Estudio comparativo in vitro del efecto antibacteriano del extracto etanolico de eucalipto con gluconato de clorhexidina sobre el streptococcus mutans

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(1)Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE ESTOMATOLOGIA. A I G. -. T N U. “ESTUDIO COMPARATIVO IN VITRO DEL EFECTO ANTIBACTERIANO. O L CLORHEXIDINA SOBRE EL Streptococcus O mutans”. T A M O TESIS T ES DE BACHILLER EN ESTOMATOLOGÍA PARA OPTAR EL GRADO DE AUTOR D A T LUCIA PATRICIA VELA NOVOA L CU. DEL EXTRACTO ETANOLICO DE EUCALIPTO CON GLUCONATO DE. FA. ASESORES DR. GUSTAVO GUARDIA MENDEZ DRA. ELVA MEJIA DELGADO. TRUJILLO – PERÚ 2017. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A Dios, por su infinita bondad y amor, por guiarme e iluminarme día a día, durante todos estos años, por darme siempre fuerza para levantarme de cada caída y seguir adelante, por brindarme buena salud para lograr mis objetivos y metas.. A I G. -. T N U. O L Oincondicional apoyo y sacrificio, por su infinito amor, por su T A depositada en mí. comprensión, por la confianza M O T S E DE A mis hermanos, MIGUEL Y JOSE, por su inmenso cariño, por todo D A T el apoyo brindado, y por ser con quienes comparto el deseo de L U superación. C A mis padres, SEGUNDO Y NATIVIDAD; ejemplos de vida y. FA. A toda mi familia, por el gran cariño y apoyo que recibí de ellos en todos estos años, y por disfrutar grandes momentos de felicidad.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTOS A la Dra. Elva Mejía Delgado, por su inestimable ayuda, sus consejos, su cuidado y su detallado trabajo realizado conmigo en la ejecución de la tesis, en el laboratorio de Microbiología.. A la Mg. Marilu Roxana Soto Vasquez, por el tiempo y la ayuda ofrecida. T N U. en el transcurso de la parte práctica en el laboratorio de Farmacognosia.. A I G. -. Al Dr. Gustavo Guardia Méndez, mi asesor y maestro, por brindarme los. O L Oy la culminación de esta paciencia, que hicieron posible el desarrollo T A investigación. M O T S E Al Dr. Miguel Ponce Linares, por sus consejos, y por brindarme su DE ayuda y apoyo incondicional. D A T L U C FA conocimientos necesarios, por su constante orientación, tiempo y. Por último, pero no menos importante, quiero dar las gracias a mi amiga Leydy Zamora Rodriguez por su gran apoyo y por toda la ayuda brindada en el término de este trabajo.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN El presente estudio de investigación de tipo experimental, comparativo tuvo como objetivo determinar el efecto antibacteriano del extracto etanolico de eucalipto en comparación con el efecto del gluconato de clorhexidina al 2% sobre la cepa ATCC 25175 de Streptococcus mutans. La susceptibilidad bacteriana se determinó mediante la técnica por difusión en discos,. T N U gluconato de clorhexidina al 2%, y en agua destilada. Se incubaron a 37°C en microanaerobiosis, midiéndose los halos con un vernierAdespués de 24 I G aumentaron horas. Se observó que los tamaños de los halos de inhibición O L en forma directamente proporcional a las concentraciones utilizadas. Para O T A se utilizó el método de determinar la concentración mínima inhibitoria, M dilución en agar, para lo cual se O prepararon un total de 6 tubos: con las 3 T S concentraciones del extracto E etanolico de eucalipto, con el gluconato de clorhexidina; tubo con penicilina G y tubo con el cultivo de S. mutans sin DE D La muestra estuvo constituida por 10 repeticiones ningún tratamiento. A T en cada placa petri con la cepa de S.mutans. Se observó que L realizadas U C conforme aumentaron las concentraciones, el número de unidades A F formadoras de colonias (UFC) promedio de S. mutans disminuyó, es decir embebidos en las 3 concentraciones del extracto etanolico de eucalipto,. el efecto inhibitorio aumentó. Se encontró que el extracto etanolico de eucalipto y el gluconato de clorhexidina al 2% tuvieron efecto antibacteriano semejante sobre el S.mutans ATCC 25175. Palabras clave: Extracto etanolico de eucalipto, gluconato de clorhexidina, Streptococcus mutans.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT The present comparative experimental study aimed to determine the antibacterial effect of ethanolic eucalyptus extract compared to the effect of 2% chlorhexidine gluconate on Streptococcus mutans’s strain ATCC 25175. The bacterial susceptibility was determined by the diffusion technique in Petri dishes, embedded in the 3 concentrations of ethanolic extract of. T N U incubated at 37 ° C in microanaerobiosis, the halos being measured with a vernier after 24 hours. It was observed that the sizes ofA inhibition halos I G increased directly proportional to the concentrations used. O L O To determine the minimum inhibitory concentration, the agar dilution T A method was used, for which a totalM of 6 tubes were prepared: with the 3 O concentrations of ethanolic T extract of eucalyptus, with chlorhexidine ES G and tube with culture of S. mutans without gluconate; Tube with penicillin DE any treatment. D A The sample T consisted of 10 replicates made in each petri dish with the L U strain. It was observed that as concentrations increased, the S.mutans C FAnumber of colony forming units (CFU) average S. mutans decreased, that eucalyptus, 2% chlorhexidine gluconate and distilled water. They were. is, the inhibitory effect increased. It was found that ethanolic eucalyptus extract and 2% chlorhexidine gluconate had similar antibacterial effect Streptococcus mutans’s strain ATCC 25175. Key words: Eucalyptus ethanolic extract, chlorhexidine gluconate, Streptococcus mutans.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE. DEDICATORIA AGRADECIMIENTOS RESUMEN ABSTRACT. FA. T N U I. INTRODUCCION …………………………………………………………….1 II. MATERIAL Y METODOS………………………………………………….16 A I G O III.RESULTADOS……………………………………………………………..33 L O T IV.DISCUSION………………………………………………………………...41 A M V.CONCLUSIONES…………………………………………………………..47 O T S E VI.RECOMENDACIONES……………………………………………………48 E D VII.REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS…………………………………....49 D A T VIII.ANEXOS…………………………………………………………………..57 L CU. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I. INTRODUCCION 1. ANTECEDENTES. Los numerosos estudios realizados de sustancias antimicrobianas, para el control de la placa y prevención de la caries, muestran muchas. T N U patogenos presentes en la cavidad bucal, como es el Streptococcus mutans. Dentro de esas sustancias químicas, es el gluconato de A I clorhexidina el más empleado en el medio, paraGla eliminación de O L microorganismos cariogenicos. O T A M O Por otro lado, existen tambiénT diversas investigaciones dentro del campo S E de la fitoterapia, que han demostrado la actividad antibacteriana de E D especies vegetales, como el Eucalyptus globulus Labill; sin embargo, aún D A no son certeras en su totalidad, y con el fin de alcanzar nuevas propuestas T L para Ula elaboración de colutorios más eficaces, y que presenten menos C FAefectos adversos, se realiza la presente investigación. discrepancias respecto a la eliminación total o parcial de los agentes. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La caries dental es una de las enfermedades de origen infeccioso que ha afectado con mayor frecuencia la cavidad bucal en las poblaciones humanas y actualmente es uno de los principales problemas de salud pública debido a las altas prevalencias reportadas a nivel mundial.1. T N U. Según Jorge Tascón, esta enfermedad afecta a una proporción de 60 a 90% de la población escolar y adulta de todo el mundo.. 2. A I G. -. La caries, según la OMS “es una entidad patológica, infecciosa, crónica,. O L O. progresiva y transmisible, de etiología multifactorial, que es producida por. T A metabolismo producen ácido, especialmente por la fermentación de M O Tla desmineralización gradual de los tejidos hidratos de carbono, originando S E duros del diente, llegando a formar una cavidad en estos tejidos, seguida E D de la destrucción proteolítica rápida de la estructura dental, hasta llegar a D A la pérdida total del diente”. T L U C La etiopatogenia de la caries se asocia con la presencia de ciertos A F la acción de microorganismos de la placa bacteriana, los cuales por su. 3,4. microorganismos, los que con mayor frecuencia se relacionan con el inicio. y desarrollo de la caries son: Streptococcus mutans, Lactobacillus sspp, y Actinomyces spp. Aunque la cavidad oral presenta una flora mixta, se sabe que la bacteria más prevalente es el S. mutans.5, 6. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El S.mutans, fue aislado por Clarke en 1924 a partir de lesiones cariosas en humanos, es el primero en colonizar la superficie del diente después de la erupción. Su nombre lo recibe por su tendencia a cambiar de forma, que se puede encontrar como coco (forma redonda) en un medio alcalino, o en forma de cocobacilo (forma ovalada) en un medio ácido.7. T N U. Esta bacteria es anaeróbica facultativa, es decir, puede utilizar el oxígeno. para crecer, pero si éste no está presente también puede sobrevivir; sin embargo su crecimiento óptimo ocurre en anaerobiosis.8. A I G. -. O L de la erupción dental, debido a que requiere de Otejido duro no descamativo T para su colonización. La principal fuenteA de adquisición y transmisión de S. M mutans en los niños es la salivaO de la madre transmitida cuando hay un T contacto salival con la comida ES que se le dará al bebé, estas evidencias provienen de estudios DE que demuestran un patrón idéntico de DNA Dlas bacterias de los niños y de las madres. cromosomal en A T L Uha demostrado que el tiempo exacto de colonización de esta bacteria Se C FAes a los 26 meses de edad, coloniza especialmente las superficies duras. El S.mutans se encuentra de forma permanente en la cavidad oral después. 7. de los dientes (esmalte y cemento), induce a las lesiones cariosas tanto en superficies lisas, de fosas y fisuras como en zonas interproximales y en el cemento radicular. A nivel extraoral el S.mutans está relacionado con endocarditis subagudas y raramente con otros procesos patológicos.. 9. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Perteneciente al grupo de bacterias ácido-lácticas, posee propiedades que se encuentran asociadas con el poder cariogénico de un microorganismo como: capacidad para producir polisacáridos extracelulares a partir de la sacarosa que se adhiere firmemente al diente y la bacteria fácilmente se adhiere a ellos; elementos que determinan fenómenos de adhesión, agregación y coagregación; producción y metabolismo de polisacáridos. T N metabolismo de los azucares a ácido láctico y otros ácidos orgánicos U y pueden conseguir un pH crítico de 5.5 necesario para iniciar el proceso de Alo logran más I desmineralización del esmalte; éstos microorganismos G O rápidamente que cualquier otro presente en la placa dental. L O T A M Posee factores de virulencia como: acidogenicidad (capacidad de fermentar O T los azúcares de la dieta ySproducir principalmente ácido láctico como E producto final del E metabolismo ocasionando que el pH baje y se D desmineralice el esmalte), aciduricidad (capacidad del Streptococcus para D A producir T ácido en un medio de pH bajo), acidofilicidad ( por la cual resiste L U del medio, propiedad que es muy necesaria para sobrevivir y la acidez C FAdesarrollarse en un pH bajo) y la capacidad de sintetizar polisacáridos que intracelulares;. producción. de. dextranasas. y. fructanasas;. rápido. 10. le sirven como reserva de nutrientes y de adherencia a la superficie dental, y un corto efecto post-pH ( debido a que requiere de poco tiempo para recuperar su actividad de crecimiento habitual tras ser sometido a un pH bajo). 10. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El S.mutans, se considera como la especie más frecuentemente aislada en la placa dentobacteriana. De ahí que el control de los microorganismos relacionados con la placa dental, y con el proceso carioso, es de vital importancia para el control de la enfermedad, y uno de los mecanismos es el uso de antimicrobianos. 11. T N U la químicamente la proliferación de los microorganismos. Entre estos está clorhexidina al 2%, como el agente más utilizado en el medio, dada su A I eficacia en la eliminación de microorganismos cariogénicos. G O L O T A de carga positiva, que posee La clorhexidina es una bisguanida catiónica M O un amplio espectro de acción sobre varios microorganismos. Presenta baja T S toxicidad y una fuerte capacidad E para adherirse a mucosas, a la película adquirida y a los microorganismos. (Maya, 2011), definió que en base es DE mínimamenteD soluble en agua, pero la forma en sal, el digluconato, es A T muchoLmás soluble. U C FA Se. han. probado. diversos. agentes. antimicrobianos,. que. inhiben. 12. 13. La clorhexidina es un fármaco derivado del clorofenil biguanido, el cual tiene una propiedad muy importante que es la “sustantividad”, la cual le permite que se una a la hidroxiapatita del esmalte, a la película adquirida y a las proteínas salivales y se va liberando paulatinamente durante 12 o 24. horas y esto impide la colonización de las bacterias. Por tanto se considera a la clorhexidina como un agente antibacteriano de segunda generación. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Asimismo en estudios se describió a la clorhexidina como un antiséptico tópico potente con muy poca posibilidad de absorción; con su acción sobre bacterias Gram positivas y Gram negativas, también se presenta activo contra anaerobias facultativas y aerobias y, en menor medida, contra hongos y levaduras. Baja actividad contra Mycobacterium tuberculosis, y no es esporicida.14, 15. T N U. Posee actividad residual por 6 horas, el efecto antimicrobiano se ve. -. afectado en mínima cantidad por material orgánico, en este caso la sangre.. A I G. Estudios realizados por (Emilson, 1977) refieren que el “S.mutans” es. O L O. altamente sensible a la clorhexidina, en la cavidad bucal; lo que ocasiona. T A utilización de enjuagues a base M de gluconato de clorhexidina, es O beneficiosa en la reducción deT“S.mutans” y otros microorganismos de la S E cavidad oral. DE Dde acción de la clorhexidina fue explicado por (Gonzales, El mecanismo A T 2011),L lo describió como un antiséptico tópico, este penetra a la membrana U C celular microbiana e ingresa al citoplasma e interfiere con su función; A F además inhibe la utilización de oxígeno, lo cual disminuye los niveles de una reducción significativa de procesos cariosos. Adicionalmente la. 16. ATP y muerte celular.14. Además, en la cavidad oral se adsorbe rápidamente a las superficies, incluidos los dientes con película adquirida, proteínas salivales y a la hidroxiapatita. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La clorhexidina adsorbida se libera gradualmente en 8-12 horas en su forma. activa,. después. de. 24. horas. aún. pueden. recuperarse. concentraciones bajas de clorhexidina, lo que evita la colonización bacteriana durante ese tiempo.15. En relación (Wang, 2007) mencionó, que a bajas concentraciones produce. T N en U. un aumento de la permeabilidad con filtración de los componentes intracelulares. incluido. el. potasio. (efecto. bacteriostático),. -. concentraciones más altas produce la precipitación del citoplasma bacteriano y muerte celular (efecto bactericida).17. O L O. A I G. T A 0,12 % y al 0,2 %. La posología es un buche con 10 ml de producto a una M O T concentración del 0,2 % y de 15 ml al 0,12 %, esto es debido a la dosis total S E de clorhexidina ya que 10ml al 0.2 % libera 20 mg y 15 ml al 0.12 % libera E D 18 mg, observándose que los resultados con ambas formulaciones son D A igual de efectivos. En altas concentraciones se comporta como bactericida, T L mientras U que a bajas concentraciones su acción es bacteriostática. El C FAgluconato de clorhexidina es un potente antiséptico.. La clorhexidina suele presentarse en dos concentraciones, estas son al. 18. La clorhexidina en el aspecto odontológico es indicada como agente antiplaca, para el tratamiento de gingivitis y periodontitis, en cirugía periodontal, como irrigador en alveolitis, como desinfectante en estomatitis por dentaduras (candidiasis subplaca), como tratamiento de ulceraciones aftosas y como coadyuvante en halitosis. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El efecto adverso más común es la pigmentación marrón de los dientes, de algunos materiales de restauración y de las mucosas sobre todo del dorso de la lengua. Otro efecto descrito frecuentemente es la alteración del gusto.19, 20. De otro lado, han sido comprobados los efectos antimicrobianos in vivo de. T N U. colutorios a base de aceites esenciales, habiéndose demostrado su. capacidad para la reducción del mal olor oral suprimiendo las bacterias que lo causan. 20. O L O. A I G. -. La Organización Mundial de la Salud (OMS), en los años 70, orientó la. T A particularmente de la fitoterapia, con la finalidad de lograr "Salud para M O Todos en el año 2000", en los diferentes sistemas de salud de países T S desarrollados y más aúnE en los en “vías de desarrollo”, por ser esta forma de medicina más natural DE y asequible a grandes grupos poblacionales. D A T L La medicina natural ha sido utilizada desde tiempos antiguos, estos U C conocimientos han sido transferidos de generación en generación; tal es A F investigación y aplicación de la medicina natural y tradicional (MNT),. 21. así que ha sido considerada como el primer recurso terapéutico para mantenimiento de la salud, como medicina casera.. 22. Desde entonces estos conocimientos han evolucionado y las plantas han pasado. a. constituir. importantes. fuentes. de. productos. naturales. biológicamente activos. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Estudiando su actividad en el organismo e identificando su carácter terapéutico se podrá avalar los usos que la medicina popular les atribuye. Además, es importante conocer más sobre plantas medicinales como métodos alternativos en el consultorio dental, pues con su ayuda, no se deberán utilizar fármacos que a largo plazo se pueden volver perjudiciales para el organismo. 23. T N Así, dentro de las alternativas en plantas medicinales que tenemos U en nuestro país, encontramos al eucalipto, que tiene como nombre científico A Eucalyptus globulus Lábill, un árbol de gran altura, naturalI de Australia y de G O Tasmania, por lo que ha sido considerado durante mucho tiempo como L O Es de gran utilidad para T “exótico”, perteneciente a la familia mirtácea. A eliminar las zonas pantanosas yaM que sus potentes raíces tienen la O T manteniendo el suelo firme y de esta capacidad de absorber la humedad S E manera eliminar: la plaga, insectos, principalmente mosquitos. Su E D existencia es una gran ayuda para el control del paludismo en muchas D A zonas deT Asia, América del sur y el sur de Europa. L U C FALa introducción del eucalipto como planta medicinal en la fitoterapia 24. occidental es bastante reciente. Comienza a utilizarse a partir del siglo XVIII, pues al tratarse de un árbol procedente de otras latitudes, solamente se conocen sus propiedades cuando se implanta su cultivo en otras zonas alejadas de su hábitat natural.25. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Las hojas de eucalipto contienen de 3 a 5% de aceite esencial, de característico olor balsámico, que es un poderoso desinfectante natural. El principal componente es el cineol, también llamado eucaliptol, que es, al mismo tiempo, el componente más abundante del aceite esencial (representa el 75-85 %), y el que le da sus propiedades bacteriostáticas, bactericidas y fungicidas. También posee terpenos y alcoholes como el. T N parte del aceite esencial, el eucalipto contiene ácidos como el polifenólico, U elagico, gálico, flavonoides (eucaliptina, quercetina, quercitrina, etc), A I taninos (sustancias detoxificantes) y resinas. G O L O El eucalipto posee acción antiviral, ya T que descongestiona las vías A Mde moco existente en los pulmones, respiratorias eliminando la producción O analgésico porque suprime S el T dolor; eficaz contra la tuberculosis o el virus E causante de la rabia, también tiene gran importancia en el campo psíquico; E D porque puede actuar como estimulante de relajación por su delicado D A aroma. T L U C A F En la rama de la odontología, el aceite esencial o el extracto de eucalipto pineno, canfeno, terpinol y eugenol; además de aldehídos y cetonas. A. 26. 27. son empleados para la fabricación de solventes y selladores de conductos radiculares como parte final del tratamiento de endodoncia. También se utiliza como parte de los componentes de colutorios dentales, como un antiséptico de pastas dentales, en pastillas para atenuar la tos y en gomas de mascar para controlar la halitosis causada por invasión bacteriana.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El aceite de eucalipto no se debe administrar por vía oral o aplicar a la piel tópicamente sin antes disolverlo para disminuir la toxicidad, ya que puede producir el dolor e inflamación de las membranas mucosas del ser humano.23. Estudios de Clifford, Scalbert (2000) y Babay(2004), reportaron que el. T N éstos se pueden obtener compuestos de alto valor agregado, como elU ácido elágico, compuesto bioactivo que actúa como antioxidante. Además cuenta Aantimicrobiana, I con propiedades biológicas destacadas como la actividad G O la actividad antitumoral y actividad antiviral, entre otras. Estas también L O T fueron valoradas en extractos metanólicos de Eucaliptus camaldulensis. A M O T S E Rodríguez P. (2007), DEen Madrid, realizo investigaciones, donde fueron Dalcances terapéuticos de tres enjuagues a base de aceites valorados los A T (menta, eucalipto y hierbabuena) disueltos en agua destilada, L esenciales U C en comparación con tres enjuagues comerciales reconocidos: Clorexil®, A F Colgate Plax® y Listerine®; en ese estudio se pudo comprobar la eficacia eucalipto es una fuente rica en taninos y que a partir de la degradación de. 28,29. del enjuague natural de eucalipto como el mejor para el control de la biopelícula dental y el mantenimiento del pH salival. 30. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Por otro lado, Madrigal y Garita (2009), en Costa Rica, demostraron que el enjuague natural de eucalipto, a diferencia del enjuague de menta o hierbabuena, es más eficaz en el control de la biopelícula dental y el mantenimiento del pH salival al tercer día de uso. 31. Egwaikhide y colaboradores (2009), demostraron que los extractos. T N U estreptomicina, cuando se evaluaron contra las bacterias Corynebacterium pyogenes, Bacillus stearothermophilus, Staphylococcus A epidermidis, I Gactividad biológica Klebsiella pneumoniae y Bacillus cereus; asociando esta O L a la presencia de alcaloides y esteroides antimicrobianos presentes en los O T A extractos de eucalipto. M O T S E E Además, PranayDy colaboradores (2010), probaron esta actividad Dcontra las bacterias Staphylococcus aureus, Escherichia antimicrobiana A T y Candida albicans, demostrando además que los extractos L coli, S.mutans U C del tronco fueron más eficientes que los del follaje, y asoció esta actividad A F a presencia de glucósidos cardiacos, flavonoides y saponinas. metanólicos del eucalipto fueron más eficientes en comparación con la. 32. 33. Morales Castillo (2012), en Perú, determino el efecto in vitro del aceite esencial del Eucalyptus globulus (Eucalipto) en diferentes concentraciones sobre cepas estandarizadas del Enterococcus faecalis ATCC 29212.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El efecto antibacteriano (halo de inhibición) se determinó mediante la técnica. por. difusión. en. Agar,. con. 5. grupos. experimentales,. correspondientes a 4 concentraciones de aceite esencial, y un grupo control donde se usó únicamente hipoclorito de sodio al 2.5%. Se encontró que la susceptibilidad bacteriana in vitro del Enterococcus faecalis frente al aceite esencial de Eucalyptus globulus (eucalipto) al 75% y 100% fue mayor en comparación con hipoclorito de sodio al 2.5%.34. A I G. -. T N U. Así mismo, Ibarra S (2014), en Ecuador, comprobó el efecto antimicrobiano. O L hipoclorito de sodio al 2,5%, y al gluconato de clorhexidina al 2%, sobre O T cepas de enterococcus faecalis.” Se elaboró A el aceite esencial a diferentes M concentraciones (25%, 50% ,75% y 100%); mediante arrastre de vapor de O T S agua. Para realizar el análisis de los resultados se utilizaron las pruebas de E ANOVA y Bonferroni,Elas que mostraron que a mayor concentración del D Dhay mayor eficacia inhibitoria sobre cepas de Enterococcus aceite esencial A Tseguida del hipoclorito de sodio y gluconato de clorhexidina al 2%. faecalis, L U C FA del aceite esencial de Eucalyptus globulus L. (eucalipto) en comparación al. 35. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1. JUSTIFICACION El Perú es un país de gran biodiversidad y es muy usual que las plantas sean utilizadas como medicina alternativa. En el ámbito odontológico, el importante crecimiento mundial de la fitoterapia dentro de programas preventivos y curativos ha estimulado la investigación científica con el fin de avalar la actividad antimicrobiana de distintos extractos de plantas y así. T N U. ayudar en el control de la placa bacteriana y por consiguiente en la disminución de la incidencia de caries dental.. A I G. -. Se han realizado muchos estudios para controlar la cantidad de bacterias. O L O. orales que causan patologías, dentro de las cuales tenemos al S.mutans,. AT Men el mercado para la inhibición de Sin embargo los productos que existen O Tefectos adversos que alteran la estética y este microorganismo producen S E que nuestra población necesita alternativas función, y teniendo en cuenta E D de costos reducidos y que sean accesibles a las clases más populares. Por D A eso, conT el fin de contribuir con la continua búsqueda de un mejor agente, L U se investigará una especie vegetal, como lo es, el Eucalyptus globulus C A F Lábill (eucalipto) que debido a sus propiedades antimicrobianas y sus como principal agente etiológico de la caries dental.. componentes, pueda ser usada como agente preventivo para controlar esta bacteria, y disminuir el índice de caries dental en nuestro medio.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Por ello, de acuerdo con lo antes descrito, el propósito del presente estudio es comparar el efecto antibacteriano in vitro del extracto etanolico de Eucalyptus globulus Lábill (eucalipto) con el efecto del gluconato de clorhexidina al 2% sobre la cepa ATCC 25175 de Streptococcus mutans.. T N U de ¿Cuál es el efecto antibacteriano in vitro de tres concentraciones extracto etanolico de Eucalyptus globulus Lábill (eucalipto) en comparación A I con el gluconato de clorhexidina al 2% sobre la cepa ATCC 25175 de G O L Streptococcus mutans? O T A M O T 3. HIPÓTESIS S Etres concentraciones del extracto etanolico de En el análisis in vitro, las E D Eucalyptus globulus Lábill (eucalipto) tendrán semejante susceptibilidad D A bacteriana y/o concentración mínima inhibitoria que el gluconato de T L clorhexidina U al 2% sobre la cepa ATCC 25175 de Streptococcus mutans. C FA 2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA. 4. OBJETIVOS 5.1 Objetivo General: Comparar el efecto antibacteriano in vitro de tres concentraciones del extracto etanolico de eucalipto con el efecto del gluconato de clorhexidina al 2% sobre la cepa ATCC 25175 de S. mutans.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 5.2 Objetivos Específicos:. 5.2.1 Comparar la susceptibilidad antibacteriana in vitro del extracto etanólico de eucalipto al 50%,75% y 100% con el gluconato de clorhexidina al 2% sobre el S.mutans ATCC 25175.. 5.2.2 Comparar la concentración mínima inhibitoria (CMI) in vitro del. T N U. extracto etanólico de eucalipto al 50%,75% y 100% con el gluconato de clorhexidina al 2% sobre el S.mutans ATCC 25175.. O L O. A I G. -. AT OM. T S II. MATERIAL Y METODOS E E 2.1. MATERIAL DE DESTUDIO D A Ty área de estudio: L 2.1.1 Tipo U C FALa presente investigación se ajusta a un tipo de estudio experimental, comparativo e “in vitro”, se llevará a cabo en los laboratorios de Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.1.2 Definición de la población muestral: La población estuvo conformada por el conjunto de placas petri que contendrán las diferentes concentraciones de extracto etanolico de eucalipto, gluconato de clorhexidina al 2%, y la siembra adecuada de S.mutans ATCC 25175.. 2.1.2.1 Criterios de Inclusión. A I G. -. T N U.  Placas petri con siembra adecuada de cepas ATCC 25175 de S.mutans. O L O. a priori al enfrentamiento con el extracto etanolico de eucalipto y gluconato de clorhexidina.. AT M etanolico de eucalipto al 50%,  Placas petri con el contenido de extracto O T 75% y 100%. S E E D  Placas petri con gluconato de clorhexidina al 2%. D A T L  Placas petri que se utilicen para la determinación de la Concentración U CMínima Inhibitoria (CMI), que no presenten crecimiento bacteriano ni A F contaminación por otros microbios (solo hongos).. 2.1.2.2 Criterios de Exclusión  Placas que mostraron contaminación por otros microbios (solo hongos), después del proceso de incubación.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.1.3 Diseño estadístico de muestreo:. 2.1.3.1. Unidad de análisis La constituyo cada una de las placas petri, las que contendrán extracto etanolico de eucalipto a una determinada concentración, gluconato de clorhexidina al 2% y la siembra de S.mutans ATCC 25175.. T N U La unidad de muestreo estuvo constituida por las placas petri, que cumplan con los criterios de inclusión y exclusión. A I G O L 2.1.3.3. Marco de muestreo O T El marco muestral estuvo conformadoApor el listado o registro de las M O unidades de muestreo, es decir de las placas petri con sus respectivas T S concentraciones de extracto E etanolico de eucalipto, gluconato de E clorhexidina al 2%D y siembras de S.mutans ATCC 25175. D A T L U C 2.1.3.4. Tamaño muestral A F Para determinar el tamaño de la muestra, por ser experimental se empleó 2.1.3.2. Unidad de muestreo. la siguiente formula:. n = (Zα/2 + Zβ)2 2S2 d2. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Donde: n. : Tamaño de cada grupo de estudio.. Zα/2: 1.96 coeficiente de confiabilidad para α=0.05. Zβ : 0.84 coeficiente de confiabilidad para β=0.20 o una potencia del 80%. S : 0.8d, donde 0.8 es el valor asumido por no haber estudios previos.. T N U. d : Diferencia mínima entre los promedios de cualquier pareja de grupos para rechazar la igualdad.. Reemplazando: n = (1.96+0.84)2 2(0.64) (d)2 / (d)2 = 10. O L O. A I G. -. AT OM. Luego la muestra estará conformada por 10 placas petri para cada grupo.. T S E. 2.1.4 Diseño de Contrastación:. DE. El presente estudio corresponde a un diseño experimental, comparativo y. D A T. prospectivo.. L U C. FA TIPO DE ESTUDIO. EXPERIMENTAL. Según el. En función de la. Según la interferencia. periodo en que. comparación. del investigador en el. se capta la. entre. fenómeno que se. información.. poblaciones.. analiza.. Prospectivo. Comparativo. Experimental. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.1.4.1. Diseño específico del extracto etanolico de eucalipto: Extracto etanolico de eucalipto al 50%. Preparación del extracto etanolico de eucalipto.. Extracto etanolico de eucalipto al 75%.. T N U. Extracto etanolico de eucalipto al 100%.. O L O. A I G. -. EFECTO DEL EXTRACTO ETANOLICO DE EUCALIPTO SOBRE Streptococcus mutans.. AT OM. • Cepa de Streptococcus mutans.. D A T. FA. L U C. DE. MUESTRA. CEPAS JOVENES T ES • Colonias jóvenes de Streptococcus mutans, en Agar TSA sangre.. •Solución salina 0.5 de McFarland 𝟏. 𝟓𝒙𝟏𝟎𝟖 UFC/ml.. SIEMBRA Placas Petri con Agar Mueller Hinton Sangre.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.1.4.2. Diseño Específico del Gluconato de clorhexidina.. EFECTO DEL GLUCONATO DE CLORHEXIDINA AL 2% SOBRE Streptococcus mutans.. CEPAS JOVENES • Cepa de Streptococcus mutans.. •Solución salina 0.5 de McFarland 𝟏. 𝟓𝒙𝟏𝟎𝟖 UFC/ml.. • Colonias jóvenes de Streptococcus mutans, en Agar TSA sangre.. MUESTRA. AT OM SIEMBRA. Placas Petri con Agar Mueller Hinton Sangre.. D A T. UL. C A F. DE. Extracto etanolico de eucalipto. O L O. A I G. -. T N U. T S E. 50%. 75%. Prueba de Susceptibilidad: Halo de inhibición (mm).. 100%. Streptococcus mutans. Gluconato de clorhexidina.. 2%. CMI (UFC). 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.1.5. Consideraciones éticas: La presente investigación conto con la autorización del Comité Permanente de Investigación de la Facultad de Estomatología de la Universidad Nacional de Trujillo, en concordancia con las recomendaciones y principios establecidos en la Declaración de Helsinki, adoptada por la 18ª Asamblea Médica Mundial en Helsinki, Finlandia, junio 1964 y modificada por la. T N Al realizar la investigación, se tuvo en cuenta los factores que puedan U dañar el medio ambiente. Se realizó la manipulación y el desecho de las A muestras de Streptococcus mutans, de acuerdo al manualI de Bioseguridad G O en los laboratorios de Microbiología y MedicinaLdurante la ejecución del O T trabajo, previas autorizaciones. A M O T S E E DTECNICAS 2.2 METODOS Y DMICROBIOLOGICO A 2.2.1. METODO T L U Obtención de la Cepa 2.2.1.1. C FAEn el presente estudio se utilizó la cepa bacteriana Streptococcus mutans Asamblea Medica mundial en Tokio, enero 2004. 36. ATCC 25175. El cultivo de la cepa se realizó en el Laboratorio del Departamento de Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo, por el investigador principal, bajo la supervisión de una microbióloga.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.1.2. Preparación de la Cepa La cepa se cultivó en tubos de ensayo con tapa rosca conteniendo Agar soya tripticasa sangre, se incubo bajo condiciones de microanaerobiosis a 37° C, para obtener colonias jóvenes. Luego de 24 horas de cultivadas se les sembró en medio tioglicolato, para obtener una turbidez semejante al tubo número 0.5 de la Escala de Marc Farland.. T N 30 segundos, antes de proceder al sembrado, para una distribución U adecuada de los microorganismos. A I G O 2.2.1.3. Sembrado L O Se embebió un hisopo estéril, en el tuboTdel cultivo preparado y a una A Mmechero, se hizo el sembrado en distancia de 10cm de la llama de un O T Mueller Hinton – Sangre, hisopando placas petri, conteniendo S Agar E uniformemente sobre toda la superficie del agar y girando cada placa 30 E D grados por 10 veces aproximadamente. D A T L U Prueba de Susceptibilidad 2.2.1.4. C FAPara el estudio microbiológico, las soluciones fueron divididas en grupos: Los tubos con la bacteria estudiada, fueron girados entre las manos durante.  Grupo I: extracto etanolico de eucalipto al 50%.  Grupo II: extracto etanolico de eucalipto al 75%.  Grupo III: extracto etanolico de eucalipto al 100%.  Grupo IV: Gluconato de clorhexidina al 2%.  Grupo V: Agua destilada (grupo control).. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Posteriormente al preparado y sembrado de la cepa ATCC 25175 de Streptococcus mutans, en placas petri, se utilizó el método de Difusión en discos. Se prepararon discos de papel filtro estériles, los cuales serán sumergidos durante media hora, en cada una de las concentraciones del extracto etanolico de eucalipto y en gluconato de clorhexidina, luego con una aguja estéril se colocaron sobre los cultivos de S. mutans ATCC 25175,. T N se colocaron discos embebidos en agua destilada. Después, todas U las placas se llevaron a incubación a 37°C por 24 horas en jarra Gas-Pack en A condiciones de microanaerobiosis (5 a 10% de dióxido deI carbono). G O L Luego de las 24 horas se midieron los halos O de inhibición (susceptibilidad) T A de las siembras con cada una de las concentraciones de extracto etanolico M O de eucalipto y gluconato de clorhexidina y de la siembra con agua destilada, T S considerando el área E del disco de papel filtro, usando una regla milimetrada. El procedimiento DE se realizó 10 veces para cada grupo. D A T L U Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI). 2.2.1.5. C FASe utilizó el método de dilución en agar, para lo cual se prepararon un total en las placas petri con Agar Mueller Hinton-Sangre; para el grupo control,. de 6 tubos, para cada uno de los casos. Se llenaron las diferentes diluciones con la micropipeta, de la siguiente manera: se colocarán 0.8ml del extracto etanolico de eucalipto al 50%, 75%, y 100% y gluconato de clorhexidina al 2% en cada tubo de ensayo respectivamente, previamente etiquetado.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Después del proceso de dilución se colocó un inóculo de 0.2 ml del cultivo preparado de S. mutans, en los tubos con las diversas concentraciones del extracto y con el gluconato de clorhexidina; así como en el control positivo (tubo con penicilina G) y en el control negativo (tubo con el cultivo de S. mutans sin ningún tratamiento), se obtuvo un volumen final de 1 ml para cada tubo y se llevó a incubación a 37°C en condiciones de microanaerobiosis durante 24 horas.. -. T N U. Luego de las 24 horas, se tomaron 0.1ml de las suspensiones de cada tubo. A I G. y con la espátula de Drigalski se dispersó en las placas con Agar Mueller. O L O. Hinton-Sangre. Después del sembrado, estas placas se colocaron en la. AT OM. estufa a 37°C por 24 horas en condiciones de microanaerobiosis.. T S E. Luego de lo cual, se procedió a la observación del crecimiento bacteriano. E D considerándose como la CMI a la menor concentración que llegará a inhibir D A completamente T el desarrollo de los gérmenes. Todo el procedimiento se L U a cabo dentro del diámetro de 10cm de la llama de un mechero. Se llevara C FAefectuaron 10 repeticiones por concentración. en base al conteo de las Unidades Formadoras de Colonias (UFC),. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.1.6. Controles Para la susceptibilidad bacteriana: Se utilizó como control el agua destilada. Para la concentración mínima inhibitoria: Se utilizó como control positivo, penicilina procaínica, y como control negativo, la suspensión estándar de S. mutans sin tratamiento.. 2.2.2. PROCEDIMIENTO 2.2.2.1. Recolección de la muestra:. O L O. A I G. -. T N U. Se recolecto 1 Kg de hojas de Eucalyptus globulus Lábill (eucalipto) del. AT OM. distrito de Salpo, provincia de Otuzco, departamento de La Libertad.. T S E. 2.2.2.2. Identificación y determinación taxonómica de la especie vegetal.. D A T. DE. Un ejemplar completo de la planta se llevó al Herbarium Truxillense (HUT) de la Universidad Nacional de Trujillo para su identificación y determinación. L U C. taxonómica.. FA. 2.2.2.3. Obtención del extracto etanólico de eucalipto. Se colocaron 100 g de hojas secas, pulverizadas y tamizadas, en un recipiente de vidrio de boca ancha. Luego, se añadió etanol de 70º G.L. cantidad suficiente hasta cubrir la muestra por sobre 2 cm de altura. Se mezcló bien, teniendo en cuenta que la mezcla debe ocupar como máximo las ¾ partes del recipiente. 26. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Se tapó el recipiente y se macero por 7 días, agitándose 15 minutos, dos veces al día. Transcurrido el tiempo de maceración, se filtró el líquido al vacío, con papel de filtro Whatman N°1. Al líquido filtrado se le denomino extracto etanólico. A continuación, el extracto etanólico se concentró en un rotavapor hasta obtener una masa siruposa.. T N Esta se llevó a secar a la estufa a 30 ºC. Al producto resultanteU se le denomino extracto seco. De este, se prepararon las concentraciones de A 50%, 75% y 100%. Finalmente, los extractos etanólicosIse guardaron en G O frascos de vidrio de color ámbar y en refrigeración hasta su utilización. L O T (Anexo 01). A M O T S E 2.3 INSTRUMENTO DEDE RECOLECCIÓN DE DATOS D A Para determinar T la susceptibilidad bacteriana y la concentración mínima L U se realizó la medición de los halos de inhibición, con el uso de inhibitoria; C FAuna regla milimetrada y el conteo de las unidades formadoras de colonias 37. (UFC) mediante la inspección visual respectivamente. La información recolectada se registró en una ficha elaborada especialmente para la recolección de datos. (Anexo 02 y 03).. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.4. VARIABLES DE ESTUDIO Y ESCALAS DE MEDICION. VARIABLES. DIMENSION. 50%. Efecto del extracto etanolico de eucalipto.. Independiente. Extracto etanolico de eucalipto al:. 75%. VARIABLE. AD. T L U. C A F. DE. Dependiente S.mutans.. ESCALA. TIPO. Tiene efecto No tiene efecto. 100%. Efecto del Gluconato de clorhexidina. INDICADOR. T N U. Tiene efecto Cualitativa No tiene efecto. A I G. -. Tiene efecto. O L O. No tiene efecto. T Tiene efecto A Gluconato de Cualitativa M clorhexidina al O 2% T ES INDICE. Nominal. No tiene efecto INDICADOR. TIPO. Nominal. ESCALA. Escala de Susceptibilidad: Durafford: Halo de Inhibición Nula, Cuantitativa según el diámetro sensible, (mm). muy sensible y sumamente sensible. De razón. Concentración Efectiva Mínima Inhibitoria (UFC/ml). No efectiva. De razón. Cuantitativa. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.5 DEFINICION OPERACIONAL DE LAS VARIABLES. 2.5.1 Efecto del extracto etanolico de eucalipto.  Definición conceptual: Es una preparación de consistencia líquida en base a etanol y hojas de eucalipto que contiene los principios activos de esta especie vegetal.38. T N  Definición operacional: Preparación liquida en base a etanol yU hojas de eucalipto, a diferentes concentraciones: 50%, 75%, y 100%. A I G O L O T 2.5.2 Efecto de la Clorhexidina. A M O  Definición conceptual: T es un agente antimicrobiano tópico, que S pertenece al grupo E de las biguanidas. Presenta baja toxicidad y una fuerte capacidad DEpara adherirse a mucosas, a la película adquirida y D a los A microorganismos. Es mínimamente soluble en agua, pero la T L forma en sal, el digluconato, es mucho más soluble. U C A F 13.  Definición operacional: es un agente antimicrobiano tópico, que pertenece al grupo de las biguanidas. Se utilizará el gluconato de clorhexidina al 2%.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.5.2 Streptococcus mutans ATCC 25175.  Definición Conceptual: Cepa estándar de Streptococcus mutans con nomenclatura 25175. 39  Definición Operacional: Para efectos de la investigación, la definición operacional coincidió con la conceptual, siendo valorada mediante el halo de inhibición y el conteo UFC/ml.. 2.5.3.1. Halo de Inhibición. O L O. A I G. -. T N U.  Definición conceptual: Zona alrededor del disco donde una sustancia. AT de 18 a 24 horas de incubación.M O T S E  Definición operacional: Se utilizará como medida los diámetros de E Dmm, según la escala de Duraffourd, con el manejo de estas zonas en D A T indicadores: los siguientes L CU. antibacteriana es capaz de impedir el crecimiento de la bacteria al cabo 37. FA Escala de Duraffourd.. Escala utilizada para determinar cualitativamente el efecto inhibitorio in vitro, según diámetro de inhibición: . Nula (-): para un diámetro inferior a 8 mm.. . Sensibilidad límite (sensible =+): para un diámetro comprendido entre 8 a 14 mm.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Medio (muy sensible = ++): para un diámetro entre 14 y 20 mm.. . Sumamente sensible (+++): para un diámetro superior a 20 mm.. 2.5.3.2. Concentración Mínima Inhibitoria. Definición Conceptual: Será interpretada como la mínima. . T N U. concentración de la preparación que inhibe el crecimiento del microorganismo después de su incubación.40. O L O. A I G. -. Definición Operacional: La definición coincidirá con la conceptual. . T A etanolico de eucalipto donde se pretende apreciar la inhibición total M O del crecimiento del S. mutans mediante el conteo UFC/ml. T ES no efectiva, cuando en la inspección visual Considerándose solución E se registre D formación de colonias, y efectiva cuando no se observe D de colonias del crecimiento del S. mutans ATCC 25175. formación A LT al ser valorada mediante el número obtenido en mg/ml de extracto. U C FA. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.6. ANALISIS ESTADISTICO E INTERPRETACION DE DATOS. Para analizar la información se construyeron tablas de frecuencias de una sola entrada con sus valores absolutos y relativos, se calculó el promedio y la desviación estándar de las variables cuantitativas y se diseñaron gráficos para mostrar las variaciones de promedios de los valores. Para determinar la susceptibilidad, y la Concentración Mínima Inhibitoria. T N U se determinar que concentración fue más efectiva contra el S. mutans aplicó la prueba de comparaciones múltiples de Duncan.AAmbas con un I G nivel de significancia del 5%(P <0.05). O L O T Alas pruebas de susceptibilidad En el presente estudio, se utilizaron M O bacteriana y concentración mínima T inhibitoria para determinar el efecto S Eextracto etanolico de eucalipto sobre la cepa antibacteriano in vitro del E D ATCC 25175 de Streptococcus mutans. D A T L U C FA (CMI), se emplearon la prueba de Análisis de Varianza (ANOVA). Y para. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III. RESULTADOS En el presente estudio de tipo experimental in vitro tuvo como objetivo comparar el efecto antibacteriano in vitro de tres concentraciones del extracto etanólico de eucalipto con el gluconato de clorhexidina al 2 % sobre S.mutans ATCC 255175. Al análisis de datos se encontraron los siguientes resultados:. -. T N U.  En la prueba de susceptibilidad bacteriana, se obtuvo que las 10. A I G. repeticiones con las concentraciones del extracto etanólico de eucalipto al. O L O. 50%, 75% y 100% presentaron sensibilidad media, mientras que de las 10. T A sensibilidad media y 6 sensibilidad alta en la inhibición de S.mutans ATCC M O 25175. TABLA 1A. El promedio de los halos de inhibición de crecimiento T ESetanolico de eucalipto al 50% fue de 16.7 mm, de S.mutans con extracto DE de eucalipto al 75% fue de 18.0mm, con extracto con extracto etanolico D etanolico A de eucalipto al 100% fue de 19.1mm, con gluconato de T L clorhexidina al 2% fue de 20.3mm y con el control de agua destilada fue U Cde 0mm. TABLA 1B, TABLA 1C, TABLA 1D. A F repeticiones con gluconato de clorhexidina al 2%, 4 presentaron.  Los promedios de las Unidades Formadoras de Colonias obtenidos con: extracto etanolico de eucalipto al 50%-1.1 UFC promedio, extracto etanolico de eucalipto al 75%-0.7 UFC promedio, extracto etanolico de eucalipto al 100 -0.2 UFC promedio, gluconato de clorhexidina al 2% y con penicilina procainica fue de 0 UFC promedio. TABLA 2A, TABLA 2B, 2C.. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA 1A: Susceptibilidad bacteriana in vitro del extracto etanólico de eucalipto al 50%,75% y 100% en comparacion con el gluconato de clorhexidina al 2% sobre el S.mutans ATCC 25175, según Escala de Duraffourd.. Concentración de. Concentración. Escala de. extracto etanolico. del gluconato. Duraffourd. de eucalipto. de clorhexidina. Nula Sensibilidad límite Muy sensible Sumamente sensible. D A T. 50%. 75%. 100%. -. -. -. E D. -. -. -. T N U Destilada con agua. -. O L O. AT M 10 10 10 O T S E -. A I G. 2%. Control. -. 10. -. -. 4. -. 6. -. L U C. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2016.. FA. Nula = - , para un diámetro inferior a 8 mm.. . Sensibilidad limite = +, para un diámetro entre 8 y 14mm.. . Muy sensible = ++, para un diámetro entre 14 y 20mm.. . Sumamente sensible = +++, para un diámetro superior a 20mm.. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 1B. Susceptibilidad bacteriana in vitro del extracto etanólico de eucalipto al 50%,75% y 100% en comparación con el gluconato de clorhexidina al 2% sobre el S.mutans ATCC 25175.. TAMAÑO PROMEDIO DE LOS HALOS n. Promedio. Extracto etanólico de eucalipto 50% 1. 10. 16.7. Extracto etanólico de eucalipto 75%. 10. Grupo de Tratamiento. Extracto etanólico de eucalipto 100%. 19.1 O L 10 O 20.3 10. AT 10 OM. Gluconato de clorhexidina 2% Control con agua destilada. DE. A I G 18.0. 0. T N U 0.29. Desv.. Estándar. -. 0.37 0.48 0.49 0. T S E. Fuente: Datos recogidos por el investigador, año 2016.. D A T. FA. L U C. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA 1C. Susceptibilidad bacteriana in vitro del extracto etanólico de eucalipto al 50%,75% y 100% en comparación con el gluconato de clorhexidina al 0.2% sobre el S.mutans ATCC 25175.. ANÁLISIS DE VARIANZA. Fuente de Variación. Suma de Cuadrados. Grados De Libertad. Cuadrados. Prueba. Medios. f. A I 138.06 G Tratamientos 70.875 3 23.625 O 8 L O T Error 6.16 36 0.171 A M Total 77.035 39 O T S E DE por el investigador, año 2016. Fuente: Datos obtenidos D A T L U C FA ( F de V). (SC). (GL). (CM). ( F). T N Posibilidad U -(p) 0.0000. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA 1D. Susceptibilidad bacteriana in vitro del extracto etanólico de eucalipto al 50%,75% y 100% en comparación con el gluconato de clorhexidina al 0.2% sobre el S.mutans ATCC 25175.. PRUEBA DE DUNCAN sub grupos para α = 0.05. Grupos de Tratamiento n. 1. A18.00 I G. Extracto etanólico de eucalipto 50%. 10. 16.7. Extracto etanólico de eucalipto 75%. 10. 18.00. Extracto etanólico de eucalipto 100%. 10. O L O. AT10 OM. 2. Gluconato de clorhexidina 2%. -. T N 3 U. 19.1 20.3. T S Fuente: Datos obtenidos Epor el investigador, año 2016. DE D A T L U C FA. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA 2A. Concentración mínima inhibitoria (CMI) in vitro del extracto etanólico de eucalipto al 50%,75% y 100% en comparación con el gluconato de clorhexidina al 2% sobre el S.mutans ATCC 25175.. FA. T N PROMEDIO DE UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS (UFC) U A Desv. I Grupos de Tratamiento n Promedio G Estándar O Extracto etanólico de eucalipto 50% 10 L 1.1 2.51 O Extracto etanólico de eucalipto 75% T10 0.7 1.89 A M Extracto etanólico de eucalipto 100% 10 0.2 0.42 O T S Gluconato de clorhexidina 2% 10 0 0 E Penicilina G 10 0 0 E D Cultivo sin tratamiento 10 13.897 0.71 D A T L Datos obtenidos por el investigador, año 2016. Fuente: U C. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA 2B. Concentración mínima inhibitoria (CMI) in vitro del extracto etanólico de eucalipto al 50%,75% y 100% en comparación con el gluconato de clorhexidina al 2% sobre el S.mutans ATCC 25175. ANALISIS DE VARIANZA. Fuente de. Suma de. Grados Cuadrados Prueba. Variación. Cuadrados. de. Medios. ( F de V). (SC). Libertad. (CM). Error Total. FA. ( F). O L 1316.780 3 438.927 166.05 O T 3 A 95.159 36 M 2.643 O T 1411.939 39 S E DE (GL). Tratamientos. A I G f. T N U Posibilidad - (p) 0.0000. D A Fuente:TDatos obtenidos por el investigador, año 2016. L U C. 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA 2C. Concentración mínima inhibitoria (CMI) in vitro del extracto etanólico de eucalipto al 50%,75% y 100% en comparación con el gluconato de clorhexidina al 2% sobre el S.mutans ATCC 25175. PRUEBA DE DUNCAN. Grupos de Tratamiento Extracto etanólico de eucalipto 100% Extracto etanólico de eucalipto 75%. 10 T A 10 OM. Extracto etanólico de eucalipto 50% Cultivo sin tratamiento. DE. T N sub grupos para α = U 0.05 -2 n 1 A I 10 0.2 G 10 O 0.7 L O 1.1. 13.897. T S E. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2016.. D A T. FA. L U C. 40 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(47) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV. DISCUSION En la presente investigación, se buscó comparar el efecto antibacteriano in vitro de tres concentraciones del extracto etanolico de eucalipto con el efecto del gluconato de clorhexidina al 2% sobre la cepa ATCC 25175 de S. mutans.. T N U. En la prueba de susceptibilidad bacteriana, se observó que dentro de las concentraciones de extracto etanolico de eucalipto, la de mayor. -. sensibilidad fue la del 100% con un promedio de inhibición de 19.1mm,. A I G. mientras que el gluconato de clorhexidina tuvo un diámetro de halo de 20.3mm.. O L O. AT M altamente significativa del mostrándonos que existe una diferencia O T formados, dado que el valor de p de la efecto inhibitorio de los grupos S E prueba estadísticaEfue menor a 0.05 (p= 0.000), asimismo para D determinar cuál de las concentraciones fue la que presento mayor D A efecto T antibacteriano se aplicó la prueba de Duncan, mediante L U comparaciones del diámetro de los halos de inhibición entre las tres C FA concentraciones de extracto etanolico de eucalipto ( 50%, 75%, y 100%) La acción antibacteriana se evaluó mediante el test de ANOVA,. y el gluconato de clorhexidina al 2%, determinándose que no existe diferencia significativa en el primer grupo, lo mismo que en el segundo grupo, y al igual que en el tercer grupo, pero si existe diferencia significativa entre el extracto etanolico de eucalipto al 50% y el gluconato de clorhexidina al 2%.. 41 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(48) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El efecto antibacteriano del eucalipto, observado sobre el S.mutans, se puede deber a los principales principios activos antibacterianos: eucaliptol (1,8-cineol), flavonoides, taninos, terpenos, alcoholes, compuestos que en conjunto poseen propiedades bactericidas y bacteriostáticas. Los principios activos del Eucalyptus globulus Lábill (eucalipto), tienen poder antibacteriano debido a que causan daño a los. T N enzimas extracelulares) asociadas a la pared celular, provocando U liberación de los componentes citoplasmáticos, alteración de la A I morfología y disminución del volumen celular. G O L O T En la prueba de la concentración mínima inhibitoria, el crecimiento de A S.mutans, con extracto etanolicoM de eucalipto al 50% fue 1.1 UFC O TUFC promedio y al 100% fue 0.2 UFC promedio, al 75% fue 0.7 S Ede clorhexidina al 2% y con penicilina G fue de promedio, con gluconato E D 0 UFC promedio, comparadas con el control en donde se observó un D A crecimiento T de 13.897 UFC/ml aproximadamente. En todas las L U utilizadas de Eucalyptus globulus Lábill se determinó Cconcentraciones mecanismos de transporte y de inhibición de enzimas (precipitación de. FA. efecto antibacteriano, siendo la concentración mínima inhibitoria la de 50%, ya que el inoculo fue de 13.897 UFC reduciéndose a 1.1 UFC, confirmando la hipótesis porque los resultados fueron semejantes con el gluconato de clorhexidina. Esto podría deberse a las propiedades bacteriostáticas y bactericidas de los principios activos del eucalipto.. 42 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(49) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En el análisis de varianza (ANOVA), se determinó que existe una diferencia estadística altamente significativa en el crecimiento de UFC de S. mutans según la concentración de extracto etanolico de eucalipto, gluconato de clorhexidina al 2%. Debido a que el valor de p de la prueba estadística fue menor a 0.05 (p=0.000). Al aplicar la prueba de Duncan, se determinó que entre el grupo formado. T N Uy no hay diferencia significativa en el promedio de UFC de S.mutans, el grupo conformado por el cultivo sin tratamiento, si hay diferencia A I altamente significativa. G O L De lo anterior, podemos decir que el gluconato O de clorhexidina al 2% T tiene efecto semejante que el A grupo formado por las tres M O de eucalipto sobre el S.mutans concentraciones de extracto etanolico T ATCC 25175, y dentro de ESestas, la de mayor efecto fue la del 100%. E D Varios investigadores han utilizado el eucalipto para determinar su D A efecto antibacteriano, como lo demostrado por Egwaikhide y T L , quienes encontraron que los extractos metanólicos U Ccolaboradores por las tres concentraciones de extracto etanolico de eucalipto, donde. FA. (32). del. eucalipto. fueron. estreptomicina, Corynebacterium. más eficientes. cuando. se. pyogenes,. en. evaluaron Bacillus. comparación. contra. las. con. la. bacterias. stearothermophilus,. Staphylococcus epidermidis, Klebsiella pneumoniae y Bacillus cereus; mientras que en el presente estudio se encontró que el S. mutans es susceptible al extracto etanolico de Eucalyptus globulus.. 43 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

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