V O L 4 2
2 0 1 0
REVISTA ARGENTINA DE
M I C R O B I O L O G Í A
PUBLICACIÓN
DE LA
ASOCIACIÓN ARGENTINA
DE
MICROBIOLOGÍA
Secretaría: Deán Funes 472, C1214AAD Buenos Aires; Tel/FAX: 54-11-4932-8858, 54-11-4932-8948; E-mail: [email protected], http://www.aam.org.ar
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Silvia Carla Predari
Instituto de Investigaciones Médicas Alfredo Lanari - UBA
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Facultad de Ciencias Veterinarias - UNLP - CONICET
COMITÉ EDITOR
Aparece en Biological Abstracts, Chemical Abstracts, Veterinary Bulletin, Index Veterinario, EMBASE (Excerpta Medica)
Medline (Index Medicus), Tropical Diseases Bulletin, Abstracts on Hygiene and Communicable Diseases, Literatura
Latinoa-mericana en Ciencias de la Salud (LILACS), Periódica, LATINDEX, SciELO y Science Citation Index Expanded.
C. Bantar
J. C. Basilíco
M. I. Berría
H. M. Bianchini
N. Binsztein
M. M. Bracco
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G. Carballal
A. Cataldi
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S.R. Costamagna
C. Coto
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A. Gentile
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D. Masih
M. Mollerach
R. Negroni
F. Nicola
T. Orduna
ASESORES EN EL EXTERIOR
R. Raya
V. Ritacco
H. R. Rodríguez
A. P. de Ruiz Holgado
A. Schudel
L. Scolaro
F. Sesma
R. Soloaga
H. Terzolo
G. Vaamonde
A. Amoroso (Bélgica)
J. Arbiza (Uruguay)
J. A. Ayala (España)
P. Feng (EE.UU.)
E. García López (España)
M. Gottschalk (Canadá)
R. Guerrero (España)
M.J.Mendes Giannini (Brasil)
M. Philipp (EE.UU.)
F. Queiroz Telles (Brasil)
A. Restrepo (Colombia)
G. San Blas (Venezuela)
G. Schmunis (EE.UU.)
A. Steinbüchel (Alemania)
M. Tolmasky (EE.UU.)
J. Vila Estape (España)
ASESORES CIENTÍFICOS
Alicia I. Arechavala
Hospital Francisco J. Muñiz - GCBA
José A. Di Conza
Facultad de Farmacia y Bioquímica - UBA - UNL - CONICET
Ana M. Jar
Facultad de Ciencias Veterinarias - UBA
Claudia I. Menghi
Hospital de Clínicas - Facultad de Farmacia y Bioquímica - UBA
Elsa C. Mercado
Instituto de Patobiología - INTA
Héctor R. Morbidoni
CURSOS Y TALLERES
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MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS RÁPIDOS: SU VALIDACIÓN
21 de Octubre 2010
Organiza: Subcomisión de Buenas Practicas-DAMyC
TALLER INTERNACIONAL DE RIZOSFERA, BIODIVERSIDAD Y AGRICULTURA SUSTENTABLE (TIRBAS 2010)
21 y 22 de Octubre 2010
Organiza: DiMAyA
ACTUALIZACION SOBRE BOTULISMO DEL LACTANTE Y ALIMENTARIO. USOS DE LA TOXINA BOTULINICA
5 de Noviembre 2010
Organiza: DAMyC
XVIII CURSO DIAGNOSTICO VIROLOGICO RAPIDO
8 al 26 de Noviembre 2010
Organiza: SAV
IX CURSO DE ACTUALIZACIÓN EN INTEGRONES
1 al 10 de Noviembre 2010
Organiza: Microbiología General
CURSO BIOSEGURIDAD
4 al 11 de Noviembre 2010
Organiza: Filial Rosario
SONRÍELE A LOS PAPERS EN INGLÉS
5-12-19 Y 26 de Abril 2011
Organiza: Comisión Directiva AAM
CONGRESOS Y JORNADAS
Para mas información visite nuestra pagina web (www.aam.org.ar), sección Congresos y JornadasCongresos y Jornadas
VI REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE BACTERIOLOGÍA, MICOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA CLÍNICAS: BACTERIEMIAS, FUNGUEMIAS Y PARASITEMIAS
22 de Noviembre 2010
XXX REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL DE SAV 2010
8 al 11 de Diciembre 2010
BRUCELLOSIS 2011
INTERNATIONAL RESEARCH CONFERENCE
21 al 23 de Septiembre 2011
X CONGRESO ARGENTINO DE VIROLOGÍA, III SIMPOSIO DE VIROLOGÍA CLÍNICA
26 al 29 de Septiembre 2011
XIV JORNADA ARGENTINA DE MICROBIOLOGÍA
3ª JORNADA DE MICROBIOLOGÍA E INFECTOLOGÍA DEL NEA - MINEA 2011. RESISTENCIA CHACO
DE MICROBIOLOGÍA
VI CONGRESO DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE
BACTERIOLOGÍA, MICOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA
CLÍNICA (SADEBAC)
I CONGRESO DE MICROBIOLOGÍA AGRÍCOLA Y
AMBIENTAL (DiMAyA)
17 al 20 de octubre de 2010
Palais Rouge
Jerónimo Salguero 1433/49 (C1177AFA)
XII CONGRESO ARGENTINO
DE MICROBIOLOGÍA
Presidente:
Ricardo Negroni
Vicepresidentes:
Marta Tokumoto
Jorge Reinheimer
Isabel Bogado
Secretarias Generales:
Alicia Arechavala
María Alejandra Picconi
Prosecretaria:
Cristina Iovannitti
Tesorera:
Adriana De Paulis
Protesorera:
Paula Gagetti
Secretaria de Relaciones Institucionales:
Daniela Centrón
Secretaria Técnica:
Adriana Sucari
Colaboradores Secretaria Técnica:
María Soledad Ramírez
María Paula Quiroga
Secretarios Científicos:
Liliana Guelfand
Horacio Salomón
Comité Científico
División DiMAyA:
Susana Vázquez e Inés García
División DAMYC:
Virginia Fernández Pinto y Guillermo Guirín
División SADEBAC:
Carlos Vay y Magdalena Pennini
División SAV:
Victoria Preciado, Viviana Mbayed y
Oscar Taboga
Vocales: Filial Córdoba:
Marina Bottiglieri
Filial Cuyo:
Alejandro Sturniolo
Filial NOA:
Aída Suárez
Filial NEA:
Luis Merino
Filial Sur:
Ana Paris de Baeza
Filial Rosario:
Perla Hermida Lucena
Filial Santa Fe:
Francisco Salamone
Comité Organizador VI Congreso de SADEBAC
Presidente:
Jorgelina Smayevsky
Vicepresidente:
María I. G. de Fernández
Secretarios Científicos:
Horacio Lopardo, Carlos Vay
Comité Científico:
Magdalena Penini, Paula Gagetti, Angela Famiglieti,
Viviana Ritaco, Sonia Arduino, Marta Rocchi,
Emilce Ménze, Rodolfo Casero, Gabriela Santiso,
Comité Organizador I Congreso de Microbiología Agrícola y Ambiental
Presidente:
Fabricio Cassan
Vicepresidente:
Claudio Penna
Comité Científico Asesor:
Susana Vázquez, Inés García de Salamone,
Diego Sauka, Lucas Ruberto
COMISIÓN DIRECTIVA
ASOCIACIÓN ARGENTINA DE MICROBIOLOGÍA
Presidente
Manuel Gómez Carrillo
Vicepresidente
Marta Rocchi
Secretaria
María Cecilia Freire
Secretaria de actas
María I. G. Fernández
Prosecretaria
María Alejandra Picconi
Tesorera
Adriana De Paulis
Protesorero
Claudio Penna
Vocal Titular 1°
Jorge Santoianni
Vocal Titular 2°
María José Gallego
Vocal Titular 3°
Marta Rivas
Vocal Titular 4°
María Soledad Ramírez
Vocal Suplente 1°
Adriana Sucari
Vocal Suplente 2°
Diego Sauka
Vocal Suplente 3º
Manuel Boutureira
Vocal Suplente 4º
Gustavo Giusiano
COMISIÓN DIRECTIVA
DIVSIÓN AGRÍCOLA Y
AMBIENTAL - DiMAyA
Presidente
Fabricio Cassán
Vicepresidente
Claudio Penna
Secretario
Diego Sauka
Tesorera
Inés García de Salamone
Secretaria de actas
Susana Vázquez
Vocal Titular 1º
Lucas Ruberto
Vocal Titular 2º
Rosana Massa
Vocal Suplente 1º
Mónica Baldini
Vocal Suplente 2º
Diego Libkind
COMISIÓN DIRECTIVA
SOCIEDAD ARGENTINA DE
BACTERIOLOGÍA,
MICOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA
CLÍNICA - SADEBAC
Presidente
Horacio Lopardo
Vicepresidente
Angela Famiglietti
Secretaria general
Nora A. Gómez
Prosecretario
Marcelo Galas
Secretaria de actas
Patricia Vidal
Tesorera
María Adelaida Rosetti
Protesorera
María José Rial
Vocal Titular 1º
Adriana Sucari
Vocal Titular 2º
Paula Gagetti
Vocal Titular 3º
Magdalena Pennini
Vocal Titular 4º
Gabriela Santiso
Vocal Suplente 1º
Marta Rocchi
Vocal Suplente 2º
Marta Hofman
Vocal Suplente 3º
Patricia Paulin
Vocal Suplente 4º
XII Congreso Argentino de Microbiología
VI Congreso de la Sociedad Argentina de
Bacteriología, Micología y Parasitología
Clínica (SADEBAC)
I Congreso de Microbiología Agrícola y
Ambiental (DiMAyA)
INDICE
Comité Organizador
Comisión Directiva de la Asociación Argentina de Microbiología
Comisión Directiva SADEBAC y DiMAyA
Mensaje del Presidente de la Asociación Argentina de Microbiología
Mensaje de la Presidente del VI Congreso de SADEBAC
Mensaje del Presidente del XII Congreso Argentino de Microbiología
Mensaje del Presidente del I Congreso Agrícola y Ambiental
Comunicaciones Orales
1
Posters
25
Índice de Autores
263
XII Congreso Argentino de Microbiología
VI Congreso de la Sociedad Argentina de
Bacteriología, Micología y Parasitología
Clínica (SADEBAC)
I Congreso de Microbiología Agrícola y
Ambiental (DiMAyA)
INDEX
Conference Organizing Committee
Executive Board of the Argentine Society for Microbiology
Executive Board of SADEBAC and DiMAyA
Argentine Association for Microbiology President’s Message
VI SADEBAC Conference President’s Message
XII Argentine Microbiology Conference President’s Message
I DiMAyA Conference President’s Message
Oral Sessions
1
Poster Sessions
25
Author Index
263
Mensaje del Presidente
de la Asociación Argentina de Microbiología
XII Congreso Argentino de Microbiología
Estimados Colegas
Es para mí un gran honor, en nombre de la
Aso-ciación Argentina de Microbiología, darles la
bienve-nida a nuestro
XII Congreso Argentino de
Microbiolo-gía
que desarrollaremos en la Ciudad de Buenos
Ai-res.
Como ocurre cada tres años, la AAM organiza un
congreso de carácter nacional de nuestra especialidad
con el firme objetivo de brindar un escenario que
per-mita la expresión de la producción científica y técnica
más destacada de la microbiología.
Fundada en 1948, la AAM incorporó siete filiales
desde 1961, logrando hoy en día una amplia
represen-tación en todo nuestro territorio nacional. Al
comen-zar la década de los ochenta se incorporó como
divi-sión la
Sociedad Argentina de Virología
(SAV) y se
crearon las divisiones
Sociedad Argentina de
Bacte-riología Clínica
(SADEBAC) y
Alimentos,
Medicamen-tos y Cosméticos
(DAMyC). Desde el 2005, la
micro-biología agrícola y ambiental se ve representada en
la división DiMAyA.
La AAM tiene una larga historia en la capacitación
continua de microbiólogos no solo a través de sus
cur-sos y talleres sino también por medio de sus
congre-sos y jornadas. El primer congreso de la AAM,
organi-zado en 1976 tuvo este objetivo y desde ese momento
se viene organizando de manera ininterrumpida.
Para una Asociación que reúne diversas disciplinas
como la nuestra, que crece día a día y que tiene
re-presentación en amplias regiones del país, nuestros
congresos deben ser también un marco para
conocer-nos, intercambiar conocimiento y propiciar
colaboracio-nes. Sin duda es una oportunidad de crecimiento y
pro-greso para todos nosotros.
Hace casi tres años la Comisión Directiva confió al
Dr. Ricardo Negroni la presidencia y conformación del
Comité Organizador de nuestro congreso, invitando
además a nuestras Divisiones a sumarse y compartir
este mismo escenario en la medida de sus
posibilida-des. El interés mostrado por todas las Divisiones,
Fi-liales, Subcomisiones y Grupos de Trabajo, que han
contribuido con la labor de sus integrantes, sus ideas
y participación, ha culminado con la conformación de
un programa científico que no dudo hará de este
con-greso un encuentro especial.
Quiero agradecer al Dr. Negroni, a las Divisiones
SADEBAC y DiMAyA que están organizando sus
con-gresos de manera conjunta y a todos los miembros que
integran sus Comités Organizadores por haber
desa-rrollado un magnífico marco para alcanzar nuestro
objetivo. Sólo nos queda aprovecharlo.
Manuel Gómez Carrillo
Presidente Asociación Argentina de Microbiología
XII Congreso Argentino de Microbiología
Mensaje de la Presidente del VI Congreso de la
Sociedad Argentina de Bacteriología,
Micología y Parasitología Clínica (SADEBAC)
La
Sociedad Argentina de Bacteriología,
Mi-cología y Parasitología Clínica,
división de la
Aso-ciación Argentina de Microbiología, convoca
nueva-mente a los profesionales involucrados en el
diagnós-tico, tratamiento y prevención de las enfermedades
in-fecciosas a participar de nuestra actividad científica
más importante del año 2010, el
VI Congreso de
SADEBAC
. Este evento tiene una significación
espe-cial ya que se realiza en el marco del XII Congreso de
la Asociación Argentina de Microbiología, con el
espí-ritu de poder brindar a nuestros asistentes una visión
global de la Microbiología en nuestro país. Pese a los
continuos avances de la ciencia, las infecciones
con-tinúan siendo en el mundo, una de las causas más
fre-cuentes de morbi-mortalidad. En muchos casos, estas
muertes serían evitables mediante diagnósticos
rápi-dos, certeros, políticas eficientes de prevención y uso
adecuado de los antimicrobianos. Esta función es
atri-buto del microbiólogo clínico integrado en el equipo
multidisciplinario de salud. El comité científico ha
pla-nificado un ambicioso programa enfocado desde las
patologías a los microorganismos, en el cual conviven
en un mismo nicho ecológico las bacterias, los
hon-gos, los virus y los parásitos, peleando palmo a
pal-mo con los nuevos y viejos antimicrobianos, los
inmu-nomoduladores, las vacunas y los programas de
con-trol de infecciones y de mejora continua de la calidad.
Les agradecemos a todos por acompañarnos a
tran-sitar estos primeros 29 años de nuestra sociedad y los
invitamos a participar y colaborar activamente en la
misma. Sus inquietudes y aportes serán bienvenidos
y su invalorable presencia contribuirá al éxito de este
Congreso. Cordialmente,
Jorgelina Smayevsky
Mensaje del Presidente del XII Congreso
Argentino de Microbiología
La Comisión Directiva de la Asociación Argentina de
Microbiología (AAM) me ha conferido el alto honor de
designarme Presidente del próximo Congreso
Argen-tino de Microbiología, que tendrá lugar en la ciudad de
Buenos Aires entre los días 17 y 20 de octubre de
2010. Es la reunión científica más importante
organi-zada por la AAM y se lleva a cabo cada tres años.
La AAM ha sobrepasado ya las seis décadas de
existencia y su finalidad es
mejorar
y difundir los
co-nocimientos microbiológicos en las más diversas
áreas. Durante este prolongado lapso su desarrollo ha
sido constante y hoy agrupa a más de 2000 cultores
de las distintas ramas de la Microbiología. La AAM es
una organización federal, que cuenta con siete filiales
en el interior del país y posee cuatro divisiones: la
Sociedad Argentina de Virología, la Sociedad
Argenti-na de Bacteriología Clínica (que recientemente
inclu-yó a micólogos y parasitólogos), la División de
Micro-biología de Alimentos, Medicamentos y Cosméticos
(DAMyC) y la nueva División de Microbiología
Agríco-la y Ambiental. Tanto Agríco-las filiales como Agríco-las divisiones
gozan de una cierta autonomía y organizan diversas
actividades científicas propias.
La AAM publica la Revista Argentina de
Microbio-logía que ha editado ya
41
volúmenes, emite cuatro
números por año y su nivel científico ha permitido que
sea citada por las más prestigiosas organizaciones
de-dicadas a la recopilación de bibliografía como
Chemical Abstract, Science Citation Index Expanded,
Medline (Index Medicus), etc.
Es la segunda vez que me toca organizar un
Con-greso Argentino de la especialidad. En esta
oportuni-dad, la propia complejidad de la Asociación y la
evo-lución de los conocimientos de la microbiología, ha
tornado indispensable contar con una Comisión
Orga-nizadora amplia, laboriosa y capaz, que sirva a la vez
de órgano consultor y de ejecutor de las acciones
ne-cesarias para que el Congreso pueda llegar a buen fin.
Es así como he elegido un plantel de colaboradores
que, a primera vista, puede parecer muy extenso, pero
que es representativo de las distintas áreas de
nues-tra especialidad y cuya capacidad individual y
colecti-va estoy seguro que será probada en esta
oportuni-dad.
Debe tenerse en cuenta además que en esta
oportunidad se llevarán a cabo, simultáneamente
con esta reunión científica general, los Congresos
Argentinos de dos de nuestras divisiones, SADEBAC
y Microbiología Agrícola y Ambiental.
Sobre el Programa Científico, procuramos
organi-zar las actividades de forma tal que no existan
sesio-nes simultáneas de asuntos relacionados, para ello
procuramos que las actividades de cada división
es-tén dispuestas en el tiempo de una forma lineal, sin
superposiciones y que existan a la vez
conferencias
plenarias en donde se junten
miembros
de distintas
divisiones para considerar temas de interés general.
Estas conferencias estarán a cargo de
personali-dades científicas de reconocido prestigio y
procu-rarán mostrar el impacto social de la
microbiolo-gía en sus distintas facetas.
La situación económica del país y del mundo, así
como la de la propia AAM, no va a permitir contar con
un número elevado de invitados extranjeros.
Hemos
procurado
sin embargo, que los expositores locales
sean del más alto nivel y traer al mayor número de
per-sonalidades internacionales para las cuales podamos
conseguir financiación de sus gastos.
El local seleccionado para la realización de este
evento científico es cómodo y adecuado a las
necesi-dades de un Congreso de la magnitud del que
esta-mos organizando. Estoy seguro que dejará satisfecho
a los concurrentes en cuanto a la comodidad de sus
ambientes, aislamiento acústico y servicios esenciales.
Deseo agradecer muy especialmente la
coope-ración del Sr. Presidente de la Asociación
Argen-tina de Microbiología y a su Comisión Directiva
du-rante este proceso de organización del Congreso.
En nombre del Comité Organizador del Congreso
Argentino de Microbiología invito a todos los
interesa-dos en la Microbiología a participar de esta Reunión
Científica para contribuir al éxito de la misma.
Por último nuestro reconocimiento las entidades
oficiales de la República Argentina y del exterior,
así como a las empresas comerciales que
apoya-ron económicamente esta reunión científica, sin
cuya decidida colaboración este Congreso no
po-dría realizarse
.
Dr. Ricardo Negroni
Mensaje del Presidente del I Congreso de
Microbiología Agrícola y Ambiental (DiMAyA)
Estimados colegas:
La Comisión Organizadora del I Congreso
Argenti-no de Microbiología Agrícola y Ambiental, así como la
Comisión Directiva de la División de Microbiología
Agrícola y Ambiental (DiMAyA), quieren darles la
bien-venida al primer congreso nacional en la especialidad,
en el Marco del XIII Congreso de Argentino de
Micro-biología (XIII CAM). Para tal fin, hemos asumido un
altísimo compromiso de trabajo y desde hace más de
dos años hemos esculpido lenta y detalladamente cada
una de las facetas de nuestro Congreso, que
espera-mos sea de la calidad y del nivel académico-científico
que todos ustedes anhelan. Las actividades que se
de-sarrollarán en el marco de nuestro Congreso fueron
acordadas sobre la base de dos grandes áreas de
co-nocimiento de la Microbiología General, hoy
altamen-te demandanaltamen-tes y en plena emergencia en nuestro
país. Dentro de la especialidad de la Microbiología
Agrícola hemos planificado el desarrollo de dos
con-ferencias plenarias y dos mesas redondas que
abar-caran principalmente las comunidades microbianas en
suelos agrícolas, las bacterias promotoras del
creci-miento vegetal y la microbiología dentro de un
esque-ma de agricultura sustentable. En el área de la
Micro-biología Ambiental, hemos planificado dos
conferen-cias plenarias y cinco mesas redondas que abarcaran
la microbiología de aguas y suelos, la bioremediación
de ambientes contaminados y el estudio de la
estruc-tura y funcionalidad de comunidades microbianas en
el medio ambiente. Adicionalmente, hemos
conside-rado la presentación de trabajos científicos
seleccio-nados, que serán expuestos y defendidos por sus
au-tores, en el marco de dos mesas redondas, una de
cada especialidad.
Nuestra joven División les da la bienvenida y los
in-vita a participar de nuestras actividades en el marco del
XIII CAM y permanentemente, en el marco institucional
de la Asociación Argentina de Microbiología.
Fabricio Dario Cassán
XII Congreso Argentino de Microbiología
PRESENTACIONES ORALES
LUNES 18/10/2009
ALIMENTOS, MEDICAMENTOS Y COSMÉTICOS
O1 - 27110 INFLUENCE OF GROWTH CONDITIONS AND THE FOOD MATRIX ON THE FUNCTIONALITY OF Bifidobacteriumanimalis subsp. lactis INL1. VINDEROLA, GABRIEL (1); BOCKELMANN, WILHEM (2); NEVE, HORST (2); ZACARIAS, MA-RIA FLORENCIA (1); REINHEIMER, JORGE (1); HELLER, KNUT (2)
(1) Instituto de Lactología Industrial (UNL-CONICET), (2) MRI, KIEL, Alemania
Introduction: Bifidobacterium animalis subsp. lactis INL1 is a probiotic strain isolated from human breast milk with the capacity of enhancing the gut defences through the increase of the number of IgA+ cells in the small and large intestine of mice. Recent studies suggest that cell viability might not always be a full indicator of cell functionality when strains undergo technological treatments like biomass production and drying for storage. Aim: To study, as a cri-terion of cell functionality, the influence of growth conditions and stor-age in different food matrixes of Bifidobacterium animalis subsp. lactis
INL1 on its resistance to simulated gastric digestion. Materials and Methods: The strain was grown in MRS broth in a biofermentor at 37 °C at pH 6.5 and pH 5 for 12 h and 22 h with the influx of CO2. Cells were harvested, washed twice with PBS buffer, resuspended in 10% lactose and dried for 22 h in a Christ Beta 2-16 freeze-drier. Scanning electron microscopy studies were carried out for the freeze-dried cultures obtained. Freeze-dried cultures were added (ca. 108 CFU/ml) to six different commercial dairy and non-dairy food products: orange juice (1), banana-carrot juice (2), mixed-fruits juice + fiber (3), vanilla milk drink (4), banana puree (5) and apple-peach puree (6). Samples were kept at 5 °C for 4 weeks. Cell viabil-ity and resistance to simulated gastric digestion (pH 2 + 0.5% NaCl + 0.3% pepsin, 37 °C for 90 min) was assessed at time 0 and at the end of the storage period. Results: No significant differences were observed in cell viability for cultures grown for 12 or 22 h at pH 6.5 or 5. However, cell losses after 90 min of exposure to simulated gas-tric acidity were higher than 4 log cycles for cultures grown at pH 6.5 compared to the negligible cell losses observed for cultures grown at pH 5. Scanning electron microscopy studies showed that only cul-tures grown at pH 6.5 for 22 h presented an exopolysaccharide-like matrix around freeze-dried cells. No significant differences in cell counts were observed among food products after 4 weeks of stor-age compared to counts at zero time. However, resistance to simu-lated gastric digestion differed among the commercial food products analyzed by the end of the shelf life: after 90 min of digestion, re-ductions in cell counts were negligible for products 2 and 4, for ucts 3 and 6 cell losses were around 1 log order, whereas for prod-ucts 5 and 1 cell losses were 2 and 3 log orders, respectively. For the development of functional foods, appropriate conditions for biomass production must be chosen and a careful selection of food matrix must be performed in order to preserve not only viability but also cell functionality of probiotic strains.
O2 - 27124DISTRIBUCIÓN DE LISOGENIA EN CEPAS COMER-CIALES, DE COLECCIÓN Y SALVAJES DE Lactobacillus DEL GRUPO casei. MERCANTI, DIEGO (1); ROSSETTI, LIA (2); REINHEIMER, JORGE (1); QUIBERONI, ANDREA (1)
(1) Instituto de Lactología Industrial, UNL-CONICET, (2) CRA-FLC
Antecedentes: La lisogenia se encuentra muy difundida en cepas de Lactobacillus. Los profagos no son entidades inertes y pueden contribuir o dar origen a fagos que pueden ser virulentos aún para la cepa de la cual derivan. En la industria láctea fermentativa, los ataques fágicos pueden tener consecuencias muy graves, siendo el impacto económico especialmente alto contra bacterias probióticas que por sus propiedades específicas resultan de difícil o casi imposible reemplazo. Objetivo. Determi-nar la presencia de profagos inducibles por mitomicina C en ce-pas de Lactobacillus del grupo casei de diverso origen, con énfa-sis en aquéllas actualmente usadas en la industria láctea. Mate-riales y Métodos: Se realizó la inducción con mitomicina C de 30 cepas de Lactobacillus del grupo casei: 11 comerciales, 11 de colección, 7 aisladas de quesos y 1 de heces. Las cepas fueron reclasificadas mediante reacciones de PCR específicas para cada especie que conforma el grupo casei (casei, paracasei,
rhamnosus, zeae), y se determinaron sus perfiles de RAPD-PCR con 3 primers; los perfiles se analizaron construyendo un dendrograma con el software BioNumerics. De los sobrenadantes de inducción filtrados se extrajo ADN el cual, en los casos positi-vos (presencia de profagos), se sometió a restricción con BglII. Los perfiles se analizaron utilizando BioNumerics, y se compara-ron con el dendrograma obtenido por RAPD-PCR. Los sobrena-dantes de inducción filtrados se enfrentaron con cepas de
Lactobacillus del presente estudio en tests de turbidez, con el fin de evidenciar fagos virulentos derivados de las cepas lisógenas. Resultados: Aproximadamente la mitad de las cepas presentaron muy alta homología (>80% por RAPD-PCR), entre ellas la mayo-ría de las cepas comerciales. Numerosas cepas de Lb. casei fue-ron reclasificadas como Lb. paracasei o Lb. rhamnosus. La co-rrelación entre perfiles de RAPD-PCR y especie fue muy buena considerando la nueva clasificación. En 25 de las 30 cepas estu-diadas se encontraron profagos, demostrando su amplia distribu-ción dentro del grupo casei. Además, 10 de las 11 cepas comer-ciales contenían profagos, con el mismo perfil de restricción para 6 de ellas (5 muy relacionadas y 1 moderadamente por RAPD-PCR). Otra cepa comercial homóloga a las anteriores contenía otro profago con perfil de restricción igual que 3 cepas de colec-ción (2 ATCC y 1 del INLAIN), mientras otras 3 cepas comercia-les contenían profagos diversos. Esto señala que los lactobacilos del grupo casei utilizados en la industria están, en general, muy emparentados entre sí y poseen profagos de más de un tipo, con el riesgo de recombinaciones y generación de nuevos fagos viru-lentos que esto implica. Por otro lado, a partir de los sobrena-dantes de inducción se aislaron 2 nuevos fagos líticos que fue-ron capaces de lisar la mayoría de las cepas comerciales. Los resultados obtenidos evidencian un factor de riesgo de infeccio-nes fágicas latente pero potencialmente muy peligroso para los lactobacilos probióticos del grupo casei usados industrialmente en la actualidad.
O3 - 27231EVALUACIÓN DE LA DINÁMICA DE LA POBLACIÓN MICROBIANA DURANTE LA ELABORACIÓN Y MADURACIÓN DEL QUESO ITALIANO GRANA PADANO. SANTARELLI, MARCELA; BOTTARI, BENEDETTA; GATTI, MONICA; NEVIANI, ERASMO
Università Di Parma
Introducción: El Grana Padano (GP) es un queso duro, coci-do y de lenta maduración reconocicoci-do con la “Denominación de Origen Protegida”. Es elaborado con leche de vaca cruda y con
suero fermento natural compuesto por distintas cepas de bacte-rias lácticas termófilas fuertemente acidificantes. La microflora secundaria (NSLAB) originaria principalmente de la leche cruda y aquella del suero fermento (SLAB) constituyen la compleja microflora que contribuyen al desarrollo de sus características organolépticas. Diversos trabajos han estudiado la composición microbiana de los fermentos naturales, mientras se conoce poco sobre las dinámicas durante la elaboración y maduración. Objeti-vos: Estudio de la dinámica de la población microbiana de SLAB y NSLAB durante la producción y maduración del queso GP a tra-vés de un enfoque independiente de cultivo. Materiales y Méto-dos: Fueron involucradas 6 diferentes queserías de 6 provincias de la zona de producción del GP (norte de Italia). Por cada que-sería fueron colectadas 6 muestras constituidas por: leche cruda, suero fermento natural, cuajada a las 48 horas y quesos a distin-tos tiempos de maduración (2, 6 y 9 meses). Cada muestra fue analizada mediante la técnica “Length heterogeneity-PCR” a tra-vés de un analizador genético. Para los quesos de 2, 6 y 9 me-ses la metodología se desarrolló de manera de distinguir la frac-ción de células enteras y autolisadas. Resultados y Conclusiones: La composición de las diferentes muestras de leche cruda resul-tó ser variable en relación a la composición de especies. L. delbrueckii subsp. lactis y S.thermophilus fueron identificadas en todas las muestras. Las especies L. helveticus, L. delbrueckii
subsp. lactis y S.thermophilus fueron identificadas en todos los suero fermentos, mientras las cuajadas y quesos no dieron la señal correspondiente a S.thermophilus. En los quesos de 2, 6 y 9 meses L. helveticus y L. delbrueckii subsp. lactis fueron encon-tradas ya sea como células enteras y lisadas. En algunas mues-tras de cuajadas se observó la presencia de la especie heterofermentante L. fermentum, que además fue revelada solo como células lisadas en la totalidad de las muestras de queso de 2 meses. A partir del segundo mes de maduración se detectó la presencia de la especie mesófila L. rhamnosus predominante en la fracción de células enteras. Además algunos quesos de 6 y 9 meses mostraron, en la fracción de células enteras, la presencia de la especie P. acidilactici. Fue observada una continua evolu-ción de las características de la microflora en examen en el inte-rior de cada matriz analizada. La dinámica de las especies del suero fermento, L. helveticus y L. delbrueckii subsp. lactis en las primeras horas de producción y sus permanencias hasta el que-so de 9 meses de maduración ya sea como células enteras como lisadas, evidencia el rol de dicho fermento en la fase de acidifica-ción de la cuajada como en la maduraacidifica-ción del queso. El desarro-llo y la presencia de células enteras de NSLAB como L. rhamnosus y P. acidilactici subrayan el aporte de la leche cruda y del ambiente de producción a la definición del ecosistema microbiano del GP y por consiguiente a las características del producto final.
O4 - 27469VIGILANCIA DE ENFERMEDADES DE TRANSMISIÓN ALIMENTARIA BASADA EN LABORATORIO: BASE DE DATOS NACIONAL DE SUBTIPOS DE Salmonella spp. CAMPOS, J; PICHEL, M; CAFFER, MI; BINSZTEIN, N
Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas - ANLIS “Carlos G. Malbrán”
Salmonella spp. es uno de los agentes causales de enferme-dades de transmisión alimentaria más frecuentes del mundo. El uso de técnicas de subtipificación molecular permite identificar grupos de aislamientos relacionados, para la detección y confir-mación de brotes desde el laboratorio. En el marco de la Red PulseNet América Latina y Caribe se ha establecido en Argenti-na la Base NacioArgenti-nal de Subtipos de Salmonella spp., con 1019 aislamientos de 2005 a 2010. En el Laboratorio Nacional de Re-ferencia se realiza la subtipificación de Salmonella enterica ser. Typhimurium (STM) y S. enterica ser. Enteritidis (SE), junto con una selección de aislamientos de otras serovariedades menos fre-cuentes. El objetivo de este trabajo es presentar la relación genética y distribución de subtipos de STM y SE circulantes en Argentina entre 2005 y 2010 contenidos en la Base de Datos Nacional. Los aislamientos fueron serotipificados siguiendo el esquema de Kauffmann-White, con antisueros provistos por el
Servicio Antígenos y Antisueros del Instituto Nacional de Produc-ción de Biológicos, ANLIS “Carlos G. Malbrán”. La diversidad genética se determinó por electroforesis en campo pulsado (PFGE) con las enzimas XbaI y BlnI según el protocolo de la Red PulseNet Internacional. Los perfiles obtenidos fueron analizados con el programa BioNumerics (Applied Maths), aplicando el co-eficiente de Dice y UPGMA. Para SE, se identificaron 13 patro-nes de XbaI-PFGE entre 164 aislamientos de origen humano, de alimentos y animales, de 16 provincias. El patrón ARJEGX01.0001 agrupó 137 (83,5%) de los aislamientos, encontrándose en todas las provincias y tipos de muestra y a través de los años. Todos los brotes estudiados en este período (n=11) fueron causados por este subtipo, que presentó además un mismo patrón con BlnI. Entre los subtipos restantes de XbaI-PFGE, 7 se encontraron sólo en aislamientos de origen humano, 3 en aislamientos humanos y de alimentos y 1 en alimentos. Para STM, se identificaron 94 patrones de XbaI-PFGE entre 543 aislamientos de 16 provincias. Se encontraron tres patrones predominantes, distribuidos en to-das las provincias: ARJPXX01.0007, con 32 aislamientos (5,9%); ARJPXX01.0065, con 43 (7,9%) y ARJPXX01.0194, con 19 (3,5%). Estos dos últimos estuvieron asociados a dos brotes cada uno. De los 94 patrones, 30 se identificaron en los cinco años, mientras que el resto sólo se presentaron en alguno de los años. Los aislamientos de STM mostraron una alta diversidad genética. En el caso de SE, la clonalidad de esta serovariedad es conoci-da mundialmente y se identificó también en el país. La Base Na-cional de PFGE de Salmonella spp. crece continuamente y el análisis de subtipos circulantes y su distribución provee una he-rramienta fundamental para la vigilancia basada en el laborato-rio, permitiendo identificar cepas emergentes, detectar y confirmar brotes, fuentes de infección y vías de transmisión. La aplicación de los protocolos estandarizados de la Red PulseNet permite además comparar los subtipos circulantes en el país con aque-llos identificados en otros países, para la vigilancia de Salmonella
spp. a nivel global.
O5 - 7821EFECTO DE INTERMEDIARIOS BIOSINTETICOS SO-BRE LA PRODUCCION DE VITAMINA B12 EN BACTERIAS LACTICAS. VANNINI, MV; DE CARVALHO, K; FONT DE VALDEZ, G; TARANTO, MP; SESMA, F
Centro de Referencia para Lactobacilos - CERELA
La cobalamina (vitamina B12 o CBL) es una macromolécula no polimérica cuya estructura contiene un anillo tetrapirrólico li-gado a un átomo de cobalto, denominado anillo de corrina. Ade-más presenta una base como ligando axial inferior, el dimetilben-zaimidazol (DMB), y un ligando superior (adenosil), ambos liga-dos al átomo de cobalto. Su síntesis es compleja, e involucra al menos 25 enzimas diferentes y se halla restringida a ciertas es-pecies bacterianas y arqueas. Estudios previos en nuestro labo-ratorio demostraron que Lactobacillus (Lb.) reuteri CRL 1098 es capaz de producir cobalamina (y su variante pseudo-CBL) y se caracterizó el operón Cob involucrado en su síntesis. Asimismo los extractos celulares (EC) de Lb. curvatus CRL 1000, Lb. coryniformis CRL 1001 y Lb. murinus CRL 1104 presentaron ac-tividad de tipo cobalamina. En base a los resultados previos, el objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de varios interme-diarios de la vía biosintética de B12 en su producción, por las di-ferentes cepas de lactobacilos previamente mencionados. Se eva-luó la producción de CBL por las cepas lácticas CRL 1098, CRL 1000, CRL 1001 y CRL 1104, en presencia de diferentes precur-sores de su síntesis: ac. aminolevulinico (ALA) (25ng/ul), porfobi-linógeno (25ng/ul), uroporfirinógeno III (25ng/ul), CoCl2 (25ng/ul), DMB (20ng/ul) y O-fosfotreonina (50ug/ul) y en medios de cultivo libres de la vitamina. Una estimación del contenido en B12 se llevó a cabo inicialmente mediante un ensayo biológico utilizando la cepa mutante en la enzima metionina sintasa independiente de cobalamina, Salmonella enterica serovar Typhimurium AR2680 (metE cbiB) y a continuación se cuantificó el nivel de la vitamina obtenida en cada una de las condiciones ensayadas empleando un inmunoensayo enzimático (RIDASCREEN-FAST Vitamin B12, R-Biopharm). Todos los ensayos fueron realizados por triplicado. Los resultados indican que Lb. reuteri CRL 1098 y Lb. coryniformis
CRL 1001 presentan los mayores niveles de producción de cobalamina (25-35 ug/L y 20-30 ug/L respectivamente) y con re-lación a los intermediarios, se observó que la adición de O-fosfotreonina incrementó la producción de la vitamina en ambas cepas, mientras que el agregado de ALA y CoCl2 afectaron posi-tivamente la producción de este compuesto por CRL 1098. El porfobilinógeno tuvo un efecto negativo en la síntesis de esta vi-tamina para ambas cepas. Los demás intermediarios no presen-taron efectos significativos sobre la biosíntesis de esta vitamina. Las cepas Lb. murinus CRL 1104 y Lb. curvatus CRL 1000 pre-sentaron valores de B12 entre 0,5 y 2 ug/L. No se observó dife-rencia significativa en la producción de vitamina B12 con el agregado de los intermediarios ensayados, lo cual podría deber-se a los bajos niveles en la producción. En vista de los resulta-dos expuestos, podemos concluir que Lb reuteri CRL 1098 y Lb coryniformis CRL 1001 son cepas potencialmente aplicables en el desarrollo de alimentos bio-enriquecidos en vitamina B12.
O6 - 27871 PREVALENCIA Y DIVERSIDAD DE Escherichia coli NO-O157 EN ARGENTINA 2000-2008. CARBONARI, C; CHINEN, I; DEZA, N; MILIWEBSKY, E; BASCHKIER, A; MANFREDI, E; D ASTEK, B; RIVAS, M
Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas - ANLIS “Carlos G. Malbrán”
Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) es un pa-tógeno emergente, asociado a enfermedad severa en humanos. STEC O157:H7 es el serotipo prevalente a nivel mundial, siendo en Argentina el principal agente causante de síndrome urémico hemolítico (SUH). Sin embargo, existen más de 200 serotipos descriptos, y en nuestro país cepas de diferentes serotipos no-O157 producen alrededor del 30% de los casos de SUH que se registran por año. Los serogrupos O26, O103, O145, O111 y O121 han sido reconocidos como un grupo de riesgo para la salud pú-blica ya que poseen el mismo potencial patogénico que O157. Con el fin de destacar la importancia de los serogrupos de rele-vancia en el país, se compararon todos los patrones de cepas STEC no-O157 obtenidos por electroforesis de campo pulsado e incorporados a la Base de Datos Nacional (n=1203) entre los años 2000 y 2008. En total, más de 50 serogrupos se encuentran in-corporados a la Base. Los cinco serogrupos prevalentes fueron los siguientes: a) O145, con 157 aislamientos que presentaron un 64,9% de similitud. El serotipo prevalente fue O145:NM (95,5%) y en menor frecuencia a O145:HNT y O145:H25, con el mismo perfil de virulencia stx2/eae/ehxA. El 97,5% de los aislamientos correspondieron a casos clínicos, y el resto a reservorios, algu-nas cepas de ambos orígenes presentaron el mismo patrón. En Argentina, STEC O145 está generalmente asociado a casos es-porádicos. Sin embargo, se describieron dos brotes y un conglo-merado de casos asociados a O145:NM. b) O8: con 58 aislamien-tos con 65% de similitud. El serotipo más frecuente fue O8:H19 (72,4%), seguido de O8:H16, O8:H21, O8:H25, O8:H7 y O8:HNT. Los aislamientos fueron de origen bovino, alimentos y humanos. Los perfiles de virulencia en orden de frecuencia fueron stx1/stx2/ ehxA/saa, stx1/stx2/ehxA y stx2/ehxA. c) O26 con 46 aislamien-tos con 65,7% de similitud. El principal serotipo fue O26:H11 (65,2%), seguido por O26:HNT, O26:NM, O26:H2, y O26:H21. El perfil genético más frecuente fue stx1/eae/ehxA. Algunas cepas aisladas de casos de SUH portaron un perfil poco frecuente: stx2/ stx2c(vh-a)/eae/ehxA. Los aislamientos fueron de origen clínico, alimentos y bovinos. Se describió un brote asociado a O26:H11. d) O113: con 36 aislamientos con 69,1% de similitud. El serotipo prevalente fue O113:H21 (83%) seguido por O113:NM, O113:HNT y O113:H7. Los aislamientos fueron de origen bovino, alimentos y casos clínicos incluyendo SUH. El perfil genético más frecuen-te fue stx2/ehxA/saa. e) O103 con 35 aislamientos con 70,5% de similitud. El principal serotipo fue O103:NM (74%) y le siguen O103:H2, O103:H25 y O103:HNT. Los aislamientos son de ori-gen bovino y casos clínicos incluyendo SUH. El perfil ori-genético más frecuente fue stx1/eae/ehxA. Se describió además un brote aso-ciado a O103:H2. Los resultados obtenidos hasta el momento en cuanto a detección en enfermedad severa, reservorios y alimen-tos, indicarían que en Argentina los serotipos STEC no-O157
re-presentan un desafío por la magnitud de la prevalencia y la im-portancia que adquiere este patógeno en Salud Pública.
O7 - 28008 Lactobacillus kefiranofaciens subsp. kefiranofaciens DE GRÁNULOS DE KÉFIR ARGENTINOS. AISLAMIENTO, IDEN-TIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN REOLÓGICA DEL PRODUC-TO FERMENTADO. HAMET, MARIA FERNANDA(1,2); LONDERO, ALEJANDRA(1); PIERMARIA, JUDITH(1,2); GARROTE, GRACIELA LILIANA(1,2); ABRAHAM, ANALIA GRACIELA(1,2)
(1) Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Ali-mentos. (2) Facultad de Ciencias Exactas, UNLP
El gránulo de kefir está constituido en un 8 % por kefiran, un exopolisacárido (EPS) producido por Lactobacillus kefiranofaciens
subsp. kefiranofaciens. Este EPS posee propiedades funcionales comprobadas, actúa como gelificante, espesante y forma pelícu-las comestibles. Además posee capacidad de proteger el epitelio y actividad inmunomodulatoria. El aislamiento de Lb. kefiranofa-ciens subsp. kefiranofaciens es dificultoso ya que es anaerobio estricto y de crecimiento lento. El objetivo del trabajo fue aislarlo de gránulos de kefir argentinos y analizar las propiedades reológicas de sus cultivos en leche. La presencia del Lb. kefiranofaciens subsp. kefiranofaciens en 9 gránulos de kefir se analizó mediante electroforesis en gel con gradiente desnatura-lizante (DGGE). Se extrajo ADN de gránulos de kefir y de las cepas de referencia Lb. kefiranofaciens subsp. kefiranofaciens
JCM 6985 y subsp. kefirgranum JCM 8572 y se amplificó con los oligunucleótidos sintéticos 518r y GC-338f. Los productos obte-nidos fueron analizados por DGGE (urea/formamida 40-60%, 16 horas, 100 Voltios y 60 °C). Las bandas coincidentes con la cepa JCM 6985 fueron cortadas, amplificadas y secuenciadas. Luego, se procedió al aislamiento mediante tres técnicas de disgregación de los gránulos: ruptura con ultraturrax, congelamiento y corte mecánico y disolución del gránulo en agua a 40 °C. A partir de cada una de las suspensiones se realizaron aislamientos direc-tos y con previo enriquecimiento (MRS pH 5 en anaerobiosis). Se obtuvieron 23 aislados que fueron caracterizados mediantes co-loración de Gram, presencia de catalasa, crecimiento en leche, producción de gas a partir de glucosa y perfil de proteínas tota-les. En base a los perfiles de proteínas se construyó un dendro-grama en el cual 8 aislados provenientes de los gránulos AGK1, 2, 3, 5 y 6 agruparon con el microorganismo buscado. Su identi-dad se confirmó mediante DGGE, secuenciación y contraste con una base de datos. Como resultado de su secuenciación se ob-tuvo una homología de 98 a 100% con Lb. kefiranofaciens subsp. kefiranofaciens. La distancia relativa recorrida por ambas susbes-pecies en los perfiles de DGGE es diferente, mostrando todos los aislados un perfil equivalente a Lb. kefiranofaciens subsp. kefiranofaciens. La evaluación reológica de las leches fermenta-das se realizó en un reómetro Haake Rheostress 600 en modo rotacional. Todas presentaron un comportamiento pseudoplás-tico con importantes áreas de histéresis. Los valores de vis-cosidad aparente a 300s-1 variaron entre 17,82 ± 1,05 y 35,96 ± 10,15 mPa.s y las áreas de histéresis entre 745,2 ± 35,64 y 1861 ± 613,77 Pa/s. Sólo dos de las cepas presentaron visco-sidad equivalente a la cepa de referencia. Es importante desta-car que es la primera vez que se aisla Lb. kefiranofaciens subsp. kefiranofaciens de gránulos de kefir argentinos que son capa-ces de fermentar la leche obteniéndose productos con diferen-tes características reológicas. Estas cepas podrían presentar po-tencialidad para su aplicación en nuevos desarrollos tecnoló-gicos.
O8 - 28068 FACTORES DE VIRULENCIA ASOCIADOS A
Es-cherichia coli PRODUCTOR DE TOXINA SHIGA. ANGEL VILLEGAS, N(1); POLIFRONI, R(2); ETCHEVERRIA, AI(2); PADOLA, NL(2); PARMA, AE(2); ALBESA, I(1); BECERRA, MC(1); PARAJE, MG(1)
(1)Departamento de Farmacia. Facultad de Ciencias Químicas, UNC. (2)Laboratorio de Inmunoquímica y Biotecnología. Facultad de Ciencias Veterinarias. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires
Introducción: Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) se asocia a brotes de diarrea, colitis hemorrágica y sín-drome urémico hemolítico (SUH). La patogenicidad está asocia-da con varios factores de virulencia, entre los que se incluyen la producción de la toxina Shiga (vt1, vt2). Las cepas más virulen-tas de STEC además poseen otros como enterohemolisina (ehxA)
e intimina (eae). Un nuevo factor de virulencia podría ser la ca-pacidad que poseen las STEC para formar biofilms, lo cual se encuentra menos caracterizado. Entre los factores importantes para la formación del biofilms se pueden mencionar a la fimbria tipo I “curlina”. Objetivo: Determinar genotípica y fenotípicamente la presencia de distintos factores de virulencia en cepas produc-toras de toxina Shiga aislada de pacientes con SUH. Materiales y Métodos: En este estudio se analizaron ocho cepas clínicas (sie-te E.coli O157:H7 y una O111:H-) provistas por Hospitales pediátricos de Córdoba y una cepa de referencia (EDL 933). Aná-lisis Genotípico: la presencia de los genes que codifican para los factores de virulencia (vt1, vt2, ehxA, eae) y para la proteína curlina (csgD, csgA y crl) se estudiaron mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Análisis Fenotípico: mediante un Inmunoensayo óptico (OIA SHIGATOX) se estudió la expresión de las toxinas Shiga 1 y/o 2. La expresión de la curlina se anali-zó mediante Rojo Congo. La capacidad de formar biofilms de las cepas de E.coli se determinó mediante la adhesión a placas de poliestireno de 96 wells y su posterior coloración con cristal vio-leta determinando la densidad óptica a 595 nm. Resultados: Me-diante el análisis genotípico se observó la presencia de los genes
vt1, vt2, ehxA, eae, csgD, csgA y crl en todas las cepas estudia-das, excepto en la E.coli O111 que no presentó el gen vt2 que codifica para la toxina Shiga 2. En cuanto al análisis fenotípico, todas las cepas expresaron ambas toxinas en el sobrenadante de cultivo, excepto E.coli O111 (solo Shiga 1). Cuando se realizó la determinación de curlina se apreció el desarrollo de colonias li-sas y rosadas, interpretándose este resultado como negativo. Todas las cepas estudiadas fueron débiles formadoras de biofilms, presentando valores entre 0,15 y 0,25 de densidad óptica. Con-clusiones: las cepas regionales aisladas de pacientes con SUH presentaron la co-expresión de diversos factores de virulencia, tanto genotípica como fenotípicamente. En cuanto a la capacidad de las cepas de formar biofilms, si bien se observó la presencia de los genes que codifican para la fimbria tipo I, no se obtuvieron las características colonias negras indicativas de la expresión de la proteína. Asociado a lo antes mencionado, todas las cepas en estudio mostraron una débil formación de biofilms in vitro lo que parece indicar que los genes que codifican la formación necesi-tan condiciones in vitro no requeridas para que otros factores de virulencia se expresen.
VIROLOGÍA
O9 - 27088 EFECTO DE LA PROTEÍNA X DEL VIRUS HEPATI-TIS B (HBV) SOBRE LA SUPERFAMILIA DE TRANSPORTADO-RES ABC: UN NUEVO ROL EN LA PATOGÉNSIS VIRAL. CUES-TAS, ML(1); RIVERO, C(1); ROSSO, N(2); GENTILE, E(3); CASTI-LLO, A(3); MINASSIAN, ML(1); ANDREETTA, A(1); TRINKS, J(1); TIRIBELLI, C(2); OUBIÑA, JR(1); MATHET, V(1)
(1) CONICET, (2) Centro Studi Fegato, (3) Laboratorio De Hepatitis
Introducción: Los carcinomas hepatocelulares (HCC) represen-tan el 4% de los tumores de todo el mundo siendo la quinta cau-sa de cáncer en el hombre. Cerca del 80% de los pacientes con este cáncer se encuentran crónicamente infectados con HBV. La proteína X de HBV desempeña un rol principal en la oncogénesis hepática. Las mutantes K130M y V131I exhiben una actividad transactivadora mayor que la salvaje, contribuyendo significa-tivamente a la hepatocarcinogénesis. Las proteínas ABC son bom-bas transmembrana que transportan sustratos en contra del gradiente de concentración, utilizando la hidrólisis de ATP. Su sobreexpresión está asociada a la resistencia a múltiples drogas, a la inhibición de la vía intrínseca de la apoptosis y al cáncer. Objetivo: Analizar el efecto de la expresión de las proteínas X salvaje y mutada de HBV sobre los niveles de ARNm y sobre los
niveles de expresión de diversas proteínas ABC. Materiales y Métodos: Se transfectaron transitoriamente células HeLa y Huh7 con plásmidos que codificaban para la proteína X salvaje y mutada (K130M/V131I) de HBV. Al cabo de 24 h se les evaluó mediante RT-PCR en tiempo real la variación en la expresión relativa de los genes que codifican para las proteínas ABC BCRP, MDR1, MRP1 y MRP2. La detección de la expresión de dichas proteínas se realizó mediante Western blot utilizando anticuerpos mono-clonales específicos. Resultados: En las células HeLa se eviden-ció: 1) una disminución en la expresión del gen mrp1 debido a la expresión de la proteína X salvaje; 2) un incremento en la expre-sión de los genes bcrp y mrp2 debido a la expreexpre-sión de la proteí-na X mutada; 3) No se documentó variación en la expresión de mrp1 debido a la proteína X mutada, ni de bcrp y mrp2 debido a la proteína X salvaje. En las células Huh7 se evidenció: 1) un aumento en la expresión de los genes mrp1 y mrp2 debido a la expresión de la proteína X mutada; 2) un incremento en la expre-sión del gen bcrp debido a la expreexpre-sión de la proteína X salvaje; 3) no se observó variación en la expresión del gen mdr1 por la proteína X salvaje ni por la mutada, ni de bcrp por la mutada ni de mrp1 y mrp2 por la salvaje. Los resultados en el Western blot se correlacionaron con los de RT-PCR en tiempo real. Conclusio-nes: Al estudiar el efecto de las proteínas X salvaje y mutada sobre los niveles de ARNm correspondientes a los genes bcrp, mdr1, mrp1 y mrp2 por RT-PCR en tiempo real, se observó un comportamiento dependiente de la estirpe celular estudiada (hepatocitaria vs epitelial) y de la naturaleza salvaje o mutada de la proteína X. Merece especial consideración la observación de un aumento en los niveles de expresión de los genes mrp1, mrp2 y bcrp en células Huh7, con potenciales nuevas implicancias en la oncogénesis hepática y en la resistencia a drogas antivirales y antitumorales.
O10 - 27686 ORIGEN Y DIVERSIFICACIÓN DEL VIRUS DE LA HEPATITIS C GENOTIPO 2C EN CÓRDOBA, REPÚBLICA AR-GENTINA. CULASSO, ACA(1); RE, V(2); CONTINGIANI, M(2); CAMPOS, RH(1)
(1) Cátedra de Virología Fac. de Farmacia y Bioquímica, UBA. (2) Instituto de Virología Dr. J. M. Vanella Fac. Ciencias Médicas, UNC
La infección crónica con el virus de la hepatitis C (HCV) está asociada a patologías hepáticas severas. El HCV se clasifica taxonómicamente en genotipos 1 a 6 y subtipos a, b, c, etc. Los HCV-1, 2 y 3 son cosmopolitas. Los subtipos de HCV-2 son co-munes en África occidental y en el sur de Europa. El HCV-2c es ubicuo como genotipo minoritario pero en Italia es el segundo en prevalencia (después del 1b). En la provincia de Córdoba se de-tecta HCV-2c en 50% de las infecciones e incluso en Cruz del Eje es el principal genotipo (90%). El objetivo de este trabajo es el estudio del origen y la diversificación del HCV-2c en la provincia de Córdoba utilizando análisis filogenéticos y de coalescencia. Se analizaron 92 muestras de suero de personas de Cruz de Eje (positivas para HCV) en un estudio epidemiológico previo (año 2004) y 53 muestras de suero de pacientes concurrentes al Ser-vicio de Virología del Instituto Dr J. M. Vanella desde distintos puntos de la provincia de Córdoba. A partir del ARN viral del suero se realizó una reacción de RT-PCR anidada para amplificar un fragmento de 367 pb de la región NS5B que luego fue secuenciado de manera directa. Análisis filogenéticos: las secuen-cias obtenidas y otras provenientes de África y Europa (Genbank) se analizaron por métodos de Distancia (MEGA 4), Máxima Ve-rosimilitud (PhyML 3.0) y Parsimonia (TNT). Análisis de Coales-cencia: se infirió por métodos Bayesianos la edad del ancestro común más reciente y la demografía del HCV-2c (BEAST 1.4.8) calibrando un reloj molecular relajado con una tasa de 5x10-4
sus-tituciones por sitio por año. Como resultado, los tres métodos filogenéticos reprodujeron una topología en donde todas las mues-tras cordobesas junto con las europeas (Francia e Italia, princi-palmente) y las africanas conforman un único grupo sin subgrupos internos. El análisis de coalescencia se realizó sobre tres grupos de secuencias: Cruz del Eje (CdE), otras ciudades cordobesas (OCC) y Francia. La edad estimada de los ancestros comunes
para los tres grupos fue de ~150 años (~1860 D.C.) y en todos los casos el modelo demográfico presentó su fase exponencial entre 1890 y 1950. La filogenia sugiere la ausencia de diversidad asociada al espacio geográfico (no hubo subgrupos de secuen-cias de CdE, de OCC ni de Francia o de Italia), compatible con un proceso de diversificación reciente. El crecimiento exponencial observado en la demografía de los tres grupos de secuencias analizados coincide con la emergencia mundial de otras infeccio-nes, como HCV-1b y con el proceso de “globalización” de princi-pios del siglo XX (transfusiones, uso de inyectables, migraciones masivas, tránsito, drogadicción). El análisis filogenético y de coalescencia, la epidemiología y la historia inmigratoria sugieren que los HCV-2c detectados en CdE y OCC serían el resultado de la introducción del virus desde Italia durante el proceso migrato-rio de 1880-1920. Luego de la migración de los ancestros, se pro-dujo un fenómeno de diversificación simultáneo en cada espacio geográfico como consecuencia del proceso de “globalización”. Sin embargo, se observó la falta de identidad geográfica debido a la intensa corriente migratoria Italia-Argentina o a que aún no se ha cumplido el tiempo necesario para producir este fenómeno.
O11 - 27276 DESARROLLO DE UN CANDIDATO VACUNAL CONTRA HERPESVIRUS BOVINO BASADO EN UN VIRUS VACCINIA ANKARA RECOMBINANTE. FERRER, M FLORENCIA (1,2); DEL MEDICO ZAJAC, M PAULA (1); CALAMANTE, GABRIELA(1)
(1) Instituto de Biotecnología CICVyA-INTA Castelar, (2) CONICET
Los poxvirus se utilizan eficientemente como vacunas segu-ras y efectivas contra enfermedades infecciosas. En particular, los poxvirus recombinantes se evaluaron en numerosos ensayos clí-nicos de vacunas contra el cáncer, malaria, tuberculosis y sida. La cepa MVA (virus vaccinia Ankara modificado) es una cepa del virus vaccinia altamente atenuada, que no replica en la mayoría de las células de mamíferos, siendo un buen candidato para el desarrollo de vacunas a virus vivo no replicativo. El fenotipo ate-nuado de MVA es el resultado de numerosas mutaciones que particularmente afectaron a las proteínas que interactúan con el hospedador, a los genes con motivos tipo anquirina y a algunas proteínas estructurales. La infección con herpesvirus bovino de tipo 1 (BoHV-1) puede producir conjuntivitis, neumonía, desórde-nes genitales, abortos y una infección en el tracto respiratorio superior denominada fiebre del transporte. Para controlar las en-fermedades causadas por BoHV-1 es necesario disponer de va-cunas efectivas y que permitan diferenciar animales naturalmen-te infectados de animales vacunados. El objetivo de esnaturalmen-te trabajo es la evaluación de un inmunógeno basado en MVA capaz de expresar in vivo la glicoproteína D de BoHV-1. Primeramente, se construyó un vector de transferencia (VT) que porta las secuen-cias de interés (genes gDs y uidA bajo regulación de promotores tempranos de poxvirus) flanqueadas por regiones correspondien-tes al gen viral MVA086R. Los virus MVA-gDs se obtuvieron por recombinación homóloga in vitro entre el VT y el genoma viral, y se aislaron por su capacidad de formar placas de lisis azules en presencia del sustrato X-Gluc. Mediante análisis molecular se confirmó la correcta expresión, antigenicidad y N-glicosilación de la glicoproteína D expresada a partir de dichos virus. posterior-mente, se evaluó la capacidad inmunogénica de los virus MVA-gDs en animales de experimentación, determinando la presencia de anticuerpos específicos anti-gD mediante ELISA. En el mode-lo de ratón, se observó que mode-los virus MVA-gDs desencadenaron una respuesta inmune humoral específica que se mantuvo en ni-veles similares durante un período de siete meses. Además, se demostró que la síntesis de novo de la glicoproteína D a partir del vector viral no replicativo MVA-gDs fue la responsable de la inducción de dicha respuesta. La inoculación de conejos con MVA-gDs desencadenó una respuesta inmune humoral específica ob-servándose la máxima respuesta a los 9 días post dosis refuer-zo. En un ensayo de desafío de conejos con BoHV-1, se observó que la inmunización por vía intramuscular con virus MVA-gDs dis-minuyó la cantidad de animales que excretaron el virus de desa-fío. Finalmente, se demostró que la inmunización de ratones por vía intranasal con virus MVA-gDs, combinado con toxina
coléri-ca, indujo respuestas inmunes humorales específicas de tipo IgA en muestras de lavados nasales y broncopulmonares y de tipo IgG en muestras de suero. Los virus recombinantes MVA-gDs pueden ser utilizados como inmunógenos en animales de experimenta-ción con el propósito de desencadenar respuestas inmunes es-pecíficas a nivel sistémico y de mucosas. En el futuro, su utiliza-ción como vacuna contra el virus BoHV-1 se evaluará en bovinos.
O12 - 27596 DETERMINACIÓN DE LINAJES MITOCONDRIALES EN MUJERES CAUCÁSICAS RESIDENTES DE LA PROVINCIA DE MISIONES Y SU RELACIÓN CON LA INFECCIÓN POR VI-RUS PAPILOMA HUMANO (HPV). BADANO, INES(1); RUBINSTEIN, SAMARA(2); SCHURR, THEODORE(2); PICCONI, ALEJANDRA(3); CAMPOS, RODOLFO(4); LIOTTA, JAVIER(1)
(1) Laboratorio de Biología Molecular Aplicada. Universidad Na-cional de Misiones; (2) Department of Anthropology, University of Pennsylvania. EEUU; (3) Servicio Virus Oncogénicos, INEI-ANLIS “Dr. Carlos Malbran”; (4) Cátedra de Virología, Facultad de Far-macia y Bioquímica, UBA.
La relación entre el origen étnico, la infección genital por vi-rus papiloma humano (HPV) y el desarrollo del cáncer cervical ha sido sugerida por algunos autores. Estudios epidemiológicos en comunidades multiétnicas de los EEUU atribuyeron estas diferen-cias a la baja cobertura médica en minoridades socio-culturales (principalmente afroamericanos y amerindios). Sin embargo es-tos trabajos clasificaron las pacientes en base a los apellidos, la coloración de la piel y la auto-denominación étnica. El valor predictivo de estas características puede ser bajo en poblaciones mezcladas, como las latinoamericanas. Los marcadores mole-culares ofrecen una herramienta útil para identificar el componente étnico de los individuos, siendo el ADN mitocondrial (ADNmt) uno de los más ampliamente utilizados. La provincia de Misiones po-see una de las tasas de mortalidad por cáncer más altas del país y una prevalencia de infección por HPV del 40% para población femenina asintomática. Estas diferencias han sido atribuidas a un menor acceso al sistema de salud por parte de las mujeres de la región, y a sus rasgos socio-culturales y demográficos especia-les. Sin embargo las características genéticas no han sido explo-radas. Con el fin de identificar potenciales marcadores molecu-lares de susceptibilidad, se procedió a la caracterización genética (ADNmt) de mujeres caucásicas de la región. Se analizaron 140 mujeres (66 infectadas y 74 negativas) que no manifestaron as-cendencia indígena. Los linajes mitocondriales se determinaron por PCR y secuenciación de la (HVS-1) de la mitocondria. Como blanco de amplificación se empleó ADN extraído de cepillados cervicales. El posible rol del ADNmt como factor de riesgo en la infección por HPV fue establecido mediante análisis de OR. Re-sultados: Los linajes mitocondriales indicaron un patrón tri-híbri-do para la muestra, con un 72% de aporte amerindio; 23% euro-peo y 5% africano. Las infecciones por HPV fueron más frecuen-tes en mujeres portadoras de ADNmt amerindio comparadas con aquellas que presentaban ADNmt europeo (OR 1.8 IC95% 0,8-4). Los linajes africanos fueron excluidos del análisis debido a sus bajas frecuencias. Una de las características más significativas de Misiones es su composición poblacional multiétnica; esto se atri-buye a factores diversos, entre ellos su ubicación geográfica, la presencia de indígenas Guaraníes, las sucesivas corrientes inmigratorias europeas y más recientemente los fenómenos de migraciones internas y con países vecinos. Este escenario se constituye en un modelo epidemiológico particular, que permite evaluar marcadores genéticos asociados a su población. En este contexto, la frecuencia de linajes amerindios de ADNmt ha sido mayor que la reportada para ciudades como La Plata y Córdoba (40%). La potencial asociación entre el linaje amerindio y la infec-ción cervical por HPV deberá ser confirmada mediante un diseño de casos y controles. Financiado por ANPCyT (PICTR 311/2).
O13 - 27600 ACTIVIDAD ANTI-HIV DE NUEVAS PRODROGAS DE DIDANOSINA (DDI). TURK, GABRIELA(1); DECANDIA, CRISTIAN(1); RAVETTI, SOLEDAD(2); GUALDASI, MARIA SOLE-DAD(2); PAMPURO, SANDRA(1); BRIÑON, MARIA CRISTINA(2); SALOMON, HORACIO(1)
