Norma Española
UNE-EN 17049
Septiembre 2018
Alimentos para animales: Métodos de muestreo y análisis
Identificación de tilosina, espiramicina, virginiamicina, carbadox y olaquindox en cantidades subaditivas en piensos compuestos
Análisis de confirmación mediante LC-MS
Esta norma ha sido elaborada por el comité técnico CTN 34 Productos alimentarios, cuya secretaría desempeña FIAB.
Asociación Española de Normalización Génova, 6 - 28004 Madrid 915 294 900
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EXTRACTO DEL DOCUMENTO UNE-EN 17049
UNE-EN 17049
Alimentos para animales: Métodos de muestreo y análisis
Identificación de tilosina, espiramicina, virginiamicina, carbadox y olaquindox en cantidades subaditivas en piensos compuestos
Análisis de confirmación mediante LC-MS
Animal feeding stuffs: Methods of sampling and analysis. Identification of tylosin, spiramycin, virginiamycin, carbadox and olaquindox at sub-additive levels in compound feed. Confirmatory analysis by LC-MS.
Aliments des animaux : Méthodes d’échantillonnage et d’analyse. Identification de la tylosine,
spiramycine, virginiamycine, du carbadox et de l’olaquindix dans les aliments composés pour animaux à des concentrations inférieures à celles des additifs. Analyse de confirmation par LC-MS.
Esta norma es la versión oficial, en español, de la Norma Europea EN 17049:2018.
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EXTRACTO DEL DOCUMENTO UNE-EN 17049 Índice
Prólogo europeo ... 7
1 Objeto y campo de aplicación ... 8
2 Normas para consulta ... 8
3 Principio ... 8
4 Reactivos y materiales ... 8
4.1 Generalidades ... 9
4.2 Materiales y reactivos ... 9
4.2.1 Acetonitrilo (de calidad adecuada para LC-MS) ... 9
4.2.2 Metanol (de calidad adecuada para LC-MS) ... 9
4.2.3 Ácido fórmico (de calidad adecuada para LC-MS) ... 9
4.2.4 Tilosina ... 9
4.2.5 Espiramicina ... 9
4.2.6 Virginiamicina ... 9
4.2.7 Carbadox ... 9
4.2.8 Olaquindox ... 9
4.3 Disoluciones ... 9
4.3.1 Fase móvil A para HPLC: 5 mM de ácido fórmico ... 9
4.3.2 Fase móvil B para HPLC: 50 mM de ácido fórmico /acetonitrilo (10/90, v/v) ... 9
4.4 Disoluciones patrón... 9
4.4.1 ... 9
4.4.2 Disolución madre de espiramicina (500 μg/ml) ... 9
4.4.3 Disolución madre de virginiamicina (500 μg/ml) ... 10
4.4.4 ... 10
4.4.5 ... 10
4.4.6 Disolución mixta madre n° 1 ... 10
4.4.7 Disolución mixta madre n° 2 ... 10
4.4.8 Patrón de calibración ... 10
5 Aparatos ... 10
6 Toma de muestras ... 11
7 Preparación de la muestra ... 12
7.1 Tratamiento previo de la muestra ... 12
7.2 Muestras de control de calidad ... 12
7.3 Extracción de la muestra ... 12
7.4 Purificación de la muestra ... 12
7.5 Preparación de la muestra para LC-MS/MS ... 12
7.6 Control de confirmación ... 13
8 Análisis mediante LC-MS/MS ... 13
8.1 Generalidades ... 13
8.2 Condiciones experimentales de LC-MS/MS ... 13
8.3 Ensayo inicial ... 13
8.4 Análisis de las muestras ... 13
9 Procesamiento de los datos e interpretación de los resultados... 14
9.1 Procesamiento de los datos ... 14
9.2 Registro y cálculo de los parámetros de identificación ... 14
10 Criterios de aceptación de los resultados analíticos ... 15
10.1 Generalidades ... 15
10.2 Aceptación de la serie ... 15
10.3 Identificación del analito ... 15
10.3.1 Generalidades ... 15
10.3.2 Criterio del tiempo de retención... 15
10.3.3 Criterio de la proporción entre iones ... 15
11 Informe del ensayo ... 16
Anexo A (Informativo) Resultados del estudio inter-laboratorios ... 17
A.1 Procedimiento ... 17
A.2 Materiales ... 17
A.3 Análisis estadístico de los resultados ... 19
A.4 Resultados e interpretación. Precisión ... 20
Anexo B (Informativo) Formulario de aceptación de muestras y series ... 28
Anexo C (Informativo) Análisis cuantitativo ... 29
C.1 Generalidades ... 29
C.2 Procedimiento de análisis cuantitativo ... 29
C.2.1 Tratamiento previo de la muestra para el análisis cuantitativo ... 29
C.2.2 Muestras de control de calidad ... 29
C.2.3 Extracción de la muestra ... 30
C.2.4 Purificación de la muestra ... 30
C.2.5 Preparación de la muestra para LC-MS/MS ... 30
C.2.6 Control de recuperación ... 30
C.2.7 Control de confirmación ... 31
C.2.8 Análisis mediante LC-MS/MS ... 31
C.2.8.1 Condiciones experimentales de LC-MS/MS ... 31
C.2.8.2 Ensayo inicial ... 33
C.2.8.3 Análisis de las muestras ... 33
C.3 Procesamiento de los datos e interpretación de los resultados... 33
C.3.1 Procesamiento de los datos ... 33
C.3.2 Registro y cálculo de los parámetros de identificación ... 33
C.3.3 Cálculo de la cantidad de analito en la muestra ... 34
C.3.4 Cálculo del porcentaje de recuperación ... 34
C.4 Criterios de aceptación de los resultados analíticos ... 34
C.4.1 Generalidades ... 34
C.4.2 Aceptación de las series ... 34
C.4.3 Identificación del analito ... 35
C.4.3.1 Generalidades ... 35
C.4.3.2 Criterio del tiempo de retención... 35
C.4.3.3 Criterio de la proporción entre iones ... 35
C.5 Notas sobre el procedimiento ... 36
C.5.1 Influencia de la supresión de la ionización ... 36
C.5.2 Comentarios sobre la exactitud de cuantificación ... 36
C.5.3 Comentarios sobre la importancia de la tasa de recuperación ... 36
Anexo D (Informativo) Formulario de aceptación de muestras y series ... 37
Bibliografía ... 38
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1 Objeto y campo de aplicación
Esta norma europea especifica un método identificación de tilosina, espiramicina, virginiamicina, carbadox y olaquindox en piensos para animales mediante cromatografía líquida de alta resolución combinada con espectrometría de masas en tándem(LC-MS/MS).
El método resulta adecuado para la identificación de bajas concentraciones de tilosina, espiramicina, virginiamicina, carbadox y olaquindox en piensos compuestos para animales. Utilizando el método descrito, debería alcanzarse un límite de identificación de 1 mg/kg para tilosina, espiramicina y virgi- niamicina, de 4 mg/kg para carbadox y de 3 mg/kg para olaquindox. El método se validó completa- mente durante un estudio colaborativo (véase el anexo A).
Dado que la tilosina, la espiramicina y la virginiamicina corresponden a productos de fermentación consistentes en una mezcla de compuestos estrechamente relacionados, el análisis se basa en la detección e identificación de los constituyentes más abundantes. Para la tilosina, el marcador es la tilosina A, para la espiramicina los marcadores son espiramicina I y II y para la virginiamicina, los marcadores son virginiamicina M1 y S1. El resto de isómeros y formas se pueden detectar fácilmente con el mismo método, pero es necesario ajustar los parámetros de espectrometría de masas en función de las masas moleculares de los iones precursores y de los iones producto. El carbadox y el olaquindox se analizan tal cual.
2 Normas para consulta
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