UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
Efecto sinérgico del ácido indolacético y del 6 bencilaminopurina en la micropropagación in vitro de Selenicereus megalanthus
Tesis
para optar el Título Profesional de Biólogo
AUTORES: Br. Vidal Zare, Deliz Adeli
Br. Puclia Vargas, Dajaira Sherly Aracelly
ASESOR: DR. López Medina, Segundo Eloy
TRUJILLO – PERÚ 2022
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AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
Dr. Carlos Alberto Vásquez Boyer RECTOR
Dr. Juan Amaro Villacorta Vásquez VICERRECTOR ACADEMICO
Dr. Guillermo Arturo García Pérez VICERRECTOR ADMINISTRATIVO
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AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
Ms. C. Adalberto Javier Gonzáles Varas DECANO
Dra. Marlene Rene Rodríguez Espejo PROFESORA SECRETARIA
Dr. Julio Roger Chico Ruíz
DIRECTOR DE LA ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS
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PRESENTACIÓN
Señores Miembros del Jurado:
En las disposiciones y cumplimiento que establece el Régimen de Grados y Títulos de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, ponemos a vuestra consideración y elevado criterio el presente informe de tesis titulado: Efecto sinérgico del ácido indolacético y del 6 bencilaminopurina en la micropropagación in vitro de Selenicereus megalanthus
Con el cual pretendemos optar el Título Profesional de Biólogo
Trujillo, 15 de diciembre del 2021
Br. Vidal Zare Deliz Adeli Br. Puclia Vargas Dajaira
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DEL ASESOR
El que escribe, profesor asesor de la presente tesis para optar por el Título Profesional de Biólogo, certifica, que ha sido desarrollada en conformidad con los objetivos propuestos y el informe ha sido revisado y acoge las observaciones y sugerencias alcanzadas.
Por lo tanto, autorizo al Br. Vidal Zare Deliz Adeli y al Br. Puclia Vargas Dajaira a continuar con los trámites correspondientes.
Dr.
López Medina Segundo Eloy
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JURADO DICTAMINADOR
Dr.
Chaman Medina Mercedes Elizabeth
PRESIDENTE
Dr. Veneros Terrones Roger SECRETARIO
Dr. López Medina Segundo Eloy VOCAL
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DEDICATORIA
En primer lugar, dedico mi tesis a Dios, por darme la vida y la fortaleza sin él no lo habría logrado por bendecirme y protegerme a diario dándome sabiduría y llevándome por el camino del bien.
A mis padres por brindarme su apoyo incondicional enseñanzas, consejos y valores a mis hermanos por estar siempre conmigo y ser mi fortaleza e inspiración diaria.
Deliz Adeli Vidal Zare
Quiero agradecer a Dios por estar siempre presente dándome fuerza para yo lograr culminar mi etapa universitaria sin él no hubiese sido posible.
A mis padres y hermanas por su apoyo y consejos, para luchar por mis metas y sueños.
A mi hija por ser el motivo de seguir ante las adversidades.
Al Dr. Eloy López Medina por su asesoramiento y apoyo durante la elaboración de nuestra tesis.
Dajaira Sherly Aracelly Puclia Vargas
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AGRADECIMIENTO
En primera instancia agradezco a mi asesor el Dr. Eloy López Medina por haberme guiado en mi proyecto de tesis en base a su sabiduría y conocimiento científico
A Dios por guiarme y permitirme tener una buena experiencia en la universidad y convertirme en un ser profesional, gracias a cada uno de los maestros por sus enseñanzas y compartir sus conocimientos y así poder culminar mi etapa universitaria.
A mis padres por su apoyo mutuo, lo cual ha sido muy valioso para mí, para así yo lograr esta meta trazada.
Vidal Zare Deliz Adeli
Agradezco infinitamente a Dios por darme la fortaleza necesaria paro yo poder así culminar mi etapa universitaria.
A mis padres por el apoyo incondicional y constante durante toda esta etapa, haciendo posible el término de mis estudios y logros obtenidos.
Al Dr. Eloy López Medina por compartir sus grandes enseñanzas y conocimientos para aplicarlo en la elaboración de mi tesis.
Dajaira Sherly Aracelly Puclia Vargas
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INDICE
CARATULA ………..………I AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO………...…...II AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS………..…III PRESENTACION………..…IV JURADO DICTAMINADOR………..….VI DEDICATORIA……….…...VII AGRADECIMIENTO……….VIII INDICE………..….IX RESUMEN………..…..…X ABSTRACT……….…..…XI
I.INTRODUCCION……….……1
REALIDAD PROBLEMÁTICA……….……..1
JUSTIFICACION Y RELEVANCIA………..…….4
MARCO TEORICO Y CONCEPTUAL………..…….5
MARCO EMPIRICO……….….……6
PROBLEMA……….….…8
HIPOSTESIS……….……….….…8
OBJETIVO……….….….…9
II.MATERIAL Y METODOS……….……….….…9
2.1. TIPO DE INVESTIGACION………..…9
2.2. POBLACION MUESTRA……….…..……10
2.3. CRITERIOS DE INCLUSION………..…..……10
2.4. UNIDAD DE ANALISIS……….……..…10
2.5. INSTRUMENTOS………...……..…10
2.6. CONTROL DE CALIDAD DE DATOS………11
2.7. PROCEDIMIENTO……….………11
2.8. PROCESAMIENTO DE DATOS………..…12
2.9. DEFINICION DE VARIABLES………..………12
2.10. CONSIDERACIONES ETICAS Y DE RIGOR………..………13
III. RESULTADOS………14
IV.DISCUSION………..……21
V.CONCLUSIONES……….………22
VI.REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS……….……23
ANEXOS………..……….…………30
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RESUMEN
Selenicereus megalanthus (K. Schum. Ex Vaupel) Moran, considerada como pitahaya amarilla o fruto del dragón tiene una gran demanda y por sus propiedades medicinales por lo que se incrementó su producción en diversos lugares del Perú y otros países de Sudamérica, es una cactácea que resiste al estrés hídrico y se aclimata fácilmente. Por ello esta investigación busca beneficiar la producción masiva y rápida, aplicando hormonas que ayuden a la formación de nuevos explantes usando las yemas axilares; para ello se aplicó las hormonas 6-BAP y AIA (ácido indolacético y del 6 bencilaminopurina) en concentraciones de 0.0;0.5;1.0. Obteniendo solo la formación de callos, por lo que se aplicó la escala de Santana (1982) para la clasificación de callos, presentando en el tratamiento 6 una ligera formación de callo (grado 1), donde se contenía el 0.5 de AIA y 1.0 6-BAP presento el mayor número de callos con un porcentaje de 1.2%.
Palabras claves: Selenicereus megalanthus, cultivo in vitro, callos, ácido indolacético, 6 bencilaminopurina.
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ASBTRACT
Selenicereus megalanthus (K. Schum. Ex Vaupel) Moran, considered as yellow pitahaya or dragon fruit, is in great demand and due to its medicinal properties, its production increased in various places in Peru and other South American countries. It is cacti that resists water stress and acclimatizes easily. Therefore, this research seeks to benefit massive and rapid production, applying hormones that help the formation of new explants using axillary buds; For this, the hormones 6-BAP and AIA (indoleacetic acid and 6- benzylaminopurine) were applied in concentrations of 0.0; 0.5; 1.0. Obtaining only the formation of calluses, for which the Santana scale (1982) was applied for the classification of calluses, presenting in treatment 6 a slight formation of calluses (grade 1), where 0.5 AIA and 1.0 6-BAP were contained. I present the highest number of calluses with a percentage of 1.2%.
Key words: Selenicereus megalanthus, in vitro culture, callus, indoleacetic acid, 6- benzylaminopurine
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I. INTRODUCCIÓN
Realidad problemática
La “pitahaya” o también conocida como “fruto del dragón”, es originario del Centroamérica y de la selva peruana, forma parte de la familia de las cactáceas. Dentro de esta familia resaltan los géneros Hylocereus y Selenicereus (Verona et al., 2020). En el género de Selenicereus se puede encontrar hasta 20 especies, sin embargo, solo una se encuentra en el Perú (Ostolaza, 2014).
La pitahaya amarilla (Selenicereus megalanthus megalanthus (K. Schum.
Ex Vaupel) Moran.), reconocido como fruto exótico por su forma, aspecto y propiedades, como: carbohidratos, fibra, vitamina C, y 80 % de agua (Sotomayor et al., 2019), además, sus semillas también poseen propiedades medicinales que mejora los proceso y/o complicaciones en el sistema gastrointestinal; asimismo, aminora colesterol en sangre y es usado como antioxidantes, entre otros (Huachi et al., 2015; Guzmán et al., 2012).
La micropropagación está basada fundamentalmente en la totipotencia celular, por lo que se puede obtener plantas completas mediante explantes (Moebius et al., 2003).
Por ello, para asegurar una producción masiva de la pitahaya se requiere propagar los mejores especímenes con fenotipos más homogéneos, optando por la reproducción asexual donde las nuevas herramientas proporcionadas por la biotecnología, mediante la propagación in vitro, permitirá seleccionar
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a los mejores individuos tanto genéticamente, sanitaria y fisiológicamente en un corto tiempo bajo las óptimas condiciones físicas y químicas (Ruíz, 2009).
Teniendo en cuenta que en la micropropagación la renovación de tejidos tiene gran importancia en la producción masiva de plantas, por el rendimiento y el desarrollo de ellas (Ruíz, 2009).
Por lo tanto, los nuevos procedimientos de cultivo in vitro será la opción de mejora en las condiciones fisiológica, genética y fitosanitaria de un alto número de especímenes.
Para realizar un cultivo in vitro es necesario que alguna parte de la planta se encuentre en división activa, como pueden ser las regiones meristemáticas.
Estos segmentos obtenidos se inoculan sobre medios semisólidos que proporcionaran las condiciones necesarias para el desarrollo de callos y nuevos individuos (Avalos, 2010 y Ochoa, 1990).
El desarrollo de los nuevos brotes y raíces pueden darse sin la adición de reguladores de crecimiento en el medio. Por lo que el medio M&S (Murashige
& Skoog) logra inducir un alto porcentaje de brotes de los segmentos proporcionados (Drew y Azimi, 2002).
A pesar de que el medio por sí solo es más que suficiente para el desarrollo de los explantes, es necesario la adición de algunas fitohormonas para obtener mejores resultados. Ya que las fitohormonas es componente endógeno bioactivas concurrente en plantas, que controlan los procedimientos de mejora vegetal (Acosta et al., 2005).
El empleo de diferentes compuestos y su uso en la agricultura es frecuente y en contante aumento. La producción agroquímica facilita un amplio registro
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de fitorreguladores. Por otro lado, la producción agrícola, combate problemas medio ambientales ante la sociedad, optando por productos ecológicos en los países desarrollados. Presenta una inclinación gradual hacia la agricultura sostenible desplazando los plaguicidas, fertilizantes y reguladores del crecimiento (Acosta et al., 2005).
Es por ello que en un estudio reciente se encontró que, dentro de las fitohormonas endógenas se tiene a las auxinas, y en ella encuentra el ácido indolacético (AIA), presente en la mayoría de plantas (Rojas, 2020).
Dentro de los procesos activos de división celular se hallan las auxinas en mayores porcentajes, donde se ve involucrada con la extensión de tallos, coleóptilos, raíces adventicias y desarrollo de floración (Rojas, 2020; Zhao, 2010). Sin embargo, estudios demuestran que el efecto de las auxinas requiere de la producción de niveles adecuados de citoquininas para una buena influencia sobre el metabolismo de las especies (Thorpe, 1995).
La formación de citoquininas puede realizarse en cualquier tejido vegetal como puede ser las semillas, frutos, hojas y tallos, sin embargo, en las raíces se llega a producir mayor cantidad, porque en los sitios donde inicia la diferenciación celular la producción de estas hormonas será mayor (Cossio,2013). El uso de citoquininas en cultivos in vitro promueve la formación de callos (Avalos, 2010). Aunque son pocos los reportes del uso del 6-bencilaminopurina (6-BAP) en Selenicereus megalanthus, se halló que el 6-BAP fue el mejor tratamiento para la elongación y formación de callos respecto a la kinesina (Beltrán et al., 2015)
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Por lo tanto, en la presente investigación buscamos obtener la recopilación de información necesaria acerca de los efectos primarios, secundario y relativos acerca de un cultivo in vitro expuesto al 6- Bencilaminopurina (6- BAP) y al ácido indolacético (AIA) respecto a la micropropagación de Selenicereus megalanthus, buscando obtener como resultado final una exitosa propagación de los mejores especímenes en su producción y resistencia a diversos factores.
JUSTIFICACION Y RELEVANCIA
La pitahaya es una cactácea, que tiene un potencial de convertirse en un producto de primera para el consumo nacional o para la exportación, ya que se viene cultivando en distintas zonas tropicales del Perú, el cual contiene un alto beneficio económico además de beneficiar la salud del consumidor.
Como podemos ver, la salida de Pitahaya aumenta continuamente a ras del mundo, por lo que tiene potencialidades en la industrialización de alimentos o farmacéuticos medicinales y un alto consumo en fruta fresca
A pesar de ello, su posibilidad se ve mermado por la variedad de problemas fitosanitarios, como los causados por distintas especies de Fusarium, Colletotrichum y Erwinia; que puede conducir a grandes pérdidas
Por lo que la utilización de cultivos in vitro y la utilización de hormonas como el AIA y el 6-BAP u otras hormonas puede ser una alternativa ya que con esta técnica se pueden separar plantas elite y mejorar la producción, ya que según la investigación casi no se ha justificado los efectos de concentración de hormonas en el crecimiento de cultivo in vitro, además son pocas las investigaciones que se enfocan en la micropropagación de callos o brotes.
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MARCO TEORICO CONCEPTUAL
La pitahaya es una suculenta, epifita o hemiepifita muy ramificada, y se desarrolla sosteniéndose de árboles o rocas en las regiones que presentan una precipitación pluvial de 2,000 mm, y de 11 a 40 ºC de temperatura y hasta 1,840 m sobre el nivel del mar (Rodríguez, 2000; Ortiz y Carrillo, 2012).
Tiene flores hermafroditas de apertura nocturna, en su mayoría son blancas o con color amarillento y de gran tamaño, nacen por las axilas de las espinas, en las partes más expuestas a los rayos solares. El fruto tiene formación ovalada y prolongada, de 10 a 12 cm de diámetro, con escamas foliáceas y exocarpo de color amarillo, rojo y magenta. El endocarpio es de color blanco, amarillo o magenta con numerosas semillas diminutas (García et al., 2015).
Recientemente se amplió el rendimiento de este fruto en diversos territorios, algunos de estos países lo exportan en pulpa congelada mientras que otros en fruta fresca (FEDERECAFE, 1992).
Según González, 2014; la pitahaya presenta una riqueza nutricional por sus antioxidantes, mucílagos, ácido ascórbico y fenoles. Contiene vitaminas del grupo B y C, minerales, proteína y fibra, además un gran porcentaje en agua.
Así mismo, las semillas poseen la propiedad de contener ácidos grasos benéficos.
Su propagación puede desarrollarse de forma vegetativa, mediante los esquejes y también trasplante directo de plantas cultivadas. Para cumplir con su elongación se necesita de soportes o sistema de siembra (Caetano, 2010)
Entre los reguladores para el desarrollo tenemos las citocininas, auxinas, giberelinas, ácido abscísico y el etileno, etc. (Caetano,2012)
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Las aplicaciones de fitohormonas buscan inducir el proceso de floración para la proliferación y desarrollo de frutos, precaver el descenso anticipada del fruto e incitar el crecimiento del sistema radicular. Las fitohormonas o fitorreguladores son compuestos biológicos aplicables en diversas cantidades.
También pueden atenuar o incitar el desarrollo de órganos; así mismo, el proceso de los reguladores se ven influenciadas por el equilibrio hormonal, y se debe saber en qué momento se dará las aplicaciones y concentración requerida (Quilambaqui, 2003)
En el procedimiento in vitro tras la “miniaturización” de los explantes ayudan a disminuir costos y espacio, además permite una alta multiplicación en el proceso in vitro (Engelmann y González, 2013).
MARCO EMPIRICO
En la búsqueda de nuevas alternativas para procesar la pitahaya orientan los esfuerzos de investigadores en áreas agroindustriales que permitan disponer tecnologías de rápida producción, para el consumo en variadas presentaciones (Torres, 2007).
Para la conservación genética de las especies se requiere de las técnicas de micropropagación (Alegría, 2001), por lo que la biotecnología brinda una gama de técnicas, asociadas a procedimiento in vitro de tejidos vegetales, que pueden incorporarse a líneas de conservación. Un método de propagación usada en cactáceas es la estimulación de yemas axilares, las cuales se ubican en estructuras denominadas areolas, las cuales contienen células meristemáticas que dan lugar a nuevos callos o brotes que luego se desarrollan en una planta (Villavicencio et al., 2012; Lema y Kulus, 2014).
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En Hylocereus la mayor parte de las areolas perduran latentes, solo algunas inician la actividad de división celular para desarrollar callos, brotes vegetativos y botones florales (Khaimov et al., 2012). El método de propagación mediante la activación de areolas es importante por su sencillez y gran propagación (Zoghlami et al., 2012).
Para mesclar reguladores de crecimiento (RC) citocininas y auxinas en etapa de multiplicación de la propagación desempeñan una función importante para determinar el desarrollo de las células. La ocurrencia de la activación de yemas vegetativas para el desarrollo de brotes está determinada por la condición fisiológica de la planta, particularmente al evento dominancia apical, que se refiere al control o inhibición de crecimiento que realiza la yema apical encima de las yemas axilares, este fenómeno se debe a la acción de las hormonas, auxinas y citocininas, lo cual alcanzan una conexión de densidad óptima para la división y diferenciación (Lallana y Lallana, 2014).
Responden diversas especies de manera distinta a una misma situación de cultivo, en cactus la brotación de yemas axilares necesita niveles bajos de auxina y altos de citocininas (Viñas et al., 2012).
En Pelah et al., (2002) y Caetano et al., (2014), se realizaron estudios de cultivo in vitro detallados en diferentes cactus, así como en Selenicereus megalanthus. Generó un protocolo de regeneración in vitro a partir de areolas mediante organogénesis indirecta de pitahaya amarilla, que utilizó una dosis de 300 μM de TDZ (Thidiazuron) con resultados positivos en la formación de callos y formación de más brotes (Mallap, 2020).
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Zambrano et al. (2015), estudiaron la propagación in vitro de la pitahaya amarilla (Hylocereus megalanthus) empleando las siguientes fitohormonas y reguladores de crecimiento, evaluando distintas combinaciones de dos citoquininas (BAP y Kinetina) y una auxina (AIA) por organogénesis directa, de la sección apical. El estudio encontró que los tratamientos óptimos para el alargamiento y la producción de brotes fueron BAP 0.5 mg/L y BAP 1.0 mg/L, respectivamente. En la formación de número de raíces, el tratamiento más adecuado es Kinetina 1,0 mg/L + AIA 0,3 mg/L.
Mallap (2020) reportó que el medio MS + ANA + BAP comprende un 88
% de formación de callos en una proporción de 0,1 mg/L de 6- bencilaminopurina (BAP) y 3 mg/L de ácido naftaleno acético (ANA);
mientras que se obtuvo un 60 % de formación de callos por tratamiento con MS + AC + CA, consistente en 20 ml de agua de coco (AC) y 1 g de carbón activo (AC).
Problema
¿Existe efecto sinérgico entre el ácido indolacético y 6-bencilaminopurina en la micropropagación in vitro de Selenicereus megalanthus?
Hipótesis
Hi. Existe efecto sinérgico entre el ácido indolacético y 6- bencilaminopurina en la micropropagación in vitro de Selenicereus megalanthus.
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Ho. No existe efecto sinérgico entre el ácido indolacético y 6- bencilaminopurina en la micropropagación in vitro de Selenicereus megalanthus.
Objetivos
Objetivo general:
Determinar si existe sinergismo entre el ácido indolacético y 6- bencilaminopurina en el establecimiento in vitro de Selenicereus megalanthus.
Objetivos específicos:
Establecer la concentración óptima entre el ácido indolacético y 6- bencilaminopurina para la micropropagación in vitro de Selenicereus megalanthus.
Determinar la concentración óptima para la formación de callos in vitro de Selenicereus megalanthus después de la aplicación entre el ácido indolacético y 6-bencilaminopurina.
Evaluar la concentración de brotes in vitro en Selenicereus megalanthus después de la aplicación del ácido indolacético y del 6-bencilaminopurina.
II. MATERIAL Y METODOS
2.1. TIPO DE INVESTIGACION Básica
Explicativa
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2.2. POBLACION MUESTRA
Estuvo conformado por 216 yemas axilares extraídas de esquejes juveniles de Selenicereus megalanthus de 15 a 20 cm, recolectadas del invernadero del laboratorio de Biotecnología, Escuela Académica Profesional de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo.
2.3.CRITERIOS DE INCLUSION
Los esquejes de Selenicereus megalanthus “pitahaya amarilla”
extraídos de la planta madre deben estar en buen estado, debe estar verde y contener yemas axilares viables para la investigación.
2.4. UNIDAD DE ANALISIS
Yemas axilares extraídos de los esquejes de Selenicereus megalanthus 2.5.INSTRUMENTOS
Tabla 1. Instrumentos utilizados
DESCRIPCIÓN CANTIDAD CALIDAD
Equipos
Balanza analítica. 01 Und Buena
Estufa. 01 Und Buena
Autoclave 01 Und Buena
Materiales
Varilla de agitación 01 Und Buena
Vasos de precipitación Pyrex 02 Und Buena
Matraz Erlenmeyer Pyrex 01 Und Buena
Pipetas Pyrex 02 Und Buena
Papel aluminio 02 Und Buena
Frascos de penicilina 50 Und Buena
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2.6. CONTROL DE CALIDAD DE DATOS
Entrenamiento y manejo adecuado en el uso del protocolo y los instrumentos de laboratorio al momento de realizar el cultivo in vitro.
2.7. PROCEDIMIENTO
Lugar de ejecución de la tesis
La investigación se desarrolló en el laboratorio de Biotecnología del Instituto de la papa y Cultivos Andinos, Escuela Académico Profesional de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo.
Preparación del medio
En un matraz se agregó el medio de cultivo MS (1992) hasta enrazar el volumen necesario. Luego se llevó a la cocina eléctrica, donde se incorporó el azúcar y el agar cuando el medio se encontró tibio, una vez diluido todo el agar se distribuyó en 9 vasos de precipitación. Se agregó las hormonas AIA a 0 ppm, 0.5 ppm y 1.0 ppm y 6-BAP a 0 ppm, 0.5 ppm y 1.0 cada componente según los cálculos respectivos, luego con una pipeta se sirvió el medio en cada frasco de penicilina. Una vez concluida esta actividad se tapó la boca de los frascos con papel aluminio.
Luego se rotularon según su tratamiento correspondiente y se empaquetaron con papel para su esterilización en autoclave a 120°C y a 1 atm de presión por 20 minutos.
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Condiciones de cultivo
Se realizó en el laboratorio, previa desinfección del área y encendido de los mecheros en la cabina para evitar la contaminación
Desinfección
Para la desinfección del material biológico se extrajo los esquejes juveniles, donde se sometieron a un lavado con agua destilada, luego fueron colocados en un frasco estéril con alcohol al 70% por 15 segundos y se enjuagaron 5 veces con agua destilada estéril, luego se agregó lejía al 1% durante tres minutos, nuevamente se enjuagaron 5 veces con agua destilada estéril. Por último, se sembraron en los frascos de penicilina con el medio preparado, y se dejó en fotoperiodo a 16 horas luz y 8 horas oscuridad a 18°C para su desarrollo.
2.8. Procesamiento de datos
Análisis estadístico:
Con los datos obtenidos se procesó un análisis de varianza (ANOVA) y la prueba de comparación de medias de Tukey, ambas con un nivel de confianza de 95%. Y se realizó figuras para su comparación de medias.
2.9. Definición de variables
Variable independiente: Ácido indolacético y el 6- bencilaminopurina.
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Variable dependiente: Formación de callos y brotes en Selenicereus megalanthus.
2.10. Consideraciones éticas y de rigor
El material biológico de Selenicereus megalanthus se extrajo de esquejes juveniles de 15 a 20 cm, ubicado en el invernadero de Biotecnología del Instituto de la papa y Cultivos Andinos, Escuela Académico Profesional de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo. Para su siembra con técnicas asépticas y cuidadosas para su desarrollo.
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III. RESULTADOS Análisis descriptivo
Tabla 2: Aplicación o tratamiento de la concentración óptima del ácido indolacético y del 6-bencilaminopurina para la micropropagación in vitro de Selenicereus megalanthus
En la Tabla 2 se muestran los grupos de tratamiento, grupo control y grupo experimental, con la preparación y proporción de los reguladores AIA y 6-BAP en unidades o frascos.
Grupos Tratamientos
Reguladores
AIA (ppm) BAP (ppm)
Grupo control y tratamientos
𝑻𝟏 0.0 0.0
𝑻𝟐 0.0 0.5
𝑻𝟑 0.0 1.0
𝑻𝟒 0.5 0.0
𝑻𝟓 0.5 0.5
𝑻𝟔 0.5 1.0
𝑻𝟕 1.0 0.0
𝑻𝟖 1.0 0.5
𝑻𝟗 1.0 1.0
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Tabla 3: Presencia de callos de acuerdo a la escala de Santana (1982) en Selenicereus megalanthus, después de la aplicación ácido indolacético y del 6-bencilaminopurina.
GRUPOS TRATA- MIENTOS
0
(No formación de callos)
1 (Ligera formación de callos)
2
(Mediana formación de callos)
3 (Alta formación de callos
Grupo control y tratamientos
T1 99.76% 1 0.24% 0 0% 0 0%
T2 100% 0 0% 0 0% 0 0%
T3 99.76% 1 0.24% 0 0% 0 0%
T4 99.52% 2 0.48% 0 0% 0 0%
T5 99.52% 2 0.48% 0 0% 0 0%
T6 98.8% 5 1.2% 0 0% 0 0%
T7 99.76% 1 0.24% 0 0% 0 0%
T8 99.76% 1 0.24% 0 0% 0 0%
T9 99.52% 2 0.48% 0 0% 0 0%
En la Tabla 3 se muestran los niveles de formación de callos según la escala de Santana (1982) después de la aplicación de las hormonas, ácido indolacético y del 6- bencilaminopurina. Observándose que hubo crecimiento de callos, solo en un nivel de formación ligera. Entre ellos se observa que el grupo control o Tratamiento 1 solo tuvo un crecimiento del 0.24% (01 callo), mientras que, entre los tratamientos experimentales, el Tratamiento 6 alcanzó la misma escala de formación ligera, pero con la formación de 1.2% (06 callos), comprobándose el cumplimiento de este objetivo.
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Tabla 4: Presencia de brotes Selenicereus megalanthus, después de la aplicación ácido indolacético y del 6-bencilaminopurina.
GRUPOS
TRATA- MIENTOS
0 (No formación de brotes)
1 (Ligera formación de brotes)
2 (Mediana formación de brotes)
3 (Alta formación de brotes)
Grupo control y tratamientos
T1 0 0% 0 0% 0 0% 0 0%
T2 0 0% 0 0% 0 0% 0 0%
T3 0 0% 0 0% 0 0% 0 0%
T4 0 0% 0 0% 0 0% 0 0%
T5 0 0% 0 0% 0 0% 0 0%
T6 0 0% 0 0% 0 0% 0 0%
T7 0 0% 0 0% 0 0% 0 0%
T8 0 0% 0 0% 0 0% 0 0%
T9 0 0% 0 0% 0 0% 0 0%
En la Tabla 4 se muestran los niveles de micropropagación según la escala de Santana después de la aplicación de las hormonas, ácido indolacético y del 6- bencilaminopurina. Sin embargo, no se observa crecimiento de brotes en ningún tratamiento. No comprobándose este objetivo.
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Análisis inferencial
Tabla 5: Análisis de varianza
Fuente GL
SC Ajust.
MC Ajust.
Valor F
Valor p
Bloque 2 0,02165 0,01083 0,17 0,844
Tratamiento 8 1,82174 0,22772 3,60 0,014
Error 16 1,01161 0,06323
Total 26 2,85501
En la Tabla 5 se realizó el análisis de varianza en el cual se observa que el factor tratamiento es significativo, por el valor p = 0.014 menor a 0.0 5.
Tabla 6: Resumen del modelo
S
R- cuad.
R-cuad.
(ajustado)
R-cuad. (pred)
0,251448 64,57% 42,42% 0,00%
En la Tabla 6 se observa el efecto sinergismo del ácido indolacético y del 6- bencilaminopurina explica un 64.57% en la inducción de crecimiento in vitro de callos en la Selenicereus megalanthus.
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Tabla 7: Comparaciones por medias de Tukey con nivel de confianza de 95%:
Tratamiento
Tratamiento N Media Agrupación
6 3 0,880000 A
4 3 0,713333 A B
5 3 0,393333 A B
1 3 0,240000 A B
8 3 0,240000 A B
7 3 0,220000 A B
3 3 0,196667 A B
9 3 0,103333 B
2 3 0,090000 B
Nota: Las medias que no comparten una letra son significativamente diferentes.
En la Tabla 7 se realizó las comparaciones por parejas con el método de Tukey se observa que el mejor tratamiento para la micropropagación in vitro de Selenicereus megalanthus es el 6, por el motivo de que tiene mejor promedio.
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Tabla 8: Pruebas simultáneas de Tukey para diferencias de las medias
Nivel de confianza individual = 99,74%
Diferencia de Tratamiento
niveles
Diferencia de medias
EE de diferencia
IC simultáneo de 95%
Valor T
Valor p ajustado
2 – 1 -0,150 0,205 (-0,880; 0,580) -0,73 0,997
3 – 1 -0,043 0,205 (-0,774; 0,687) -0,21 1,000
4 – 1 0,473 0,205 (-0,257; 1,204) 2,31 0,393
5 – 1 0,153 0,205 (-0,577; 0,884) 0,75 0,997
6 – 1 0,640 0,205 (-0,090; 1,370) 3,12 0,111
7 – 1 -0,020 0,205 (-0,750; 0,710) -0,10 1,000
8 – 1 -0,000 0,205 (-0,730; 0,730) -0,00 1,000
9 – 1 -0,137 0,205 (-0,867; 0,594) -0,67 0,999
3 – 2 0,107 0,205 (-0,624; 0,837) 0,52 1,000
4 – 2 0,623 0,205 (-0,107; 1,354) 3,04 0,128
5 – 2 0,303 0,205 (-0,427; 1,034) 1,48 0,850
6 – 2 0,790 0,205 (0,060; 1,520) 3,85 0,029
7 – 2 0,130 0,205 (-0,600; 0,860) 0,63 0,999
8 – 2 0,150 0,205 (-0,580; 0,880) 0,73 0,997
9 – 2 0,013 0,205 (-0,717; 0,744) 0,06 1,000
4 – 3 0,517 0,205 (-0,214; 1,247) 2,52 0,293
5 – 3 0,197 0,205 (-0,534; 0,927) 0,96 0,985
6 – 3 0,683 0,205 (-0,047; 1,414) 3,33 0,076
7 – 3 0,023 0,205 (-0,707; 0,754) 0,11 1,000
8 – 3 0,043 0,205 (-0,687; 0,774) 0,21 1,000
9 – 3 -0,093 0,205 (-0,824; 0,637) -0,45 1,000
5 – 4 -0,320 0,205 (-1,050; 0,410) -1,56 0,813
6 – 4 0,167 0,205 (-0,564; 0,897) 0,81 0,995
7 – 4 -0,493 0,205 (-1,224; 0,237) -2,40 0,344
8 – 4 -0,473 0,205 (-1,204; 0,257) -2,31 0,393
9 – 4 -0,610 0,205 (-1,340; 0,120) -2,97 0,143
6 – 5 0,487 0,205 (-0,244; 1,217) 2,37 0,360
7 – 5 -0,173 0,205 (-0,904; 0,557) -0,84 0,993
8 – 5 -0,153 0,205 (-0,884; 0,577) -0,75 0,997
9 – 5 -0,290 0,205 (-1,020; 0,440) -1,41 0,877
7 – 6 -0,660 0,205 (-1,390; 0,070) -3,21 0,093
8 – 6 -0,640 0,205 (-1,370; 0,090) -3,12 0,111
9 – 6 -0,777 0,205 (-1,507; -0,046) -3,78 0,033
8 – 7 0,020 0,205 (-0,710; 0,750) 0,10 1,000
9 – 7 -0,117 0,205 (-0,847; 0,614) -0,57 1,000
9 – 8 -0,137 0,205 (-0,867; 0,594) -0,67 0,999
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En la Tabla 8 se realizó la prueba de comparaciones múltiples de Tukey para establecer entre cuales tratamientos existe diferencia significativa. Entonces, se observa que en el tratamiento 6-2 existe diferencia significativa al igual que en los tratamientos 9-6 para la micropropagación in vitro de Selenicereus megalanthus.
Figura 1
Pruebas simultáneas de Tukey para diferencias de las medias
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IV. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN
En la búsqueda de nuevos métodos en la propagación de selenicereus megalanthus se encuentra la propagación mediante estacas, semillas y la reproducción sexual (Caetano et al; 2014), sin embargo, estos métodos son pocos usados por los cuidados y tiempos que requiere para la obtención de fruto. Por ello la micropropagación in vitro es una técnica para la obtención masiva de plántulas. Por medio de este se realizó la investigación estableciendo 9 tratamientos con 24 unidades experimentales o yemas axilares para la producción de brotes o callos.
Se sabe que las plantas pueden sintetizar sus propias vitaminas, sin embargo;
mediante este método pierde esta capacidad por lo que requiere de adición de nutrientes y hormonas (Avalos, 2010); por el cual se le adiciono el medio MS, agar y sacarosa, también se le incorporo el ácido indolacético y al 6- bencilaminopurina en concentraciones de 0.0, 0.5 y 1.0. para estimular la división celular y el desarrollo de brotes y callos.
Se observó que las hormonas no obtuvieron efecto sinérgico en la producción de brotes, por los datos obtenidos se aplicó la escala de Santana (1982) para la clasificación de callos, obteniendo la formación en el grado 1(ligera formación de callos). Entre los datos obtenidos se observa que el grupo control o Tratamiento 1 solo tuvo un crecimiento del 0.24% (01 callo), mientras que, entre los tratamientos experimentales, el Tratamiento 6 alcanzó la misma escala de formación ligera, pero con la formación de 1.2% (06 callos).
En la Tabla 6 se observa que el factor tratamiento es significativo, por el valor p
= 0.014 menor a 0.05. También se comprueba el efecto sinérgico del ácido
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indolacético y del 6-bencilaminopurina en la tabla 7 explicando un 64.57% en la inducción de crecimiento in vitro de callos en la Selenicereus megalanthus.
Mediante el método de Tukey se observa que el mejor tratamiento para la micropropagación in vitro de Selenicereus megalanthus es el 6, por el motivo de que tiene mejor promedio. Para las comparaciones múltiples de Tukey para establecer entre cuales tratamientos existe diferencia significativa, por lo que en el tratamiento 6-2 existe diferencia significativa al igual que en los tratamientos 9-6 para la micropropagación in vitro de Selenicereus megalanthus.
V. CONCLUSIONES
Se determinó la concentración adecuada para la micropropagión in vitro, siendo este al 0.5 ppm del ácido indolacético y 1.00 ppm del 6- bencilaminopurina.
Se presento efecto sinérgico en la formación de callos, obteniendo un mayor porcentaje de acuerdo a la escala de Santana (1982) en el tratamiento 6 con un 1.2%.
Sin embargo, no existió sinergismo del ácido indolacético y del 6- bencilaminopurin en la formación de brotes, obteniendo un 0% en todos los tratamientos.
VI. RECOMENDACIONES
Se recomienda seguir con el estudio e investigación del efecto sinérgico variando las concentraciones de las hormonas y el tipo de explantes. Además, aplicar nuevas técnicas, procedimiento y recipiente para el sembrado de Selenicereus megalanthus.
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ANEXOS
Figura 2: Identificación de la planta de Selenicereus megalanthus (K.
Schum. Ex Vaupel) Moran. “pitahaya amarilla”, realizada por el especialista del Herbarium Truxillense de la Universidad Nacional de Trujillo.
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Anexo 2: Limpieza de explantes de Selenicereus megalanthus.
Anexo 3: Sembrado de explantes de Selenicereus megalanthus.
Anexo 4: Establecimiento de los 9 tratamiento de Selenicereus megalanthus.
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Anexo 5: Presencia de callos en el tratamiento 1
Anexo 6: Presencia de callos en el tratamiento 3
Anexo 7: Presencia de callos en el tratamiento 4
Anexo 8: Presencia de callos en el tratamiento 5
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Anexo 9: Presencia de callos en el tratamiento 6
Anexo 10: Presencia de callos en el tratamiento 7
Anexo 11: Presencia de callos en el tratamiento 8
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Anexo 12: Presencia de callos en el tratamiento 9
