N Antisera to Human α 1 -Microglobulin

OWLA G11 E0540 (421) H 1 Edition June 2001

N Antisera to Human

α

₁

-Microglobulin

Intended Use

In vitro diagnostic reagents for the quantitative determination of α1-microglobulin in

hu-man urine using the BN* Systems.

Summary and Explanation

The clinical relevance of the α1-microglobulin assay relates to the identification of tubular

proteinurias (1-4). α1-microglobulin, also referred to as protein HC (3), is a

low-molecular-weight glycoprotein (molecular low-molecular-weight approximately 33,000), the free proportion of which is quantitatively filtered through the glomeruli. As with other plasma proteins which are filtered through the glomeruli, reabsorption and catabolism take place in the proximal tubulus. Detection of elevated urinary concentrations of low-molecular-weight proteins such as α1-microglobulin can be indicative of tubular damage as may occur in the context

of nephritides, advanced diabetic nephropathy, after exposure to heavy metals or after administration of nephrotoxic medicaments. Detection of elevated urinary concentrations of α1-microglobulin in patients with urinary tract infections is indicative of renal involvement.

Principle of the Method

In an immunochemical reaction, the proteins contained in the human urine sample form immune complexes with specific antibodies. These complexes scatter a beam of light passed through the sample. The intensity of the scattered light is proportional to the con-centration of the relevant protein in the sample. The result is evaluated by comparison with a standard of known concentration.

Reagents

N α1-Microglobulin Kit, Code No. OWLA

N Antiserum to Human α1-Microglobulin and

N Supplementary Reagent A 1 vial each, containing 2 mL Composition

The N Antiserum is a liquid animal serum and is produced by immunization of rabbits with highly purified human α1-microglobulin. Labile components are removed from the antiserum

by a special procedure. Microbial contamination is essentially excluded by filtration and addition of sodium azide as a preservative (< 1 g/L). After solid phase immunoadsorption, the purified, specific antiserum is specially tested and adjusted for optimal suitability for use on the BN* Systems. The antibody titer (T) is determined by radial immunodiffusion and is printed on the vial label. The titer indicates the quantity of antigen in mg which will be precipitated in an agarose gel by 1 mL of the corresponding antiserum.

N Supplementary Reagent A consists of detergents in buffered solution. Preservatives: 5-chloro-2-methyl-4-isothiazole-3-one (approximately 6 mg/L)

2-methyl-4-isothiazole-3-one (approximately 2 mg/L) Warnings and Precautions

1. For in vitro diagnostic use.

2. Reagents containing sodium azide must be handled with due caution:

Do not ingest or allow to contact skin or mucous membranes! Sodium azide can form explosive azides when contacting heavy metals such as copper or lead.

Preparation of Reagents

The N Antiserum and N Supplementary Reagent A are ready-for-use as supplied and require no additional preparation.

Storage and Stability Shelf life at +2 to +8 °C:

see expiration date given on the label; Stability once opened:

four weeks if stored at +2 to +8 °C securely capped immediately after each use and contamination (e.g., by microorganisms) is precluded;

During storage, N Antisera can develop precipitates or turbidity which are not caused by microbial contamination and which do not affect their activity. In such cases, the antise-rum should be filtered prior to use. Disposable filters with a pore size of 0.45 µm are suitable for this purpose.

Do not freeze. On-board stability:

five days at 8 hours each or a comparable period of time (maximum 40 hours); BN* II System: on-board stability may be extended with the use of BN* II Evaporation Stoppers (Code No. OVLE) as given in the Instruction Manual;

BN ProSpec® _{System: on-board stability as given in the Instruction Manual.}

Materials required but not provided BN* System

N Protein Standard UY (human), Code No. OQLV N/T Protein Control LC (human), Code No. OQLW N Reaction Buffer, Code No. OUMS

N Diluent, Code No. OUMT

BN* II Evaporation Stoppers (optional), Code No. OVLE

Other materials and supplies as described in the respective BN* System Instruction Manual.

Specimens

Suitable samples are human urine, as fresh as possible (stored no more than 8 days at +2 to +8 °C). Random and timed urine collections are suitable specimens for the assay. Urine samples must not be frozen. Each urine sample must be centrifuged prior to testing (10 minutes at approximately 15 000 x g).

Procedure

1. Consult your BN* System Instruction Manual for details regarding operation of the instrument.

2. The reagents must not be used beyond the expiry date.

3. Allow reagents and samples to equilibrate to room temperature (+15 to +25 °C) before use on the BN* A/BN* 100 System. This equilibration step is not required prior to testing on the BN* II or BN ProSpec® _System.

Assay Protocols for BN* Systems

The assay protocols are given in the Instruction Manual and software of the instrument. All steps are performed automatically by the system.

Establishment of the Reference Curve

Reference curves are constructed by multi-point calibration. Serial dilutions of N Protein Standard UY are automatically prepared by the instrument using N Diluent.

The reference curves can be used for as long as the accuracy controls, e.g. N/T Protein Control LC, are reproduced within their respective confidence intervals. If a different lot of antiserum is used, a new reference curve must be recorded.

Assay of Specimens

Samples are assayed in undiluted form. If the readings obtained are outside the measuring range, the assay can be repeated using a higher dilution of the sample. Refer to BN* Instruction’s Manual for information on repeat measurements using other dilutions. Internal Quality Control

Assay N/T Protein Control LC after each establishment of a reference curve, the first opening of an antiserum vial as well as with each run of samples. The control is assayed and evaluated as for patient samples. The assigned value and confidence interval are listed in the Table of Assigned Values for the respective control.

Results

The results are evaluated automatically by means of a logit-log function.

Limitations of the Procedure

Turbidity and particles in the sample may interfere with the determination. Therefore, all urine samples must be centrifuged prior to testing. At pH values below 6 a measurable fall in the α1-microglobulin concentration may occur in some cases if the urine samples are

stored for several days (5).

Due to technical manufacturing reasons and/or aged samples, the results obtained for control samples and interlaboratory survey samples may differ depending on the assay method used. It may therefore be necessary to assess these results in relation to method-specific target values.

Expected Values

The concentration of α1-microglobulin in second morning urine specimen of healthy

adults is below 12 mg/L (6). The reference interval was established based on 115 urine specimens. Different reference intervals apply for other types of urine specimen (first morning specimen, 24-hour specimen).

Nevertheless, each laboratory should determine its own reference intervals since values may vary depending on the individual population studied.

Specific Performance Characteristics

The sensitivity of the assay is established by the lower limit of the reference curve and depends therefore upon the concentration of the protein in the N Protein Standard UY. A “high dose hook-effect” does not occur in α1-microglobulin concentrations of up to 600

mg/L. Typical measuring ranges are given in the BN* System’s Instruction Manual. Specificity

The N Antiserum is specific for the respective protein. Precision

The following coefficients of variation (CV) were obtained with the N Antiserum to Human α1-Microglobulin on the BN* System (6):

Intra-Assay Inter-Assay

(n = 21) (n = 10)

Protein Mean value CV Mean value CV

[mg/L] [%] [mg/L] [%]

α1-Microglobulin 7.7 5.2 6.8 13.2

41.8 2.9 42.0 7.4

Method Comparison

Fiftytwo (52) urine samples were assayed with the N Antiserum to Human α1

-Microglobu-lin on the BN* System (y) and radial immunodiffusion (x) (LC Partigen**). Correlation of the results yielded the following data:

Protein Linear Regression Coefficient of

Correlation α1-Microglobulin y (BN*) = 1.08 x (RID) - 2.36 mg/L 0.996

Note

The values cited for specific performance characteristics of the test represent typical results and are not to be regarded as specifications for the N Antiserum to Human α1-Microglobulin.

Bibliography

1. Yu H, Yanagisawa Y, Forbes MA, et al. Alpha-1-microglobulin: an indicator protein for renal tubular function. J Clin Pathol 1983; 36: 253-9.

2. Boege F, Liebermann F, Luther A, et al. Quantifizierung und Differenzierung der Pro-teinurie durch automatisierte nephelometrische Messung von alpha1-Mikroglobulin, Albumin und IgG: Vergleich mit SDS-PAGE-Analyse. Lab med 1990; 14: 243-9. 3. Weber MH, Verwiebe R. Alpha 1-microglobulin (protein HC): features of a promising

indi-cator of proximal tubular dysfunction. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1992; 30: 683-91. 4. Hofmann W, Rossmüller B, Guder WG, Edel HH. A new strategy for characterizing

proteinuria and haematuria from a single pattern of defined proteins in urine. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1992; 30: 707-12.

5. Donaldson MD, Chambers RE, Woolridge MW, et al. Stability of alpha 1-microglobulin, beta 2-microglobulin and retinol binding protein in urine. Clin Chim Acta 1989; 179: 73-7. 6. Hofmann W, Guder WG. Präanalytische und analytische Faktoren bei der Bestim-mung von IgG, Albumin, α1-Mikroglobulin und Retinol-bindendem Protein im Urin mit

dem Behring Nephelometer System (BNS). Lab med 1989; 13: 470-8.

BN ProSpec is a registered trademark of Dade Behring Marburg GmbH in the USA, Ger-many and other countries.

* BN is a trademark of Dade Behring Marburg GmbH in the USA.

** Partigen is a registered trademark of Dade Behring Marburg GmbH in Germany and other countries.

Dade Behring Marburg GmbH Emil-von-Behring-Str. 76 D-35041 Marburg

USA Distributor: Dade Behring Inc. Newark, DE 19714 U.S.A.

OWLA G11 E0540 (421) H 2 Ausgabe Juni 2001

N Antisera gegen

Human-α

1

-Mikroglobulin

Anwendungsbereich

In-vitro-Diagnosticum zur quantitativen Bestimmung von α1-Mikroglobulin im Urin mit den

BN* Systemen.

Diagnostische Bedeutung

Die klinische Relevanz der α1-Mikroglobulin-Bestimmung liegt in der Identifikation

tubulä-rer Proteinurien (1 - 4). α1-Mikroglobulin, auch als Protein HC bezeichnet (3), ist ein

nie-dermolekulares Glykoprotein (Molekulargewicht ca. 33 000), dessen im Blut frei vorlie-gender Anteil glomerulär quantitativ filtriert wird. Reabsorption und Katabolismus erfol-gen analog zu anderen glomerulär filtrierten Plasmaproteinen im proximalen Tubulus. Durch den Nachweis erhöhter Konzentrationen von niedermolekularen Proteinen im Urin, wie z. B. α1-Mikroglobulin, kann auf tubuläre Schädigungen geschlossen werden,

wie sie im Rahmen von Nephritiden, fortgeschrittener diabetischer Nephropathie, nach Schwermetallexposition oder nach Gabe nephrotoxischer Medikamente auftreten kön-nen. Der Nachweis erhöhter Konzentrationen von α1-Mikroglobulin im Urin bei

Harn-wegsinfektionen weist auf eine Nierenbeteiligung hin.

Prinzip der Methode

Die im menschlichen Urin enthaltenen Proteine bilden in einer immunchemischen Reak-tion mit spezifischen Antikörpern Immunkomplexe, an denen eingestrahltes Licht ge-streut wird. Die Intensität des Streulichts ist abhängig von der Konzentration des jeweili-gen Proteins in der Probe. Die Auswertung erfolgt durch Vergleich mit einem Standard bekannter Konzentration.

Reagenzien

Inhalt der Handelspackung N α1-Mikroglobulin Kit, Bestell-Nr. OWLA

N Antiserum gegen Human-α1-Mikroglobulin und

N Zusatzreagenz A je 1 Flasche mit 2 ml Zusammensetzung

Das N Antiserum ist ein flüssiges, tierisches Serum und wird durch Immunisierung von Ka-ninchen mit hochgereinigtem humanem α1-Mikroglobulin hergestellt. Durch ein besonderes

Stabilisierungsverfahren werden labile Bestandteile aus dem Antiserum entfernt. Mikrobielle Verunreinigungen werden durch Filtration und den Zusatz von Natriumazid (< 1 g/l) als Kon-servierungsmittel weitgehend ausgeschlossen. Das mittels Festphasenimmunadsorption gereinigte, spezifische Antiserum wird nach besonderer Prüfung so eingestellt, daß eine optimale Eignung für die Verwendung in den BN* Systemen gewährleistet ist. Der Antikör-per-Titer (T) wird in der radialen Immundiffusion ermittelt und ist auf dem Flaschenetikett ausgedruckt. Er gibt an, wieviel mg des Antigens von 1 ml des Antiserums in einem Agarose-gel präzipitiert werden. N Zusatzreagenz A besteht aus Detergenzien in gepufferter Lösung. Konservierungsmittel: 5-Chlor-2-methyl-4-isothiazolin-3-on (ca. 6 mg/l)

2-Methyl-4-isothiazolin-3-on (ca. 2 mg/l) Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen

1. Nur zur in-vitro-diagnostischen Anwendung.

2. Beim Umgang mit Natriumazid-haltigen In-vitro-Diagnostica ist zu beachten: Verschlucken und Kontakt mit Haut oder Schleimhäuten vermeiden. Natriumazid kann mit Schwermetallen, wie Kupfer oder Blei, explosive Azide bilden.

Vorbereitung der Reagenzien

Das N Antiserum und das N Zusatzreagenz A sind gebrauchsfertig und können ohne weitere Vorbehandlung eingesetzt werden.

Haltbarkeit und Lagerungsbedingungen Lagerungsdauer bei +2 bis +8 °C:

die Haltbarkeit ist auf dem Etikett angegeben; Stabilität nach Öffnen:

4 Wochen, sofern unmittelbar nach Gebrauch wieder dicht verschlossen bei +2 bis +8 °C gelagert und eine Kontamination (z. B. durch Mikroorganismen) vermieden wird; N Antisera können bei Lagerung Ausflockungen oder Trübungen zeigen, die nicht durch mikrobielle Kontamination verursacht sind und die die Aktivität in keiner Weise beein-trächtigen. In solchen Fällen sollten die Antisera vor Gebrauch filtriert werden. Dazu eig-nen sich Einwegfilter mit einem Porendurchmesser von 0,45 µm.

Die Reagenzien dürfen nicht eingefroren werden. Stabilität auf den BN* Systemen:

5 Tage mit jeweils 8 Stunden, oder ein vergleichbarer Zeitraum (maximal 40 Stunden); BN* II System: die erweiterte Stabilität der Reagenzien bei Verwendung von BN* II Eva-poration Stoppers (Bestell-Nr. OVLE) ist der Bedienungsanleitung zu entnehmen; BN ProSpec® _{System: die Stabilität der Reagenzien ist der Bedienungsanleitung zu}

ent-nehmen.

Zusätzlich benötigte Materialien BN* System

N Protein-Standard UY (human), Bestell-Nr. OQLV N/T Protein-Kontrolle LC, Bestell-Nr. OQLW N Reaktionspuffer, Bestell-Nr. OUMS N Diluens, Bestell-Nr. OUMT

BN* II Evaporation Stoppers (wahlweise), Bestell-Nr. OVLE

Verbrauchsmaterial und Ausrüstung wie in den Bedienungsanleitungen der BN* Systeme beschrieben.

Untersuchungsmaterial

Zur Messung werden möglichst frische (max. 8 Tage bei +2 bis +8 °C aufbewahrte) Urin-proben eingesetzt. Für die Bestimmung eignen sich Spontan- und Sammelurine. Urinpro-ben dürfen nicht tiefgefroren werden. Jede Urinprobe ist vor der Analyse zu zentrifugie-ren (10 min bei ca. 15 000 x g).

Testdurchführung

1. Einzelheiten zur Bedienung der BN* Systeme sind der entsprechenden Bedienungs-anleitung zu entnehmen.

2. Die Reagenzien dürfen nach dem angegebenen Verfalldatum nicht mehr verwendet werden.

3. Reagenzien und Proben sollen vor der Messung am BN* A/BN*100 System Raumtempe-ratur (+15 bis +25 °C) erreicht haben. Am BN* II/BN ProSpec® _{System können auch bei +2}

bis +8 °C gelagerte Reagenzien und Proben direkt zur Bestimmung eingesetzt werden.

Assay-Protokolle an den BN* Systemen

Die Assay-Protokolle sind in der Bedienungsanleitung sowie der Software des jeweiligen Gerätes enthalten. Alle Schritte werden automatisch vom System durchgeführt. Erstellung der Referenzkurve

Referenzkurven werden über eine Mehrpunktkalibrierung aufgenommen. Für die Erstel-lung werden automatisch Verdünnungsreihen des N Protein-Standard UY mit N Diluens hergestellt.

Die Referenzkurven können so lange verwendet werden, wie Richtigkeitskontrollen, z. B. N/T Protein-Kontrolle LC, innerhalb der jeweiligen Vertrauensbereiche wiedergefunden werden. Bei Verwendung einer anderen Antiserum-Charge muß eine neue Referenzkur-ve aufgenommen werden.

Messung der Patientenproben

Proben werden unverdünnt gemessen. Bei Meßwerten, die außerhalb des Meßbereichs liegen, kann die Messung aus einer höheren Probenverdünnung wiederholt werden. Wiederholungsmessungen aus weiteren Probenverdünnungen sind in den Bedienungs-anleitungen der BN* Systeme beschrieben.

Interne Qualitätskontrolle

Die N/T Protein-Kontrolle LC sollten nach jeder Erstellung einer Referenzkurve, nach erstmaligem Öffnen einer Antiserumabfüllung sowie bei jeder Serie von Proben einge-setzt werden. Die Kontrollen werden im Ansatz und bei der Auswertung wie Patientenpro-be Patientenpro-behandelt. Die Sollwerte und VertrauensPatientenpro-bereiche sind der TaPatientenpro-belle der Sollwerte der entsprechenden Kontrolle zu entnehmen.

Berechnung der Analysenergebnisse

Die Auswertung erfolgt automatisch mittels einer Logit-Log-Funktion.

Einschränkungen der Testdurchführung

Trübungen und Partikel in den Proben können die Bestimmung stören. Deshalb sollten alle Urinproben vor der Bestimmung zentrifugiert werden.

Bei pH-Werten unter 6 kann es bei mehrtägiger Aufbewahrung der Urinproben in Einzel-fällen zu einer Abnahme der meßbaren α1-Mikroglobulin-Konzentration kommen (5).

Für Kontroll- und Ringversuchsproben können aufgrund der technischen Herstellung bzw. gealterter Proben unterschiedliche Ergebnisse in Abhängigkeit von der verwende-ten Bestimmungsmethode resultieren. Es kann daher notwendig sein, die Bewertung dieser Ergebnisse an methodenspezifischen Zielwerten vorzunehmen.

Erwartete Werte

Die Konzentration von α1-Mikroglobulin im zweiten Morgenurin gesunder Erwachsener

liegt unter 12 mg/l (6). Die Ermittlung der Referenzbereichs-Obergrenze erfolgte an 115 Urinproben. Für andere Arten von Urinproben (erster Morgenurin, 24-Std.-Sammelurin) gelten eigene Referenzbereiche.

Darüber hinaus sollte jedes Labor seine eigenen Referenzbereiche ermitteln, da diese vielen Einflußgrößen unterliegen, die für jedes untersuchte Kollektiv verschieden sein können.

Leistungsmerkmale der Teste

Die Empfindlichkeit der Bestimmung wird durch die untere Grenze der Referenzkurve festgelegt und hängt damit von der Konzentration des Proteins im N Protein-Standard UY ab. Ein ‚High-Dose-Hook-Effekt‘ tritt bis zu α1-Mikroglobulin-Konzentrationen von 600

mg/l nicht auf. Typische Meßbereiche sind in den Bedienungsanleitungen der BN* Syste-me angegeben.

Spezifität

Das Antiserum ist spezifisch für das jeweilige Protein. Präzision

Mit dem N Antiserum gegen Human-α1-Mikroglobulin wurden am BN* System folgende

Variationskoeffizienten (VK) ermittelt (6):

Intra-Assay Inter-Assay

(n = 21) (n = 10)

Protein Mittelwert VK Mittelwert VK

[mg/l] [%] [mg/l] [%]

α1-Mikroglobulin 7,7 5,2 6,8 13,2

41,8 2,9 42,0 7,4

Methodenvergleich

Es wurden 52 Urinproben mit dem N Antiserum gegen Human-α1-Mikroglobulin am BN*

System (y) gemessen und vergleichend dazu mit der radialen Immundiffusion (x) (LC-Partigen**) bestimmt. Die Korrelation der Ergebnisse lieferte folgende Daten:

Protein lineare Regression

Korrelations-koeffizient α1-Mikroglobulin y (BN*) = 1,08 x (RID) - 2,36 mg/l 0,996

Anmerkung

Die angegebenen Werte für die Leistungsmerkmale der Teste stellen typische Ergebnis-se dar und sind nicht als Spezifikation für das N AntiErgebnis-serum gegen Human-α1

-Mikroglobu-lin anzusehen.

Literatur

BN ProSpec ist ein eingetragenes Warenzeichen der Dade Behring Marburg GmbH in den USA, Deutschland und anderen Ländern.

* BN ist ein Warenzeichen der Dade Behring Marburg GmbH in den USA.

** Partigen ist ein eingetragenes Warenzeichen der Dade Behring Marburg GmbH in Deutschland und anderen Ländern.

Dade Behring Marburg GmbH Emil-von-Behring-Str. 76 D-35041 Marburg

OWLA G11 E0540 (421) H 3

N Antisérums anti

-α

1

-Microglobuline humains

Domaine d'utilisation

Réactif pour le dosage de l’α1-microglobuline dans l’urine à l'aide des systèmes BN*.

Intérêt diagnostique

L’importance clinique du dosage de l’α1-microglobuline réside dans l’identification des

protéinuries tubulaires (1 - 4). L’α1-microglobuline, appelée aussi protéine HC (3), est une

glycoprotéine de faible poids moléculaire (env. 33 000), dont la fraction qui se trouve à l’état libre dans le sang est filtrée quantitativement par les glomérules. Sa réabsorption et son catabolisme sont analogues à ceux des autres protéines plasmatiques dont la filtra-tion glomérulaire se situe au niveau du tube proximal. La mise en évidence de concentra-tions augmentées de protéines de faible poids moléculaire dans l’urine, comme par ex. l’α1-microglobuline, permet de conclure à des lésions tubulaires, telles celles rencontrées

dans le cadre de néphrites, dans les néphropathies diabétiques avancées, après une exposition à un métal lourd, ou encore après administration de médicaments néphroto-xiques. La mise en évidence d’une augmentation de la concentration urinaire d’α1

-micro-globuline en cas d’infection des voies urinaires indique une participation rénale.

Principe de la méthode

Les protéines contenues dans l’urine humaine forment, dans le cadre d’une réaction immunochimique avec des anticorps spécifiques, des immuncomplexes qui dispersent la lumière projetée. L’intensité de la lumière dispersée est fonction de la concentration dans l’échantillon de la protéine recherchée. L’exploitation se fait par rapport à un standard de concentration connue.

Réactifs

N α1-Microglobuline kit, code OWLA

N Antisérum anti-α1-Microglobuline humaine et

N Réactif complémentaire A 1 flacon de 2 ml de chaque réactif Composition

Le N Antisérum est un sérum liquide, d’origine animale, obtenu par immunisation de lapins avec de l’α1 -microglobuline humaine hautement purifiée. Un procédé spécial de

stabilisation permet d’éliminer les éléments labiles de l’antisérum. Une filtration et l’addition d’azide de sodium (< 1 g/l) comme agent de conservation excluent pratique-ment toute contamination microbienne. L’antisérum spécifique est purifié par immunoad-sorption en phase solide, puis contrôlé et préparé de façon à garantir une utilisation optimale sur les systèmes BN*.

Le titre en anticorps (T) est déterminé par immunodiffusion radiale et indiqué sur l’étiquette du flacon. Il indique combien de mg d’antigène sont précipités en gel d’agarose par 1 ml d’antisérum. Le N Réactif complémentaire A est composé de détergents en solution tampon.

Le N Réactif complémentaire A est composé de détergents en solution tampon. Agents de conservation : 5-chloro-2-méthyl-4-isothiazol-3-one (env. 6 mg/l)

2-méthyl-4-isothiazol-3-one (env. 2 mg/l) Avertissements et mesures de précaution

1. A n'utiliser que pour un usage in vitro.

2. Les réactifs contenant de l'azide de sodium doivent être manipulés avec précaution : Ne pas avaler et éviter tout contact avec la peau et les muqueuses ! L'azide de sodium peut devenir explosif au contact de métaux lourds comme le cuivre ou le plomb. Préparation des réactifs

Le N Antisérum et le N Réactif complémentaire A sont prêts à l'emploi et peuvent être utilisés sans aucun prétraitement.

Stabilités et conditions de conservation Conservation à +2/+8°C :

La date de péremption est indiquée sur l’étiquette. Stabilité après ouverture :

4 semaines, à condition de bien refermer les flacons immédiatement après emploi, de les replacer à +2/+8°C, et d’éviter toute contamination (par ex. microbienne). Les N Antisé-rums peuvent devenir troubles ou présenter une floculation, phénomènes qui n’indiquent pas une contamination microbienne et qui n’influencent en aucune façon leur activité. Dans ces cas-là, les filtrer à l’aide d’un filtre à usage unique à pores de 0,45 µm de diamètre.

Ne pas les congeler. Stabilité sur les systèmes BN* :

5 jours à raison de 8 heures par jour, ou durée équivalente (maximum 40 heures). BN* II : l’utilisation de bouchons anti-évaporation (code OVLE) permet d’allonger la stabi-lité des réactifs ; se reporter au manuel d’utilisation du système.

BN ProSpec®_{: pour la stabilité des réactifs, se reporter au manuel d’utilisation du}

systè-me.

Autres réactifs et matériel nécessaires Système BN*

N Standard Protéines UY (humain), code OQLV N/T Contrôle Protéines LC (humain), code OQLW N Tampon de réaction, code OUMS

N Diluant, code OUMT

Bouchons anti-évaporation pour BN* II, code OVLE (utilisation facultative)

Consommables et matériels complémentaires nécessaires selon les manuels d’utilisation des systèmes BN*.

Echantillons à tester

Utiliser de préférence des échantillons urinaires frais (conservés 8 jours maximum à +2/ +8°C). Il peut s’agir d’urine spontanée ou d’urines des 24 heures. Ne pas congeler les échan-tillons urinaires. Centrifuger chaque échantillon avant leur analyse (10 min à env. 15 000 g).

Réalisation du test

Remarques :

1. Pour plus de détails concernant l’utilisation des systèmes BN*, se reporter au manuel d’utilisation de l’appareil.

2. Ne pas utiliser les réactifs au-delà de leur date de péremption.

3. Porter réactifs et échantillons à la température ambiante (+15/+25°C) avant leur ana-lyse sur le système BN* A ou BN* 100. Sur le système BN* II ou BN ProSpec®_{, ils}

peuvent être testés directement à +2/+8°C.

Protocoles du test sur les systèmes BN* :

Les protocoles sont indiqués dans le manuel d’utilisation et la dernière version du logiciel de chaque appareil. Toutes les étapes sont effectuées automatiquement par le système. Etablissement de la courbe d’étalonnage :

La courbe d'étalonnage est effectuée selon un étalonnage en plusieurs points. La série de dilutions du N Standard protéines UY est établie automatiquement avec le N Diluant. Les courbes d'étalonnage peuvent être utilisées tant que les contrôles d'exactitude, par ex. le N/T Contrôle Protéines LC, a été trouvés à l'intérieur de leur domaine de confiance. Refaire une nouvelle courbe d’étalonnage à chaque changement de lot de l’antisérum. Mesure des échantillons de patients

Tester les échantillons non dilués. Si des valeurs sortent du domaine de mesure, les échantillons peuvent être retestés dilués. Le protocole pour retester les échantillons dilués est décrit dans les manuels d’utilisation des systèmes BN*.

Contrôle de qualité interne

Tester le N/T Contrôle Protéines LC à chaque changement de courbe d’étalonnage ou de flacon d’antisérum, ainsi qu’à chaque nouvelle série d’échantillons. Traiter le contrôle comme un échantillon de patient, aussi bien dans le test que pour l’exploitation des résul-tats. La valeur théorique ainsi que le domaine de confiance du contrôle sont indiqués dans le tableau des valeurs théoriques.

Calcul des résultats d'analyse

L'exploitation des résultats est effectuée automatiquement à l'aide d'une fonction log-logit.

Limites du test

Les échantillons urinaires troubles ou contenant des particules peuvent perturber le test. Dans ce cas, les centrifuger avant le test.

Dans certains cas où les échantillons urinaires ont un pH inférieur à 6 et qu’ils sont con-servés plusieurs jours, on peut observer une diminution de la concentration d’α1

-micro-globuline (5).

Les échantillons testés dans le cadre d'un contrôle national ou d'une étude multicentrique peuvent donner des résultats différents selon la méthode de dosage utilisée. Il peut donc être nécessaire de procéder à l'exploitation des résultats selon les valeurs-cibles spéci-fiques à la méthode utilisée.

Valeurs normales

La concentration en α1-microglobuline de la deuxième urine du matin chez les adultes

sains est inférieure à 12 mg/l (6), valeur obtenue sur 115 échantillons urinaires. Pour les autres types d’échantillons urinaires (première urine du matin, urines des 24 heures), il n’existe pas de valeurs de référence.

D’une façon générale, il est recommandé à chaque laboratoire d’établir ses propres va-leurs de référence, dans la mesure où les domaines de référence sont soumis à de nom-breux facteurs d’influence qui peuvent varier selon le collectif étudié.

Caractéristiques des tests

La sensibilité du dosage est déterminée par la limite inférieure de la courbe d’étalonnage, et dépend donc de la concentration de la protéine dans le N Standard Protéines UY. Il n’y a pas de ”high-dose-hook-effect” jusqu’à une concentration d’α1 -microglobuline de 600

mg/l. Des domaines de mesure types sur les systèmes BN* sont indiqués dans le manuel d’utilisation de chaque appareil.

Spécificité

Les N Antisérums sont spécifiques de la protéine indiquée. Précision

Le N Antisérum anti-α1-Microglobuline a donné les coefficients de variation (CV) suivants

sur le système BN* (6) :

intra-essai inter-essais

(n = 21) n = 10)

protéine valeur moyenne CV valeur moyenne CV

[mg/l] [%] [mg/l] [%]

α1-microglobuline 7,7 5,2 6,8 13,2

41,8 2,9 42,0 7,4

Comparaison avec une autre méthode

52 échantillons urinaires ont été testés en parallèle, d’une part sur le système BN* avec le N Antisérum anti- α1-Microglobuline humaine (y), et d’autre part selon une méthode

d’immunodiffusion radiale (LC-Partigen**) (x). La corrélation des résultats a donné les valeurs suivantes :

protéine régression linéaire coefficient de

corrélation α1-microglobuline y (BN*) = 1,08 x (IDR) - 2,36 mg/l 0,996

Remarque :

Les valeurs indiquées comme caractéristiques du test représentent des résultats types, et ne doivent pas être considérées comme des spécifications du N Antisérum anti-α1

-Microglobuline humaine.

Littérature

BN ProSpec est une marque déposée de Dade Behring Marburg GmbH aux USA, en Allemagne et dans d’autres pays.

* BN est une marque déposée de Dade Behring Marburg GmbH aux Etats-Unis. ** Partigen est une marque déposée de Dade Behring Marburg GmbH en Allemagne et

dans d’autres pays.

Dade Behring Marburg GmbH Emil-von-Behring-Str. 76 D-35041 Marburg

OWLA G11 E0540 (421) H 4

N Antisieri anti

α

1

-microglobulina umani

Settori d'impiego

Reagenti per la determinazione quantitativa dell'α1-microglobulina nelle urine con i

si-stemi BN*.

Significato diagnostico

La determinazione dell'α1-microglobulina assume un importante significato clinico nella

identificazione delle proteinurie tubulari.(1-4) L'α

1-microglobulina, nota anche come

protei-na HC(3)_{, è una glicoproteina a basso peso molecolare (PM ca. 33.000) la cui frazione}

presente in forma libera nel sangue viene filtrata quantitativamente a livello glomerulare. Il riassorbimento ed il catabolismo viene effettuato, come per le altre plasmaproteine filtrate a livello glomerulare, dai tubuli prossimali. L'escrezione di proteine a basso peso molecolare nelle urine, come ad es. l'α1-microglobulina, è indice di danno tubulare, che si

può riscontrare nella nefrite, nella nefropatia diabetica avanzata, dopo l'esposizione a metalli pesanti o dopo la somministrazione di farmaci nefrotossici. Nel caso di infezione delle vie urinarie la determinazione di concentrazioni elevate di α1-microglobulina nelle

urine indica l'interessamento renale.

Principio del metodo

Le proteine nel campione di urina umana formano in una reazione immunochimica con gli anticorpi specifici, degli immunocomplessi che provocano la dispersione della luce inci-dente. L’intensità della luce dispersa dipende dalla concentrazione della corrispondente proteina nel campione. La valutazione quantitativa avviene per confronto con uno stan-dard a concentrazione nota.

Reagenti

Contenuto della confezione N α1-microglobulina kit, codice WLA

N antisiero anti-α1-microglobulina umana e

N reagente supplementare A 1 flacone ciascuno da 2 mL Composizione

Gli N antisieri sono sieri liquidi di origine animale, prodotti per immunizzazione di conigli con α1-microglobulina umana altamente purificata. Le componenti labili vengono rimosse

dall’antisiero mediante un particolare procedimento. Le contaminazioni microbiche ven-gono escluse essenzialmente mediante filtrazione ed aggiunta di sodio azide (< 1 g/L) come conservante.

L’antisiero specifico, purificato mediante immunoadsorbimento su fase solida, dopo par-ticolari verifiche, viene trattato in modo che sia assicurato un ottimale impiego con i si-stemi BN*. Il titolo anticorpale (T), determinato con il metodo della immunodiffusione ra-diale, è indicato sull’etichetta del flacone ed indica quanti mg di antigene vengono preci-pitati, in gel di agarosio, da 1 mL di antisiero.

L'N reagente supplementare A è costituito da detergenti in soluzione tamponata. Conservante: 5-cloro-2 metil-4-isotiazol-3-one (ca. 6 mg/L)

2-metil-4-isotiazol-3-one (ca. 2 mg/L) Avvertenze e precauzioni

1. Solo per uso diagnostico in-vitro.

2. Quando si impiegano diagnostici in-vitro contenenti sodio azide osservare le seguenti precauzioni:

non ingerire ed evitare contatti con la cute e le mucose! La sodio azide a contatto con metalli come il rame o il piombo può formare azidi esplosive.

Preparazione dei reagenti

L'N antisiero e l'N reagente supplementare A sono pronti per l'uso e possono essere utilizzati senza nessun pretrattamento.

Conservazione e validità Stabilità a +2/+8 °C:

vedere la data di scadenza sull’etichetta Stabilità dopo apertura:

4 settimane, se conservati ben chiusi a+ 2/+ 8°C, evitando contaminazioni (ad es. da microrganismi).

Durante la conservazione, gli ‘N Antisieri possono presentare intorbidamenti o floccula-zioni che non dipendono da contaminafloccula-zioni microbiche e che non influenzano in alcun modo l’attività. In questo caso è necessario filtrare l’antisiero prima dell’uso. A questo scopo sono disponibili filtri monouso con pori di 0,45 µm di diametro. Non congelare. Stabilità sui sistemi BN*:

5 giorni per 8 ore al giorno o periodo di tempo equivalente (massimo 40 ore); Sistema BN* II: la stabilità dei reagenti può essere aumentata usando gli Evaporation Stoppers per BN* II (cod. VLE), come indicato nel manuale d’uso.

Sistema BN ProSpec®_{: la stabilità dei reagenti è indicata nel manuale d’uso.}

Sono inoltre necessari: Sistema BN*

N Standard Proteine UY (umano), codice QLV N/T Controllo Proteine LC (umano), codice QLW N Tampone di reazione, codice UMS

N Diluente, codice UMT

Evaporation Stoppers per BN* II (opzionale), codice VLE

Materiale di consumo ed accessori come descritto nei manuali d’uso dei sistemi BN*.

Campioni in esame

Utilizzare preferibilmente campioni di urina freschi (conservati per un massimo di 8 giorni a +2/+8°C). Per la determinazione occorrono campioni di urina spontanea o di raccolta. I campioni di urina non devono essere congelati. Tutti i campioni di urina devono essere centrifugati prima dell’analisi (10 min. a ca. 15000 x g).

Esecuzione del test

1. Per informazioni dettagliate fare riferimento al manuale d’uso dei sistemi BN*. 2. Non utilizzare i reagenti oltre la data di scadenza indicata.

3. Prima della determinazione sul sistema BN* A /BN* 100, portare i reagenti ed i campio-ni a temperatura ambiente (+15/+25°C). Sul sistema BN* II / BN ProSpec® _{i reagenti}

possono essere analizzati direttamente a +2/+8°C.

Schema di esecuzione del test con i sistemi BN*

Gli schemi per l’esecuzione del test sono riportati nei manuali d’uso e nel software dello strumento. Tutte le fasi sono eseguite automaticamente dallo strumento.

Allestimento della curva di riferimento

Le curve di riferimento vengono allestite mediante una calibrazione a più punti. Per la sua preparazione vengono realizzate automaticamente diluizioni seriali dell'N Proteine stan-dard UY con N Diluente.

Le curve di calibrazione sono valide finchè i controlli di accuratezza, ad es. N/T Controllo per proteine LC, rimangono entro i rispettivi ambiti fiduciali.

Quando si utilizza un nuovo lotto di antisiero si deve allestire una nuova curva di riferi-mento.

Valutazione dei campioni in esame

Utilizzare campioni non diluiti. Se le letture ottenute si trovano al di fuori dell’ambito di misura, la misura può essere ripetuta usando una diluizione superiore del campione. Per informazioni sulla ripetizione della misurazione con altre diluizioni consultare il manuale d’uso dei sistemi BN*.

Controllo di qualità interno

L’N/T Controllo Proteine LC deve essere analizzato dopo ogni preparazione delle curve di riferimento, dopo aver iniziato un nuovo flacone di antisiero e con ogni serie di campio-ni. I controlli sono analizzati e valutati allo stesso modo dei campiocampio-ni. I valori nominali e gli ambiti fiduciali sono indicati nella tabella dei valori nominali del relativo controllo. Calcolo dei risultati d'analisi

La valutazione è eseguita automaticamente mediante una funzione logit-log.

Limitazioni della esecuizione del test

I campioni torbidi o contenenti particelle possono interferire con la determinazione. Per-tanto, tutti i campioni di urina devono essere centrifugati prima di essere analizzati. In presenza di valori di pH inferiori a 6, in caso di conservazione per più giorni dei campioni di urina, può verificarsi una diminuzione della concentrazione di α1-microglobulina.(5)

Per ragioni tecniche legate alla produzione e/o all’invecchiamento dei campioni, i risultati ottenuti con i sieri di controllo e con i sieri per il controllo di qualità inter-laboratori possono differire in funzione del metodo utilizzato. Può quindi rendersi necessario valutare i risultati ottenuti facendo riferimento a valori specifici per i diversi metodi utilizzati.

Valori attesi

La concentrazione di α1-mircoglobulina nella seconda urina della mattina di adulti sani è

inferiore a 12 mg/L(6)_{. Tale valore deriva da un’indagine effettuata su 115 campioni di}

urina. Per altri tipi di campioni di urina (prima urina del mattino, urina di raccolta nelle 24 ore) valgono valori di riferimento propri.

Inoltre, ogni laboratorio dovrebbe determinare i propri intervalli di riferimento, poiché i valori possono risultare diversi a seconda della popolazione esaminata.

Caratteristiche del test

La sensibilità del test viene determinata dal limite inferiore della curva di riferimento e dipende quindi dalla concentrazione delle proteine nell’N Proteine Standard UY. Non si verifica eccesso di antigene („high dose hook-effect“) fino a concentrazioni di 600 mg/ L di α1-microglobulina. Gli ambiti di misura tipici sono riportati nel manuale d’uso dei

sistemi BN*. Specificità

Gli N antisieri sono specifici per la rispettiva proteina. Precisione

Con il N antisiero anti-α1-microglobulina sono stati determinati, impiegando il sistema

BN*, i seguenti coefficienti di variazione (CV): (6)

Intra-serie Inter-serie

(n = 21) (n = 10)

Proteina Valore medio CV Valore medio CV

[mg/L] [%] [mg/L] [%]

α1-microglobulina 7,7 5,2 6,8 13,2

41,8 2,9 42,0 7,4

Confronto tra i metodi

Sono stati esaminati 52 campioni di urina con N Antisiero anti α1-microglobulina umana

sul sistema BN* (y) e con un metodo di immunodiffusione radiale (x) (LC-Partigen**). La correlazione dei risultati è la seguente:

Proteina Regressione lineare Coefficiente

di correlazione α1-microglobulina y (BN*) = 1,08 x (RID) - 2,36 mg/L 0,996

Nota:

I valori indicati come caratteristiche del test rappresentano dei risultati tipici e non devono essere considerati come specifiche per gli N Antisieri anti α1-microglobulina umana.

Bibliografia

BN ProSpec è un marchio registrato della Dade Behring Marburg GmbH negli Stati Uniti, Germania e altri paesi.

* BN è un marchio registrato della Dade Behring Marburg GmbH negli Stati Uniti. ** Partigen è un marchio registrato della Dade Behring Marburg GmbH in Germania e

negli altri Paesi.

Dade Behring Marburg GmbH Emil-von-Behring-Str. 76 D-35041 Marburg

OWLA G11 E0540 (421) H 5

N Antisueros contra

α

1

-Microglobulina

humana

Campos de aplicación

Reactivos de diagnóstico in-vitro para la determinación cuantitativa de α1-microglobulina

en orina usando los sistemas BN*.

Significado diagnóstico

La relevancia clínica de la determinación de α1-microglobulina está en que permite identificar

una proteinuria tubular (1 - 4). La α1-microglobulina, también conocida como proteína HC (3),

es una glicoproteína de bajo peso molecular (peso molecular aprox. 33 000), cuya parte glomerular se encuentra libre en la sangre y se puede filtrar cuantitativamente. Su reabsor-ción y su catabolisno ocurren al igual que en las otras proteínas plasmáticas que atraviezan el filtro glomerular en los tubulus proximales. Mediante el reconocimiento de concentracio-nes elevadas de proteínas de bajo peso molecular en orina, como por ej. α1-microglobulina,

se puede definir un daño tubular, como los que aparecen en nefritis, nefropatía diabética avanzada, después de exposición a metales pesados o después de la toma de medicamen-tos nefrotóxicos. El hallazgo de una elevada concentración de α1-microglobulina en orina, en

el caso de infecciones de las vías urinarias, indica una participación de los riñones.

Principio del método

La proteína contenida en la orina humana forma en una reacción inmunoquímica con anticuerpos específicos inmunocomplejos, los cuales pueden dispersar un rayo de luz incidente. La intensidad de la luz dispersada depende de la concentración de la corre-spondiente proteína en la muestra. La valoración se hace por comparación con un están-dar de concentración conocida.

Reactivos

Contenido del envase comercial: N α1-Microglobulina Kit, N° de pedido OWLA

N Antisuero contra α1-microglobulina humana y

N Reactivo adicional A 1 frasco de 2 ml para cada uno Composición

El N antisuero es un suero animal, líquido, producido mediante inmunización de conejos con α1 - microglobulina humana de alta pureza. Los componentes lábiles del antisuero se van a

retirar mediante un proceso especial de estabilización. La impurezas microbiológicas se ex-cluyen, en general, por filtración y adición de azida de sodio (< 1 g/l) como medio de conser-vación. El antisuero específico, purificado por medio de inmunoabsorción de fase sólida, después de ser sometido a pruebas especiales, se ajusta de tal forma que se garantice una capacidad óptima al usarse en los sistemas BN*. El título del anticuerpo (T) se determina por inmunodifusión radial y viene impreso en la etiqueta del frasco. Este valor indica, cuantos mg de antígeno van a ser precipitados en un gel de agarosa, por 1 ml de antisuero. El N Reactivo adicional A está compuesto por detergentes en una solución tampón.

N reacivo adicional A está formado por detergentes en una solución amortiguadora. Medio de conservación: 5-cloro-2-metil-4-isotiazol-3-on (aprox. 6 mg/l)

2-metil-4-isotiazol-3-on (aprox. 2 mg/l) Advertencias y medidas de seguridad

1. Sólo para ser utilizado en diagnósticos in-vitro.

2. En el manejo de diagnósticos in-vitro que contengan azida sódica debe observarse la siguiente regla: No ingerir y evitar contacto con la piel y mucosas. La azida sódica puede formar azidas explosivas con metales como cobre y plomo.

Preparación de reactivos

El N antisuero y el N reactivo adicional A vienen listo para ser utilizados y pueden aplicar-se sin ningún otro tratamiento preliminar.

Estabilidad y almacenaje

Tiempo de conservación entre +2 y +8°C: La fecha de vencimiento viene dada en la etiqueta; Estabilidad después de abierto:

4 semanas siempre que los frascos después de ser empleados se mantengan entre +2 y +8°C, perfectamente cerrados y se eviten contaminaciones (por ej., por microorganismos); Los N antisueros pueden presentar durante el almacenamiento floculación o turbidez que no son ocasionadas por contaminación microbiológica y que no influyen de manera alguna en su actividad.En estos casos los antisueros deben ser filtrados, antes de ser usados. Para esto son apropiados filtros desechables con un diámetro de poro de 0,45 µm. No está permitida su congelación.

Estabilidad en los sistemas BN*:

5 días 8 horas cada día o un período de tiempo comparable (máximo 40 horas); En el sistema BN* II el aumento de la estabilidad del reactivo, debido al uso del tapón protector de la evaporación (N° de pedido, OVLE), viene dado en el manual de operacio-nes del aparato.

La estabilidad de los reactivos en el sistema BN ProSpec® _{se debe tomar del manual de}

operaciones.

Materiales adicionales necesarios Sistema BN*

N Proteína-estándar UY (humana), N° de pedido OQLV N/T Proteína-control LC (humana), N° de pedido OQLW N tampón para reacción, N° de pedido OUMS N diluyente, N° de pedido OUMT

Tampón protector de evaporación BN* II (opcional), N° de pedido OVLE

Otros materiales y equipos como está descrito en el manual de operaciones respectivos de los sistemas BN*.

Material a investigar

Para las medidas se deben usar en lo posible muestra de orina fresca (almacenadas máximo 8 días entre +2 y +8°C). Para la determinación se pueden usar orina espontánea y retenida. Las muestras de orina no se deben congelar. Cada muestra de orina se debe centrifugar antes del análisis (10 min. aprox. 15 000 x g)

Procedimiento

1. Los detalles sobre el manejo de los sistemas BN* se deben tomar de los correspon-dientes manuales de operación.

2. Los reactivos no se deben utilizar una vez pasada la fecha de vencimiento. 3. Los reactivos y las muestras tienen que haber alcanzado la temperatura ambiente (entre +15

y +25°C) antes de ser medidos en los sistemas BN* A/BN* 100. En los sistemas BN* II/BN ProSpec® los reactivos y las muestras almacenados entre +2 y +8°C se pueden utilizar

direc-tamente para la determinación.

Protocolos del test en los sistemas BN*

Los protocolos de elaboración de los ensayos vienen dados en el manual de operacio-nes, así como en el software del aparato correspondiente. Todas las etapas son efectua-das automáticamente por el sistema.

Preparación de la curva de referencia

Las curvas de referencia se hacen sobre una calibración de varios puntos. Para su ela-boración se preparan automáticamente una serie de diluciones del N Proteína-estandar UY con el N diluyente.

Las curvas de referencia pueden ser utilizadas tanto tiempo como sea posible, siempre que al determinar de nuevo de los controles de exactitud, por ej. los N/T proteína-contro-le LC sus valores se encuentren dentro de los rangos de confianza correspondientes. Al utilizar un nuevo lote de antisueros se deben preparar nuevas curvas de referencia. Medida de las muestras de pacientes

Las muestras se miden sin diluir. Para valores que se encuentren por fuera del rango de medida, se puede repetir la medida a una dilución mayor de la muestra. La repetición de las medidas a otras diluciones de las muestras viene descrita en el manual de operacio-nes del sistema BN*.

Control de calidad interno

Los N/T proteína-controles LC se deben utilizar después de cada elaboración de una curva de referencia, después de abrir un frasco de antisuero por primera vez, así como también, con cada serie de muestras. Los controles deben manejarse en el test y en la evaluación como las muestras de pacientes. Los valores teóricos y los rangos de confi-anza se deben tomar de la Tabla de valores teóricos correspondiente a cada control. Cálculo de los resultados del análisis

La valoración se efectua automáticamente mediante una función log-logit.

Limitaciones del Procedimiento

La presencia en la muestras de turbidez o de partículas puede alterar la determinación. Por esta razón, las muestras de orina se deben centrifugar antes de la determinación. Para muestras de orina guardadas durante varios días, con valores de pH menores de 6, se puede presentar en algunos casos una disminución de la concentración medida de α1- microglobulina (5).

Para las muestras control y para las muestras empleadas en estudios en diferentes cen-tros, debido a la técnica de fabricación o al envejecimiento de las muestras, se obtienen resultados diferentes dependiendo del método de determinación utilizado. Por esta ra-zón, puede ser necesario efectuar la valoración de estos resultados en relación con los valores objetivo del método correspondiente.

Valores esperados

La concentración de α1 - microglobulina en la segunda orina del día, de adultos sanos

está por debajo de 12 mg/l (6). La determinación del límite superior del rango de referen-cia se efectuó con 115 muestras de orina. Para otros tipos de muestras de orina (primera orina del día, orina recolectada durante 24 horas) son válidos sus propios rangos de referencia.

Por esta razón, cada laboratorio debe determinar sus propios rangos de referencia, ya que estos se encuentran influenciados por muchos factores, que pueden ser diferentes para cada colectividad estudiada.

Características del test

La sensibilidad de la determinación se fija de acuerdo al límite inferior de la curva de referencia y depende por eso, de la concentración de proteína en el N Proteína- estándar UY. Un „High-Dose-Hook-Effekt“ no aparece hasta concentraciones de α1 -

microglobuli-na de 600 mg/l. Los rangos típicos de medida vienen dados en el manual de operaciones de los sistemas BN*.

Especificidad

Los N antisueros son específicos para la respectiva proteína. Precisión

Los siguientes coeficientes de variación (CV) fueron obtenidos con el N Antisuero contra α1-microglobulina en el sistema BN* (6):

Intra-assay Inter-assay

(n=21) (n=10)

Proteína promedio CV promedio CV

[mg/l] [%] [mg/l] [%]

α1-microglobulina 7,7 5,2 6,8 13,2

41,8 2,9 42,0 7,4

Comparación de métodos

Se midieron 52 muestras de orina con el N Antisuero contra α1 - Microglobulina humana

en el sistema BN* (y) y se compararon con la determinación por inmunodifusión radial (x) (LC-Partigen**). La correlación de los resultados dio los siguientes datos:

Proteína Regreción lineal Coeficiente de

correlación α1-microglobulina y(BN*)=1,08 x (RID) - 2,36 mg/l 0,996

Nota:

Los valores dados para las características del test representan valores típicos y no se de-ben tomar como especificaciones para el N antisuero contra α1 - Microglobulina humana.

Bibliografía

BN ProSpec es una marca registrada de Dade Behring Marburg GmbH en USA, Alema-nia y en otros países.

* BN es una marca de fábrica de Dade Behring Marburg GmbH en USA.

** Partigen es una marca registrada de Dade Behring Marburg GmbH en Alemania y en otros países.

Dade Behring Marburg GmbH Emil-von-Behring-Str. 76 D-35041 Marburg

OWLA G11 E0540 (421) H 6 Edição Junho 2001

N Anti-soro contra

α

1

-microglobulina humana

Campos de aplicação

Reagentes de diagnóstico in vitro para determinação quantitativa de α1-microglobulina

humana na urina com os sistemas BN*.

Significado diagnóstico

A relevância clínica da determinação quantitativa da α1-microglobulina humana reside na

identificação das proteinúrias tubulares (1 - 4). A α1-microglobulina, também chamada

proteína HC (3), é uma glucoproteína de baixo peso molecular (aprox. 33 000), de que a fracção que se acha em estado livre no sangue é filtrada quantitativamente pelos glo-mérulos. A sua reabsorção e catabolismo processam-se, analogamente aos das outras proteínas plasmáticas filtradas pelos glomérulos, no túbulo proximal. A prova de concen-trações aumentadas de proteínas de fraco peso molecular na urina, como por ex. a α1

-microglobulina, pode ser indicativa de lesão tubular, como é frequentemente o caso nas nefrites, nefropatias diabéticas avançadas, após exposição a um metal pesado ou ainda após administração de medicamentos nefrotóxicos. Concentrações aumentadas de α1

-microglobulina na urina em infecções das vias urinárias indiciam um envolvimento renal.

Princípio do método

As proteínas contidas na urina humana formam imunocomplexos, numa reacção imun-oquímica com anticorpos específicos, que dispersam a luz incidente. A intensidade da luz difusa depende da concentração da respectiva proteína na amostra. A avaliação faz-se comparando com um padrão conhecido da concentração.

Reagentes

Conteúdo da embalagem N α1-microglobulina Kit, código OWLA

N Anti-soro contra α1-microglobulina humana e

N Reagente complementar A 1 frasco de 2 ml de cada Composição

O N Antisoro é um soro líquido de origem animal obtido por imunização de coelhos com α1 –microglobulina humana altamente purificada. Os componentes instáveis são

elimi-nados do antisoro através de um processo especial. As impurezas microbianas são pra-ticamente excluídas por meio de filtração e adição de azida de sódio (< 1 g/l) na qualida-de qualida-de conservante. O antisoro específico, purificado por intermédio qualida-de imunoadsorção na fase sólida, após um controlo especial, é calibrado de forma a garantir uma utilização óptima nos sistemas BN*. O título de anticorpos (T) é determinado por imunodifusão radial e está impresso no rótulo do frasco. Ele indica quantos mg de antígeno são preci-pitados em gel de agarose por 1 ml do antisoro. N Reagente complementar A consiste de detergentes em solução tampão.

Conservantes: 5-cloro-2-metil-isotiazolina-3-on (aprox. 6 mg/l) 2-metil-4-isotiazolina-3-on (aprox. 2 mg/l) Advertências e medidas de precaução

1. Só para uso diagnóstico in vitro.

2. Precauções a observar ao lidar com reagentes para diagnóstico in vitro com teor de azida sódica:

Evitar ingerir e todo o contacto com a pele ou mucosas! Com metais pesados, como cobre ou chumbo, a azida de sódio pode formar azidas explosivas.

Preparação dos reagentes

O N Anti-soro e o N Reagente complementar A estão prontos para o uso e podem ser utilizados sem qualquer tratamento prévio.

Estabilidade e conservação Conservação entre +2 e +8 °C: A estabilidade está indicada no rótulo; Estabilidade depois de aberto:

4 semanas desde que os frascos, imediatamente após o uso, sejam firmemente fecha-dos e conservafecha-dos entre +2 bis +8 °C para evitar a contaminação (p. ex., através de microorganismos);

Em caso de armazenagem, os N antisoros podem apresentar floculações ou turvações que não são provocadas por contaminação microbiana e não prejudicam, de nenhum modo, a actividade. Nesses casos, os antisoros deverão ser filtrados antes de serem usados. Para esse efeito, são adequados os filtros descartáveis com um diâmetro de poros de 0,45 µm. Não congelar.

Estabilidade nos sistemas BN*:

5 dias com 8 horas ou um período de tempo equivalente (máximo de 40 horas); Sistema BN* II: o aumento da estabilidade dos reagentes em caso de utilização de BN* II Evaporation Stoppers (N.º de pedido OVLE) deverá ser retirada da instruções de serviço; Sistema BN ProSpec®_{: a estabilidade dos reagentes deverá ser retirada das instruções de}

serviço.

Materiais necessários mas não fornecidos Sistemas BN*

N Proteína Standard UY (humano), código OQLV N/T Controlo de proteína LC (humano), código OQLW N Tampão de reacção, código OUMS

N Diluente, código OUMT

BN* II Evaporation Stoppers (opcionais), N.º de pedido OVLE

Material de consumo e equipamento tal como descrito nas instruções de serviço dos sistemas BN*.

Amostras

Para a medição são utilizadas amostras de urina tão frescas quanto possíveis (tempo máx. de conservação: 8 dias, entre +2 e +8 °C). Para a determinação são apropriadas urinas frescas espontâneas ou urinas acumuladas. As amostras de urina não podem ser congeladas. É ne-cessário centrifugar cada amostra de urina antes da análise (10 min a aprox. 15 000 x g).

Procedimento

Notas:

1. Os pormenores para a manipulação dos sistemas BN* deverão ser retirados das in-struções de serviço respectivas.

2. Os reagentes não deverão ser mais usados após a data de expiração indicada. 3. Antes da medição no sistema BN* A/BN* 100, é necessário que os reagentes e as

amostras tenham atingido a temperatura ambiente (+15 a +25°C). Os reagentes e as amostras armazenadas entre +2 bis +8 °C podem ser utilizadas directamente no si-stema BN* II/BN ProSpec® _{para a determinação.}

Protocolos de ensaio nos sistemas BN*

Os protocolos de ensaio estão contidos nas instruções de serviço e no Software do aparelho respectivo. Todos os passos são executados automaticamente pelo sistema.

Definição da curva de referência:

As curvas de referência são obtidas por uma calibração de pontos múltiplos. As séries de diluição do N Proteína Standard UY com o N Diluente são efectuadas automaticamente. As curvas de referências permanecem válidas enquanto os controlos de exactidão, p. ex. N/T Controlos de proteína LC, se encontrarem compreendidos nos respectivos escalões de confiança. Utilizando-se outro lote de anti-soro, é necessário definir uma nova curva. Medição das amostras de paciente:

As amostras são medidas sem serem diluídas. Se os valores medidos se situarem fora do escalão de medição, esta pode ser repetida a partir de uma diluição de amostra maior. As repetições das medições a partir de outra diluição da amostra estão descritas nos manuais de utilização dos sistemas BN*.

Controlo interno de qualidade

Os N/T Controlos de proteína LC deverão ser utilizados após a preparação de uma curva de referência, após a primeira abertura de um frasco de antisoro ou em cada série de amostras. Na preparação e na avaliação do teste, os controlos são tratados como amostras de paciente. Os valores teóricos e os escalões de confiança deverão ser retira-dos da tabela de valores teóricos do controlo respectivo.

Cálculo dos resultados

O resultado é calculado automaticamente mediante uma função logit-log.

Limitações do procedimento

A turbidez e as partículas nas amostras podem perturbar a determinação. Por isso, é necessário centrifugar todas as amostras de urina antes da determinação. Se os valores pH são inferiores a 6 e as amostras são conservadas durante vários dias, pode ocorrer em alguns casos uma redução da concentração mensurável de α1-microglobulina (5).

Em amostras de controlo ou de ensaios interlaboratoriais pode acontecer obterem-se resultados divergentes, conforme o método de análise utilizado, em virtude da ela-boração técnica ou da idade das amostras. Pode ser, por isso, necessário proceder a uma avaliação destes resultados em função dos valores específicos do método utilizado.

Valores esperados

A concentração de α1-microglobulina na segunda urina da manhã de adultos sãos é

inferior a 12 mg/l (6). A determinação da curva superior do escalão de referência foi feita com base em 115 amostras de urina. Para os outros tipos de amostras de urina (primeira urina da manhã, urina acumulada em 24 horas) aplicam-se escalões de referência próprios. Além disso, cada laboratório deverá determinar os seus escalões de referência próprios, já que estes estão sujeitos a influências múltiplas, que podem ser diferentes para cada população analisada.

Características do teste

A sensibilidade da determinação é definida pelo limite inferior da curva de referência e depende, assim, da concentração de proteína no N Standard de proteína UY. O efeito de ‚High-Dose-Hook‘ não se manifesta até à concentração de α1-microglobulina de 600

mg/l. Os âmbitos de medição típicos estão indicados no manual de utilização dos siste-mas BN*.

Especificidade

Os N Anti-soros são específicos da respectiva proteína. Precisão

Os seguintes coeficientes de variação (CV) foram obtidos com N Anti-soro contra α1

-microglobulina no sistema BN* (6):

Intra-Assay Inter-Assay

(n=21) (n=10)

Proteína valor médio CV valor médio CV

[mg/l] [%] [mg/l] [%]

α1-microglobulina 7,7 5,2 6,8 13,2

41,8 2,9 42,0 7,4

Comparação de métodos

Foram medidas 52 amostras de urina com o N Antisoro contra a α1-microglobulina

huma-na no sistema BN* (y) e determihuma-nadas, comparativamente, com a imunodifusão radial (x) (LC-Partigen**). A correlação dos resultados apresenta os seguintes dados:

Proteína Regressão linear Coeficiente de

correlação α1-microglobulina y(BN*)=1,08 x (RID) - 2,36 mg/l 0,996

Nota

Os valores indicados para as características dos testes representam resultados típicos e não devem ser considerados como especificação para o N antisoro contra a α1

-microglo-bulina humana.

Bibliografia

BN ProSpec e uma marca registada da Dade Behring Marburg GmbH nos EUA, na Ale-manha e noutros países.

* BN é uma marca de fábrica da Dade Behring Marburg GmbH nos EUA.

** Partigen e uma marca registada da Dade Behring Marburg GmbH na Alemanha e noutros países.

Dade Behring Marburg GmbH Emil-von-Behring-Str. 76 D-35041 Marburg IVD LOT EXP CCYY-MM-DD 2 C 8 C

REF

Manufactured by / Hergestellt von / Fabriqué par / Prodotto da / Fabricado por In Vitro Diagnostic Medical Device / In Vitro Diagnosticum / Dispositif Médical Diagnostic In Vitro / Dispositivo Medico per Diagnostica In Vitro / Producto sanitario para Diagnóstico In Vitro

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