Instituto Tecnológico de Tijuana
Ing. Bioquímica
Bioquímica
Reporte Practica 3
“Calibración del Espectrofotómetro”
Ambriz Sevilla Andrés
No. de control: 13211449
Castillo Bautista Brian Alberto
No. de control: 13211009
Tello Valdez Mayra Alejandra
RESUMEN
Por medio de titulación con soluciones acuosas acidas y básicas, se obtuvo la
curva de titulación de aminoácidos, una solución buffer y una proteína.
Primero se realizó la preparación de la glicina (aminoácido) en una proporción
de 1gr en 50ml de agua, después se tomaron 25 ml de buffer de acetato, y
finalmente 15ml de leche (proteína) diluida en 25ml de agua, todas
preparadas dos veces para llevar a cabo la titulación correspondiente. Una vez
ya preparadas las solución se tomaron las mediciones de pH, teniendo como
resultados un pH inicial en 6 aproximadamente y posteriormente se tituló con
ácido clorhídrico hasta obtener un pH de 1 aproximadamente para el
Introducción……….……….. Página 4
Antecedentes………. Página 5
Metodologia …..………. Página 6
Resultados ………. Página 7-9
Cuestionario……….……… Página 10-11
Conclusiones………Pagina11
Introducción
En la presente practica se desarrollará un proceso experimental que consta de tres etapas, primero la titulación de la glicina (con NaOH 1.0N y HCl 1.0N), segundo la titulación de una solución amortiguadora de acetatos, tercero la titulación de una proteína (leche); posteriormente se presentarán curvas de titulación para cada una de las situaciones planteadas. Dentro del campo de la Química como de la
Bioquímica es importante saber interpretar las curvas de titulación, para el caso de la glicina o cualquier otro α-aminoácido, podríamos saber el Pka al cual el grupo amino o el carboxilo se ve fuertemente afectado por el entorno químico, esto es muy aprovechado en los centros activos de las enzimas para promover
mecanismos de reacción adaptados que dependen de los valores de los Pka’s de grupos donadoresaceptores de protones de residuos específicos. Para analizar una proteína existen diversas fuentes como la leche, donde podemos encontrar
Antecedentes
La estructura de los aminoácidos Los aminoácidos se presentan en dos formas isoméricas que son imágenes especulares, no superponibles; de acuerdo con la posición del grupo alfa amino, los isómeros de la serie L son los que poseen este grupo a la izquierda, y los de la serie D son los que poseen a la derecha, como se muestra a continuación:
Los aminoácidos que se encuentra en las proteínas son de la serie L y, por lo tanto, son estos los que tienen una mayor participación en el metabolismo celular. Los de la serie D se hallan en pequeños péptidos de las paredes celulares de las bacterias y algunos antibióticos peptídicos. Por sus características estructurales, los
aminoácidos se ionizan en solución acuosa, de manera que pueden funcionar como ácidos y como bases (son anfolitos). Los aminoácidos que poseen únicamente un grupo amino y un grupo carboxilo, como la glicina, la leucina, la isoleucina, etc., se convierten en iones dipolares, llamados también zwitteriones (dos iones). Estos iones, en solución acuosa, son eléctricamente neutros y, por lo tanto, no migran si se someten a un campo eléctrico.(1) La titulación de los
aminoácidos En los aminoácidos, los grupos carboxilo (COOH) y amino (NH2) se pueden protonar y desprotonar. Estas características y la estructura determinada de cada aminoácido hacen que cada uno de ellos posea una curva de titulación específica. La titulación en un proceso mediante el cual se introducen o se remueven protones, al agregar, respectivamente, ácidos (H+ ) o base (OH- ). A medida que procede una titulación, ocurren cambios en la estructura del
representados en una curva, llamada la curva de titulación. El análisis de este gráfico, proporciona información sobre diversos aspectos del aminoácido, entre otros su capacidad amortiguadora o buffer o tampones. Una sustancia con capacidad amortiguadora es aquella que no permite cambios bruscos de pH, cuando se adicionan equivalentes ya sea ácidos o básicos. Debido a la asociación de un ácido débil y su sal correspondiente; son capaces de disminuir con cierta rapidez la excesiva acidez o alcalinidad de los líquidos orgánicos, constituyendo el primer recurso defensivo del organismo que entra en acción para mantener el equilibrio acido-base.
Metodología
MATERIAL Y REACTIVOS
Vaso de precipitado de 100 ml Parrilla electrica
Soporte universal Bureta
Agitador magnético Potenciometro Glicina
Solución buffer de acetatos pH 4.7 Leche
Solución de NaOH 1.0 N Solución de HCl 1.0 N
PROCEDIMIENTO
GLICINA
1. Pesar 1 g de glicina y disolver en 50 ml de agua
2. Determine el pH
3. Utilizando la bureta, el potenciómetro y una parrilla eléctrica con agitación ( mosca ), titular la solución de glicina en un vaso de p.p. con NaOH 1.0 N de pH 6.8 a pH 12.0. Registre el volumen de la base adicionada por cada 0.5 unidades de pH
.
4. Titular la solución con HCl 1.0 N de pH 6.8 a pH 2.0. Registre el volumen del ácido adicionado por cada 0.5 unidades de pH
5. Elabore una gráfica con el volumen del titulante adicionado ( eje x ), contra unidades de pH de 0.5 ( eje y )
SOLUCION BUFFER DE ACETATOS pH 4.7 1. Tomar 25 ml de solución buffer de acetatos
2. Determine el pH
3. Titular la solución con NaOH 1.0 N de pH 4.7 a pH 13. Registre el volumen de la base adicionada por cada 0.5 unidades de pH
4. Titular la solución con HCl 1.0 N de pH 4.7 a pH 1.0. Registre el volumen del ácido adicionado por cada 0.5 unidades de pH
5. Elabore una gráfica con el volumen del titulante adicionado ( eje x ) contra unidades de pH de 0.5 ( eje y )
6. Determine los pka del buffer
LECHE
1. Tomar 15 ml de leche y diluir con 25 ml de agua
2. Determine el pH
3. Titular la solución con NaOH 1.0 N de pH 7 a pH 13. Registre el volumen de la base adionada por cada 0.5 unidades de pH
4. Titular la solución con HCL 1.0 N de pH 7.0 a pH 1.0. Registrar el volumen del ácido adicionado por cad 0.5 unidades de pH
5. Elabore una gráfica con el volumen del titulante adicionado ( eje x ), contra unidades de pH 0.5 ( eje y )
6. Determine los pka de la leche
PREPARACION DE REACTIVOS
A) Solución de NaOH 1.0 N :
Pesar 8 g de NaOH, disolverlos en agua, 200 ml., y aforar a un litro. B) Solución de HCl 1.0 N :
C) Solución buffer de acetatos pH 4.7:
Mezclar 500 ml de ácido acético glacial 0.05 M ( 1.5 ml ác. acético glacial aforando a 500 ml con agua destilada ) con 500 ml de acetato de sodio 0.05 M (3.4 g de acetato de sodio trihidratado, disolverlos en 200 ml con agua destilada., y aforar a 500 ml ) . Ajustar el pH si fuera necesario con ác. acético glacial o con NaOH hasta 4.7.
Resultados y Calculos
28 11.11 28.5 11.12
29 11.25
29.5 11.3
30 11.34
30.5 11.38
31 11.49
31.5 11.55
32 11.6
32.5 11.66
33 11.78
33.5 11.84
34 12
SOLUCION BUFFER DE ACETATOS pH 4.7
NaOH
Volumen pH
0 4.65
0.5 4.82
1 5.02
1.5 5.21
2 5.52
2.5 6.23
3 12.58
3.1 12.71
3.2 12.81
3.3 12.93
3.4 12.94
0.5 4.52
1 4.38
1.5 4.23
2 4.03
2.5 3.78
3 2.55
3.5 2.24
4 2.01
4.5 1.87
5 1.78
5.5 1.71
6 1.65
6.5 1.56
7 1.52
7.5 1.49
8 1.46
9 1.41
9.5 1.38
10.5 1.35
12 1.28
14 1.24
15 1.22
17 1.19
19 1.16
20 1.14
21 1.13
22 1.11
23 1.11
24 1.1
25 1.09
26 1.08
27 1.07
28 1.06
30 1.05
32 1.04
33 1.03
Leche:
Volumen pH
0 7
0.4 7.5
0.5 8
0.8 8.5
1 9
1.1 9.5
1.2 10
1.5 10.5
1.75 11
2.1 11.5
2.9 12
HCl
Volumen pH
0 6.62
0.7 6.12
1.6 5.62
2.7 5.12
3.8 4.62
4.6 4.12
5.6 3.62
6.7 3.12
7.7 2.62
9.6 2.12
15.5 1.62
68 1.12
140 1
CUESTIONARIO
1. ¿Por qué los aminoácidos actúan como reguladores de pH? Se debe a su estructura química, los aminoácidos contienen dos grupos esenciales, los grupos carboxilo (COOH) y amino (NH2) los cuales se pueden protonar y desprotonar, en el caso del carbonilo se desprende de un protón de hidrogeno quedando COO- , y el amino gana un protón de hidrogeno quedando NH3, como podemos notar tiene un similitud a las reacciones acido-base, reacción en la que se fundamentan las soluciones amortiguadoras.
en bajas concentraciones, es decir, está dada en un sal y estabiliza a un pH7(ApH7).
3. ¿Qué es una curva de titulación? Es un análisis de volumen entre el analito (muestra a estudiar) y nuestro titulante, donde su confiabilidad está determinada por la pureza de nuestras soluciones, en este análisis se determinada el pH inicial así como sus variaciones a un volumen determinado.
4. ¿Qué valores de concentración deben tener los
componentes de un buffer, para tener la máxima capacidad? Se sabe experimentalmente que una solución amortiguadora tienen alta capacidad cuando la cantidad de base presente es al menos 10% de la cantidad de acido. De otro forma la base es utilizada por completo rápidamente a medida que se añade acido fuerte. De manera muy similar, una solución amortiguadora tiene alta capacidad cuando el ácido presente es al menos 10% de la cantidad base, porque de otra
manera el ácido es utilizado por completo a medida que se agrega base fuerte.
5. ¿Cuál es la utilidad que tienen las soluciones buffer en nuestras funciones biológicas? 1.91 5 25.5 1.90 5 30.5 1.82 10 40.5 1.77 10 50.5 1.73 10 60.5 1.71 10 70.5 1.60 10 80.5Tijuana, Baja California a 20 Febrero 2014 20 Los buffer o soluciones amortiguadoras son soluciones que tienen la capacidad de estabilizar la variación de pH, un caso muy importante es el de la sangre, ya que esta cambia su pH por la comida que ingerimos, las proteínas, grasas carbohidratos, sal e iones varían el pH, lo que ocasionaría que nuestro metabolismo celular se detuviera, ya que estas funcionan a un pH determinado.
Conclusiones:
Ambriz Sevilla Andres 13211449
Castillo Bautista Brian 1321009
En la práctica realizada anteriormente se pudo determinar el PH de ciertas sustancias al utilizar potenciometro, del que ya se había tenido conocimiento previo por los cursos
anteriores. También así titulamos los aminoácidos
encontrados en ciertas sustancias para así encontrar la curva de titulación, la cual en cierto punto se mantiene constante en ciertos casos. Se realizó con éxito y sin complicaciones sin embargo se empleo mucho reactivo de HCl en ciertas
titulaciones.
TELLO VALDEZ MAYRA ALEJANDRA 11210837
En esta practica mas que nada pusimos en practica los conociemientos aquiridos en cursos anteriores de titulacion, las curvas de calibracion y ademas determinar el pH.
BIBLIOGRAFIA:
1. Plummer, D. Introduccion a la Bioquimica practica. Ed. McGraw-Hill. Latinoamericana. 1981. Colombia
2. Lehninger, A. Bioquímica. Ed. Omega. 1991. Barcelona. España
3. Conn, E. Bioquímica Fundamental. 3ª Ed. Limusa .1976.
