Efecto anti fúngico in vitro del aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum sobre especies causantes de Otomicosis

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA. IC. IN. A. -U. NT. ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA. ED. TESIS. DE. M. Efecto anti fúngico in vitro del aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum sobre especies causantes de Otomicosis. AUTOR:. LT. AD. PARA OPTAR EL TITULO PROFESIONAL DE: MEDICO CIRUJANO. FA. CU. Pérez Sánchez, Alejandro Sebastian ASESORES: Dra. Mejía Delgado, Elva Manuela Dra. Soto Vásquez, Marilú Roxana. TRUJILLO – PERÚ 2018 0 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. DEDICATORIA. NT. A Dios, por guiar cada paso que doy, mostrarme el camino correcto y ayudarme. ED. A mi madre y mis hermanos por su apoyo y motivación diaria que me permite. A mis familiares por la motivación y consejos que me brindan para seguir en el camino del bien.. FA. CU. LT. AD. DE. M. seguir adelante cada día.. IC. IN. A. -U. mejorar diariamente como persona.. A mis amigos más cercanos que me apoyaron a lo largo de este proyecto.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. AGRADECIMIENTOS. IC. IN. A. -U. NT. A la Dra. Elva Manuela Mejía Delgado, por su tiempo, paciencia y experiencia impartida antes y durante la realización de este trabajo.. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. A la Dra. Marilú Soto, por sus consejos, aportes, recomendaciones y tiempo invertido en la construcción del presente trabajo de investigación.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ÍNDICE Pág. RESUMEN…………………………………………………………………………….03 ABSTRACT……………………………………………………………………….......04. NT. 1. INTRODUCCIÓN….………….………………………………………………..…05. -U. 1.1. Problema……………………….…………………………….……………….......08. A. 1.2. Hipótesis……………………….………………..………………………………...08. IN. 1.3. Objetivos……….……………………….…….…..……………………………....08. ED. IC. 2. MATERIALES Y PROCEDIMIENTOS…………………………………………09. M. 2.1. Objeto de estudio……………………….……………………………..………….09. DE. 2.2. Materiales……………………….………………..…………………...…………..09 2.3. Procedimientos…….………………..……………………….................................16. AD. 2.4. Aspectos éticos.……………………….………………...........................................20. LT. 2.5. Análisis e interpretación de la información….………………..………………..20. CU. 3. RESULTADOS……………………….………………..……………………...……21. FA. 4. DISCUSIÓN……………………….………………..…………………….………...29 5. CONCLUSIONES……………………….……………………………………........33 6. RECOMENDACIONES………………….…….………………………………….34 7. LIMITACIONES……………………...………………………………………........35 8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS….……..…………………….……………36 9. ANEXOS……………………….………………..…………………….……………40 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. RESUMEN El objetivo del presente estudio fue demostrar el efecto anti fúngico in vitro del aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum sobre especies causantes de Otomicosis. El estudio se desarrolló en los ambientes del laboratorio de Farmaconogsia de la. NT. Universidad Nacional de Trujillo y en los laboratorios de Microbiología de la Facultad de. -U. Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.. La muestra estuvo constituida por 10 repeticiones por cada concentración de aceite. A. esencial de canela y se tuvo como control positivo fluconazol. La efectividad de dicho. IN. aceite esencial frente a Candida albicans y Aspergillus niger se determinó mediante el. IC. método difusión de discos. La concentración mínima inhibitoria se evaluó usando el. ED. método de macrodilución, observando la turbidez además de la presencia o ausencia de. M. las Unidades Formadoras de colonias (UFC).. DE. Los resultados obtenidos permitió demostrar que el aceite esencial Cinnamomum. FA. CU. LT. AD. zeylanicum posee efecto anti fúngico in vitro sobre especies causantes de Otomicosis.. Palabras clave: Otomicosis, Aspergillus niger, Candida albicans, Cinnamomum Zeylanicum, efecto anti fúngico. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ABSTRACT The objective of this study was to demonstrate the in vitro antifungal effect of Cinnamomum zeylanicum essential oil on otomycosis-causing species. The study was developed in the environments of the laboratory of Farmaconogsia of the. NT. National University of Trujillo and in the Microbiology laboratories of the Faculty of. -U. Medicine of the National University of Trujillo.. The sample consisted of 10 replicates for each concentration of cinnamon essential oil. A. and fluconazole was taken as a positive control. The effectiveness of such essential oil. IN. against Candida albicans and Aspergillus niger was determined by the disk diffusion. IC. method. The minimum inhibitory concentration was assessed using the method of. ED. macrodilution, observing the turbidity in addition to the presence or absence of colony. M. forming units (CFU).. DE. The results obtained showed that the essential oil Cinnamomum zeylanicum has anti-. FA. CU. LT. AD. fungal effect in vitro on otomycosis-causing species.. Key words: Otomycosis, Aspergillus niger, Candida albicans, Cinnamomum zeylanicum, anti-fungal effect. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 1. INTRODUCCIÓN La otomicosis, también conocida como otitis externa fúngica, es una enfermedad producida por hongos saprofitos oportunistas, siendo responsable de un 10% de todas las otitis externas 1. Ha sido generalmente descrita como una infección fúngica del canal auditivo externo con complicaciones infrecuentes que pueden comprometer el oído medio.. NT. Esta entidad, es una de las condiciones más comunes encontradas en la práctica clínica. -U. otorrinolaringológica, siendo reportada su prevalencia en un rango de 9% a 27.2% entre los pacientes que presentan signos y síntomas de otitis externa y hasta en un 30% en. IN. A. pacientes con otopiorrea 2.. IC. Existen varios factores predisponentes para esta enfermedad, los cuales incluyen un clima. ED. húmedo, presencia excesiva de cerumen, uso de instrumental en el oído, uso de antibióticos tópicos/soluciones esteroideas, uso de sustancias oleosas, exposición. M. continua a agua dulce o salada, inmuno compromiso del huésped, pacientes sometidos a. DE. mastoidectomía de cavidad abierta y aquellos que usan audífonos con molde de oído. AD. oclusivo. Estos factores, conllevan cambios en el conducto auditivo externo, el cual cambia su pH y que en conjunto con la temperatura del mismo, proporcionan las. LT. condiciones adecuadas para el crecimiento fúngico 3, 4.. CU. Etiológicamente, existen una gran variedad de hongos saprofitos causantes de otomicosis,. FA. dentro de los que se encuentran Aspergillus niger, Candida albicans, Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, y hongos del género Penicillium, Mucor, Rhizopus. Sin embargo, en diversos estudios las especies más comúnmente aisladas, en pacientes inmunocompetentes e inmunocomprometidos, son Aspergillus niger y Candida albicans, los cuales son causantes de aproximadamente un 95% de todos los casos de otomicosis 2, 4, 5.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Entre los principales antimicóticos que se utilizan en la terapia contra la infección por Aspergillus niger se encuentran los triazoles (fundamentalmente el itraconazol y el voriconazol), la anfotericina B y las equinocandinas 6. Por otro lado, en el tratamiento de las infecciones causadas por Candida albicans no complicadas, los anti fúngicos más utilizados son los derivados imidazólicos (fluconazol, itraconazol, ketoconazol,. NT. miconazol, etc.) 7.. -U. Sin embargo, en la actualidad se observa una disminución en la efectividad de estos medicamentos, es decir, un fenómeno de resistencia de parte de los microorganismos a. IN. A. estos fármacos, esto debido principalmente, al surgimiento de cepas resistentes, a la. IC. prescripción irracional de antimicóticos como profilaxis y al aumento de las dosis. ED. terapéuticas 7,8, 9.. Actualmente, la falta de un régimen de tratamiento estandarizado para la otomicosis y el. M. aumento de la prevalencia de cepas resistentes de ambos microorganismos frente a una. DE. gran variedad de anti fúngicos 10, abre nuevas oportunidades a tratamientos que incluyen el uso de plantas como Cinnamomum zeylanicum.. AD. Cinnamomum zeylanicum, es una planta de la familia de las Lauráceas, nativa de la India. LT. e Indochina. Suele crecer bien en climas secos y calientes, alcanzando entre 3 a 10 metros. CU. de altura en estado salvaje. Además posee un ramaje recubierto de una corteza amarillosa y aromática de sabor dulce y picante, hojas persistentes, flores blanco amarillentas. FA. dispuestas en ramas terminales y un fruto de color azul o negro que en su interior contiene usualmente dos semillas 11. Históricamente, ha sido usada para una gran variedad de aplicaciones médicas, debido a los diferentes ingredientes activos que han sido identificados en su aceite, tales como: cinamaldehído (60-75%), eugenol (10% en corteza y 80% en sus hojas), hidroxicinamaldehído,. benzaldehído,. cuminaldeído,. carburos. terpénicos. y. de. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. metilamilcetona, los cuales le confieren un gran número de propiedades: antiinflamatoria, anti bacterial, antivírica, anti fúngica y antioxidante 12, 13. En un estudio realizado por Hili et al, se evaluó el efecto inhibitorio del aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum sobre diferentes microorganismos, entre ellos distintas levaduras como: Torulopsis utilis, Schizosaccharomyces pombe, Candida albicans y. NT. Saccharomyces cerevisiae. Se observó un efecto inhibitorio sobre todas ellas, sugiriendo. -U. este resultado a un posible sinergismo entre sus diversos componentes 13.. Asimismo, Goel et al, estudiaron la actividad inhibitoria de este aceite sobre cepas clínicas. IN. A. de Candida paraprilosis, tropicalis, krusei y albicans. Los resultados demostraron una. IC. marcada sensibilidad, en aproximadamente el 50% de los casos, en especial por parte de. ED. Candida albicans en comparación con las otras cepas aisladas 14. Por otro lado, Li, et al, evaluaron el efecto y mecanismo anti fúngico de Cinnamomum. M. zeylanicum sobre Rhizopus nigricans. Se planteó que el aceite esencial tuvo un efecto. DE. inhibitorio debido a una alteración en la actividad de la succinato y malato deshidrogenasas en el ciclo del ácido tricarboxílico, por lo que se sugirió evaluar este. AD. efecto sobre otras especies de mohos 15.. LT. Debido a los estudios realizados acerca de la actividad anti fúngica de Cinnamomum. CU. zeylanicum, y conociendo la resistencia creciente a diversos anti fúngicos por parte de agentes etiológicos importantes en Otomicosis, el propósito del presente estudio fue. FA. determinar el efecto anti fúngico del aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum, sobre especies representativas de otomicosis de modo que pueda guiar a investigaciones futuras en formulaciones de un tratamiento efectivo y de bajo costo para la otomicosis.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 1.1. Problema ¿Tiene efecto anti fúngico in vitro el aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum sobre especies causantes de Otomicosis?. 1.2. Hipótesis. NT. Ho: El aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum si tiene efecto anti. -U. fúngico in vitro sobre especies causantes de Otomicosis.. H1: El aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum no tiene efecto anti. IC. IN. A. fúngico in vitro sobre especies causantes de Otomicosis.. ED. 1.3. Objetivo general.. Evaluar el efecto anti fúngico in vitro del aceite esencial de Cinnamomum. DE. M. zeylanicum sobre especies causantes de Otomicosis.. 1.3.1. Objetivos específicos:. Determinar la susceptibilidad de especies causantes de otomicosis. AD. ›. LT. frente a distintas concentraciones del aceite esencial de. CU. Cinnamomum zeylanicum.. FA. ›. Determinar la concentración inhibitoria mínima del aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum sobre especies causantes de Otomicosis.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 2. MATERIAL Y MÉTODOS 2.1. Objeto de Estudio: La medida del diámetro del halo de inhibición en las placas sometidas a tratamiento con aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum. 2.2. Materiales:. NT. 2.2.1. Material Botánico. -U. La identificación y clasificación del material vegetal se realizó en el Herbarium Truxillense (HUT) de la Universidad Nacional de Trujillo. IN. A. (ANEXO N°1). Después de su debida identificación, los ejemplares. IC. vegetales obtenidos fueron llevados a los laboratorios de la Facultad. ED. de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, para su posterior procesamiento.. M. 2.2.2. Microorganismos utilizados. DE. Las cepas clínicas de Aspergillus niger y Candida albicans se obtuvieron del Laboratorio Referencial de Salud Pública de la región. AD. La Libertad. Posteriormente se cultivaron en medio Agar Sabouraud. LT. Dextrosa (SDA) a fin de obtener colonias jóvenes.. ›. Placas Petri conteniendo cepas clínicas de Aspergillus niger o Candida albicans con la concentración de aceite esencial de. FA. CU. Criterios de inclusión. Cinnamomum zeylanicum correspondiente. Criterios de exclusión ›. Placas Petri que presenten algún tipo de deterioro o daño en su estructura durante el proceso de incubación.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ›. Placas Petri cuyo resultado en el proceso de incubación sea dudoso.. 2.2.3. Materiales de Laboratorio De uso común en el laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de. NT. Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo.. -U. 2.2.4. Tamaño muestral: Por tratarse de un trabajo experimental, se empleó la siguiente formula estadística para el cálculo del número de. IN. A. repeticiones necesarias que validen el diseño experimental:. M. ED. IC. (𝑍𝛼⁄2 + 𝑍𝛽 )2 2𝑆 2 𝑛= ̅̅̅1 − 𝑋̅2 ) (𝑋. DE. Siendo “n” el número de repeticiones a efectuar en cada investigación. AD. 𝑍 𝛼/2 = 1.96 𝑝𝑎𝑟𝑎 𝛼 = 0.05. LT. 𝑍 𝛽 = 0.84 𝑝𝑎𝑟𝑎 𝛽 = 0.20. CU. ̅̅̅1 − 𝑋̅2 ) valor asumido por no haber estudios previos S = 0.8 (𝑋. FA. Reemplazando: 𝑛 = 10  Unidad de análisis: Constituida por cada una de las repeticiones para cada concentración de aceite esencial realizada en las placas Petri.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Independiente cuantitativa. -U. Definición operacional Colocación de disco con 50µL de aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum en medio SDA. Indicador. Concentraciones del 0%, 25%, 50%, 75% y 100%.. Nivel de medición. Unidad de medida. Razón. Micro litros (µL). M. Aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum. Tipo de variable. ED IC IN A. Variable. NT. 2.2.5. Operacionalización de variables. DE. Dependiente Cuantitativa. Diámetro del halo de inhibición. UFC y Turbidez. Nominal. Milímetros (mm) (UFC/mL). FA CU. LT AD. Efecto anti fúngico. Capacidad para evitar la reproducción o producir la muerte del hongo en condiciones experimentales.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 2.2.6. Marco conceptual Otomicosis: Infección del conducto auditivo externo o del oído medio producida por hongos 2. Otopiorrea: Supuración purulenta, que se exterioriza en el conducto. NT. auditivo externo 2. Concentración inhibitoria mínima (CIM): Concentración más baja de un. -U. antimicrobiano que inhibe el crecimiento de un microorganismo después de. A. su incubación 16.. IN. Unidad formadora de colonias (UFC): Valor que expresa el número. IC. relativo de microorganismos de un taxón determinado en un volumen de. ED. agua 16.. M. Efecto anti fúngico: Capacidad para evitar la reproducción o producir la. DE. muerte del hongo en condiciones experimentales 16. Halo de Inhibición: Zona alrededor del disco donde una sustancia. AD. antimicrobiana es capaz de impedir el crecimiento de un microorganismo al. LT. cabo de 18 a 24 horas de incubación 16. Susceptibilidad: Determina la cantidad de droga que se requiere para matar. CU. o inhibir el crecimiento de un microorganismo patógeno. Se considera. FA. sinónimo de sensibilidad 16.. Bioseguridad: Parte de la biología que estudia el uso seguro de los recursos biológicos y genéticos 16. Nivel de significación: Es la probabilidad de rechazar una hipótesis nula verdadera 17.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Test F: Prueba estadística que permite comparar la diferencia de las varianzas para 2 o más medias extraídas de muestras independientes 17. Prueba de Duncan: Es un test de comparaciones múltiples que permite comparar las medias de los t niveles de un factor después de haber rechazado. NT. la Hipótesis nula de igualdad de medias 17. Farmacognosia: Ciencia que se interesa por las sustancias, las plantas y. -U. otra materias primeras de origen animal susceptibles de ser utilizadas con. A. un objetivo terapéutico 12.. IN. Análisis fitoquímico: Estudio que analiza e identifica los principales. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. grupos de metabolitos en una especie vegetal 12.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 2.2.7.. Diseño de investigación:. Método de difusión con discos en agar para el cálculo del diámetro del halo de inhibición del aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum a distintas. Aceite esencial (100%). -U. NT. concentraciones.. 100%. 75%. 50%. 6mL + 0mL de Tween 80. 4,5mL + 1,5mL de Tween 80. 3mL + 3mL de Tween 80. 0%. A. 25%. 0mL + 6mL de Tween 80. IC. IN. 1,5mL + 4,5mL de Tween 80. DE. M. ED. 5mL solución salina estéril Se tomó una muestra con hisopos estériles y se estrió en medio Agar Sabouraud Dextrosa. AD. Ajustado a estándar 0.5 de McFarland 𝟏𝒙𝟏𝟎𝟖 𝑼𝑭𝑪/𝒎𝑳. LT. 2 a 3 colonias de A. niger o C. albicans. FA. CU. Se embebieron los discos durante 1h y se dejaron secar por 15 min. 10 Discos por cada concentración. Se incubaron los cultivos a 37°C por 24h.. 50 µL |. Concentración de aceite esencial correspondiente. Se dejó reposar los discos por 15 min. MEDICIÓN HALOS DE INHIBICIÓN. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Método de macrodilución para la obtención de la concentración inhibitoria mínima del aceite esencial Cinnamomum zeylanicum. 0,5mL. 0,5mL. Caldo Glucosado. 0,5mL. 0,5mL. DE. M. ED. IC. IN. A. 0,5mL. 0%. 25%. 50%. NT. C. albicans o A. niger ajustadas al estándar 0,5 McFarland. 75%. -U. 100%. Se incubó a 37°C por 24h. Además se tomó como la CIM aquella en donde no sea visible el crecimiento después de la incubación. FA. CU. LT. AD. Se depositó 0,5mL de la suspensión de C. albicans o A. niger ajustadas al estándar 0,5 Mc Farland en cada de tubo de ensayo experimental obteniendo un volumen final de 1mL en cada tubo. Se contabilizaron las colonias en cada placa para confirmar la CIM. 0,1mL. Se estriaron las Tubo de ensayo muestras liquidas en Agar Sabouraud experimental correspondiente Dextrosa con ayuda de un asa Drigalsky. Se incubaron los cultivos a 37°C por 24h.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 2.2.8. Procedimientos . Recolección y reconocimiento de la planta: Luego de ser recolectado el Cinnamomum zeylanicum, fue llevado al Herbario “Herbarium Truxillense” de la. NT. Universidad Nacional de Trujillo para ser identificado por. . -U. especialistas.. Obtención del aceite esencial de Cinnamomum. A. zeylanicum:. IN. El material recolectado fue transportado al laboratorio de. IC. Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioquímica. ED. de la Universidad Nacional de Trujillo, en donde se. M. eliminaron las sustancias extrañas presentes en la muestra.. DE. Se separaron grupos de 100 g del total de la corteza, para luego proceder a la obtención del aceite esencial de. AD. Cinnamomum zeylanicum (canela) por el método de. FA. CU. LT. “destilación por arrastre de vapor de agua”. Las cortezas, previamente cortadas en partes pequeñas (1x1 cm), se colocaron en un balón de fondo plano y se sometieron a. una corriente de vapor de agua sobrecalentada; de esta manera se arrastró la esencia que posteriormente por acción del refrigerante, fue condensada. El destilado se separó. tomando. en. cuenta. las. propiedades. de. inmiscibilidad y diferencia de densidades entre el agua y el aceite esencial, luego se utilizó una pera de separación. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. de vidrio, se filtró y se guardó en un frasco de vidrio color ámbar (para evitar la descomposición por la luz) bajo refrigeración a una temperatura de 4°C 18.. Obtención de concentraciones del aceite esencial de. NT. . Cinnamomum zeylanicum:. -U. Una vez obtenido el aceite esencial de Cinnamomum. A. zeylanicum puro se depositaron en 5 probetas de 10mL,. IN. volúmenes de 0, 1.5, 3, 4.5 y 6 mL y se completó hasta un. IC. volumen de 6 mL con Tween 80, obteniéndose. ED. concentraciones de 0%, 25%, 50%, 75% y 100%. Cultivo de las cepas clínicas:. DE. . M. respectivamente.. Las cepas clínicas de Aspergillus niger y Candida. AD. albicans se obtuvieron del Laboratorio Referencial de. FA. CU. LT. Salud Pública de la región La Libertad. Posteriormente se cultivaron en medio SDA con el fin de obtener colonias jóvenes.. . Determinación de la susceptibilidad de halos de inhibición del aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum a distintas concentraciones: La actividad anti fúngica del aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum se realizó mediante el método de difusión con discos. Con un asa microbiológica se. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. tomaron, de las placas que contenían las cepas jóvenes de Aspergillus niger y Candida albicans, entre 2 a 3 colonias morfológicamente idénticas respectivamente y fueron depositadas en tubos con 5 ml de solución salina estéril. NT. para posteriormente, ser ajustadas con el estándar 0,5 de McFarland que equivale a 1𝑥108 𝑈𝐹𝐶/𝑚𝐿 (UFC: Unidad. -U. Formadora de colonia). Luego un hisopo estéril fue. A. untado en la suspensión recientemente preparada y se usó. IN. para estriar una las placas Petri con Agar Sabouraud.. IC. Con una micropipeta se tomó 50µg de cada concentración. ED. de aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum (25%,. M. 50%, 75% y 100%) y se depositó sobre sus respectivos. DE. discos estériles (papel de filtro de 6mm de diámetro) los cuales fueron embebidos durante 1 hora y se dejaron secar. AD. posteriormente durante 15 minutos. Además se utilizaron. FA. CU. LT. los discos de sensibilidad con Fluconazol para nuestro control positivo y discos estériles embebidos en la concentración al 0% como control negativo. Pasado el tiempo de secado de los discos embebidos en las distintas concentraciones de Cinnamomum zeylanicum, fueron tomados con una aguja estéril y puestos en la placa Petri correspondiente. Se dejaron reposar las placas alrededor de 15 minutos y fueron puestas en incubación por un periodo de 24 horas. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. a temperatura de 37ºC. Pasado este tiempo se midió, en milímetros, el diámetro de inhibición de cada disco con ayuda de un calibrador Vernier y se apuntaron los resultados en nuestra hoja de cálculo (ANEXO Nº 2) 19 Obtención de la concentración inhibitoria mínima del. NT. . aceite esencial Cinnamomum zeylanicum:. -U. Para este procedimiento se hizo uso del método de. A. macrodilución. De los tubos que contenían las respectivas. IN. concentraciones del aceite esencial de Cinnamomum. IC. zeylanicum se tomaron 0.5 mL y se colocaron en otros. ED. cinco tubos estériles, además a este nuevo grupo de tubos. M. se agregaron dos tubos de control (uno con 0.5mL de. DE. Caldo glucosado y 0.5mL de Tween 80). Con un asa microbiológica se tomaron del tubo, que. AD. contenía las cepas jóvenes de C. albicans o A. niger. FA. CU. LT. activas, colonias morfológicamente idénticas y fueron depositadas en un tubo con 5 mL de caldo glucosado para ser comparadas con el estándar 0,5 de McFarland, luego se dejó reposar por un periodo de 15 minutos. Pasado este tiempo se tomó 0.5mL de esta suspensión y fue puesta en los nuevos 7 tubos estériles preparados. Se mezclaron suavemente, uniformizando el contenido de los tubos y se incubó a 37ºC durante 24 horas. Además, la CIM del aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum quedó. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. definida como la concentración donde se registró menor turbidez. Después de este periodo de incubación, se tomó 0.1mL de cada tubo y se lo colocó en la placa Petri con medio SDA para luego ser estriado con la ayuda de un asa. NT. de Drigalsky. Estas placas estriadas fueron incubadas a temperatura de 37ºC durante 24 horas. Luego de este. -U. periodo de incubación se examinaron las placas y se. A. registró el número de colonias. (ANEXO Nº 3) 20.. IN. 2.3. Aspectos éticos. IC. El proyecto de investigación se presentó para consideración, comentario,. ED. consejo y aprobación a los comités designados por la Facultad de. M. Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo. Se tuvo en cuenta los. DE. principios de bioseguridad, prestando atención adecuada a factores que puedan dañar el medio ambiente 21.. AD. 2.4. Análisis e interpretación de la información. LT. Se utilizó el método estadístico ANOVA para analizar el efecto de las diferentes concentraciones del aceite esencial de Cinnamomum. CU. Zeylanicum sobre Aspergillus niger y Candida albicans.. FA. Se utilizó el paquete Estadístico SPSS 22. El nivel de significación (p ≤ 0,05) fue considerado estadísticamente significativo. Todos los datos se presentaron como valores medios ± desviación estándar.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 3. RESULTADOS En la Tabla 1, se muestra el promedio de los halos de inhibición de Candida albicans frente a los distintos tratamientos administrados. Se observa que a mayor concentración del aceite se presentó un aumento en la media del tamaño en el halo. NT. de inhibición. Asimismo, los resultados del Test F muestran que existe diferencia. -U. significativa entre las varianzas de las medias de los diferentes grupos.. IN. A. En la Tabla 2, se muestra el promedio de los halos de inhibición de Aspergillus. IC. niger frente a los distintos tratamientos administrados. Se observa que a mayor. ED. concentración del aceite se presentó un aumento en la media del tamaño en el halo de inhibición. Asimismo, los resultados del Test F muestran que existe diferencia. DE. M. significativa entre las varianzas de las medias de los diferentes grupos.. AD. En la Tabla 3, se muestra la prueba de Duncan para determinar si hubo diferencias. LT. significativas en los tratamientos administrados. Se observó la existencia de 3. CU. subgrupos conformados por las distintas concentraciones de aceite esencial de Cinnamomun zeylanicum, Fluconazol y Tween 80. Estos subgrupos son. FA. estadísticamente diferentes entre sí a un nivel de significancia de 0,05.. En la Tabla 4, se muestra la prueba de Duncan para determinar si hubo diferencias significativas en los tratamientos administrados. Se observó la existencia de 3 subgrupos conformados por las distintas concentraciones de aceite esencial de. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Cinnamomun zeylanicum, Fluconazol y Tween 80. Estos subgrupos son estadísticamente diferentes entre sí a un nivel de significancia de 0,05.. En la Tabla 5, se muestra la presencia de turbidez y el promedio de UFC de Candida. NT. albicans luego del tratamiento frente a distintas concentraciones de aceite esencial de Cinnamomun zeylanicum y fluconazol. No se observó turbidez en ninguna. -U. concentración del aceite, por lo que la CIM fue considerada como la menor. A. concentración utilizada (25% - 228µg/mL). No se observó crecimiento alguno de. IN. colonias del hongo en estudio con el uso de aceite o el fármaco control. Sin embargo. IC. hubo un crecimiento promedio de 146.8 UFC en el grupo tratado solo con Tween. M. ED. 80.. DE. En la Tabla 6, se muestra presencia la turbidez y el promedio de UFC de Aspergillus niger luego del tratamiento frente a distintas concentraciones de aceite esencial de. AD. Cinnamomun zeylanicum y fluconazol. No se observó turbidez en ninguna. LT. concentración del aceite, por lo que la CIM fue considerada como la menor concentración utilizada (25% - 228µg/mL). No se observó crecimiento alguno de. CU. colonias del hongo en estudio con el uso de aceite o el fármaco control. Sin embargo. FA. hubo un crecimiento promedio de 182.6 UFC en el grupo tratado solo con Tween 80.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Promedio (mm). Concentración al 25%. 10. 41. Desviación estándar 8,80. Concentración al 50%. 10. 42.8. 3.96. Concentración al 75%. 10. 43.8. 5.67. Concentración al 100%. 10. 45.2. Fluconazol. 10. Prueba F. -U. A. F = 10.26. IC. IN. Grupo de tratamiento. NT. N. M. Tabla 1: Promedio de diámetro de halo de inhibición in vitro del aceite esencial a base de Cinnamomum zeylanicum sobre cepa clínica de Candida albicans. Sig = 0.000005. 1.15. p < 0.05. ED. 4.93. 10. 6.06. 0.08. LT. Tween 80. AD. DE. 22.3. FA. CU. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador 2018. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Promedio (mm). Concentración al 25%. 10. 42.4. Desviación estándar 4.40. Concentración al 50%. 10. 43. 3.68. Concentración al 75%. 10. 43.5. 3.44. Concentración al 100%. 10. 44.9. Fluconazol. 10. Prueba F. -U. A. F = 4.958. IC. IN. Grupo de tratamiento. NT. N. M. Tabla 2: Promedio de diámetro de halo de inhibición in vitro del aceite esencial a base de Cinnamomum zeylanicum sobre cepa clínica de Aspergillus niger. Sig = 0.001. 1.22. p < 0.05. ED. 4.58. 10. 6.06. 0.07. LT. Tween 80. AD. DE. 14.2. FA. CU. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador 2018. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Tabla 3: Prueba de Duncan para comparar la inhibición in vitro del aceite esencial a base de Cinnamomum zeylanicum sobre cepa clínica de Candida albicans. 10. Fluconazol. 10. Concentración al 25%. 10. Concentración al 50%. 10. NT. Tween 80. Subconjunto para alfa = 0.05 1 2 3 6.06 22.30. -U. N. 41.00. IN. A. Duncan. Grupos de tratamiento. IC. 42.80. 10. 43.80. ED. Concentración al 75%. 10. 45.20. Sig.. DE. M. Concentración al 100%. 1.00. 1.00. 0.093. FA. CU. LT. AD. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador 2018. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Tabla 4: Prueba de Duncan para comparar la inhibición in vitro del aceite esencial a base de Cinnamomum zeylanicum sobre cepa clínica de Aspergillus niger. 10. Fluconazol. 10. Concentración al 25%. 10. Concentración al 50%. 10. NT. Tween 80. Subconjunto para alfa = 0.05 1 2 3 6.06 14.20. -U. N. 42.40. IN. A. Duncan. Grupos de tratamiento. IC. 43.00. 10. 43.50. ED. Concentración al 75%. 10. 44.90. Sig.. DE. M. Concentración al 100%. 1.00. 1.00. 0.134. FA. CU. LT. AD. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador 2018. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Tabla 5: Turbidez y promedio de UFC para el cálculo de la concentración inhibitoria mínima del aceite esencial a base de Cinnamomum zeylanicum sobre cepa clínica de Candida albicans. Desviación estándar 20.66. Promedio. Tween 80. Si. 146.8. Fluconazol. No. 0. 0. Concentración al 25% (228µg/mL). No. 0. 0. Concentración al 50% (456µg/mL). No. 0. 0. Concentración al 75% (684µg/mL). No. 0. 0. 0. 0. -U. IN IC ED. M. DE No. AD. Concentración al 100% (912µg/mL). NT. Turbidez. A. Grupos de tratamiento. FA. CU. LT. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador 2018. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Tabla 6: Turbidez y promedio de UFC para el cálculo de la concentración inhibitoria mínima del aceite esencial a base de Cinnamomum zeylanicum sobre cepa clínica de Aspergillus niger. Promedio. Tween 80. Si. 182.6. Fluconazol. No. 0. No. Concentración al 75% (684µg/mL). No. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. ED. M. DE. AD. No. LT. Concentración al 100% (912µg/mL). A. Concentración al 50% (456µg/mL). 0. 0. IN. No. Desviación estándar 23.34. IC. Concentración al 25% (228µg/mL). -U. Turbidez. NT. Grupos de tratamiento. FA. CU. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador 2018. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 4. DISCUSIÓN Las propiedades antimicrobianas de los aceites aromáticos volátiles de las plantas han sido reconocidas desde la antigüedad, siendo usadas por las personas en una diversidad de afecciones causadas por microorganismos 22. En el presente trabajo. NT. se evaluó el efecto anti fúngico del aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum sobre cepas clínicas de especies causantes de Otomicosis (Candida albicans y. -U. Aspergillus niger), encontrándose efecto inhibitorio en ambas cepas clínicas.. A. Respecto a los diámetros obtenidos en el presente estudio, se presentaron de manera. IN. creciente a la concentración evaluada para ambas cepas, siendo en ambos casos. IC. mayores de 40mm en las concentraciones de 25, 50, 75 y 100%. Esto es comparable. ED. con otros estudios, como el realizado por Devkatte et al. (23) en donde se evaluó la. M. actividad antimicrobiana de diversos aceites esenciales frente a varios. DE. microorganismos mediante el método de difusión en discos. Los resultados del diámetro de inhibición obtenidos para cepas clínicas de Candida albicans tuvieron. AD. una media de 30mm en todas las muestras evaluadas con aceite puro.. LT. Esta sensibilidad por parte de Candida albicans había sido descrita con anterioridad. CU. por Quale et al. (24), quienes evaluaron los principales componentes activos de la. FA. planta (Cinamaldehído, eugenol y ácido cinámico) en cepas sensibles y resistentes al fluconazol. De manera similar, Pawar et al. (25), analizaron el efecto inhibitorio in vitro de distintos aceites esenciales sobre Aspergillus niger mediante el método de difusión por discos. Los diámetros de inhibición observados para el aceite esencial puro de. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Cynnamomun zeylanicum se encontraron en un rango de 42 a 50mm, siendo similares a los obtenidos en el presente estudio. El efecto inhibitorio de este aceite frente Aspergillus niger había sido descrito anteriormente por Carmo et al. (26), quienes demostraron mediante el método de. NT. difusión en agar por pozos, la inhibición del crecimiento en el 100% de las muestras. -U. tratadas con aceite puro.. Otros estudios mediante el uso de métodos diferentes al de difusión por discos. IN. A. también evaluaron el efecto anti fúngico del aceite esencial de Cinnamomum. IC. zeylanicum frente Candida albicans y Aspergillus niger, demostrando sensibilidad. ED. por parte de ambas cepas 14, 27, 28.. M. Por otra parte, al comparar los resultados obtenidos para la concentración inhibitoria mínima del aceite esencial de canela en Candida albicans, estos difieren. DE. con el estudio realizado por Pozzatti y cols. (29) quienes también usaron el método. AD. de macrodilución para el cálculo de la CIM. Encontraron mayor resistencia y determinaron la CIM en un valor de 800 µg/mL. También observaron que las cepas. LT. más resistentes a fluconazol presentaron índices mayores de resistencia al aceite. CU. esencial de canela. En la presente investigación se encontró sensibilidad por parte. FA. de Candida albicans tanto al fluconazol como a todas las concentraciones del aceite evaluadas. De manera similar, un estudio realizado por Wan et al. (30), evaluaron el efecto anti fúngico del aceite esencial de canela y sus posibles mecanismos sobre cepas clínicas de Candida albicans. Mediante el uso del método de macrodilución el resultado. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. obtenido para la CIM del aceite esencial de canela frente a Candida albicans fue de 64µg/ml. En el presente estudio se usaron concentraciones mayores a los estudios antes mencionados, sin embargo se debe tener en cuenta que la realización de estudios. NT. con cepas obtenidas de centros hospitalarios, suelen presentar una resistencia. -U. variable 31. Es por esto que las diferencias entre los resultados hallados por otros investigadores y los encontrados en el presente trabajo dependen posiblemente de. A. las variaciones intrínsecas de las cepas relacionadas a la permeabilidad de su. IC. IN. membrana celular frente a los componentes activos del aceite esencial.. ED. Ortigoza, et al. (32) al realizar un estudio sobre la resistencia de cepas clínicas de Candida albicans propuso que la resistencia a fármacos azoles por parte de estas se. M. debía a la acción de 2 mecanismos principalmente: La alteración de enzimas. DE. encargadas de la síntesis de ergosterol (sitio de acción de fármacos azoles) y la. AD. presencia de un sistema de bombeo anti fúngico al espacio extracelular (transportadores tipo ABC y MF). Es muy probable que el desarrollo de estos. LT. mecanismos en cepas hospitalarias confiera de manera secundaria un aumento de. CU. la resistencia frente a otro tipo de sustancias anti fúngicas, entre ellos los aceites. FA. esenciales.. En el caso de Aspergillus niger, el estudio realizado por Carmo et al. (26), quienes usaron de modo cualitativo el método de difusión en medio sólido para el cálculo de la CIM, encontraron un valor para la CIM de 80µg/mL. Un resultado parecido se puede observar el estudio de Bansod, et al. (33), en donde para el cálculo de la CIM del aceite esencial de canela sobre cepas clínicas de Aspergillus niger se usó. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. un método de dilución en agar modificado que permitía mayor difusión del aceite, obteniendo una CIM de 76µg/mL. Estas concentraciones fueron menores a las utilizadas en el presente estudio en el cual la CIM fue de 228µg/mL (25%). Considerando lo anterior, una posible explicación para las diferencias entre estos. NT. estudios y el presente estudio, son los métodos utilizados para medir la CIM. La. -U. aplicación directa del aceite esencial o la modificación para aumentar su solubilidad en el medio pudo influenciar positivamente su capacidad de difusión, permitiendo. IN. A. la inhibición a valores menores al usado en el presente estudio.. IC. Los estudios referidos en esta discusión al igual que el presente trabajo hicieron uso. ED. de cepas clínicas indistintamente de su origen. Sin embargo, se debe tener presente investigaciones como la de Arumugam, et al. (20) y Jeyasakthy et al, (34) que. M. aunque usaron distintas especies vegetales para evaluar el efecto anti fúngico,. DE. utilizaron cepas obtenidas directamente de pacientes con Otomicosis.. AD. Finalmente, este estudio es relevante debido a que permite nuevas posibilidades en farmacoterapia mediante el desarrollo de tratamientos económicos y alternativos en. LT. otomicosis además de valorar su eficacia frente a microorganismos clínicos. CU. provenientes de nuestro medio. Este estudio abre oportunidades para posteriores. FA. proyectos en los cuales se pueda evaluar la eficacia in vivo de este aceite usando modelos animales para posteriormente ser usado como una alternativa frente a la resistencia presente en algunos microorganismos.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 5. CONCLUSIONES . El aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum (canela) si posee efecto anti fúngico in vitro frente a especies causantes de Otomicosis.. . Las especies causantes de Otomicosis (Candida albicans y Aspergillus. NT. niger) fueron sensibles frente a todas las concentraciones del aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum. El efecto anti fúngico guarda relación directa. -U. al aumento de las concentraciones utilizadas frente a Candida albicans y. La concentración inhibitoria mínima del aceite esencial de Cinnamomum. IN. . A. Aspergillus niger.. IC. zeylanicum frente a especies causantes de Otomicosis (Candida albicans y. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. Aspergillus niger) fue de 228µg/mL.. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 6. RECOMENDACIONES . Ejecutar pruebas in vivo con la concentración inhibitoria mínima inhibitoria encontrada en este estudio.. . Realizar un análisis fitoquímico al aceite esencial de Cinnamomum. NT. zeylanicum para identificar los distintos componentes responsables de su actividad anti fúngica.. Realizar trabajos de investigación con concentraciones menores de aceite. -U. . IN. Elaborar estudios de sensibilidad en otro tipo de microorganismos. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. . A. esencial de Cinnamomum zeylanicum.. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 7. LIMITACIONES . Carencia de medio selectivo para aislamiento de Candida albicans y Aspergillus niger de pacientes con Otomicosis.. . Carencia de un cromatógrafo de gases para un estudio detallado de los. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. componentes del aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Larach F, Astorquiza C. Otitis externa: diagnóstico y manejo práctico. Rev. Med. Clin. Condes. 2016; 27 (6): 898-904. 2. Prasad S, Kotigadde A, Shekhar M, et al.Primary Otomycosis in the Indian. NT. Subcontinent: Predisposing Factors, Microbiology, and Classification. Int J Microbiol. 2014; 404-413.. -U. 3. Anwar K, Gohar M. Otomycosis; clinical features, predisposing factors and. A. treatment implications. Pak J Med Sci. 2014; 30(3): 564-567. IN. 4. Karn P, Lakshmanan A, Hemamalini M, et al. Otomycosis: A study from a. IC. tertiary care center. J Pharm Res. 2014; 8(3):266-268.. ED. 5. Rao P, Rao R. A Mycologic Study of Otomycosis in a Tertiary Care Teaching. M. Hospital in Karnataka, India. IJCMR. 2014; 3(7): 606-609.. DE. 6. Patterson T, Thompson G, Denning D, et al. Practice guidelines for the diagnosis and management of aspergillosis: 2016 update by the Infectious. AD. Diseases Society of America. Clin Infect Dis. 2016; 63(4): 1-60.. LT. 7. Pappas P, Kauffman C, Andes D, et al. Clinical Practice Guideline for the Management of Candidiasis: 2016 Update by the Infectious Diseases Society of. CU. America. Clin Infect Dis. 2016; 63(4): 1-60.. FA. 8. Vadlapudi V. Antifungal resistance of few Aspergillus species. Pharmacophore. 2011; 2(3): 163-167. 9. Fuentes M, Hermosilla M, Alburquenque C, et al. Caracterización de los mecanismos de resistencia a azoles en aislados clínicos chilenos de Candida albicans. Rev. Chil. Infectol. 2014; 31 (5): 511-517.. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 10. Navaneethan N, Dharmapuri R, Krishnan Y. Type of Antifungals: Does it Matter in Empirical Treatment of Otomycosis? Indian J Otolaryngol Head Neck Surg. 2015; 67(1):64–67. 11. Hakima A. Cinnamon plant extracts: a comprehensive physico-chemical. Algeria: Istituto Agronomico Mediterraneo di Bari; 2009.. NT. and biological study for its potential use as a biopesticide. [dissertation].. -U. 12. Alonso J. Tratado de Fitofármacos y Nutracéuticos. Argentina: CORPUS;. A. 2004.. IN. 13. Hili P, Evans C, Veness R. Antimicrobial action of essential oils: the effect. IC. of dimethylsulphoxide on the activity of cinnamon oil. Lett Appl Microbiol.. ED. 1997; 24(4): 269–275.. M. 14. Goel N, Rohilla H, Singh G, et al. Antifungal Activity of Cinnamon Oil and. DE. Olive Oil against Candida Spp. Isolated from Blood Stream Infections. J Clin Diagn Res. 2016; 10(8): 9–11.. AD. 15. Li Y, Nie Y, Zhou L, et al. The possible mechanism of antifungal activity. 20.. LT. of cinnamon oil against Rhizopus nigricans. J. Chem Pharm Res. 2014; 6(5):12-. CU. 16. Ingraham J. Introducción a la microbiología. II. Edición 2. España: Reverté;. FA. 1998.. 17. Wayne W. Bioestadistica: Base para el análisis de las ciencias de la salud. Daniel. Edición 4. Madrid: Limusa; 2002. 18. González A. Obtención de aceites esenciales y extractos etanólicos de plantas del Amazonas. [Tesis]. Colombia: Universidad Nacional de Colombia Sede Manizales, departamento de Ingeniería Química; 2004.. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 19. Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standards for antimicrobial susceptibility Testing; Seventeenth Informational Supplement. 2007; 27(1): 38-9. 20. Arumugam P, Mohamad I, Salim R, et al. Antifungal effect of Malaysian. NT. Neem Leaf extract on selected fungal species of pathogenic otomycosis in vitro culture medium. Malays J Med Health Sci. 2015;11(2):69-84.. -U. 21. Colegio Médico del Perú. Código de Ética y Deontología. Lima: Colegio. A. Médico del Perú; 2007.. IN. 22. Deans S, Subota K, Kennedy A. Biological activity of plant volatile oils and. IC. their constituents. Planta Med. 1989; 55(7): 588-592.. ED. 23. Devkatte A, Zore G, Karuppayil S. Potential of plant oils as inhibitors of. M. Candida albicans growth. FEMS Yeast Research. 2005; 5(9): 867–873.. DE. 24. Quale J, Landman D, Zaman M, et al. In vitro activity of Cinnamomum zeylanicum against azole resistant and sensitive Candida species and a pilot. LT. 109.. AD. study of cinnamon for oral candidiasis. Am. J. Chin. Med. 1996; 24(2): 103–. 25. Pawar V, Thaker V. In vitro efficacy of 75 essential oils against Aspergillus. CU. niger. Mycoses. 2006; 49(2): 316–323.. FA. 26. Carmo E, Oliveira E, Leite E, et al. Effect of cinnamomum zeylanicum blume essential oil on the growth and morphogenesis of some potentially pathogenic Aspergillus species. Braz J Microbiol. 2008; 39(1): 91–97. 27. Ambindei W, Dongmo P, Tatsadjieu L, et al. Effect of the essential oils of Thymus vulgaris, Cinnamomum zeylanicum and Mentha piperita on fungal growth and morphology. Afr. J. Biotechnol. 2017; 16(9): 388-399.. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 28. Udomlak S, Vichai H, Walairut C, et al. Antifungal Activity of Clove and Cinnamon Oil and Their Synergistic Against Postharvest Decay Fungi of Grape in vitro. Kasetsart J. (Nat. Sci.). 2008; 42(5): 169 – 174. 29. Pozzatti P, Scheid L, Spader T, et al. In vitro activity of essential oils. NT. extracted from plants used as spices against fluconazole-resistant and fluconazole-susceptible Candida spp. Can J Microbiol. 2008; 54(11):950-6.. -U. 30. Wang G, Deng J, Ma Y, et al. Mechanisms, clinically curative effects, and. IN. species of Candida. JCTM. 2012; 32(1): 19-24.. A. antifungal activities of cinnamon oil and pogostemon oil complex against three. IC. 31. Gutiérrez M, Santibáñez J, Hernández M, et al. Estudio in vitro de. ED. antimicóticos contra cepas de Candida aisladas de pacientes del Hospital. M. General de México OD. Dermatol Rev Mex 2012; 56(2):93-101.. DE. 32. Ortigoza E, Arroyo D. Susceptibilidad in vitro de las especies de Candida a. AD. los antifúngicos en el Hospital de Especialidades del Centro Médico Nacional de Occidente. Med Int Méx. 2014; 30(40): 373-380.. LT. 33. Bansod S, Rai M. Antifungal Activity of Essential Oils from Indian. CU. Medicinal Plants Against Human Pathogenic Aspergillus fumigatus and A.. FA. niger. World J. Med. Sci. 2008; 3(2): 81-88. 34. Jeyasakthy S, Rosdan S, Irfan M, et al. Antifungal Effect of Malaysian Aloe vera Leaf Extract on Selected Fungal Species of Pathogenic Otomycosis Species in In Vitro Culture Medium. Oman Med J. 2017; 32(1): 41–4 6.. 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 9. ANEXOS ANEXO N°1: CONSTANCIA DE DETERMINACIÓN. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. TAXONÓMICA PARA Cinnamomum zeylanicum. 40 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO N°2: TABLA DE RECAUDACIÓN DE LOS DIAMETROS DE HALOS DE INHIBICIÓN PARA CADA MICROORGANISMO.. GRUPOS DE. ZONA DE INHIBICIÓN (mm). PROMEDIO. -U. NT. TRATAMIENTO. IN. A. Fluconazol. M. ED. IC. 100%. DE. 75%. LT. AD. 50%. FA. CU. 25%. 0%. 41 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO N°3: TABLA DE RECAUDACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN INHIBITORIA MINIMA PARA CADA MICROORGANISMO.. MICROORGANISMOS. Turbidez. Aspergillus niger (UFC/mL). Turbidez. NT. Candida albicans (UFC/mL). -U. GRUPOS DE TRATAMIENTO. IN. A. Fluconazol. ED. IC. 100%. DE. M. 75%. CU. LT. 25%. AD. 50%. FA. 0%. 42 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO N°4: REGISTRO FOTOGRÁFICO. Obtención del aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum en el laboratorio de. ED. IC. IN. A. -U. NT. farmacognosia de la Facultad de Farmacia – UNT. FA. CU. LT. AD. DE. M. Fig 1: Procesamiento de corteza de Cinnamomum zeylanicum en partículas más pequeñas. Fig 2: Separación de corteza de Cinnamomum zeylanicum en grupos de 100gr y extracción del aceite esencial por arrastre de vapor. 43 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Realización de pruebas de sensibilidad y macrodilución del aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum sobre Candida albicans y Aspergillus niger en el. ED. IC. IN. A. -U. NT. laboratorio de Microbiologia de la Facultad de medicina UNT. FA. CU. LT. AD. DE. M. Fig 3: Proceso de siembra de las cepas clínicas de Candida albicans y Aspergillus niger ajustadas al estándar 0,5 de Mc Farland en agar Sabouraud. Fig 4: Colocación de discos con diferentes concentraciones de aceite esencial en placas de Agar Sabouraud sembradas. 44 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(48) -U. NT. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. Fig 5: Preparación de los tubos de macrodilución con diferentes concentraciones de aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum. Fig 6: Tubos de macrodilución luego de incubar a 37ªC por 24h. 45 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(49) -U. NT. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. FLUCONAZOL. 25%. 75%. 100%. CU. LT. AD. DE. TWEEN 80. M. ED. IC. IN. A. Fig 7: Incubación de las placas de agar Sabouraud para prueba de sensibilidad y placas de macrodilución. FA. 50%. Fig 8: Efecto anti fúngico del aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum sobre Aspergillus niger. 46 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(50) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. FLUCONAZOL. 50%. 75%. 25%. NT. TWEEN 80. IC. IN. A. -U. 100%. AD. DE. M. ED. Fig 9: Efecto anti fúngico del aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum sobre Candida albicans. FLUCONAZOL. 25%. FA. CU. LT. TWEEN 80. 50%. 75%. 100%. Fig 10: Recuento de colonias de Candida albicans en macrodilución con aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum. 47 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(51) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 25%. FLUCONAZOL. -U. NT. TWEEN 80. 75%. 100%. IC. IN. A. 50%. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. Fig 11: Recuento de colonias de Aspergillus niger en macrodilución con aceite esencial de Cinnamomum zeylanicum. 48 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(52) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO N°5 Criterios de evaluación del informe final de los trabajos de investigación en la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo Puntaje. NT. Aspectos. -U. 1. TITULO. a. Contiene las variables del problema de investigación. No es mayor 1. IN. A. a quince palabras.. b. El título refiere de manera general las variables del problema.. IC. 0,5. ED. Tiene más de 15 palabras.. 0,1. M. c. El título no refleja el contenido del trabajo.. DE. 2. RESUMEN. AD. a. Tiene no más de 200 palabras y palabras clave.. LT. b. Tiene más de 200 palabras y palabras clave.. 0,3 0,1. CU. c. Tiene más de 200 palabras o no tiene palabras clave.. 0,5. 3. ABSTRACT. FA. a. Tiene no más de 200 palabras y palabras clave con correcto uso 0,5. del idioma inglés. b. Tiene más de 200 palabras y palabras clave con correcto uso del 0,3 idioma inglés.. 49 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(53) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. c. Tiene más de 200 palabras en idioma inglés o no tiene palabras 0,1 clave o uso incorrecto del idioma inglés. 4. INTRODUCCIÓN a. Se basa en antecedentes de conocimientos previos, presenta el 3,5. NT. problema con sustento, la hipótesis es coherente con el problema y. -U. objetivos.. A. b. Se basa en antecedentes de conocimientos previos, el problema no 2. IN. está bien sustentado o la hipótesis no es coherente con el problema. IC. y/o objetivos.. ED. c. Se basa en antecedentes de conocimientos previos. No presenta. M. problema u objetivos.. 1. DE. 5. MATERIAL Y MÉTODO. AD. a. La muestra recolectada es representativa, adecuada y plantea un 3. LT. diseño apropiado a la solución del problema. b. La muestra recolectada es representativa, adecuada y no plantea 2. CU. un diseño apropiado a la solución del problema.. FA. c. La muestra recolectada no es representativa, ni adecuada.. 1. 6. RESULTADOS a. Presenta los resultados en forma sistemática en función de las variables del problema e incluye pruebas estadísticas, figuras y. 4. tablas de acuerdo a las normas internacionales.. 50 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(54) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. b. Presenta los resultados en forma sistemática en función de las variables del problema. No incluye pruebas estadísticas, figuras y. 2. tablas de acuerdo a las normas internacionales. c. No presenta los resultados en forma sistemática en función de las 1. NT. variables del problema.. -U. 7. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN. A. a. Discute cada uno de los resultados para probar su validez y. IN. contrasta con las pruebas estadísticas mencionadas en los resultados. 4. IC. Busca generalizaciones y establecer las posibles implicancias de los. ED. nuevos conocimientos.. M. b. Discute algunos resultados para probar su validez y no contrasta. DE. con las pruebas estadísticas mencionadas en los resultados. Busca 2. generalizaciones y establecer posibles implicancias de los nuevos. AD. conocimientos.. LT. c. Discute algunos resultados para probar su validez y no contrasta. CU. con las pruebas estadísticas mencionadas en los resultados. No busca 1. FA. generalizaciones. 8. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES a. Replantea sumariamente el problema y las características de la muestra. Formula conclusiones lógicas y emite recomendaciones. 2. viables.. 51 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.