Instituto de Medicina Tropica. al Daniel A Carrion UNMSM

(1)

César Cabez

Instituto Naci

Instituto de Medicina Tropica

p

zas Sánchez

ional de Salud

(2)



_Reservorio:



_{Modo de Transmisión:}



_{Tiempo de Incubación}



Periodo de Transmisib



Susceptibilidad:

El Hombre

:

Picadura de

:

Picadura de

mosquitos

infectantes

n:

3 a 14 días

bilidad:

Hasta 7 días

bilidad:

Hasta 7 días

Universal

(3)

Envoltur

Antígenos de

a

••

Familia

Familia:

: Flavivirus

Flavivirus

•• Cuatro

Cuatro serotipos

Cuatro

Cuatro serotipos

serotipos

1 (4

1 (4 genotipos

genotipos))

2 (6

2 (6 genotipos:Americano

genotipos:Americano,

,

A i 1 A i 2 A/

A i 1 A i 2 A/A

A

i

))

Asia1, Asia2, A/

Asia1, Asia2, A/A,selvatico

A,selvatico).

).

3 (4

3 (4 genotipos

genotipos))

4 (4

4 (4 genotipos

(( g

genotipos))

g

p

p ))

••

Envoltura

Envoltura lipídica

lipídica

•• ARN+

ARN+

N

••

Cadena

Cadena simple

simple

(4)

VIRUS DEN

C y RNA:

C y

1Kd

ucleocapside

pitopes

pitopes céls

céls T

T

pitopes

pitopes céls

céls T

T

45 -75 nm

NGUE

PrM :

Glicoproteína

Precursor de M

Protege a la proteína E

M: Induce Acs. Nt y protección

E:

Principal Proteína Estructura

(53

(5)

(6)

(7)

(8)

(9)

(10)

D

T l

dengue virus

cytolysis

dengue virus

DV-specific Ab

a

direct

entry

p

DV-infected

monocyte

Ab-enhanced

uptake

virus-Ab

complex

complement

activation

DV-specific

lymphocyte

cytokine

activation

plasma

leakage

y

production

g

vascular

endothelial

cell

(11)

Factores

epidemiológicos

Fa

ind

F

t

G

G K

i T

ti

f th R

Fuente: Guzman G, Kouri, Transactions of the Ro

(2008) 102, 522—523

Factores

virales

FDS

actores

ividuales

l S

i t

f T

i

l M di i

d H

i

(12)

Reinfestación d

1930s

₁₉₇₀

el Aedes aegypti

2008

(13)

u

el

Per

u

y

pti

en

e

s aeg

y

-2007

e

l

Aed

e

-1984

s

ión d

e

Disper

s

Fuente: INS - MINSA

(14)

20000 25000 15000 20000

7858

6426

10000

689 1965

8871530

2806

13561004

₄

0 5000 0 1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999

22403

20300

16000

5486

8889

9586

496 5486

3622

1640

4025

2954

99 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009

(15)

(16)

(17)

(18)

(19)

(20)

(21)

(22)

El ve

Aedes albopictus

ector

(23)

(24)

El mosquito se alimenta /

adquiere el virus

El mo

tr

Período de

incubación

t í

Viremia

extrínseca

Día

0

5

8

12 Enfermedad

Humano 1

H

Enfermedad

osquito se realimenta /

ransmite el virus

Período de

incubación

Viremia

intrínseca

as

16

20

24

28 Enfermedad

Humano 2

Enfermedad

(25)

Curso de la Infección del

Aislamiento viral

Picadura del

Aedes aegypti

Aislamiento viral

PCR

Detección de Ag

Fiebre

Aedes aegypti

Viremia

2

0 -1

-4

-3

-2

1

3 Dias de E

l Dengue

Neutralización

g

Inhibición de Hemaglutinación

Ig M, Ig G Elisa

Test Rápido

Shock / FDS

_{A i}

Shock / FDS

_{Anticuerpos contra}

el virus Dengue

4

3

5

6

7

8

9

10

(26)

(27)

Método de

Obtención de

Mues

Diagnóstico

muestras

Biológ

Anticuerpos: IgM, Sangre.- A pacientes con

tiempo de enfermedad Sue

p g

IgG tiempo de enfermedad

igual o mayor a 6 días.

Sue

Detección del

Sangre.- A pacientes con

un tiempo de enfermedad

igual o menor a 5 días Sue

Detección del antígeno Ag NS1, detección de ARN,

aislamiento viral y tipificación de los

igual o menor a 5 días.

(período virémico)

Tejido.- Realizar la

necropsia dentro las 24

h d f ll i i t T jid

serotipos. horas de fallecimiento

(Tejido bazo, hígado y/o riñón). Tejid Tejido.- Realizar la i d t d l 24 Histopatología e inmunohistoquímica

necropsia dentro de las 24 horas de fallecimiento (Tejido bazo, hígado y/o

riñón). Tejid .

stra

Cantidad

Conservaci

ón y

Tiempo de

resultado en el

gica

Cantidad

ón y

Transporte

Sistema

NETLAB

ro 2 ml Estéril. Enviar en cadena de 3 días ro 2 ml en cadena de frío 2 – 8 °C 3 días. ro 2 ml. Estéril. Enviar en cadena de 3 días para PCR y hasta 30 días para frío 2 – 8 °C

p aislamiento viral.

d ± 2 3

Estéril. Enviar

en preservante 3 días para PCR y

h t 30 dí

do ± 2 cm3 p

y en cadena de frío 2 – 8 °C

hasta 30 días para aislamiento viral. Enviar en f l l 10% do ± 2cm3 formol al 10% tamponado, en un volumen 10 veces del volumen de la 5 días. volumen de la muestra, a temperatura ambiente.

(28)

Aislam

Viral en Cult

D t

ió d

D t

ió d

Diagnó

Deng

Detección de

gM, IgG

ELISA

PR)

ELISA

PR)

Deng

ELISA y PR)

eroconversion

Detección

Detección de

(RT-PCR m

(

Clínica

miento

ivo Celular

óstico

gue

Detección

Antígeno NS1

gue

Antígeno NS1

(ELISA)

e ARN viral

multiplex).

p

)

Situación

Epidemiológica

(29)

(30)

RT

RT--PCR EN

PCR EN

RT PCR Dengue Multipl

RT

RT--PCR EN

PCR EN

Sensibilidad: 99%

Especificidad: 98%

Tipificación molecular del virus dengue 3 durante el brote epidémico Enrique Mamani Z; María García M; Victoria Gutiérrez P; César Cabe Rev. perú. med. exp. salud publica v.22 n.3 Lima jul./sep 2005

N DENGUE

lex

N DENGUE

Como citar este artículo

o de dengue clásico en Lima, Perú, 2005 ezas S; Eva Harris

(31)

PRUEBA ELISA A

• Detecta antígeno NS1

• Suero de 1-5 días

•Diagnostico temprano

g

p

de dengue.

Sensibilidad

93%

Sensibilidad 93%

Especificidad 100%

Sensibilidad(97.3%) en inf. aguda primar

(

)

g

p

Sensibilidad (70.0%) en inf. aguda segun

VPP 100%

VPN 97 3%

Evaluation of a commercial dengue NS1 antigen-captu

VPN 97.3%.

Evaluation of a commercial dengue NS1 antigen captu V. Kumarasamya_{, A.H. Abdul Wahab}a_{, S.K. Chua}b_{, Z. H}

Journal of Virological Methods

Volume 140, Issues 1-2, March 2007, Pages 75-79

ANTIGENO NS1

ria

ndaria

ure ELISA for laboratory diagnosis of acute dengue virus infection ure ELISA for laboratory diagnosis of acute dengue virus infection Hassana_{, Y.K. Chem}a_{, M. Mohamad}a_{and K.B. Chua}

(32)



_{Ratón lactante}



Células cultivo



Células cultivo

LLCMK2, C636, AP61



_{Mosquitos vivos}

(33)

IDENTIFICACION D

N

C C ON

••

Inmunofluores

••

Inmunofluores

Acs

Acs.. Monoclon

Monoclon

Acs

Acs.

. Monoclon

Monoclon

DEL VIRUS DENGUE

V

US

NGU

scencia

scencia Indirecta

Indirecta

scencia

scencia Indirecta

Indirecta

nales

nales específicos

específicos

nales

(34)

AISLAMIENTO

C6

C6--36/HT (

36/HT (

Días Tubo

C

(%)

ECP (%)

2

2 0/30 (

0/30 (

3 4/30 (1

4 11/30 (3

5

5 17/30 (5

17/30 (5

Aislamiento rápido del virus dengue 3 por el método d Victoria Gutiérrez P; Miryam Palomino R; Marcela Oliv Victoria Gutiérrez P; Miryam Palomino R; Marcela Oliv Rev. perú. med. exp. salud publica v.22 n.3 Lima jul./s

O DEL VIRUS

(Shell vial)

os Shell Vial

)

(%)

)

(%)

(0)

5/30 (16)

13)

16/30 (53)

37)

18/30 (60)

37)

18/30 (60)

57)

22/30 (73)

de shell vial en el brote de dengue en Lima, Peru 2005 vares S; Gissella Noroña C

vares S; Gissella Noroña C. ep 2005

(35)

ELISA CAPTURA

ELISA CAP

ELISA INDIR

A IgM o IgG DENGUE

PTURA IgM: Infección reciente.

PTURA IgG: Infección secundaria

(36)

IMPORTANCIA DE LA

ANTICUERPOS IgM EN P

DE 5 DIAS DE E

GRUPOS

N° DIAS

N°

MUESTR

A

1-2

44 A

1 2

44 B

3-4

38 C

5-6

23 D

7-8

13 E

9-10

7 F

11- A MAS

12 TOTAL

13 44% positividad en sueros de pacientes co

para considerar la necesidad de buscar ant

enfermedad, dentro de la vigilancia del de

DETERMINACION DE

PACIENTES CON MENOS

ENFERMEDAD

RAS

POSITIVOS

%

4

6 13.64%

4

6 13.64%

8

12 30.77%

3

12 47.83%

3

13 100%

7 100%

2

12 100%

7 on < 5 días, porcentaje significativo como

ticuerpos IgM aun en este periodo de la

engue.

(37)

PRU

D

TARI DE I

IMPLEMENTACION: 2008 -2010

C O

008 0 0

TRANSFERENCIA: 2010 lotes pilotos

SENSIBILIDAD % ESPECIFICIDAD% UEBA DIAGNOSTICA

TARIKI IGM

DENGUE INS

99.3

98 DENGUE – INS

+

PRUEBA DE REFERENCIA

+

--

1 100 101

Total

154 IKI IGM ENGUE INS

+

149 2

Total

150 102 255

(38)

PRUEBAS RAPIDAS Ig

Pruebas rápidas IgM

Sensibilidad

%

Especificidad

%

SD Bi li

98

98 SD Bioline

98

98 Duo Panbio

86

96 ACON

94

96 Sensibilidad Especificidad

Pruebas rápidas IgG

%

p

%

SD Bioline

98

98 Duo Panbio

98

96 ACON

96

96 Pruebas rápidas NS1

Sensibilidad

%

Especificidad

%

SD Bioline

84

96 SD Bioline

84

96 gM, IgG Y ANTIGENO.

(39)



_{La implementación de la}

_p

diagnóstico de laborator

‐‐

Vigilancia

Vigilancia rutinaria

rutinaria

Vi il

i

Vi il

i

ti

l

t bl

‐‐Vigilancia

Vigilancia centinela

centinela en

en establ

establ

‐‐Detección

Detección temprana

temprana de

de brote

brote

a nueva directiva de

rio.

l i i

t

l i i

t

lecimientos

es

(40)

OTRAS PRUEBAS A

•INHIBICION DE LA HEMAGLUTINACION

•ELISA DE INHIBICION: Titulación de antic

•ELISA PARA DETECTAR IgA: Diagnostic

•ELISA PARA DETECTAR IgE: Demostrar

Demostrar

PCR EN TIEMPO REAL

PCR EN TIEMPO REAL D t

D t

ió

ió tt

••PCR EN TIEMPO REAL:

PCR EN TIEMPO REAL: Detección

Detección temp

temp

nuevas

nuevas. (

. (cuantificación

cuantificación viral,

viral, tiempo

tiempo y

y míni

míni

••SECUENCIAMIENTO GENÉTICO.

SECUENCIAMIENTO GENÉTICO. Detec

Detec

••

••PRUEBAS RAPIDAS (

PRUEBAS RAPIDAS (IgM

IgM,

, IgG

IgG Y NS1 e

Y NS1 e II

aplicación

aplicación..

LTERNATIVAS

N: Titilación de anticuerpos totales.

cuerpos totales.

o temprano del de dengue.

y

y predecir

predecir severidad

severidad..

i

l

ió

i

l

ió

i

d

á

rana

rana circulación

circulación virus dengue en

virus dengue en áreas

áreas

imo

imo riesgo

riesgo de

de contaminacion

contaminacion))

cción

cción de

de genotipos

genotipos..

IgA

(41)

RED NACIONAL D

EN SALUD

RED NACIONAL D

EN SALUD

B Tumbes Cajamarca Piura Chiclayo La Libertad La Libertad Huaraz Lima** Huancayo Lima** Huanc

1 LAB. DE REFERENCIA NACIONAL

24 LAB. DE REFERENCIA REGIONAL

DE LABORATORIOS

D PUBLICA

DE LABORATORIOS

D PUBLICA

Bagua Iquitos Tarapoto Pucallpa Puerto Maldonado Cusco o cavelica Abancay Puno Ayacucho Arequipa Puno