Efecto antibacteriano “in vitro” del aceite esencial de piper angustifolium (matico) sobre streptococcus pyogenes

Texto completo

(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA. fo r. m. át ica. yC. om un. ica ció. n. ESCUELA ACADÉMICO-PROFESIONAL DE MEDICINA. In. Efecto antibacteriano “in vitro” del aceite esencial de Piper angustifolium. as. de. (matico) sobre Streptococcus pyogenes. BACHILLER EN MEDICINA. ió. n. de. Si st. em. TESIS PARA OPTAR EL GRADO DE. Di re cc. AUTOR:. ASESOR:. FRANZ JESÚS ARTEAGA DAMAZON Dra. ELVA MEJÍA DELGADO. TRUJILLO-PERÚ 2016. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. n. A Dios por bendecirme y guiarme. ica ció. durante este largo camino,. om un. por darme las fuerzas necesarias. yC. para lograr mis metas y seguir adelante.. A mis padres y hermanas, por su apoyo. át ica. y confianza incondicional en mí,. fo r. m. por su respaldo hacia el logro de mis sueños.. De La Pastoral Universitaria Medicina UNT. Por su constante apoyo, motivación y por formar parte de mi familia.. Di re cc. ió. n. de. Si st. em. as. de. In. A mis amigos de la facultad y a los integrantes. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTOS. n. A la Dra. Elva Mejía Delgado, mi asesora de tesis, por brindarme su amistad y. ica ció. consejos durante toda mi carrera universitaria, por guiarme y ayudarme en la. om un. realización de nuestra investigación.. yC. A la profesora Marilú Soto Vásquez, por su apoyo en el Laboratorio de Farmacognosia- Farmacobotánica de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la. m. át ica. UNT. fo r. Al personal técnico del Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Medicina. as. de. In. de la UNT, por su gran apoyo y servicio durante la ejecución de la investigación.. em. A los pacientes que participaron en este estudio, por su colaboración voluntaria y. Di re cc. ió. n. de. Si st. disponibilidad, en las pruebas pertinentes de la investigación.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE INTRODUCCIÓN……………………………………………………..….1. I.. n. 1.1. Antecedentes……………………………………………………..…...1. ica ció. 1.2. Justificación…………………………………………………….…….4. 1.3. Problema………………………………………………………..….…5. om un. 1.4. Hipótesis…………………………………………………………..…..5. yC. 1.5. Objetivos……………………………………………………….….….5 MATERIAL Y MÉTODOS………………………………………..….....6. II.. át ica. 2.1. Material de estudios:…………………………………………..….…6. m. 2.2. Métodos y Técnicas……………………………………………...…..8. In. fo r. 2.3. Instrumento de Recolección de Datos…………….……….............14. de. 2.4. Operacionalización de variables.…………………….…….............14. as. 2.6. Definición conceptual de variables…………………………….…..15. em. 2.7. Análisis estadístico e interpretación de la información…….…….16. Si st. 2.8. Aspectos éticos……………………………………………………....16 2.9. Diseño Experimental……………………………………………......18 RESULTADOS…………………………………………………….…….19. IV.. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN……………………………………….……..25. ió. n. de. III.. CONCLUSIONES……………………………………………….………29. VI.. RECOMENDACIONES…………………………………………..…….30. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS…………………………..……..31. Di re cc V.. VIII. ANEXOS…………………………………………………………..……..36. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Efecto antibacteriano “in vitro” del aceite esencial de Piper angustifolium (matico) sobre Streptococcus pyogenes. n. RESUMEN. ica ció. OBJETIVO: Evaluar el efecto antibacteriano “in vitro” del aceite esencial de Piper. om un. angustifolium (matico) sobre Streptococcus pyogenes Grupo A aislado de hisopado faríngeo.. yC. MATERIAL Y MÉTODOS: Estudio de tipo experimental del efecto antibacteriano de las concentraciones al 25% (268.65 mg/mL), 50% (537.3 mg/mL), 75% (805.5. át ica. mg/mL) y 100% (1074.6 mg/mL) del aceite esencial de Piper angustifolium sobre. m. Streptococcus pyogenes Grupo A; se utilizó como control Penicilina de 10 UOF. Se. fo r. empleó el método de Kirby Bauer (difusión en disco) y la concentración mínima. de. In. inhibitoria (CMI) para evaluar la actividad antibacteriana de Piper angustifolium. as. sobre Streptococcus pyogenes Grupo A. Se realizó la prueba de análisis de varianza. em. no paramétrico Kruskal-Wallis y la prueba de comparaciones múltiples utilizando. Si st. subconjuntos homogéneos. Ambas con un nivel de significancia del 0,05 (P< 0,05).. de. Resultados: Se evidencia el efecto antibacteriano del aceite esencial de Piper entre las. n. angustifolium (matico) sobre Streptococcus pyogenes existiendo. Di re cc. ió. concentraciones utilizadas 3 grupos significativamente diferentes (p<0.05). Streptococcus pyogenes según la escala de Duraffourd fue sumamente sensible a las 4 concentraciones. La CMI para Streptococcus pyogenes fue de 75% (805.5 mg/mL). Conclusiones: Existe efecto antibacteriano del aceite esencial de Piper angustifolium (matico) sobre Streptococcus pyogenes del grupo A aislada de hisopado faríngeo. Palabras Claves: Piper angustifolium, Streptococcus pyogenes, aceite esencial.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT OBJECTIVE: Evaluate the antibacterial effect "in vitro" the essential oil of Piper. n. angustifolium (matico) on Group A Streptococcus pyogenes isolated from throat. ica ció. swab.. om un. MATERIAL AND METHODS: Experimental study of the antibacterial effect of the concentrations 25% (268.65 mg / mL), 50% (537.3 mg / mL), 75% (805.5 mg /. yC. mL) and 100% (1074.6 mg / mL) essential oil Piper angustifolium on Streptococcus pyogenes Group A; Penicillin was used as control 10 UOF. The method of Kirby. át ica. Bauer (disk diffusion) and the minimum inhibitory concentration (MIC) was used to. m. evaluate the antibacterial activity of Piper angustifolium on Streptococcus pyogenes. fo r. Group A. test analysis of variance nonparametric was performed Kruskal-Wallis test. de. In. multiple comparisons using homogeneous subsets. Both with a significance level of. as. 0.05 (P <0.05).. em. Results: The antibacterial effect of essential oil of Piper angustifolium (matico) on. Si st. Streptococcus pyogenes exist between the concentrations used three groups. de. significantly different (p <0.05) is evident. Streptococcus pyogenes as measured. n. Duraffourd was highly sensitive at 4 concentrations. The MIC for Streptococcus. Di re cc. ió. pyogenes was 75% (805.5 mg / mL). Conclusions: There antibacterial effect of essential oil of Piper angustifolium (matico) on Streptococcus pyogenes group A isolated from throat swab. Keywords:. Piper. angustifolium,. Streptococcus. pyogenes,. essential. oil.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I. INTRODUCCIÓN 1.1.. ANTECEDENTES. n. La faringoadmigdalitis es una inflamación de las mucosas del área faringoamigdalar,. ica ció. presentándose eritema, edema, exudado, úlceras o vesículas. Aunque su etiología. om un. viral es la más frecuente; se reconoce al Streptococcus pyogenes beta hemolítico del grupo A, como el agente bacteriano responsable de una tercera parte de los casos.. (1). yC. Además, esta bacteria produce complicaciones supurativas y no supurativas, las primeras por diseminación a otros tejidos; las segundas, debido a secuelas de la. át ica. respuesta inmunológica como fiebre reumática aguda y la glomerulonefritis. m. postestreptocócica. (2). fo r. La infección por Streptococcus pyogenes ocurre por contacto cercano con personas (3). de. In. infectadas o colonizadas, a partir de saliva o secreciones nasales.. as. Con el fin de minimizar sus consecuencias, se deben tener en cuenta diferentes. em. aspectos en el manejo de la faringoamigdalitis.. Si st. Existe controversia sobre el manejo de la faringoamigdalitis por Streptococcus. de. pyogenes; desarrollándose dos tendencias generales diferentes: la primera de. n. identificar los casos posibles según criterios clínicos y epidemiológicos, confirmar. Di re cc. ió. por laboratorio la presencia de Streptococcus pyogenes y hacer tratamiento antibiótico en los casos positivos para prevenir las complicaciones; la segunda, de considerar la infección como una enfermedad benigna autolimitada, con baja frecuencia de fiebre reumática y de complicaciones supurativas. (4,5). 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Rutinariamente el diagnóstico de faringoamigdalitis se hace en base a los criterios clínicos de Centor, que establecen una escala de puntaje para definir la necesidad de (5,6). n. hacer prueba confirmatoria o prescribir antibióticos inmediatamente.. ica ció. La confirmación de la presencia de Streptococcus pyogenes se hace por métodos. om un. convencionales como el aislamiento en cultivo de exudado amigdalar, cuya sensibilidad y especificidad son muy elevadas (90-95% y > 95%, respectivamente) y. yC. las posteriores pruebas de identificación que demoran el diagnóstico entre 24 y 48 horas. (5, 7). át ica. La confirmación del diagnóstico de la enfermedad es fundamental para el buen. m. tratamiento del paciente sintomático y para la prevención de las complicaciones.. fo r. Los pacientes deben ser tratados con un antibiótico apropiado en una dosis apropiada. de. In. con una duración generalmente 10 días para erradicar el organismo de la faringe.. as. Basado en su estrecho espectro de actividad, poca frecuencia de las reacciones. em. adversas, y el costo modesto, penicilina o amoxicilina son los fármacos. Si st. recomendados de elección para aquellos que no son alérgicos a estos agentes. En. de. individuos alérgicos a la penicilina se debe incluir una cefalosporina de primera generación durante 10 días, clindamicina o claritromicina durante 10 días, o. Di re cc. ió. n. azitromicina durante 5 días. (8) Los antibióticos beta-lactámicos son bactericidas sobre bacterias en crecimiento, y poseen el mismo mecanismo: Inhiben el sistema enzimático implicado en la reacción de transpeptidación del peptidoglucano naciente, o sea que impiden los entrecruzamientos entre cadenas de peptidoglucano. Ello origina la acumulación de precursores del peptidoglucano, sin ensamblar; activación de una serie de autolisinas 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. (amidasas, glucosidasas), que hidrilozan el peptidoglucano maduro de la bacteria; si la bacteria se encuentra en un medio hipotónico, termina lisándose. En Gram-. n. positivas, además, se produce desorganización de los ácidos teicoicos y lipoteicoicos. ica ció. que regulan de algún modo a las autolisinas. (9). om un. En países en vías de desarrollo el tratamiento para la faringoadmigdalitis la mayoría de veces se lleva a cabo de manera empírica, implicando la prescripción de. yC. antibióticos innecesarios; tal situación tiene efectos en el aumento de la resistencia bacteriana.. át ica. El desarrollo de resistencia a medicamentos en los patógenos humanos contra. m. antibióticos usados, el alto costo y el aumento de los efectos secundarios tóxicos de. fo r. estas drogas sintéticas ha hecho necesario la búsqueda de nuevas sustancias. de. In. antimicrobianas de otras fuentes, incluyendo plantas medicinales. (10, 11, 12,13). as. El uso de plantas medicinales para tratar enfermedades crónicas e infecciosas es bien (13). em. conocida en zonas rurales de muchos países en desarrollo.. Si st. Las plantas utilizadas en la medicina no tradicional contienen una amplia gama. de. sustancias químicas que producen acciones fisiológicas definidas en el cuerpo humano. Los más importantes compuestos bioactivos son alcaloides, flavonoides,. Di re cc. ió. n. taninos y compuestos fenólicos. (14.15) Las especies del género Piper han sido ampliamente investigadas y los estudios fitoquímicos han conducido al aislamiento de una amplia variedad de metabolitos secundarios,. destacando. los. alcaloides,. lignanos,. neolignanos,. terpenoides,. kavapironas, piperolidas, chalconas y dihidrochalconas, flavonas y flavanonas, los cuales presentan una amplia gama de actividades biológicas. (16) 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El matico es una planta de la familia Piperaceae de aproximadamente 3 metros de altura que crece en la costa, selva alta y baja y en los valles interandinos de la sierra;. n. se utiliza en la medicina tradicional como diurético, antiinflamatorio, antiséptico local. ica ció. y cicatrizante. (16, 17, 18). om un. El contenido de aceite esencial de las hojas de matico es 0,63% predominando compuestos terpenoides. Los monoterpenos componen el 53% del aceite esencial y. yC. son representados por el linalol; otros constituyentes son los irinoides con propiedades antibacterianas. Los sesquiterpenos conforman el 55% del contenido del. át ica. aceite esencial y son representados por diversos compuestos, especialmente el óxido. m. de cariofileno, epóxido II de humuleno, (E) Nerolidol y a-Copaeno. También está. fo r. presente pequeñas cantidades de alil benzeno safrol y de metil cetona 2- Undecanona;. de. In. además fenilpropanoides que posee propiedades bactericidas. (19). as. Algunos ensayos in vitro demostraron actividad antibacteriana contra gérmenes Gram. JUSTIFICACIÓN DE LA INVESTIGACIÓN. Si st. 1.2.. em. positivos y negativos, lo cual se debería a la presencia terpenos. (20). de. Debido a la prevalencia de Faringoadmigdalitis por Streptococcus pyogenes Grupo A,. n. el aumento de resistencia por el uso de antibióticos contra estos microorganismos de. Di re cc. ió. manera indiscriminada y cumpliendo con las estrategias planteadas por la OMS para el periodo 2014-2023 de fomentar la cobertura sanitaria universal a través de la integración de la Medicina no tradicional en la prestación de servicios de salud,. aprovechando sus posibilidades para contribuir a mejorar los servicios y los resultados sanitarios; además de fortalecer su garantía de calidad, seguridad, uso adecuado y eficacia de la medicina no tradicional mediante su reglamentación, 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. evaluación e integración de productos y práctica, se estudió si el aceite esencial de Piper angustifolium (matico) tiene efecto antibacteriano “in vitro” sobre. PROBLEMA. ica ció. 1.3.. n. Streptococcus pyogenes Grupo A.. om un. ¿Tiene efecto antibacteriano “in vitro” el aceite esencial de Piper angustifolium (matico) sobre Streptococcus pyogenes Grupo A? HIPÓTESIS. yC. 1.4.. El aceite esencial de Piper angustifolium (matico) posee efecto antibacteriano “in. OBJETIVOS. m. 1.5.. át ica. vitro” sobre Streptococcus pyogenes Grupo A.. fo r. 1.5.1. Objetivo General. de. In. Evaluar el efecto antibacteriano “in vitro” del aceite esencial de Piper angustifolium. as. (matico) sobre Streptococcus pyogenes Grupo A.. Determinar la concentración mínima inhibitoria del aceite esencial de Piper. Si st. -. em. 1.5.2. Objetivos específicos. 25%, 50%, 75% y 100% frente a Streptococcus. de. angustifolium (matico) al pyogenes Grupo A.. ió. n. Comparar el efecto antibacteriano “in vitro” del aceite esencial de Piper. Di re cc. -. angustifolium (matico) al. 25%, 50%, 75% y 100% frente a Streptococcus. pyogenes Grupo A.. -. Determinar la susceptibilidad bacteriana del aceite esencial de Piper angustifolium (matico) frente Streptococcus pyogenes Grupo A.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II. MATERIAL Y MÉTODOS 2.1.. MATERIAL DE ESTUDIO. om un. - Según la evolución del fenómeno estudiado: Transveral. ica ció. - Según el período en que se capta la información: Prospectivo. n. 2.1.1. TIPO DE ESTUDIO:. - Según la interferencia del Investigador en el fenómeno que se analiza:. yC. Experimental 2.1.2. POBLACIÓN Y MUESTRA:. CARACTERÍSTICAS GENERALES. át ica. 2.1.2.1.. m. Se trabajó con cepas de Streptococcus pyogenes expuestas a aceite esencial de. CRITERIOS DE SELECCIÓN DE MUESTRA. as. Criterios de inclusión. de. 2.1.2.2.. In. fo r. Piper angustifolium (matico) en concentraciones de 25%, 50%, 75% y 100%.. de. Si st. concentración. em. - Placas con Agar Sangre con macrodilución de Streptococcus pyogenes y la aceite. esencial. de. Piper. angustifolium. (matico). de. correspondiente.. n. Criterios de exclusión. Di re cc. ió. - Placa Petri con la macrodilución que presente algún tipo de deterioro o daño en su estructura durante el proceso de incubación. - Placa Petri con la macrodilución cuyo resultado en el proceso de incubación sea dudoso.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Criterios de eliminación - Placa Petri con la macrodilución que sufra deterioro o daño durante la. n. conservación y los procedimientos, que no permitan su medición posterior.. ica ció. 2.1.3. DISEÑO ESTADÍSTICO DE MUESTREO. om un. Se calculó el número de ensayos con el programa estadístico Minitab 17, obteniendo como tamaño de muestra, 11 repeticiones como mínimo para cada. yC. nivel. La muestra total para el conteo de UFC estuvo constituida por 44 unidades de muestreo para los 4 grupos experimentales y 11 para el grupo. n. de. Si st. em. as. de. In. fo r. m. át ica. control.. Di re cc. ió. Con estos datos se determinó una muestra de 11 observaciones para cada concentración de Piper angustifolium (matico). -. GRUPO 1: 11 repeticiones utilizando aceite esencial de Piper angustifolium (matico) a una concentración de 25% (268.65 mg/mL). -. GRUPO 2: 11 repeticiones utilizando aceite esencial de Piper angustifolium 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. (matico) a una concentración de 50% (537.3 mg/mL) -. GRUPO 3: 11 repeticiones utilizando aceite esencial de Piper angustifolium. GRUPO 4: 11 repeticiones utilizando aceite esencial de Piper angustifolium. -. GRUPO 5: 11 repeticiones utilizando discos de Penicilina 10 UOF MÉTODOS Y TÉCNICAS. yC. 2.2.. om un. (matico) a una concentración de 100% (1074.6 mg/mL). ica ció. -. n. (matico) a una concentración de 75% (805.5 mg/mL). 2.2.1. DE LA APROBACIÓN DEL PROYECTO:. át ica. Para la realización del presente estudio de investigación se obtuvo el permiso para la. m. ejecución, mediante la aprobación del proyecto por el Comité Permanente de. In. fo r. Investigación Científica de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de. de. Trujillo y la correspondiente Resolución de Decanato.. as. 2.2.2. DE LA AUTORIZACIÓN PARA LA EJECUCIÓN:. em. Una vez aprobado el proyecto se solicitó el permiso para poder trabajar en el. de. de Trujillo.. Si st. Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional. n. 2.2.3. DE LA CERTIFICACIÓN DEL EXAMINADOR:. Di re cc. ió. La presente investigación se desarrolló por el investigador principal, bajo la supervisión de su asesora. El investigador se certificó por su asesora experta en el tema, para lo cual realizó la lectura de 10 placas Petri para el conteo de las UFC mediante la inspección visual de cada placa y también repitió la medición con un vernier los halos de inhibición en milímetros entre el investigador y asesora. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.4. ACEITE ESENCIAL DE Piper Angustifolium (MATICO) PARA EL ESTUDIO Recolección de Piper angustifolium (matico). n. 2.2.4.1.. ica ció. Se recolectaron 5 kg hojas verdes y talluelos de Piper angustifolium (matico), del. om un. departamento de La Libertad, provincia de Otuzco, ubicada a 2,641 msnm). Los cuales fueron observados a temperatura ambiente, sin desecar hasta el momento. 2.2.4.2.. yC. de la extracción del aceite esencial.. Identificación de Piper angustifolium (matico). át ica. La planta medicinal completa, fue llevada al Herbario Truxillensis de la. Preparación de la Muestra vegetal. fo r. 2.2.4.3.. m. Universidad Nacional de Trujillo para su identificación taxonómica.. de. In. Selección de Piper angustifolium (matico): Obtenida la muestra necesaria de. as. Matico, fue transportada al laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de. em. Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo y se eliminaron. Si st. las hojas que presentaron signos de enfermedades evidentes como pigmento café,. de. amarillo u oscuro.. n. Lavado: Se lavó el material vegetal con agua destilada, seguido de desinfección,. ió. utilizando hipoclorito de sodio al 0.5 %. Posteriormente se realizó un enjuague. Di re cc. con agua destilada estéril, para retirar los residuos de hipoclorito. (21) 2.2.4.4.. Obtención del aceite esencial de Piper angustifolium (matico). Se efectuó con el método por arrastre de vapor de agua (convencional). Técnica simple y económica para obtener el aceite esencial de este tipo de planta.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El aceite esencial fue extraído a partir de 500g de hojas, previamente cortadas en trozos de aproximadamente 2 cm, este material se colocó en un recipiente de en. n. un balón de vidrio de 1000 mL; así como 500 mL de agua destilada. Luego se. ica ció. armó el equipo de destilación, sometiendo la muestra a una corriente de vapor de. om un. agua sobrecalentada, arrastrando la esencia que posteriormente por acción del refrigerante, fue condensada, repitiéndose esta operación hasta completar los 2.5. yC. kg de muestra seleccionada. El destilado se separó tomando en cuenta sus propiedades de inmiscibilidad y diferencia de densidades entre agua y aceite. át ica. esencial, para lo cual se utilizó una pera de separación de vidrio, deshidratándose. m. las impurezas de agua en el aceite esencial con Na2SO4 anhidro. Finalmente se. fo r. filtró, guardándose en un frasco de vidrio color ámbar estéril (para evitar la. DE. LAS. CONCENTRACIONES. DE. ACEITE. as. 2.2.5. PREPARACIÓN. de. In. descomposición por la luz) y bajo refrigeración a una temperatura de 4 a 8 oC. (22). em. ESENCIAL DE Piper Angustifolium (MATICO). Si st. Se prepararon según el siguiente cuadro: Volumen de. Volumen. Concentración. aceite esencial. Tween 80. final. (%). Di re cc. ió. n. de. Volumen de. 1.25 mL. 3.75 mL. 5 mL. 25 %. 2.50 mL. 2.50 mL. 5 mL. 50 %. 3.75 mL. 1.25 mL. 5 mL. 75 %. 3 mL. -. 3 mL. 100 %. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Luego, se colocaron cada una de las concentraciones en frascos de vidrio de color ámbar estéril, para protegerlas de la luz, llevándolas posteriormente a. n. refrigeración de 4 a 8 °C, hasta la realización del análisis microbiológico.. ica ció. 2.2.6. RENDIMIENTO DEL ACEITE DE Piper Angustifolium (MATICO). om un. El rendimiento del aceite fue de 0.41ml por cada 100g de hoja seca (0.41%), obteniéndose una densidad de 1.0746 g/mL.. yC. Las concentraciones al transformarse en mg/mL se obtienen sus respectivas equivalencias:. át ica. Densidad del. Concentración(%) 25 %. fo r. 268.65 mg/mL. m. aceite (mg/mL). 50 %. In. 537.3 mg/mL. de. 805.5 mg/mL. 100 %. em. as. 1074.6 mg/mL. 75 %. Si st. 2.2.7. CEPAS BACTERIANAS PARA EL ESTUDIO Se trabajó con cepas de Streptococcus pyogenes, obtenidas por hisopado faríngeo. de. de pacientes sintomáticos con faringoadmigdalitis, en el laboratorio de. ió. n. Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de. Di re cc. Trujillo.. 2.2.8. CRECIMIENTO DE CEPAS BACTERIANAS ESTÁNDARES Streptococcus pyogenes: creció a 37°C en Agar sangre con 5% de sangre de conejo y en condiciones de microanaerobiosis.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.9. ESTANDARIZACIÓN DE Streptococcus Pyogenes Se confirmó. el crecimiento de. Streptococcus pyogenes. mediante la. n. determinación de B hemólisis, coloración Gram y prueba de la catalasa. Para. ica ció. estandarizar las cepas bacterianas se utilizó un tubo de ensayo con caldo de Tioglicolato, hasta obtener una turbidez semejante al tubo N°0.5 del Nefelómetro. om un. de Mc Farland (suspensión experimental) que corresponde a 10 8 bacterias/mL.. yC. Los cultivos se incubaron a 37°C por el lapso de 24 a 48 horas en condiciones de. DE. LA. CONCENTRACIÓN. INHIBITORIA. m. 2.2.10. DETERMINACIÓN. át ica. microanaerobiosis, en jarra Gaspak.. fo r. MÍNIMA (CIM). de. In. - En tubos de ensayo se colocó 0.8 ml de cada dilución del Piper angustifolium. as. al 25%, 50%, 75% y 100%.. em. - Se adicionó un inóculo de 0.2 ml del cultivo preparado de Streptococcus. Si st. pyogenes a cada tubo (incluyendo los tubos control) y se incubaron a 370C por un. de. lapso de 24 horas en condiciones de microanaerobiosis.. n. - El crecimiento microbiano se evaluó por turbidez del medio de cultivo.. Di re cc. ió. - Se realizó el sembrado del contenido de los tubos en placa con agar Sangre para determinar las cuentas viables para lo cual se tomó 0,1 ml de cada tubo y se dispersó en toda la placa para determinar las unidades formadoras de colonias (UFC) por cada concentración.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. - Después del sembrado las placas se incubaron a 37°C por 48 horas en jarra Gaspak en condiciones de microanaerobiosis 5 a 10% de CO 2.. n. - Todos los ensayos se realizaron bajo condiciones asépticas y fueron 11. ica ció. repeticiones por concentración.. om un. - Se contaron las Unidades Formadoras de Colonias (UFC’s) en cada repetición. 2.2.11. DETERMINACIÓN DE EFECTO ANTIBACTERIANO (PRUEBA DE. yC. SUSCEPTIBILIDAD). Para la prueba de susceptibilidad se utilizó el método de Difusión en discos. át ica. Kirby-Bauer.. m. Se prepararon discos de papel de filtro estériles, los cuales fueron sumergidos. In. fo r. dentro de cada una de las concentraciones del aceite esencial de Piper. de. angustifolium, luego con una aguja estéril estos se colocaron sobre los cultivos de. as. Streptococcus pyogenes en placas Petri con agar Muller Hinton-sangre,. em. previamente preparadas.. Si st. Se realizaron 12 repeticiones por cada concentración. De igual manera se. de. hicieron 12 repeticiones para el control Penicilina G de 10 UOF.. n. Posteriormente las placas se incubaron a 37°C en microanaerobiosis. Todo el. Di re cc. ió. procedimiento se llevó a cabo dentro del diámetro de 10 cm. de la llama de un mechero. Al cabo de 24 horas se realizó la lectura, se midieron los halos de inhibición de cada una de las concentraciones, incluyendo el área del disco de papel de filtro, con un calibrador vernier.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.3.. INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS:. Se llenaron los datos obtenidos en las fichas elaboradas (Anexo Nº1 y N°2). OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES.. DEFINICIÓN TIPO DE VARIABLE OPERACIONAL DIMENSIONES SEGÚN SU SEGÚN SU E FUNCIÓN INDICADORES NATURALEZA. yC. 2.4.. om un. 2. Medida de halos de inhibición expresada en milímetros (mm).. ica ció. 1. El conteo de las Unidades Formadoras de Colonias (UFC). n. El instrumento contiene:. ESCALA DE MEDICIÓN. fo r. m. át ica. VARIABLES. In. Cualitativa. Independiente. Ordinal. de. Si st. em. as. Aceite esencial. Designación de la concentración utilizada: 25%, 50%, 75%, 100%,Control. de. Aceite esencial de Piper angustifolium "Matico". UFC. Cuantitativa. Dependiente. De Razón. Sensibilidad bacteriana. Halos de inhibición(mm). Cuantitativa. Dependiente. De Razón. ió. n. Concentración inhibitoria mínima. Di re cc. Efecto antibacteriano “in vitro” frente a Streptococcus pyogenes. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.5.. DEFINICIÓN CONCEPTUAL DE VARIABLES:. Aceite esencial de Piper angustifolium “Matico”. n. Aceite esencial de Piper angustifolium obtenido a partir del método de arrastre al. ica ció. vapor, en concentraciones de 25 %, 50%, 75% y 100%.. om un. Efecto antibacteriano “in vitro” frente a Streptococcus pyogenes. El efecto antibacteriano in vitro frente a Streptococcus pyogenes se estudió mediante. yC. la concentración inhibitoria mínima, la cual es la concentración mínima que inhibe el crecimiento de Streptococcus pyogenes. Se tomó como concentración efectiva, al. át ica. tener como resultados 0 UFC.. m. Y para determinar la sensibilidad bacteriana, se utilizó la Escala de Duraffourd,. fo r. escala utilizada para determinar cualitativamente el efecto inhibitorio in vitro, según. de. In. diámetro de inhibición. (23). Nula (-) para un diámetro inferior a 8 mm.. -. Sensibilidad límite (sensible = +) para un diámetro comprendido entre 8 a 14. em. as. -. Si st. mm.. Medio (muy sensible = ++) para un diámetro entre 14 y 20 mm.. -. Sumamente sensible (+++) para un diámetro superior a 20 mm.. ió. n. de. -. Di re cc. Sensibilidad de Streptococcus pyogenes a Penicilina: Se consideró según el diámetro de inhibición: -. Sensible para un diámetro superior a 24 mm.. -. Medio y resistente: Hasta la fecha, no se ha descrito ninguna cepa de S. pyogenes con resistencia a penicilina.(24). 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.6.. ANÁLISIS. ESTADÍSTICO. E. INTERPRETACIÓN. DE. LA. INFORMACIÓN:. n. Para utilizar una prueba estadística adecuada a los datos se evaluó el supuesto de la. om un. 0,05, caso contrario no cumple el supuesto de la normalidad.. ica ció. normalidad (prueba de Shapiro-Wilk) considerando normal si el valor-p es mayor a. Se utilizó el análisis de varianza no paramétrico (Kruskal-Wallis) considerando un. yC. nivel de significancia de 0.05.. Se elaboró cuadros de una entrada con sus valores absolutos para cada variable. át ica. dependiente en Microsoft Excel 2013.. m. Se obtuvo medidas estadísticas descriptivas: media y desviación estándar.. fo r. Para determinar si existe diferencia entre las concentraciones del Piper angustifolium. de. In. "Matico" al 25%, 50%, 75% y 100% y Penicilina de 10 UOF; para el número de. as. unidades formadoras de colonias (UFC) y los halos de inhibición; se empleó un. em. análisis de varianza para un diseño completamente aleatorizado.. Si st. Para determinar que concentración es más efectiva contra Streptococcus pyogenes se. de. aplicó una prueba de comparaciones múltiples utilizando subconjuntos homogéneos.. ió. ASPECTOS ÉTICOS. Di re cc. 2.7.. n. Ambas con un nivel de significancia del 0,05 (P< 0,05).. -. Constancia de Asesoría. (Anexo N° 3). -. Constancia de aprobación para ejecución del proyecto por el Comité. Permanente de Investigación de la Escuela Académico Profesional de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo. (Anexo N°4). 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. -. Autorización del Departamento de Ciencias Básicas Médicas para acceder al. Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional. Acta de consentimiento informado para las pruebas de hisopado faríngeo.. ica ció. -. n. de Trujillo. (Anexo N°5). -. om un. (Anexo N°6). Para la ejecución de esta investigación, el personal investigador tomó todas las. yC. medidas estándares de bioseguridad establecida por el Ministerio Nacional de Salud. Di re cc. ió. n. de. Si st. em. as. de. In. fo r. m. át ica. (MINSA) antes, durante y después de cada procedimiento microbiológico.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DISEÑO EXPERIMENTAL. Di re cc. ió. n. de. Si st. em. as. de. In. fo r. m. át ica. yC. om un. ica ció. n. 2.8.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. RESULTADOS. a. diferentes. concentraciones. de. Piper. sobre. om un. Streptococcus pyogenes y control con Penicilina. angustifolium. ica ció. inhibición. n. Tabla N° 01 Prueba de normalidad Shapiro-Wilk con resultados de los halos de. gl. Sig.. 25% (mm). 0.928. 12. 0.362. 50% (mm). 0.674. 12. 0.000. 75% (mm). 0.809. 12. 0.012. 100% (mm). 0.777. 12. 0.005. 12. 0.000. In. fo r. m. át ica. Estadístico. de. yC. Prueba de normalidad SHAPIRO-WILK. 0.650. Si st. em. as. Control (mm). n. de. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2016. Di re cc. ió. Tabla N° 01. La prueba de Shapiro-Wilk a las medidas de los diámetros obtenidos en diferentes concentraciones de Piper angustifolium, determinó que el análisis de varianza se realizaría con la Prueba no paramétrica (Kruskal-Wallis) considerando un nivel de significancia de 0.05.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Gráfico N° 01 Medida del halo de inhibición en mm a diferentes concentraciones. Di re cc. ió. n. de. Si st. em. as. de. In. fo r. m. át ica. yC. om un. ica ció. n. de Piper angustifolium sobre Streptococcus pyogenes y control con Penicilina. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2016. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Gráfico N° 01. Indica las medidas y promedio de los halos de inhibición hallados de acuerdo a la concentración del aceite esencial de Piper angustifolium "Matico" al. n. 25%, 50%, 75% y 100% sobre Streptococcus pyogenes (p<0.05), Además se observa. ica ció. que el mayor efecto antimicrobiano sobre el crecimiento de Streptococcus pyogenes. om un. corresponde a la concentración del aceite esencial de Piper angustifolium (matico) al 100% (1074.6 mg/mL); en segundo lugar, la concentración de 75% (805.5 mg/mL);. yC. luego, la concentración del fármaco utilizado (Penicilina G), después las concentraciones del aceite esencial de Piper angustifolium (matico) al 50% (537.3. Di re cc. ió. n. de. Si st. em. as. de. In. fo r. m. át ica. mg/mL) y 25% (268.65 mg/mL). Encontrando un efecto dosis dependiente.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla N° 02 Prueba de comparaciones múltiples utilizando subconjuntos homogéneos con. resultados de. los halos de inhibición. a diferentes. n. concentraciones de Piper angustifolium sobre Streptococcus pyogenes y control. ió. n. de. Si st. em. as. de. In. fo r. m. át ica. yC. om un. ica ció. con Penicilina. Di re cc. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2016. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla N° 02. Muestra que existen 3 grupos significativamente diferentes sobre el crecimiento de Streptococcus pyogenes; el primer grupo está formado por las. n. concentraciones del aceite esencial de Piper angustifolium (matico) al 50% (537.3. ica ció. mg/mL) y 25% (268.65 mg/mL); el segundo grupo formado por el fármaco utilizado. om un. (Penicilina) y la concentración de Piper angustifolium (matico) al 75% (805.5 mg/mL) y finalmente el tercer grupo, la concentración de Piper angustifolium. yC. (matico) al 100% (1074.6 mg/mL). No se encontraron diferencias significativas en el. Di re cc. ió. n. de. Si st. em. as. de. In. fo r. m. át ica. interior de los grupos (p<0.05). 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Gráfico N° 02: Media de UFC y Prueba de Kruskal- Wallis para análisis de varianza. de. diferentes. concentraciones. de. Piper. angustifolium. sobre. de. Si st. em. as. de. In. fo r. m. át ica. yC. om un. ica ció. n. Streptococcus pyogenes y control con Penicilina. ió. n. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2016. Di re cc. Gráfico N° 02: Se presenta el efecto inhibitorio de Piper angustifolium (matico) en relación al número de UFC. Se observa que todas las concentraciones afectan a. Streptococcus pyogenes grupo A, ya que se reduce el número de UFC en todos los. grupos; la concentración de 75% tuvo efecto bactericida, porque el número de UFC fue 0.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. DISCUSIÓN. La faringoadmigdalitis es una de las infecciones más comunes en la infancia, a pesar. n. que su etiología viral es la más frecuente; se reconoce al Streptococcus pyogenes beta. ica ció. hemolítico del grupo A como el agente bacteriano responsable de una tercera parte de. om un. los casos (1); además puede presentar resistencia a macrólidos y lincosamidas (25), por ello en la investigación con plantas medicinales, en la medicina no tradicional,. yC. conocida desde la antigüedad por sus propiedades curativas, destaca el género Piper, el cual se utiliza en la medicina tradicional como diurético, antiinflamatorio,. át ica. antiséptico local y cicatrizante. (16, 17, 18) Sin embargo, hasta la actualidad, pocos son. m. los estudios científicos experimentales que comprueban sus propiedades biológicas.. fo r. En el presente trabajo se evidencia que existe un efecto antibacteriano del aceite. de. In. esencial de Piper angustifolium sobre Streptococcus pyogenes, aislada por hisopado. as. faríngeo de pacientes con faringoadmigdalitis, constatado en la medición de los halos. em. de inhibición obtenidos (Gráfico N°01). Además se observó que al hacer. la. prueba. de. subconjuntos. homogéneos,. existen. 3. grupos. de. utilizando. Si st. comparación entre los grupos del aceite esencial de Piper angustifolium (matico). Di re cc. ió. N°02). n. significativamente diferentes sobre el crecimiento de Streptococcus pyogenes (Tabla. El efecto antibacteriano además se comprueba en el crecimiento de unidades formadoras de colonias (UFC) obtenidas, sin existir diferencias significativas entre los grupos (Gráfico N° 02). Sin embargo la concentración con efecto bactericida fue la de 75% porque eliminó a todas las bacterias, no hubo crecimiento de UFC.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La composición del aceite esencial de Piper angustifolium varía de acuerdo al lugar de procedencia. En América, Sureste Asiático y Oceanía el componente mayoritario. n. es el dillapiol (30 a 90%), en Bolivia el 1.8 cineol (40%), en Panamá el β -cariofileno. ica ció. y aromadendreno. (26). om un. En el estudio de Dousseau et al, el rendimiento del aceite esencial de las hojas de Piper angustifolium, fue de 0.63% siendo los compuestos predominantes en mayor. yC. proporción los terpenoides y el monoterpeno linalol. (19) Sin embargo, en algunos estudios ha sido predominante la presencia fenilpropanoide dilapiol, con un. át ica. rendimiento de aceite variable, como se observó en la región occidental de Cuba, con. m. 0.96% de rendimiento y 82.2% de dilapiol (27), en el Estado de Acre, donde se reporta. fo r. cerca de 2% de rendimiento y 73.97% de dilapiol. (28). , y en el Estado de Pará, con el. de. In. 2.5% de rendimiento y el 88.9% de dilapiol. (29). as. Por otra parte, otros trabajos sobre aceites en plantas mencionan la presencia de una. em. mezcla de monoterpenos y sesquiterpenos, pero una carencia de dilapiol como se. Si st. encuentra en las plantas del Estado de Minas Gerais, donde su rendimiento fue de. . En el estado de Pernambuco, también se encontraron plantas de rendimiento entre. n. (31). de. 0.7% de aceite esencial (30), y en el Estado de Sao Paulo, con un rendimiento del 2%. ió. 1.2 a 2.5% y con una predominante presencia de sesquiterpeno E - nerolidol, con un. Di re cc. nivel cerca de un 80%.(32) En nuestro estudio el rendimiento del aceite esencial de Piper angustifolium fue de 0.41%, aunque no se determinó la composición química. del aceite esencial, es muy probable que el Piper angustifolium que se desarrolla en Perú tiene composición variable en comparación con los otros países.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Algunos ensayos in vitro demostraron actividad antibacteriana sobre gérmenes Gram positivos y negativos, lo cual se debería a la presencia de terpenos. (20). , que son. n. antibacterianos.. ica ció. Guerrini el at, encontraron que la MIC del aceite esencial de Piper angustifolium para bacterias Gram positivas (Micrococcus luteus, Staphylococcus aureus, Bacillus. om un. subtilis, Enterococcus foecalis) fue 5.24 mg/mL (26); a diferencia del presente estudio. yC. en que la MIC para Streptococcus pyogenes es de 805.5 mg/mL; la cual se asemeja a la MIC obtenida en el estudio de Cruzado, 750 mg/mL, sobre Staphylococcus aureus ; siendo probable que éstas tengan mayor sensibilidad que las cepas de. át ica. (33). m. Streptococcus Pyogenes.. fo r. Brazao et al, al estudiar el efecto antibacteriano de Piper angustifolium sobre aureus,. Staphylococcus. Staphylococcus. aureus. meticilino-resistantes,. epidermidis, encontraron. S.. epidermidis. que. dilapiol. y en. as. de. In. Staphylococcus. em. combinación con la miristicina, ambos componentes del aceite esencial, mostraron. Si st. actividad antibacteriana con valores compatibles a lo previamente observado entre el. de. aceite y dilapiol solo, y que era valores de CIM entre 500 y 750 mg/ml. Otro componente importante del aceite, es el piperitona, lo que puede ayudar en la acción. Di re cc. ió. n. bactericida de dilapiol y miristicina. (34) Según los resultados obtenidos, se determinó que existe actividad inhibitoria in vitro. del aceite esencial de Piper angustifolium (matico) sobre el crecimiento de Streptococcus pyogenes del grupo A, obteniendo un efecto dosis dependiente y mayor que el control utilizado.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El presente estudio es relevante porque, conlleva a nuevas posibilidades en la investigación clínica y farmacológica sobre Piper angustifolium, e incentiva al. n. desarrollo de nuevos estudios en modelos in vivo con la finalidad de permitir que la. ica ció. población disponga de una alternativa antibacteriana natural, de bajo costo y eficiente. Di re cc. ió. n. de. Si st. em. as. de. In. fo r. m. át ica. yC. om un. para tratar las infecciones por Streptococcus pyogenes del grupo A.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V. -. CONCLUSIONES. La concentración mínima inhibitoria del aceite esencial de Piper. n. angustifolium (matico) fue 75% frente a Streptococcus pyogenes Grupo A. Existe 3 grupos del aceite esencial de Piper angustifolium (matico). ica ció. -. om un. significativamente diferentes con efecto antibacteriano in vitro sobre Streptococcus pyogenes Grupo A, el primer grupo formado por las. yC. concentraciones al 25% y 50%; el segundo grupo, por el fármaco utilizado (Penicilina) y la concentración de 75% y el tercer grupo, por la. Streptococcus pyogenes Grupo A fue sumamente sensible a todas las. m. -. át ica. concentración al 100%.. Di re cc. ió. n. de. Si st. em. as. de. In. la Escala de Duraffourd.. fo r. concentraciones del aceite esencial de Piper angustifolium (matico) según. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI. -. RECOMENDACIONES. Se recomienda aislar los principios activos de Piper angustifolium (matico). n. responsables de su actividad antimicrobiana. Sería conveniente realizar estudios que incluyan componentes activos de. ica ció. -. -. om un. Piper angustifolium para dilucidar su posible mecanismo de acción.. Se recomienda realizar estudios in vivo para valorar la efectividad y que. podrían. producir. componentes. activos. de. Piper. yC. toxicidad. angustifolium (matico), obteniendo dosis terapéuticas para la población. Di re cc. ió. n. de. Si st. em. as. de. In. fo r. m. át ica. humana, en sus diferentes presentaciones.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Shaikh N, Leonard E, Martin J. Prevalence of Streptococcal Pharyngitis and. n. Streptococcal Carriage in Children: A Meta-Analysis. Pediatrics. 2010; 126(3):e557-. ica ció. e564.. om un. 2. Little P, Stuart B, Hobbs R, Butler C, Hay A, Campbell J, et al. Predictors of suppurative complications for acute sore throat in primary care: prospective clinical. yC. cohort study. BMJ. 2013; 347(f6867): 1-14.. át ica. 3. Restrepo M, Múnera M, Ramírez B, Acuña C. Infección y colonización faríngea. m. asintomática de niños por Streptococcus pyogenes. Iatreia. 2012; 25(3): 203-209.. fo r. 4. Regoli M, Chiappini E, Bonsignori F, Galli L, De Martino M. Update on the. de. In. management of acute pharyngitis in children. Ital J Pediatr. 2011; 37(10):1-7.. as. 5. Cots J, Alós J, Bárcena M, Boleda X, Cañada J, Gómez N, et al. Recomendaciones. Si st. 47(8):532-543.. em. para el manejo de la faringoamigdalitis aguda del adulto. Aten Primaria. 2015;. de. 6. Fine A, Nizet V, Mandl K. Large-Scale Validation of the Centor and McIsaac. ió. n. Scores to Predict Group A Streptococcal Pharyngitis. Arch Intern Med. 2012;. Di re cc. 172(11): 847–852. 7. Cohen J, Cohen R, Levy C, Thollot F, Benani M, Bidet P, et al. Selective testing strategies for diagnosing group A streptococcal infection in children with pharyngitis: a systematic review and prospective multicentre external validation study. CMAJ. 2015; 187(1):23-32 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 8. Shulman S, Bisno A, Clegg H, Gerber M, Kaplan E, Lee G, et al. Clinical Practice Guideline for the Diagnosis and Management of Group A Streptococcal Pharyngitis:. n. 2012 Update by the Infectious Diseases Society of America. Clin Infect Dis. 2012; 55. ica ció. (10): e86-e102.. om un. 9. Brunton L, Chabner B, Knollmann B, editores. Goodman & Gilman. Las Bases Farmacológicas De La Terapéutica.12ª Edición.Mc Graw Hill; 2011.. yC. 10. Nascimento G, Locatelli J, Freitas P, Silva G. Antibacterial activity of plant. át ica. extracts and phytochemicals on antibiotic resistant bacteria. Braz. J. Microbiol 2000;. m. 31 (4): 247-256.. fo r. 11. Ramírez R, Mojica D. Actividad antibacteriana de extractos de Gnaphalium. de. In. polycephalum Michx. contra Staphylococcus aureus, Escherichia coli y Pseudomonas. as. aeruginosa. Rev. Col. Inv. Sal. 2014; 1(1):63-71.. em. 12. Valarmathy K, Gokulakrishnan M, Salma M, Paul K. A Study of Antimicrobial. Si st. Activity of Ethanolic Extracts of Various Plant Leaves against Selected Microbial. de. Species. IJPSR 2010; 1(8): 293-295.. ió. n. 13. Hassan A, Rahman S, Deeba F, Mahmud S. Antimicrobial activity of some plant. Di re cc. extracts having hepatoprotective effects. J Med Plant Res 2009; 3(1):20-23. 14. Gibbons S. Phytochemicals for bacterial resistance – strengths, weaknesses and opportunities. Planta Med. 2008; 74: 594-602.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 15. Soto M, Soto K, Serrano A. Metabolitos secundarios y efecto antibacteriano in vitro del extracto hidroetanólico de las flores de Cantua buxifolia Juss. ex Lam.. ica ció. n. (Polemoniaceae) “Flor Sagrada de los Incas” Arnaldoa 2014; 21 (1): 81 – 90 16. Lazo C. Efecto de un Extracto Seco de Matico (BG126) sobre el daño oxidativo. om un. inducido por Biorreducción De Nitrofurantoína [Tesis], Santiago de Chile: Universidad de Chile. Facultad deCiencias Químicas y Farmacéuticas; 2010. yC. 17. Arroyo J. Chávez R, Anampa A, Donaires R, Ráez J. Protective Effect of Piper. át ica. aduncum Capsule on DMBAinduced Breast Cancer in Rats. Breast Cancer: Basic and. m. Clinical Research 2015; 9:41–48. fo r. 18. Arroyo J, Bonilla P, Moreno L, Ronceros G, Tomás G, Huamán J, et al. Efecto. de. In. gastroprotector y antisecretor de un fitofármaco de hojas de matico (Piper aduncum).. as. Rev Perú Med Exp Salud Pública. 2013, 30(4): 608-615.. em. 19. Dousseau S, De Souza I, De Castro E, Alves A, Alves E, Brasil J, et al.. Si st. Caracterización del limbo de Piper aduncum L. (Piperaceae): Análisis estructurales,. de. histoquímicos y de sus aceites esenciales. Gayana Bot. 2014; 71(1): 147-162. ió. n. 20. Chang L, García A, Rosabal Y, Espinosa A, Ramos M, Remon H. Caracterización. Di re cc. fitoquímica y la evaluación de la actividad antibacteriana in vitro de los extractos de hojas y tallos de Solanum nigrum L. que crece en Cuba. Rev Mex Cienc Farm.2013; 44 (4):30-35 21. Miranda M. Métodos de Análisis de Drogas y Extractos. Instituto de Farmacia y Alimentos. Universidad Habana de Cuba.2002. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 22. Albarracín G., Gallo S. Comparación de dos métodos de extracción de aceite esencial utilizando Piper aduncum (cordoncillo) procedente de la zona cafetera.. n. Universidad Nacional de Colombia de Manizales Ingeniería Química. 2003. ica ció. 23. Duraffourd C, D'Hervicourt, L Lapraz J. Cuaderno de Fitoterapia Clínica.. om un. Barcelona: Masson, 1987. 24. Clinical and Laboratory Standards InstitutePerformance Standards for. yC. Antimicrobial Susceptibility Testing. 25th Ed. Wayne: CLSI; 2015.. 25. Camponovo R. Problemas de resistencia en Streptococcus pyogenes. Rev. chil.. át ica. infectol. 2002; 19(2):107-110.. m. 26. Guerrini A, Sacchetti G, Rossi D, Paganetto G, Muzzoli M, Andreotti E, et al.. fo r. Bioactivities of Piper Aduncum L. And Piper Obliquum Ruiz & Pavon (Piperaceae). de. In. Essential Oils of Eastern Ecuador. Environ Toxicol Pharmacol. 2009; 27:39-48.. as. 27. Pino J, Marbot R, Bello A, Urquiola.A. Essential Oils of Piper Peltata (L.) Miq.. em. and Piper Aduncum L. Journal of Essential Oil Research. 2004; 16:124-126.. Si st. 28. Fazolin M., Vidal J, Estrela, Catani V, Alécio M, De Lima M. Propriedade. de. Inseticida Dos Óleos Essenciais De Piper Hispidinervum C. Dc., Piper Aduncum L.. n. e Tanaecium Nocturnum (Barb. Rodr.) Bur. & K. Shum Sobre Tenebrio Molitor L.,. Di re cc. ió. 1758. Ciência e Agrotecnologia. 2007; 31(1):113-120. 29. Sousa P, Barros C, Rocha J, Lira D, Monteiro G. Avaliação Toxicológica Do Óleo Essencial de Piper Aduncum L. Revista Brasileira De Farmacognosia. 2008; 18(2): 217-221.. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 30. Mesquita J, Cavaleiro C, Cunha A, Lombardi J, Oliveira A.. Estudo Comparativo dos Óleos Voláteis de Algumas Espécies de Piperaceae. Revista Brasileira De. n. Farmacognosia. 2005; 15(1): 6-12.. ica ció. 31. Navickiene H, A. Morandim A, Alécio A, Regasini L, Bergamo D, Telascrea M.,. om un. et al. Composition and Antifungal Activity of Essential Oils from Piper Aduncum L., Piper Arboreum Aub. and Piper Tuberculatum Jacq. Química Nova.. yC. 2006; 29(3): 467-470.. 32. Oliveira J, De Dias I, Da Camara C, Schwartz M. Volatile Constituents of the. át ica. Leaf Oils of Piper Aduncum L. From Different Regions of Pernambuco (Northeast of. m. Brazil). Journal of Essential Oil Research. 2006; 18(5): 557-559. fo r. 33. Cruzado L. Efecto antibacteriano in vitro de tres concentraciones de aceite. de. In. esencial de Piper aduncum L. “matico” sobre cinco cepas de Staphylococcus aureus.. as. [Tesis de Bachiller]. Trujillo, Facultad de Medicina UNT, Perú. 2011. em. 34. Brazao M, Brazao F, Maia J, Monteiro M. Antibacterial Activity Of The Piper. Si st. Aduncum Oil And Dillapiole, Its Main Constituent, Against Multidrug-Resistant. Di re cc. ió. n. de. Strains Bol Latinoam Caribe Plant Med Aromat 2014; 13(6): 517 – 526.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) fo r. m. át ica. yC. om un. ica ció. n. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Di re cc. ió. n. de. Si st. em. as. de. In. VIII. ANEXOS. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo N° 01 Diámetros de halos de inhibición en mm en función a cuatro concentraciones de Piper angustifolium sobre Streptococcus pyogenes. Control:. angustifolium. om un. repetición. Control (mm). 30. 25. 26. 28. 25. 26. 30. 26. 26. 28. 26. 26. 26. 30. 25. de. Concentración del aceite esencial de Piper. 24. 24. 26. 25. as. N° de. ica ció. Medición de los halos de inhibición de Piper angustifolium. n. Penicilina. 24. 24. 28. 26. 28. 26. 30. 25. 24. 28. 30. 26. 25. 24. 26. 30. 26. 24. 24. 26. 26. 25. 12. 22. 26. 28. 28. 26. Promedio. 23.42. 24.83. 26.17. 28.67. 25.50. 50% (mm). 75% (mm). 1. 25. 26. 28. 2. 20. 24. 3. 22. 24. 4. 26. 24. 5. 23. 6. 22. 7. 22. 8. 24. n. 10. Di re cc. ió. 11. át ica m fo r. In. em. Si st 26. de. 9. 100% (mm). yC. 25% (mm). Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2016. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo N° 02 Número de UFC en cuatro concentraciones del aceite esencial de Piper angustifolium sobre Streptococcus pyogenes. Control: Penicilina. Repetición. Piper angustifolium "Matico". 1. 0. 0. 0. 2. 0. 0. 0. 3. 0. 0. 4. 0. 0. 5. 1. 0. 6. 0. 7. 0. 8. n. 11. ió. PROMEDIO. Di re cc. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 7. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 1. 1. 0. 0. 0. 0.18. 0.72. 0. 0. 0. yC. 0. m. 0. em. de. 10. UFC/ml 0. Si st. 9. ica ció. UFC/ml. om un. UFC/ml. Control. át ica. UFC/ml. 100%. fo r. 75%. de. 50%. as. 25%. n. CONCENTRACIÓN MÍNIMA INHIBITORIA. In. N° de. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2016. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO N°03 UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. n. FACULTAD DE MEDICINA. om un. ica ció. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MEDICINA. yC. CONSTANCIA DE ASESORIA. Yo, ELVA MEJÍA DELGADO, Profesora Principal a Tiempo Completo del. át ica. Departamento Académico de Ciencias Básicas de la Facultad de Medicina de la. m. Universidad Nacional de Trujillo.. de. In. fo r. CERTIFICO. as. Ser asesora de la Tesis titulada: Efecto antibacteriano “in vitro” del aceite esencial. em. de Piper Angustifolium (Matico) sobre Streptococcus pyogenes, cuyo autor es el. Si st. Estudiante de Pregrado Franz Jesús Arteaga Damazon, identificado con DNI. N°. de. 70577612; Carnet Universitario Nº 1041800311, de la Facultad de Medicina de la. Di re cc. ió. n. Universidad Nacional de Trujillo.. Se expide la presente para los fines correspondientes.. Trujillo, 16 de Mayo del 2016. Dra. ELVA MEJÍA DELGADO Asesora 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Di re cc. ió. n. de. Si st. em. as. de. In. fo r. m. át ica. yC. om un. ica ció. n. ANEXO N°04. 40 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Di re cc. ió. n. de. Si st. em. as. de. In. fo r. m. át ica. yC. om un. ica ció. n. ANEXO N°05. 41 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(48) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO N°06. ________________________________,. identificado. con. Nº. de. ica ció. Yo,. n. ACTA DE CONSENTIMIENTO INFORMADO. DNI. __________, expreso mi voluntad de someterme a la prueba de hisopado faríngeo,. om un. como parte del trabajo de investigación: “Efecto antibacteriano “in vitro” del aceite. yC. esencial de Piper angustifolium (Matico) sobre Streptococcus pyogenes”, realizado por el estudiante Franz Arteaga Damazon de la Facultad de Medicina de la. m. át ica. Universidad Nacional de Trujillo, identificado con código universitario: 1041800311.. fo r. Además, comprendo y acepto que durante el procedimiento pueden aparecer. de. In. circunstancias inesperadas, que puedan requerir una extensión del procedimiento. as. original.. em. Al firmar este documento reconozco que he sido informado de los objetivos que tiene. Si st. la investigación, lo he leído o que me ha sido leído y explicado su contenido. Se me. de. ha dado amplias oportunidades de formular preguntas y que todas las preguntas que. n. he formulado han sido respondidas o explicadas en forma satisfactoria.. Di re cc. ió. Asimismo, tendré la potestad de retirarme del proyecto cuando así lo desee.. Trujillo, _______ de ______del ______. Nombre: ______________________________ DNI: ________________________________ Firma: _______________________________ 42 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(49) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO HERBARIO TRUXILLENSE (HUT) FLORA PERUANA. Di re cc. ió. n. de. Si st. em. as. de. In. fo r. m. át ica. yC. om un. ica ció. n. Familia: Piperacea Nombre Científico: Piper aduncum L. o Piper angustifolium Lam. Leg: -Arteaga Damazon Franz (Alumno de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo) Código: 58318. 43 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(50) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ELABORACIÓN DEL ACEITE ESENCIAL DE Piper angustifolium (matico) EN EL LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA DE LA. Di re cc. ió. n. de. Si st. em. as. de. In. fo r. m. át ica. yC. om un. ica ció. n. FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA- UNT. 44 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.