Vitamina D y PTH en pacientes con obesidad mórbida antes y después de

BARIÁTRICA

3.2.3.1. MATERIALES

Pacientes

Se estudiaron todos los pacientes (180) a los que se les había realizado una cirugía bariátrica entre el año 2010 y el 2015 en el Servicio de Cirugía y Digestivo de ña FJG. Pero sólo se incluyeron los pacientes con obesidad mórbida a los que se les había realizado al menos un análisis de sangre antes de la cirugía y otro al año de la misma donde figuraran los valores de PTH y 25 (OH) vitamina D. Los datos de los pacientes fueron recogidos de la base de datos del Servicio de Cirugía Digestiva de la FJD.

Criterios de exclusión:  Menores de 18 años.

 Pacientes que no tuvieran pedido en un mismo análisis de sangre: 25 (OH) vitamina D, PTH, Ca, P y creatinina.

 Pacientes sin historia clínica registrada en la FJD.

 Pacientes con omisión de peso o talla antes de la cirugía en la historia clínica.  Pacientes con omisión de peso al año de la cirugía en la historia clínica.  Pacientes que no tuvieran pedido PTH y vitamina D antes de la cirugía y al

año de la misma.

3.2.3.2. MÉTODOS

Se completó, de manera manual, la base de datos de pacientes operados de cirugía bariátrica entre 2010 y 2015 del servicio de Cirugía Digestiva de la Fundación Jiménez Díaz donde se recogían sus diferentes variables en estudio (edad, sexo y parámetros analíticos).

Parámetros bioquímicos: Las técnicas de determinación de Ca, P,

48 las mismas que en el apartado 3.2.2. "Correlación entre los niveles de 25 (OH) vitamina D y los principales parámetros bioquímicos en pacientes con insuficiencia renal crónica en diálisis". La 25 (OH) vitamina D y la PTH fueron determinadas mediante un Analizador ADVIA CENTAURO® (SIEMENS).

Se recogió la talla de los pacientes en centímetros (cm), y el peso en Kilogramos (Kg) previo a la cirugía y al año de la misma.

Se calculó el Índice de Masa Corporal (IMC) previo a la cirugía y al año. IMC= peso (KG)/ talla2 (m2).

Se registró si tomaban vitamina D antes de la cirugía y el tratamiento al año de la cirugía.

3.2.3.3. ANÁLISIS ESTADÍSTICO

En primer lugar, se realizó un análisis descriptivo de las variables recogidas en el estudio. Las variables continuas se expresaron como medida de tendencia central: media y/o mediana y medida de dispersión: desviación típica y rango. Las variables de tipo cualitativo se expresaron como porcentajes. En todos se calculó el intervalo de confianza al 95% de cada una de las estimaciones realizadas.

Se presentaron resúmenes descriptivos de las características demográficas y basales. Se presentaron los recuentos y proporciones para las variables categóricas y los estadísticos descriptivos para las variables continuas.

El análisis estadístico de las variables cualitativas se realizó mediante el test de Chi2, aplicando la corrección de Yates si procedía.

Para las variables cualitativas se emplearon test paramétricos (t-Student) o no paramétricos (U de Mann-Whitney) en función de su aplicabilidad.

Se calcularon los coeficientes de correlación de Spearman y los correspondientes valores de p de la correlación estudiada entre los niveles de 25 (OH) vitamina D de los pacientes en estudio antes de la cirugía y el resto de los parámetros analizados antes de la cirugía.

49 valores de p de la correlación estudiada entre los niveles de 25 (OH) vitamina D y el resto de los parámetros analizados al año de la cirugía. Así mismo se calcularon los coeficientes de correlación de Spearman y los correspondientes valores de p de la diferencia de los valores de 25 (OH) vitamina D antes y al año de la cirugía y la diferencia de los valores de los parámetros analizados antes y al año de la cirugía.

El análisis estadístico fue realizado con el programa STATA 11.0 por los Servicios de estadística del Hospital Universitario FJD. En todos los análisis, el nivel de significación se estableció en p< 0,05.

3.2.4. COMPARACIÓN ENTRE DOS TÉCNICAS DE MEDIDA DE 25 (OH) VITAMINA D UTILIZADAS ACTUALMENTE EN LOS

LABORATORIOS CLÍNICOS

3.2.4.1. MATERIALES

Se separaron 1.000 sueros al azar de pacientes a los que se les había pedido la vitamina D en el laboratorio de Bioquímica de la Fundación Jiménez Díaz en el año 2015 por el método de Siemens y se analizaron estos mismos sueros por el método de Fujirebio

3.2.4.2. MÉTODOS

Se realizaron las determinaciones de 25 (OH) vitamina D de los 1.000 sueros mediante dos técnicas:

1. Analizador ADVIA CENTAURO® (SIEMENS). Consiste en un inmunoensayo competitivo con detección por quimioluminiscencia que utiliza un anticuerpo monoclonal murino anti-fluoresceína unido de forma covalente a partículas paramagnéticas (PMP), un anticuerpo monoclonal murino anti-25 (OH) vitamina D marcado con éster de acridinio, y un análogo de vitamina D marcado con fluoresceína. Como medio de separación de la proteína ligadora se utiliza un agente liberador en tampón salino.

Según las especificaciones del fabricante, la técnica presenta una imprecisión con un coeficiente de variación intra e interensayo < 4,2% y < 11,9% respectivamente y una sensibilidad funcional de 4,2 ng/ml. Su intervalo de medición es de 4,2-150 ng/ml. La especificidad analítica reflejada a través del porcentaje de reactividad cruzada con

50 otros metabolitos es del 97,4% para la 25 (OH) vitamina D3, del 106,2% para la 25 (OH) vitamina D2 y del 1% para el epímero C3 de 25 (OH) vitamina D3.

2. Analizador LUMIPULSE G1200®(FUJIREBIO): Éste realiza un inmunoensayo no competitivo, tipo sándwich, con detección por quimioluminiscencia que emplea dos anticuerpos, un anticuerpo monoclonal de oveja que se une a la 25 (OH) vitamina D2 y D3, y un segundo anticuerpo monoclonal que se une exclusivamente al complejo anteriormente formado. La separación de la proteína ligadora de la vitamina D se realiza mediante un agente químico en 1ª reacción. Según las especificaciones del fabricante, la técnica presenta una imprecisión intraensayo con un coeficiente de variación (CV) ≤ 6%, y una sensibilidad funcional de 3,492 ng/ml. Su intervalo de medición es de 4-150 ng/ml. La especificidad analítica reflejada a través del porcentaje de reactividad cruzada con otros metabolitos es de 100% para la 25 (OH) vitamina D2, y de 19,9% para el epímero C3 de 25 (OH) vitamina D3.

Las muestras que presentaban más discordancia entre sí (N=50), al analizarlas por los dos métodos, se mandaron a evaluar por el método cromografía líquida- espectrometría tándem-masas (LC-MS/MS), que es el método de referencia, en el laboratorio del Dr. Etienne Cavalier (departamento de Química Clínica, Universidad de Lieja, Bélgica), para ver qué método se aproximaba más a los valores que se obtenían con el método gases-masa.

La diferencia de resultado entre estas 50 muestras oscilaba entre el 14% y el 133% (32 ± 52%, media ± DS) con respecto a la media de los 2 valores obtenidos.

En todos los casos este porcentaje era superior a los coeficientes de variación inter-análisis de los 2 métodos: FUJIREBIO, 6%; SIEMENS, 11,9%.

Analizamos las muestras más discordantes para ver si correspondían a un grupo determinado de pacientes, como por ejemplo gestantes que presentan niveles anormales de proteína ligadora de la vitamina D. Sin embargo, observamos que dichos pacientes pertenecían mayoritariamente a los servicios de Nefrología, Reumatología y Endocrinología, hecho no significativo, ya que estos servicios son los que más demandan la determinación de vitamina D.

51 34% hombres y el 66% mujeres, cifras muy similares a las del grupo total de 1.000 muestras (edad 59 ± 18 años con un 37% de mujeres y un 63% de hombres).

Se eligieron las muestras más discordantes entre sí para enviar a analizar por gases-masas porque nuestro objetivo era doble: por una parte comprobar su similitud con la técnica de gases-masas y por otra parte aclarar cuál de las dos técnicas se asemejaba más a la técnica de referencia. Este segundo punto no se podía clarificar si enviábamos las muestras cuyos resultados eran similares.

Se eligió un número de 50 muestras, como la adecuada para el estudio, porque era una cantidad de muestras suficiente para obtener resultados estadísticamente significativos. Debido al elevado coste de la determinación por gases-masas no fue posible enviar un mayor número de muestras.

3.2.4.3. ANÁLISIS ESTADÍSTICO

Se evaluó el grado de concordancia de las medidas de vitamina D proporcionadas por los dos aparatos en las 1.000 muestras de suero obtenidas al azar entre las analizadas en el laboratorio de Análisis Clínicos de la Fundación Jiménez Díaz: ADVIA CENTAURO XP® y LUMIPULSE G1200®.

Calculamos los coeficientes de correlación intraclase (CCI) junto con sus intervalos de confianza al 95%.

Las muestras pertenecían a pacientes con una edad comprendida entre 1 y 92 años (59 ± 18, media ± DS) con 37% de mujeres y un 63% de hombres.

Las muestras se dividieron en los grupos con valores de vitamina D < 20 ng/ml y > 20 ng/ml.

Se obtuvo la recta de regresión entre ambos ensayos donde Y corresponde a los valores de LUMIPULSE G1200® y X a los del CENTAURO®.

Con respecto al subgrupo de 50 muestras seleccionadas para analizar por LC- MS/MS, se calcularon los coeficientes de correlación intraclase (CCI) junto con sus intervalos de confianza al 95% entre los valores obtenido con el método ADVIA

52 CENTAURO® y el analizador de LC-MS/MS, y entre los valores obtenidos con el método LUMIPULSE G1200® y el LC-MS/MS.