Efecto antibacteriano in vitro de Vaccinium corymbosum L sobre Escherichia coli y Staphylococcus aureus

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. ED. IC. IN. A. -U. ESCUELA DE MEDICINA. NT. FACULTAD DE MEDICINA. M. Efecto antibacteriano in vitro de Vaccinium corymbosum L. sobre Escherichia. DE. coli y Staphylococcus aureus. AD. TESIS PARA OPTAR EL GRADO ACADÉMICO DE:. FA. CU. LT. BACHILLER EN MEDICINA AUTOR. REYES CASTAÑEDA GHERALDO STALIN ASESORA MEJÍA DELGADO ELVA MANUELA TRUJILLO – PERÚ 2019. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. DEDICATORIA. A Dios por acompañarme en este camino, iluminando el camino adecuado para. NT. poder lograr los objetivos trazados.. -U. A mis padres, Maruja y Roberto, por. A. inculcarme todos los valores que he. IN. adquirido a lo largo de este camino, por. IC. enseñarme a perseverar en lo que uno se. ED. propone y en brindarme su amor y apoyo. A mi abuela, María Emilia, por ser como. DE. trazadas. Muchas gracias.. M. incondicional para lograr juntos las metas. AD. mi segunda madre y enseñarme a ser. CU. LT. mejor persona cada día.. A Jackson, Robert y Catherine, mis. FA. hermanos, por aconsejarme y apoyarme en todo momento y brindarme la confianza de poder contar siempre con ustedes.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. AGRADECIMIENTOS. NT. A la Dra. Elvita, mi madrina de promoción. -U. y asesora de tesis, por preocuparse siempre de mi persona y por el apoyo brindando en. DE. M. ED. IC. IN. A. la realización del presente trabajo.. A mis grandes amigos de promoción: David, Diego, Lourdes, Leah y Hernán por motivarme en cada momento de estos. CU. LT. AD. 7 años de estudio.. FA. Al Sr. Villavicencio por todos sus sabios consejos.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. INDICE. RESUMEN ……………………………………………………………………. 6 ABSTRACT ………………………………………………………………......... 7. -U. NT. INTRODUCCIÓN ……………………………………………………………… 8 MATERIAL Y MÉTODOS ………………………………………………......... 15. IN. A. RESULTADOS ………………………………………………………………… 23. ED. IC. DISCUSIÓN …………………………………………………………………… 32. M. CONCLUSIONES ………………………………………………………………36. DE. RECOMENDACIONES ………………………………………………………. 37. AD. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ………………………………………… 38. FA. CU. LT. ANEXOS ………………………………………………………………………. 43. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. RESUMEN OBJETIVO: Demostrar el efecto antibacteriano in vitro del extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L. sobre Escherichia coli y Staphylococcus aureus. MATERIAL Y MÉTODO: Se recolectaron 2 Kg de fruto de Vaccinium. NT. corymbosum L. procedente de Virú, La Libertad; se obtuvo el extracto alcohólico. -U. mediante el método de maceración con etanol a 70% para concentraciones de 25%, 50%, 75% y 100%, determinando el efecto antibacteriano mediante el método de. IN. A. difusión de discos de Kirby y Bauer, cuantificándose mediante la escala de. IC. Duraffourd, además se utilizaron fármacos controles para comparar el efecto. ED. antibacteriano: Oxacilina para Staphylococcus aureus y ciprofloxacino para. M. Escherichia coli.. DE. RESULTADOS: Los resultados mostraron que hubo efecto antibacteriano en todas las concentraciones del extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L. para. AD. Escherichia coli, y para Staphylococcus aureus sólo la concentración de 25 % no. LT. presentó efecto antibacteriano (7.5 mm). Se evidenció que los fármacos controles obtuvieron mayor halo de inhibición que las concentraciones del extracto (22.2 mm. CU. para Staphylococcus aureus y 36.6 mm para Escherichia coli). Hubo mayor efecto. FA. antibacteriano sobre Staphylococcus aureus que sobre Escherichia coli. CONCLUSION: El extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L. posee efecto antibacteriano sobre Escherichia coli y Staphylococcus aureus. Palabras Claves: Extracto alcóholico, Vaccinium corymbosum L., Staphylococcus aureus, Escherichia coli. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ABSTRACT OBJECTIVE: To Demonstrate the in vitro antibacterial effect of the alcoholic extract of Vaccinium corymbosum L. on Escherichia coli and Staphylococcus aureus.. NT. MATERIAL AND METHOD: 2 Kg of Vaccinium corymbosum L. fruit was. -U. collected from Virú, La Libertad; the alcoholic extract was obtained by the method of maceration with ethanol at 70% for concentrations of 25%, 50%, 75% and 100%,. IN. A. determining the antibacterial effect by means of the Kirby and Bauer disc diffusion. IC. method, quantified by the Duraffourd’s scale, furthermore, control drugs were used. M. ciprofloxacin for Escherichia coli.. ED. to compare the antibacterial effect: Oxacillin for Staphylococcus aureus and. DE. RESULTS: The results showed that there was antibacterial effect in all the concentrations of the alcoholic extract of Vaccinium corymbosum L. for. AD. Escherichia coli, and for Staphylococcus aureus only the concentration of 25% did. LT. not present antibacterial effect (7.5 mm). It was evidenced that the control drugs obtained greater halo of inhibition than the concentrations of the extract (22.2 mm. CU. for Staphylococcus aures and 36.6 mm for Escherichia coli). There was a greater. FA. antibacterial effect on Staphylococcus aureus than on Escherichia coli. CONCLUSION: The alcoholic extract of Vaccinium corymbosum L. has an antibacterial effect on Escherichia coli and Staphylococcus aureus. Key words: Alcoholic extract, Vaccinium corymbosum L., Staphylococcus aureus, Escherichia coli. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. I. 1.1. INTRODUCCIÓN. ANTECEDENTES Desde la antigüedad los seres humanos hemos sido beneficiados por las plantas y sus metabolitos secundarios, es así como a la par de la evolución del hombre,. NT. las plantas representaban una fuente casi ilimitada de alimentos, fibras para ropa y medicamentos, los cuales han sido utilizados en muchos sistemas de. -U. curación en la antigüedad. Dicha evolución fitológica se debe a sus metabolitos. A. secundarios, los cuales contribuyeron con la colonización terrestre, dentro de. IN. los cuales los compuestos volátiles repelen a microorganismos fitófagos.1. IC. Vaccinium corymbosum L. constituye un grupo de especies nativas del. ED. hemisferio norte, pertenecen a la familia de la Ericáceas. Son arbustos que. M. alcanzan alturas que van desde unos pocos centímetros hasta 2,5 metros. El. DE. fruto es una baya redondeada, de 7 a 9 mm de diámetro, de color negro azulado, cubierta de pruina azul y con un ribete en lo alto a modo de coronita. La carne. AD. del fruto es de color vinoso y presenta un agradable sabor agridulce. En nuestro. LT. país los cultivos de arándanos recién iniciaron entre 2007-2008, las áreas cultivadas al 2015 se estiman en alrededor de 2,5 mil hectáreas y una. CU. producción de 10,3 mil toneladas, que casi en su totalidad es exportado y en el. FA. 2016 la producción superó las 20 mil toneladas. Siendo nuestra región La Libertad la mayor productora y exportadora de arándanos del país en aproximadamente 90% del total producido y exportado por Perú, le siguen con volúmenes poco significativos Ancash, Arequipa, Cajamarca, Ica, Lima y Lambayeque.2. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Vaccinium corymbosum L. tiene una composición fitoquímica compleja y rica, particularmente compuestos de flavanoles, procydinas, antocianinas, ácido benzoico. Las procydinas representan un 85% del total de flavanoles, y dentro de estos las proantocianidinas de tipo A son el principio activo responsable de. NT. las actividades biológicas atribuidas a los arándanos.3,4 Las enfermedades infecciosas siguen siendo causas más importantes de. -U. morbimortalidad en la población, por lo que la introducción de los antibióticos. A. supuso una de las intervenciones más importantes para su control y aumentó. IN. en varios años la esperanza de vida de la población. Sin embargo, desde últimos. IC. años se ha elevado la resistencia bacteriana a los antibióticos la cual se define. ED. como la capacidad de una bacteria para sobrevivir en concentraciones de. M. antibiótico que inhiben a otras de la misma especie.5. DE. Escherichia coli, principal anaerobio facultativo de la microbiota, es una bacteria Gram negativa que pertenece a la familia Enterobacteriaceae. Entre. AD. algunos de sus múltiples atributos se la conoce como causante frecuente de diarrea infantil, asimismo pueden causar otras enfermedades en el humano. LT. como neumonía, infecciones en vías urinarias, entre otras.6. CU. Dentro de las mencionadas anteriormente, la infección de las vías urinarias es padecimiento. frecuente. en. mujeres. en. edad. reproductiva. y. FA. un. posmenopáusicas, por lo que en estudios se evidenció que el consumo de jugo de arándano, en concentraciones y cantidades adecuadas, es una opción útil para prevenir infecciones de las vías urinarias, principalmente en mujeres. Dentro de estos estudios de laboratorio han demostrado que el jugo de arándano inhibe la adherencia de los uropatógenos a las células uroepiteliales.7,8 Dentro. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. de los posibles mecanismos tenemos a los mediadores de este efecto antiadherencia a la fructosa, que podría interferir con la adhesión de Fibria tipo 1 de Escherichia coli a el uroepitelio9, a su vez se ha demostrado in vitro que las proantocianidinas modifican la superficie celular de las bacterias al capturar los. NT. lipopolisacáridos de la pared celular y modificar los patrones de unión a las células epiteliales, es así que interrumpen la colonización de las bacterias antes. -U. de que éstas invadan la vía urinaria.10 En 2012 un estudio de 176 mujeres. A. continuó apoyando la posibilidad biológica de la actividad del arándano al. IN. reducir las cepas de Escherichia coli P- fimbriadas, aunque no fue. IC. estadísticamente significativa,.11. ED. En 2010 Risco y col, estudiaron in vitro y ex vivo el efecto del arándano. M. americano (Cysticlean®)‚ sobre la adherencia de Escherichia coli a células. DE. epiteliales de vejiga, para lo cual utilizaron ratas Wistar hembra, encontrando que las muestras de orina de ratas que habían ingerido Cysticlean® sobres y. AD. comprimidos mostraron una importante inhibición de la adherencia de. LT. Escherichia coli (83% y 52%, respectivamente), a dosis menor, también presentó una destacada inhibición (29% tras el consumo de Cysticlean®. CU. comprimidos y 40% tras el consumo de Cysticlean® sobres). Para lo realizado. FA. in vitro, Cysticlean® mostró inhibición de la adherencia bacteriana a todas las concentraciones ensayadas. Encontrándose que a las concentraciones de 5, 25 y 75 mg de PACs/mL, disminuyó un 25%, 36% y 34%, respectivamente, el número de bacterias adheridas a las células epiteliales.12 Staphylococcus aureus, es un coco Gram positivo que tiene al hombre como su reservatorio principal y se encuentra habitualmente aislado en las narinas y piel. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. de personas saludables, sin embargo, se considera un patógeno humano oportunista, y está frecuentemente asociado a infecciones de piel y tejidos blandos como impétigo, celulitis y heridas en diversos sitios corporales; con potencial para diseminación a diferentes tejidos. Esta bacteria es actualmente. NT. solo 5-10% sensible a la penicilina.13 Silva S y col, en 2015 evaluaron el impacto de Vaccinium corymbosum, frutos. -U. y hojas, infusiones y decocciones sobre Staphylococcus aureus sensible a la. A. meticilina (MSSA) y resistente a la meticilina (MRSA). Para lograr estos. IN. objetivos se caracterizaron los extractos de Vaccinium corymbosum y se. IC. evaluaron los halos de inhibición, las concentraciones inhibidoras, el impacto. ED. sobre la actividad enzimática y la formación de biofilm. Los resultados. M. obtenidos mostraron que los principales compuestos presentes en la. DE. constitución fitoquímica de Vaccinium corymbosum eran los ácidos quercetina3-glucósido, clorogénico y cafeico. El crecimiento de MRSA y MSSA fue. AD. inhibido a 12,5 mg / mL, para hojas, y 50 mg / mL, para frutos. Los resultados que obtuvieron implican una actividad antibacteriana eficaz de estos extractos. LT. hacia MRSA y MSSA.14. CU. Biswas D. y col, investigaron las propiedades antimicrobianas del jugo de. FA. arándanos contra los patógenos transmitidos por los alimentos, entre ellos: Salmonella Typhimurium, Campylobacter jejuni, Listeria monocytogenes y Escherichia coli. Encontrando que el crecimiento de los cuatro patógenos se redujo por debajo del nivel de detección (100 cfu / mL) por el zumo de arándanos.15. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. En 2013 Silva S y col. evaluaron la actividad antimicrobiana de los frutos secos y hojas de Vaccinium corymbosum contra varios microorganismos patógenos, evaluando al mismo tiempo el efecto de Vaccinium corymbosum sobre las bacterias acidolácticas, encontrándose que los extractos foliares poseen una. NT. mayor actividad antimicrobiana que los extractos de frutas, ya que los extractos foliares presentaron valores de CMI(Capacidad mínima inhibitoria) más bajos. -U. que los frutos, además encontraron que Vaccinium corymbosum poseían una. A. actividad antimicrobiana significativa frente a microorganismos contaminantes. IN. / microorganismos patógenos y poca o ninguna actividad contra bacterias. IC. acidolácticas.16. ED. Además Shen X et al. en 2014 examinaron el efecto antimicrobiano de los. M. extractos de arándanos (Vaccinium corymbosum) sobre el crecimiento de. DE. Listeria monocytogenes y Salmonella Enteritidis. Se determinó la concentración inhibitoria mínima (CIM) y la concentración bactericida mínima. AD. (CBM) de los extractos contra Listeria monocytogenes y Salmonella Enteritidis. LT. en caldo de soya tripticasa. Los extractos a 112,5-900 mg / ml mostraron un efecto inhibidor del crecimiento dependiente de la dosis contra Listeria. CU. monocytogenes y Salmonella Enteritidis. Listeria monocytogenes fue. FA. significativamente más sensible al efecto antimicrobiano de los extractos que Salmonella Enteritidis, siendo ácido clorogénico, quercetina, ácido elágico y quercetina-3-galactósido los compuestos fenólicos activos en los extractos de arándanos, demostrando efecto sobre otras bacterias.17. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 1.2. JUSTIFICACIÓN Las enfermedades infecciosas han ido aumentando en todo el mundo, para lo cual se han empleado medicamentos para contrarrestar estas enfermedades, sin embargo con el uso indebido de antibióticos, los patógenos han ido. NT. desarrollando mecanismos que hacen frente a estos fármacos, denominándola resistencia bacteriana, lo que motiva a buscar nuevas alternativas, entre estas. -U. nuevos fármacos que puedan contrarrestar estas enfermedades, sin embargo. A. paralelo a esto se está avanzando en buscar alternativas naturales que puedan. IN. sustituir a los fármacos. Estas medicinas alternativas las tenemos en el medio. IC. ambiente, tal como las utilizaban las diversas culturas del mundo desde el inicio. ED. de la aparición del hombre en la tierra, donde se utilizaban tanto hojas, raíces,. M. semillas y frutos. En nuestro país los cultivos de arándanos se iniciaron en 2007. DE. y a la actualidad nuestra región La Libertad es la mayor productora exportadora de este fruto en un 90%. El jugo de arándano ha sido ampliamente utilizado. AD. para el tratamiento y prevención de las enfermedades del tracto urinario,. LT. teniendo un efecto antiadherente para Escherichia coli a las paredes de las células de la vejiga, es posible que tenga efecto en otros microorganismos. CU. debido a que no existen gran número de estudios específicos cuantitativos in. FA. vitro respecto del grado de sensibilidad de otros microorganismos, como el de Staphylococcus aureus siendo este un microorganismo grampositivo y poder comparar a la vez con un Gramnegativo como Escherichia coli. Por lo que se propone investigar el efecto antibacteriano in vitro de Vaccinium corymbosum L. sobre Staphylococcus aureus y Escherichia coli.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 1.3. PROBLEMA ¿Cuál es el efecto antibacteriano in vitro de Vaccinium corymbosum L. sobre Staphylococcus aureus y Escherichia coli?. 1.4. HIPÓTESIS. NT. H1: El extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L. si tiene efecto antibacteriano sobre Staphylococcus aureus y Escherichia coli. -U. H0: El extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L. no tiene efecto. OBJETIVOS Objetivo General. IC. . IN. 1.5. A. antibacteriano sobre Staphylococcus aureus y Escherichia coli. ED. Demostrar el efecto antibacteriano in vitro de Vaccinium corymbosum L.. Objetivos Específicos. DE. . M. sobre Staphylococcus aureus y Escherichia coli..  Determinar a qué concentración del extracto alcohólico de. AD. Vaccinium corymbosum L., se produce mayor efecto antibacteriano sobre Escherichia coli.. LT.  Determinar a qué concentración del extracto alcohólico de. CU. Vaccinium corymbosum L., se produce mayor efecto antibacteriano. FA. sobre Staphylococcus aureus..  Comparar el efecto antibacteriano in vitro del extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L. al 25%, 50% ,75%, 100% y ciprofloxacino sobre Escherichia coli.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT.  Comparar el efecto antibacteriano in vitro del extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L. al 25%, 50% ,75%, 100% y oxacilina sobre Staphylococcus aureus.. NT. II. MATERIAL Y MÉTODO 2.1 Material Tipo de estudio. -U. 2.1.1. Definición de la población muestral. IN. 2.1.2. A. Esta investigación consistió en un estudio prospectivo, trasversal y experimental.. IC. La población muestral estuvo constituida por las cepas de Escherichia coli y. ED. Staphylococcus aureus las cuales fueron brindadas por el Laboratorio de. 2.1.3. DE. Nacional de Trujillo.. M. Microbiología y Parasitología de la Facultad de Medicina de la Universidad. Diseño estadístico del muestreo Unidad de Análisis. AD. . LT. La unidad de análisis estuvo compuesta por cada una de las placas Petri con medio Mueller Hinton cultivadas con Escherichia coli y. CU. Staphylococcus aureus, las cuales estuvieron expuestas a las 4. FA. concentraciones diferentes del extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L. y el fármaco control usado para cada bacteria. . Unidad de Muestreo. La unidad de muestreo estuvo compuesta por cada halo de inhibición producto del efecto antibacteriano del extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L. sobre Escherichia coli y Staphylococcus aureus.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. . Tamaño muestral. Para el cálculo del tamaño se empleó la fórmula estadística para hallar el número de repeticiones necesarias que validen el diseño experimental. Se. A. -U. NT. aplicó la siguiente fórmula estadística:. IN. Dónde:. IC. n= número de repeticiones para cada concentración (25%, 50% ,75%,. M. Zα/2= 1.96 para α = 0.05. ED. 100%) y fármacos controles (oxacilina y ciprofloxacino). DE. Zβ = 0.842 para β = 0.20. S: Desviación estándar de la susceptibilidad bacteriana.. AD. X1 – X2: Diferencia a detectar en la susceptibilidad bacteriana entre 2 concentraciones de extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L. LT. Se asume: S= 0.8 (X1 – X2), por no haber estudios similares.. CU. Reemplazando se tiene:. FA. n= 2 x (1.96 + 0.842)2 x 0.82 n= 10 repeticiones /grupo Por lo tanto, se realizó 10 repeticiones por cada concentración de extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L. por cada bacteria estudiada; esto se distribuyó de la siguiente manera:. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. - GRUPO A1: 10 repeticiones de extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L. al 25 % para Escherichia coli. - GRUPO A2: 10 repeticiones de extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L. al 50 % para Escherichia coli.. NT. - GRUPO A3: 10 repeticiones de extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L. al 75 % para Escherichia coli.. -U. - GRUPO A4: 10 repeticiones de extracto alcohólico de Vaccinium. A. corymbosum L. al 100 % para Escherichia coli.. IN. - GRUPO A5: 10 repeticiones utilizando discos de ciprofloxacino. IC. para Escherichia coli.. ED. - GRUPO B1: 10 repeticiones de extracto alcohólico de Vaccinium. M. corymbosum L. al 25 % para Staphylococcus aureus.. DE. - GRUPO B2: 10 repeticiones de extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L. al 50 % para Staphylococcus aureus.. AD. - GRUPO B3: 10 repeticiones de extracto alcohólico de Vaccinium. LT. corymbosum L. al 75 % para Staphylococcus aureus.. CU. - GRUPO B4: 10 repeticiones de extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L. al 100 % para Staphylococcus aureus. FA. - GRUPO B5: 10 repeticiones utilizando discos de oxacilina para. 2.1.4. Staphylococcus aureus. Criterios de control. Los cultivos en los que haya algún error en el procedimiento de su manipulación serán excluidos del experimento.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 2.1.5. Operacionalización de las variable Tipo de Variable Escala de. Variable. Dimensiones. Indicador. Según su. Según su. naturaleza. función. Se medirá. alcohólico de. según la. Vaccinium. Extracto. concentración. corymbosum L.. alcohólico. a utilizar: 25. -U. Extracto. NT. medición. IC. ED. Efecto. Ordinal. IN. %, 50%, 75% y 100%. Independiente. A. Cualitativa. M. antibacteriano in vitro sobre Staphylococcus. Cuantitativa. Dependiente. De razón. Cuantitativa. Dependiente. De razón. DE. Medición de halos de. Sensibilidad aureus. inhibición. AD. bacteriana. antibacteriano in. expresado en mm. CU. vitro sobre. LT. Efecto. FA. Escherichia coli. 2.1.6. Definición operacional de las variables . Extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L.. Es un extracto fluido utilizando el método de extracción por maceración con etanol/agua (70:30)18.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. . Efecto antibacteriano in vitro sobre Staphylococcus aureus y Escherichia coli. Es la capacidad de inhibir la producción o causar la muerte de un agente bacteriano en condiciones experimentales19, mediante halos de inhibición. NT. de 18 a 24 horas de incubación, medido mediante la escala de Duraffourd. -U. la cual indica que el efecto antibacteriano es: Nulo (-) si fue inferior a 8 mm, Sensibilidad límite (Sensible = +) de 8 a 14 mm, Sensibilidad media. IC. IN. para un diámetro mayor de 20 mm.20. A. (muy sensible = ++) de 15 a 19 mm y Sumamente sensible (S.S. = +++). Diseño Procedimental. Recolección del fruto e identificación taxonómica. DE. . M. 2.2.1. ED. 2.2 Procedimientos y método. Los frutos maduros y frescos de Vaccinium corymbosum L. se. AD. obtuvieron del Valle de Virú, se recolectó 2 Kg, luego fueron. LT. trasladados y procesados en el Laboratorio de Farmacognosia y Farmacobotánica de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la. CU. Universidad Nacional de Trujillo. Se seleccionaron aquellos que. FA. estuvieron en buen estado de maduración y que no presentaron lesiones en cuerpo externo. Un ejemplar de la planta de la especie Vaccinium. corymbosum. L.. fue. llevada. al. Herbarium. Truxillensis(HUT) de la Universidad Nacional de Trujillo para su identificación taxonómica según el sistema filogenético de la especie, en donde fue registrada con N°: 59247.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. . Obtención del extracto alcohólico y preparación de concentraciones:. Los arándanos fueron lavados con agua y desinfectadas con Hipoclorito de sodio al 0.5% y secadas, luego se licuó y se colocó en. NT. un frasco de vidrio y se envolvió con papel aluminio para proteger. -U. de radiaciones UV, dejando macerar por una semana, agitándolo todos los días El producto fue filtrado con papel filtro Whatman N°. A. 1. El sobrenadante filtrado se colocó en un Rotavapor con el cual se. IN. eliminó el solvente y se obtuvo el extracto, a partir del cual se. IC. tomaron volúmenes de 2.5, 5, 7.5 y 10 mL del extracto alcohólico. ED. puro, los cuales se colocaron en una fiola de 10 mL, y se completó. M. con etanol al 70%, obteniendo las concentraciones de 25%, 50%,. DE. 75% y 100% las cuales se colocaron en frascos de color ambar para. AD. la utilización en las placas Petri18,21. Obtención y preparación de la cepa. LT. . Las cepas de Staphylococcus aureus y Escherichia coli se obtuvieron. CU. del laboratorio de Microbiología de la Facultad de Medicina de la. FA. Universidad Nacional de Trujillo. Las cepas se cultivaron en tubos de ensayo con Agar Tripticasa Soya (TSA) por 24 horas a una temperatura de 37°C, luego se procedió a extraer con un asa bacteriológica las colonias aisladas del mismo tipo morfológico, las cuales fueron inoculadas en un tubo de ensayo estéril con 5 mL de caldo Mueller Hinton; y se comparó con el tubo. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. de la escala de Mac Farland a una turbidez al 0.5 (1.5 x 108 UFC/ml), esta comparación se llevó a cabo visualmente utilizando un fondo blanco con líneas negras como contrastes y una fuente de luz adecuada. Los tubos que contienen los patógenos, fueron girados. NT. entre las manos por un tiempo de 30 segundos antes de proceder al sembrado. Para el sembrado, primeramente, las placas de agar. -U. Mueller-Hinton se colocaron en la estufa entreabiertas por 10-15 min. A. para evitar que el exceso de humedad se absorba en el medio. Luego. IN. se introdujo un hisopo estéril en la suspensión, se retiró el exceso de. IC. caldo del hisopo, presionando suavemente sobre las paredes del tubo.. ED. Posterior a ello, se sembró en placa Petri que contenía agar Müller. M. Hinton, para lo cual se pasó con el hisopo en forma paralela y bien. DE. compacta abarcando toda la superficie de la misma. Luego se repitió el procedimiento rotando la placa 60° en dos oportunidades más Determinación del efecto antibacteriano. AD. . LT. Se determinó mediante el método de difusión de discos de Kirby y. CU. Bauer, se sumergieron los discos de 6mm en las 4 concentraciones. FA. de Vaccinium corymbosum L., a su vez también se usaron discos de solución de oxacilina y ciprofloxacino para el control, luego con una aguja estéril estos discos se colocaron sobre los cultivos de Staphylococcus aureus y E. coli en las placas Petri. Los discos estuvieron a más de 15 mm del borde de la placa y distribuidos de manera de que no haya superposición de los halos de inhibición y a. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. una distancia mínima de 25 mm uno del otro. Posterior a ello, las placas Petri se colocaron en la estufa a 37°C durante 24 horas, pasado este tiempo, se procedió a medir con una regla los halos de inhibición del crecimiento de S. aureus y E. coli; los cuales fueron registrados. NT. en la ficha de recolección de datos (ANEXO N° 1). Para luego ser. -U. analizados. 2.3 Aspectos Éticos. IN. A. Se aplicaron los principios de Bioseguridad correspondientes a los realizados en. IC. trabajos in vitro. A su vez se respetó el principio ético adoptado en el capítulo 6 del. ED. código de ética del Colegio Médico del Perú titulado: “Del trabajo de investigación”, específicamente el Art 48, donde habla de la veracidad en la publicación de los. DE. M. resultados obtenidos en el estudio.22. 2.4 Análisis e interpretación de la información. AD. La información fue analizada e incorporada en una base de datos para el. LT. procesamiento en software Excel Microsoft Office® v10 versión y SPSS, luego se. CU. procedió a utilizar instrumentos de la estadística descriptica como la media y desviación estándar. El efecto antibacteriano se determinó mediante la prueba de. FA. análisis ANOVA donde se compararon todos los resultados obtenidos; y luego la prueba de Duncan para determinar pares de grupos en los que la diferencias es significativa, ambas pruebas se consideran significativas si p<0.05.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. III. RESULTADOS Los resultados del efecto antibacteriano del extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L. y del fármaco control oxacilina sobre Staphylococcus aureus se muestran en la TABLA 1, donde se obtuvo un efecto nulo por parte de la. NT. concentración de 25% (Halo de inhibición promedio: 7.5 mm), una sensibilidad. -U. límite a la concentración de 50 % y 75%, muy sensible al 100% y sumamente sensible al fármaco control Oxacilina. Mientras que los resultados para Escherichia. A. coli, se muestran en la TABLA 4, donde Escherichia coli presentó sensibilidad. IN. límite para todas las concentraciones del extracto alcohólico, y fue sumamente. ED. IC. sensible para el fármaco control ciprofloxacino.. Hubo diferencia significativa para ambas bacterias(p=0.000), al realizar el análisis. DE. M. de varianza (ANOVA) como se muestra en la TABLA 2 Y 5. Con la prueba de DUNCAN, se compararon los grupos de tratamiento con un nivel. AD. de confianza al 95% tanto para Staphylococcus aureus y Escherichia coli como se. LT. muestra en las TABLAS 3 Y 6 en donde se evidencia que hubo 5 grupos de tratamiento para la primera (GRAFICO N°1), y 2 grupos para la segunda. FA. CU. (GRAFICO N°2).. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. TABLA. N°. 1:. EFECTO. ANTIBACTERIANO. DEL. EXTRACTO. ALCOHÓLICO DE Vaccinium corymbosum L. FRENTE A Staphylococcus aureus. UNT, Trujillo - 2017. Ext. Alcoh. Vaccinium corymbosum L al 25%. 10. Ext. Alcoh. Vaccinium corymbosum L al 50%. 10. Ext. Alcoh. Vaccinium corymbosum L al 75%. 10. 7.5. 0.97. 12.7. 1.57. 10. 16.5. 2.92. 10. 22.2. 1.48. A. 0.85. IN. ED. Oxacilina. Desv. Estándar. 9.5. IC. Ext. Alcoh. Vaccinium corymbosum L al 100%. Promedio(mm). NT. n. -U. Grupo de tratamiento. DE. M. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, 2017. AD. En esta Tabla 1, se muestra el promedio de los halos de inhibición de. LT. Staphylococcus aureus tratado con extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum. CU. L. a las distintas concentraciones (25%, 50%, 75% y 100%) y el fármaco control Oxacilina. Se observa que a mayor concentración del extracto alcohólico utilizado. FA. se presentó mayor tamaño del halo de inhibición, sin embargo, la concentración de 25% no fue efectiva frente a esta bacteria.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. TABLA. N°. 2:. ANÁLISIS. DE. VARIANZA. DEL. EFECTO. ANTIBACTERIANO DEL EXTRACTO ALCOHÓLICO DE Vaccinium. SC. GL. CM. F. p. 1371.68. 4. 342.92. -U. 0.0000. Error. 133.2. 45. 2.96. Total. 1504.88. 49. A. 115.85. IN. Tratamientos. IC. F de V. NT. corymbosum L. FRENTE A Staphylococcus aureus. UNT, Trujillo - 2017. DE. M. ED. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, 2017. En la tabla N° 2 se muestra el análisis de varianza, observando que existe diferencia. AD. significativa entre grupos de investigación sobre Staphylococcus aureus dado que. FA. CU. LT. el valor de P es menor a 0.05 (p= 0.0000). 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. TABLA N° 3: COMPARACIÓN DEL EFECTO ANTIBACTERIANO DEL EXTRACTO ALCOHÓLICO DE Vaccinium corymbosum L. FRENTE A Staphylococcus aureus. UNT, Trujillo – 2017. n. Ext. Alcoh. Vaccinium corymbosum L. al 25%. 10. Ext. Alcoh. Vaccinium corymbosum L. al 50%. 10. Ext. Alcoh. Vaccinium corymbosum L. al 75%. 10. NT. Subconjunto para α= 0.05 Grupo de Tratamiento. 2. A. IC. IN. 9.5. 10. M. 5. 12.7. 16.5. 10. 22.2. DE. Oxacilina. 4. 7.5. ED. Ext. Alcoh. Vaccinium corymbosum L. al 100%. 3. -U. 1. AD. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, 2017. LT. En esta tabla N° 3 se muestra la prueba de DUNCAN para determinar grupos. CU. significativos a las distintas concentraciones del extracto alcohólico de Vaccinium. FA. corymbosum L. y el fármaco control Oxacilina sobre Staphylococcus aureus, por lo que nos muestra que existen 5 grupos con diferencia significativa en relación al efecto antibacteriano, siendo cada concentración de extracto alcohólico un grupo Estos grupos son estadísticamente diferentes entre sí, a un nivel de significancia de 0,05.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. GRÁFICO N° 1: PROMEDIO DE DIÁMETROS INHIBITORIOS DEL EXTRACTO ALCOHÓLICO DE Vaccinium corymbosum L. SEGÚN GRUPOS DE TRATAMIENTOS (25%, 50%, 75%, 100% Y OXACILINA). CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. SOBRE Staphylococcus aureus.. FA. Este Gráfico N° 1 indica que el mayor efecto antibacteriano sobre Staphylococcus aureus corresponde al fármaco control Oxacilina, seguido del extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L. a la concentración de 100%, luego la de 75% y finalmente a la de 50%. La concentración de 25% no tuvo efecto.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. TABLA. N°. 4:. EFECTO. ANTIBACTERIANO. DEL. EXTRACTO. ALCOHÓLICO DE Vaccinium corymbosum L. FRENTE A Escherichia coli.. n. Ext. Alcoh. Vaccinium corymbosum L. al 25%. 10. Ext. Alcoh. Vaccinium corymbosum L. al 50%. 10. Promedio(mm). -U. Grupo de tratamiento. NT. UNT, Trujillo – 2017. Desv. Estándar 1.06. 8.6. 0.70. 10. 10. 3.13. Ext. Alcoh. Vaccinium corymbosum L. al 100%. 10. 10.3. 2.41. Ciprofloxacino. 10. 36.6. 5.99. M. IN. ED. IC. Ext. Alcoh. Vaccinium corymbosum L. al 75%. A. 8.3. DE. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, 2017. AD. En esta Tabla 4 se muestra el promedio de la medición de los halos de inhibición de. LT. Escherichia coli tratado con extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L. a las. CU. distintas concentraciones (25%, 50%, 75% y 100%) y el fármaco control Ciprofloxacino. Se observa que Escherichia coli fue sensible y a mayor. FA. concentración del extracto alcohólico utilizado se presentó mayor tamaño del halo de inhibición, sin embargo, el mayor tamaño de halo de inhibición resulto la del antibiótico ciprofloxacino.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. TABLA. N°. 5:. ANÁLISIS. DE. VARIANZA. DEL. EFECTO. ANTIBACTERIANO DEL EXTRACTO ALCOHÓLICO DE Vaccinium. GL. CM. F. 5992.12. 4. 1498.03. 141.32. Error. 477. 45. 10.6. Total. 6469.12. 49. 0.0000. IN. Tratamientos. p. A. F de V. NT. SC. -U. corymbosum L. FRENTE A Escherichia coli. UNT, Trujillo - 2017. ED. IC. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, 2017. M. En la tabla N° 5 se aprecia el análisis de varianza, lo cual muestra que si existe. DE. diferencia significativa entre grupos de investigación sobre Escherichia coli dado. FA. CU. LT. AD. que el valor de P es menor a 0.05 (p= 0.0000). 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. TABLA N° 6: COMPARACIÓN DEL EFECTO ANTIBACTERIANO DEL EXTRACTO ALCOHÓLICO DE Vaccinium corymbosum L. FRENTE A Escherichia coli. UNT, Trujillo – 2017. Ext. Alcoh. Vaccinium corymbosum L. al 50%. 10. 10. 8.6. 10. 10.3. 10. 36.6. DE. M. Ext. Alcoh. Vaccinium corymbosum L. al 100% Ciprofloxacino. 8.3. IC. 10. ED. Ext. Alcoh. Vaccinium corymbosum L. al 75%. NT. 10. -U. Ext. Alcoh. Vaccinium corymbosum L. al 25%. A. n. IN. Grupo de Tratamiento. Subconjunto para α= 0.05 1 2. LT. AD. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, 2017. En esta tabla N° 6 se presenta la prueba de DUNCAN para determinar grupos. CU. significativos a las distintas concentraciones del extracto alcohólico de Vaccinium. FA. corymbosum L. y el fármaco control Ciprofloxacino sobre Escherichia coli, la cual nos muestra que existen 2 grupos con diferencia significativa con relación al efecto antibacteriano. Un primer grupo constituido por todas las concentraciones del extracto alcohólico, un segundo grupo conformado por el fármaco control. Estos grupos son estadísticamente diferentes entre sí, a un nivel de significancia de 0.05.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. GRÁFICO N° 2: PROMEDIO DE DIÁMETROS INHIBITORIOS EN mm DEL EXTRACTO ALCOHÓLICO DE Vaccinium corymbosum L. SEGÚN GRUPOS. DE. TRATAMIENTOS. (25%,. 50%,. 75%,. 100%. Y. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. CIPROFLOXACINO) SOBRE Escherichia coli.. Este Gráfico N° 2 indica que el mayor efecto antibacteriano sobre Escherichia coli corresponde al fármaco control Ciprofloxacino.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. IV. DISCUSIÓN Los resultados del presente estudio demostraron que el extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L. presenta actividad antibacteriana in vitro con todas las concentraciones en estudio sobre Escherichia coli, ya que los diámetros superaron. NT. los 8 mm; sin embargo, sobre Staphylococcus aureus, la concentración de 25% no tuvo efecto antibacteriano (halo de inhibición promedio: 7,5 mm). Sin embargo, el. -U. efecto antibacteriano fue más evidente sobre Staphylococcus aureus, debido a que. A. tuvo mayor halo de inhibición mientras mayor era la concentración; a diferencia de. IN. las concentraciones utilizadas sobre Escherichia coli, donde a cualquier. IC. concentración tuvo el mismo efecto, este hecho de que Escherichia coli( Gram. ED. negativa) sea más resistente que Staphylococcus aureus(Gram positiva) , se debería. M. a que las Gram negativas presentan una pared celular de unos 10 nm de espesor y es. DE. más compleja que las Gram positivas, tanto química como estructuralmente. Sus componentes presentan una pared celular con dos membranas lipídicas delgadas, las. AD. cuales están unidas mediante lipoproteínas(periplasma), dicho espacio contiene enzimas hidrolíticas (fosfatasas, proteasas, lipasas, nucleasas. y enzimas. CU. LT. metabolizadoras de carbohidratos), que contribuyen a su resistencia.23,24. FA. El efecto antibacteriano de Vaccinium corymbosum L. un tipo de baya es debido a sus propiedades antioxidantes y compuestos fitoquímicos, los cuales constituyen compuestos de flavanoles, procydinas, antocianinas, ácido benzoico. Los flavanoles de arándano están presentes como monómeros, oligómeros y polímeros conocidos como proantocianidinas o taninos condensados y representan aproximadamente el 85% del total de los flavonoles, siendo el de tipo A el principal bioactivo responsable. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. de las actividades biológicas atribuidas a los arándanos, donde se ha demostrado que actúan inhibiendo al patógeno mediante el daño estructural, el metabolismo, sobre la expresión génica y síntesis de membrana celular.3,4,25,26 Precisamente se ha evidenciado que los compuestos fitoquímicos que contiene el. NT. arándano actúan sobre las bacterias Gram negativas al unirse a los lipopolisacáridos. -U. de la membrana externa, mediante quelación de iones metálicos, los cuales regulan la estabilidad y permeabilidad de la membrana externa27,28; esto ocasiona que se. A. produzcan reacciones REDOX en la membrana plasmática en la cual se ha. IN. demostrado que estos compuestos se unen a componentes de la cadena de. IC. transferencia de electrones de la membrana celular e inhiben el flujo de electrones,. ED. ocasionando disrupción en el ciclo de protones quimiosmóticos, por lo que no se. M. sintetiza ATP29; y en consecuencia hay debilitamiento y destrucción de las. DE. estructuras de la membrana externa bacteriana, tal como lo demuestra Lacombe y col., donde se visualizó mediante microscópico electrónico, daño de la membrana. AD. al utilizar extracto de arándano30. A su vez sobre las Grampositivas (Staphylococcus. LT. aureus) actúan inhibiendo las enzimas: ADN girasa y coagulasa tal como Silva S et. CU. al. demostraron en su estudio.14. FA. Otros estudios también han demostrado que la capacidad de los compuestos fitoquímicos de arándanos sobre la capacidad de reducir la formación de biofilms por parte de las bacterias, tal como es el caso en Escherichia coli, en la cual, se ha demostrado que las proantocianidinas inhiben la adherencia y formación de biofilms sobre el urotelio31, así como para Stpahylococcus aureus, en la cual los componentes relacionados con este mecanismo son la quercetina y el ácido tánico.32. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Los halos inhibitorios promedios obtenidos de cada concentración de extracto alcohólico sobre cada bacteria, no superaron a los obtenidos por el fármaco control (22.2 mm para Staphylococcus aureus y 36.6 mm para Escherichia coli), esto puede ser debido a que el arándano presenta un contenido particularmente alto de. NT. proantocianidinas unidos a la pared celular, los cuales son resistentes a los métodos convencionales de extracción, por lo que estos compuestos no son extraídos en su. -U. totalidad y siendo estos el principal bioactivo para el mecanismo antibacteriano, se. A. infiere que las concentraciones obtuvieron menor halo inhibitorio que los fármacos. IN. controles.33. IC. Resultados obtenidos por Sahr C, en donde el efecto de jugo de arándano presentó. ED. a una dilución de 1:1 un halo promedio de 14,58 mm ±1,03 para Staphylococcus. M. aureus y 11,07 mm ± 0,48 para Escherichia coli34 son comparables a los. DE. encontrados en este estudio, en donde el halo promedio en la máxima concentración de extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L. (100%) para la primera. AD. bacteria fue de 16,5 mm y para la segunda, de 10,3 mm.. LT. Pervin M y col, encontraron una inhibición para Staphylococcus aureus de 15.88 ±. CU. 1.35 mm y 20.59 ± 3.22 mm para Escherichia coli, observándose que la bacteria. FA. que presentó mayor halo de inhibición fue Escherichia coli35, a diferencia del presente estudio, en donde se determinó mayor sensibilidad para Staphylococcus aureus, esto podría deberse a que el estudio fue realizado con extracto alcohólico de hojas de Vaccinium corymbosum L. y se ha demostrado que las hojas presentan mayor contenido de compuestos de flavonoles a diferencia de los frutos; a su vez el extracto del fruto contiene contenido de azúcar, los cual propicia crecimiento bacteriano, a diferencia del extracto de hoja.14 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Asimismo, Silva S. et al. determinaron que el extracto de arándano sobre un grupo compuesto por Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Proteus mirabilis, Acinetobacter baumannii y Staphylococcus aureus, solo impidió el crecimiento de Staphylococcus aureus y Escherichia coli36; a su vez Lian P y col. demostraron que. NT. el arándano es un potente antibacteriano frente a Staphylococcus aureus37; estos estudios demuestran que Vaccinium corymbosum L. tiene efecto antibacteriano. -U. sobre Escherichia coli y Staphylococcus aureus, tal como se demuestra en este. A. estudio.. IN. Por lo tanto, se puede afirmar que el extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum. IC. L. presenta actividad antimicrobiana, y se podría considerar una nueva alternativa. ED. futura para el tratamiento sobre bacterias resistentes, ya que los antibióticos tienen. M. efectos colaterales y las bacterias tienden a ser cada vez más resistentes, tal como. FA. CU. LT. AD. DE. es el MRSA.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. V. CONCLUSIONES.  El extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L. tuvo efecto antibacteriano in vitro sobre Staphylococcus aureus y Escherichia coli.. NT.  El efecto antibacteriano sobre Escherichia coli se produjo con todas las concentraciones del extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L.,. -U. obteniendo mayor efecto con la concentración de 100%.. A.  El efecto antibacteriano del fármaco control, ciprofloxacino sobre Escherichia. IN. coli, fue mucho mayor que las concentraciones del extracto alcohólico de. IC. Vaccinium corymbosum L.. ED.  El efecto antibacteriano sobre Staphylococcus aureus se produjo a partir de la. M. concentración de 50 % del extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L., siendo a la concentración de mayor efecto al 100%.. DE.  El efecto antibacteriano del fármaco control, oxacilina sobre Staphylococcus. AD. aureus, fue mayor que las concentraciones del extracto alcohólico de. FA. CU. LT. Vaccinium corymbosum L.. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. VI. RECOMENDACIONES.  Se recomienda realizar estudios sobre la composición fitoquímica del fruto de Vaccinium corymbosum L., analizando de manera cuantitativa como cualitativa. NT. para saber que compuesto es el que produce el efecto antibacteriano.  Se recomienda realizar estudios sobre la composición fitoquímica de la hoja de. -U. Vaccinium corymbosum L. y comparar con la composición química del fruto.. A.  Se recomienda realizar estudios ampliando la cantidad de bacterias que se. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. utilizó en el presente estudio.. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1.. Sharifi J, Sureda A, Tenore G, Daglia M, Sharifi M, Valussi M, et al. Biological Activities of Essential Oils: From Plant Chemoecology to Traditional Healing Systems. Molecules. 2017, 22(1), 70 Ministerio de Agricultura y Riego. Dirección general de políticas agrarias. NT. 2.. dirección de estudios económicos e información agraria. El arándano en el Perú. Foo LY, Lu Y, Howell AB, Vorsa N. A-type proanthocyanidin trimers from. A. 3.. -U. y el mundo: Producción, Comercio y Perspectivas. 2016. IN. cranberry that inhibit adherence of uropathogenic P-fimbriated Eschrechia. Blumberg J, Camesano T , Cassidy A , Etherton P , Howell A, Manach C, et. ED. 4.. IC. coli. J Nat Prod 2000; 63:1225-1228.. M. al. Cranberries and Their Bioactive Constituents in Human Health. Adv. Nutr.. 5.. DE. 2013; 4: 618–632. Alós J. Resistencia bacteriana a los antibióticos: una crisis global. Enferm. Vidal G, Jorge E. Escherichia coli enteropatógena (EPEC): Una causa. LT. 6.. AD. Infecc Microbiol Clin 2015;33:692-699.. frecuente de diarrea infantil Salud en Tabasco.2003; 9(1): 188-193. Sobota A. Inhibition of bacterial adherence by cranberry juice: potential use. CU. 7.. FA. for the treatment of urinary tract infections. J Urol. 1984; 131:1013.. 8.. Schmidt DR, Sobota A. An examination of the anti-adherence activity of cranberry juice on urinary and nonurinary bacterial isolates. Microbios. 1988; 55:173.. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 9.. Zafriri D, Ofek I, Adar R, et al. Inhibitory activity of cranberry juice on adherence of type 1 and type P fimbriated Escherichia coli to eucaryotic cells. Antimicrob Agents Chemother 1989; 33:92.. 10. Howell AB, Vorsa N, Der Marderosian A, Foo L. Inhibition of the adherence P-fimbriated. proanthocyanidin. Escherichia extracts. coli. from. to. uroepithelial-cell. cranberries.. by. Engl. J. Med.1998;. -U. 339(15):1085-1086.. N. surfaces. NT. of. A. 11. Stapleton A, Dziura J, Hooton T, Cox M, Yarova-Yarovaya Y, Chen S, et al.. IN. Recurrent urinary tract infection and urinary Escherichia coli in women. IC. ingesting cranberry juice daily: a randomized controlled trial. Mayo Clin Proc. ED. 2012; 87(2):143-150. M. 12. Risco E, Miguélez C, Sánchez E, Rouseaud A. Efecto del arandano americano. DE. (cysticlean®)‚ sobre la adherencia de Escherichia coli a células epiteliales de vejiga. Estudio in vitro y ex vivo. Arch. Esp. Urol. 2010; 63 (6): 422-430.. AD. 13. Da Silva A, De Carvalho M, Da Silva S, De Almeida E, Antunes C, Gir E.. LT. Staphylococcus aureus resistente a la meticilina: conocimiento y factores asociados a la adhesión del equipo de enfermería a las medidas preventivas.. CU. Rev. Lat-Am.2010,18(3):50-56.. FA. 14. Silva S, Costa E, Costa R, Pereira M, Pereira J, Soares J, et al. Aqueous extracts of Vaccinium corymbosum as inhibitors of Staphylococcus aureus. Food Control. 2015; 51:314–320. 15. Biswas D, Wideman N, O'bryan C, Muthaiyan A, Lingbeck J, Crandall F, et al. Pasteurized blueberry (Vaccinium Corymbosum) juice inhibits growth of. 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. bacterial pathogens in milk but allows survival of probiotic bacteria. Journal of Food Safety.2012; 32: 204–209. 16. Silva S, Costa E, Pereira M, Costa M, Pintado M. Evaluation of the antimicrobial activity of aqueous extracts from dry Vaccinium corymbosum. NT. extracts upon food microorganism. Food Control 34.2013:645-650 17. Shen X, Sun X, Xie Q, Liu H, Zhao Y, Pan Y, et al. Antimicrobial effect of. -U. blueberry (Vaccinium corymbosum L.) extracts against the growth of Listeria. A. monocytogenes and Salmonella Enteritidis. Food Control. 2014; 35(1): 159-. IN. 165.. IC. 18. Miranda M. Método de análisis de drogas y extractos. Universidad de la. ED. Habana. 2002: 1-86.. M. 19. Sacaquispe R, Velásquez J. Manual de Procedimientos para la prueba de. DE. sensibilidad antimicrobiana. Lima: Instituto Nacional de Salud. Serie de Normas Técnicas N°30, 2002.. AD. 20. Duraffourd C, D’ hervicourt L, La praz JC. Cuadernos de Fitoterapia Clínica.. LT. Barcelona: Editorial Masson SA, 1987 21. Garmendía, G, Vero S. Métodos para la desinfección de frutas y hortalizas.. CU. Horticultura. 2006; 197:18–27. FA. 22. Colegio Médico del Perú. Código de Ética y Deontología. Lima: CMP; 2007. 23. Lucana M, Huanca R. Estructura bacteriana. Rev. Act. Clin. Med. 2014; 49: 2589-2593. 24. Mollinedo M, Gónzales C. Bacterias Gram Negativas. Rev. Act. Clin. Med. 2014; 49: 2609-2613.. 40 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 25. Gyawali R, Ibrahim S. Impact of plant derivatives on the growth of foodborne pathogens and the functionality of probiotics. Applied Microbiology and Biotechnology. 2012; 95: 29–45. 26. Lacombe A, Wu V. The potential of berries to serve as selective inhibitors of. NT. pathogens and promoters of beneficial microorganisms. Food Quality and Safety. 2017; 1(1): 3-12.. -U. 27. Nohynek L, Alakomi H, Kähkönen M, Heinonen M, Helander I, Oksman-. A. Caldentey K, et al. Berry phenolics: antimicrobial properties and mechanisms. IN. of action against severe human pathogens. Nutrition and Cancer. 2006; 54: 18–. IC. 32.. ED. 28. Johnson B, Lin B, Dinderman M, Rubin R, Malanoski A, Ligler F. Impact of. M. cranberry on Escherichia coli cellular surface characteristics. Biochemical and. DE. Biophysical Research Communications. 2008; 377: 992–994. 29. Escher B, Hunziker R, Schwarzenbach R. Kinetic model to describe the. AD. intrinsic uncoupling activity of substituted phenols in energy transducing. LT. membranes. Environmental Science & Technology. 1999; 33: 560–570. 30. Lacombe A, Wu V, Tyler S, Edwards K. Antimicrobial action of the American. CU. cranberry constituents; phenolics, anthocyanins, and organic acids, against. FA. Escherichia coli O157:H7. International Journal of Food Microbiology. 2010; 139: 102–107.. 31. Di Martino P, Agniel R, Gaillard J, Denys P. Effects of Cranberry Juice on Uropathogenic Escherichia coli In Vitro Biofilm Formation. Journal of Chemotherapy. 2005;17(5):563-565.. 41 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 32. Lee J, Park J, Cho H, Joo S, Cho M, Lee J. Anti-biofilm activities of quercetin and tannic acid against Staphylococcus aureus. Biofouling. 2013;29(5):491499. 33. Saura-Calixto F. Concept and health-related properties of nonextractable. NT. polyphenols: the missing dietary polyphenols. J Agric Food Chem. 2012; 60(45):11195-11200.. -U. 34. Sahr C. Determinación del efecto inhibidor in vitro del jugo de cranberry. A. (Vaccinium macrocarpon) sobre microorganismos patógenos. 2004.. IN. 35. Pervin M, Hasnat A, Lim B. Antibacterial and antioxidant activities of. IC. Vaccinium corymbosum L. leaf extract. Asian Pac.J. Trop Dis. 2013; 3(6): 444-. ED. 453.. M. 36. Silva S, Costa E, Mendes M, Morais R, Calhau C, Pintado M. Antimicrobial,. DE. antiadhesive and antibiofilm activity of an ethanolic, anthocyanin-rich blueberry extract purified by solid phase extraction. Journal of Applied. AD. Microbiology. 2016; 121(3): 693–703.. LT. 37. Lian P, Maseko T, Rhee M. The antimicrobial effects of cranberry against Staphylococcus aureus. Food Science and Technology International. 2012;. FA. CU. 18(2): 179–186.. 42 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) ED. IC. IN. A. -U. NT. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. FA. CU. LT. AD. DE. M. ANEXOS. 43 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO N°1 FICHA DE RECOLECCIÓN DE DATOS. NT. Cepa Bacteriana: Concentraciones del extracto alcohólico de. Fármaco control. Medida del halo de. 50 %. 75 %. IN. R1. IC. R2. ED. R3. M. R4. DE. R5 R6. LT. CU. R9. AD. R7 R8. 100%. A. 25 %. -U. Vaccinium corymbosum L. inhibición en mm. FA. R10. 44 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO N°2. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. DETERMINACIÓN TAXONÓMICA DE LA PLANTA DE Vaccinium corymbosum L.. Figura 1. Planta de Vaccinium corymbosum L. determinada taxonómicamente, con N° 59247.. 45 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO N°3. ED. IC. IN. A. -U. NT. REGISTRO FOTOGRÁFICO DEL PROCEDIMIENTO PARA OBTENER EL EFECTO ANTIBACTERIANO DE LAS CONCENTRACIONES DEL EXTRACTO ALCOHÓLICO DE Vaccinium corymbosum L.. M. Figura 2. Lavado de arándano antes de licuado. FA. CU. LT. AD. DE. Figura 3. Colocación de arándano en licuadora.. Figura 5. Licuado de arándano.. Figura 4. Colocación de etanol al 70% 46. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) ED. Figura 7. Frasco con licuado de arándano y etanol 70%.. FA. CU. LT. AD. DE. M. Figura 6. Colocación del licuado en frasco para maceración.. IC. IN. A. -U. NT. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Figura 9. Filtrado del producto macerado.. Figura 8. Frasco envuelto con papel de aluminio.. 47 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(48) -U. NT. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. A. Figura 10. Concentraciones del extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L.. AD. DE. M. ED. IC. IN. Figura 11. Siembra de las bacterias. Figura 12. Discos embebidos a las diferentes concentraciones del extracto alcohólico.. FA. CU. LT. Figura 13. Efecto antibacteriano del extracto alcohólico de Vaccinium corymbosum L.. Figura 14. Efecto antibacteriano de fármaco control sobre Escherichia coli.. 48 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(49) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO N°4 CRITERIOS DE EVALUACIÓN DEL INFORME FINAL DE LOS TRABAJOS DE INVESTIGACIÓN EN LA FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNT. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. Aspectos 1.TITULO a. Contiene las variables del problema de investigación. No es mayor a quince palabras. b. El título refiere de manera general las variables del problema. Tiene más de 15 palabras c. El título no refleja el contenido del trabajo. 2. RESUMEN a. Tiene no más de 200 palabras y palabras clave. b. Tiene más de 200 palabras y palabras clave. c. Tiene más de 200 palabras o no tiene palabras clave. 3. ABSTRACT a. Tiene no más de 200 palabras y palabras clave con correcto uso del idioma inglés. b. Tiene más de 200 palabras y palabras clave con correcto uso del idioma inglés. c. Tiene más de 200 palabras en idioma inglés o no tiene palabras clave o uso incorrecto del idioma inglés. 4. INTRODUCCIÓN a. Se basa en antecedentes de conocimientos previos, presenta el problema con sustento, la hipótesis es coherente con el problema y objetivos. b. Se basa en antecedentes de conocimientos previos, el problema no está bien sustentado o la hipótesis no es coherente con el problema y/o objetivos. c. Se basa en antecedentes de conocimientos previos. No presenta problema y/u objetivos. 5. MATERIAL Y MÉTODO a. La muestra recolectada es representativa, adecuada y plantea un diseño experimental apropiado a la solución del problema. b. La muestra recolectada es representativa, adecuada y no plantea un diseño experimental apropiado a la solución del problema. c. La muestra recolectada no es representativa, ni adecuada. 6. RESULTADOS a. Presenta los resultados en forma sistemática en función de las variables del problema e incluye. Puntajes 1 0.5 0.1 0.5 0.3 0.1 0.5 0.3 0.1. 3.5 2 1. 3 2 1 4. 49 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.