Resistencia a brucelosis evaluada por desafío infeccioso in vitro e in vivo y su efecto sobre los niveles de Interferon? en una población de la raza bovina criolla colombiana bon

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(1)IX Simposio Iberoamericano sobre Conservación y Utilización de recursos Zoogenéticos. RESISTENCIA A BRUCELOSIS EVALUADA POR DESAFÍO INFECCIOSO IN VITRO E IN VIVO Y SU EFECTO SOBRE LOS NIVELES DE INTERFERONγ EN UNA POBLACIÓN DE LA RAZA BOVINA CRIOLLA COLOMBIANA BON. Martínez S1., Toro R1., Tobón1., Gallego J1. Dunner S2., Cañón J2. 1. Corporación Colombiana de Investigación Agropecuaria CORPOICA, Grupo de Recursos Genéticos y Biotecnología Animal., 2 Universidad Complutense de Madrid, Facultad de Veterinaria, Departamento de Producción Animal. RESUMEN En este trabajo se evaluó el comportamiento para resistencia/susceptiblidad a brucelosis de una población de animales de la raza criolla BON, producto del cruzamiento de animales clasificados como resistentes y susceptibles, y animales de la raza Cebú Brahman (CEBU), los cuales fueron evaluados por desafío in vitro e in vivo, y se determinó la posible asociación entre este y polimorfismos tipo SNP localizados en secuencias codificantes del gen Slc11a1, además se determinó las variaciones en los niveles de IFN gamma (IFNγ) en animales BON y Cebú infectados in vivo. Se encontró que el carácter de resistencia/tolerancia a brucelosis evaluado por desafío infeccioso in vitro, presentó un componente genético aditivo elevado. Además, los resultados que se presentan indican una asociación significativa entre la capacidad de control de la supervivencia bacteriana y el polimorfismo tipo SNP ubicado en el exón 10 (p<0,05).. SUMMARY In this report was evaluated the resistance/susceptibility to Brucellosis using an in vitro and in vivo challenge, in a population, generated by crossing animals classified as resistant (R) and susceptible (S) (R x R, R x S, S x R, S x S),. Also, was evaluated the association between a SNPs identified in the coding region of Slc11a1 gene and the resistance/ susceptibility were estimated. Moreover, was established their effects on the Interferon gamma levels (IFNγ) in BON and Zebu animals in vivo infected. The trait resistance or susceptibility to brucellosis, evaluated by in vitro challenge, showed a high heritable component in terms of additive genetic variance. Results also indicated the presence of an association (p<0.05) between the control of bacterial survival and two polymorphisms (a 3’UTR and a SNP4 located in exon 10) polymorphisms. Key words: Brucellosis, ganado criollo, inmunología, genética. INTRODUCCION Para los sistemas de producción extensivos con bajos insumos, muy comunes en el trópico y en los países menos desarrollados, son los que tienen mayores incentivos para llevar a cabo procedimientos de mejora genética para resistencia a enfermedades. (Gibson y Bisop, 2005). En los últimos 60 años, la vacunación ha sido el método de elección para el control de la infección. Se ha demostrado que la cepa 19 de Brucella abortus (S19) en bovinos es una vacuna efectiva. 683.

(2) 684. Facultad de Ciencias Agrarias | UNLZ. aunque, sin embargo, presenta algunos inconvenientes como que i) también resulta infecciosa para los humanos (Meyer, 1985), ii) la protección obtenida no siempre es absoluta y depende del desafío, iii) que las pruebas serológicas no siempre permiten diferenciar entre animales infectados y animales con anticuerpos consecuencia de la vacunación (Moriyon et al., 2004), lo que hace difícil diferenciar de la infección en campo (Nielsen et al., 2007). Por último, un aspecto importante para el análisis de los resultados de este trabajo es que la cepa S19 de la Brucella abortus puede producir abortos en vacas adultas vacunadas (cerca del 1% dependiendo del estado de gestación), y serios problemas genitales en toros adultos, por tener completamente desarrollados los órganos diana para la colonización de la bacteria (Moriyon et al., 2004; Nicoletti, 1990). Por ello, se consideró que un desafío infeccioso in vivo con la cepa S19, podría ser también un indicador de la susceptibilidad/resistencia a la brucelosis. El presente estudio, tuvo como fin evaluar el comportamiento para resistencia/susceptiblidad a brucelosis mediante estudios de desafío in vitro e in vivo en una población de animales de la raza criolla BON, y la raza Cebú Brahman, para determinar el efecto de varios polimorfismos tipo SNP, localizados en secuencias codificantes del gen Slc11a1 y su asociación con los niveles de interferon gamma.. MATERIALES Y METODOS Población y selección de animales: En total se utilizaron 276 animales de las razas BON (Blanco Orejinegro) (n=228) y CEBU (Cebú Brahman) (n=47), para la evaluación de desafío infeccioso in vitro, que se realizó en dos fases. Un primer grupo se evaluó en una población inicial de animales de la raza BON, de la cual se seleccionaron padres que tuvieron fenotipo resistente y padres de fenotipo susceptible, determinado mediante evaluación de desafío infeccioso in vitro. Posteriormente, a partir de esta población se seleccionaron los padres más resistentes y más susceptibles que se cruzaron entre si: Resistente x Resistente, Resistente x Susceptible, Susceptible x Resistentes, Susceptible x Susceptible. Los hijos de estos cruces fueron utilizados para el desafío infeccioso in vitro, que corresponde al segundo grupo de evaluación. Se seleccionaron cuatro padres de cada grupo y se aparearon con un total de 95 hembras. En total se obtuvieron 95 crías de las cuales fueron utilizadas para subsiguiente evaluación de desafío infeccioso in vitro en un total de 70 animales. Además se evaluaron mediante desafío infeccioso in vivo e in vitro 40 animales, de 6 grupos de medios hermanos, de la raza Cebú Brahman (CEBU), para los cuales se realizaron evaluaciones de titulos de anticuerpo pos infección y se determinaron los niveles de Interferon gamma (IFNγ) en suero. Desafío infeccioso in vitro: El desafío infeccioso in vitro para la selección de animales resistentes y susceptibles se realizó mediante infección de macrófagos cultivados in vitro, siguiendo la metodología de Price et al. (1990), descrita por Martínez et al., (2008b). Se estimó la supervivencia bacteriana (rSOB24h) como la raíz de las Unidades Formadoras de Colonia (UFC) a las 24 horas ó como el número de bacterias a las 24 horas post-infección (NBT24) con respecto al número de bacterias a las 0 horas NBT0. En total se tienen registros de 274 animales, que fueron evaluados para la capacidad de control de supervivencia bacteriana en las razas BON y CEBU. Esto permitió clasificar los animales como fenotipo restrictivo ó resistentes, aquellos que son capaces de controlar la supervivencia bacteriana (rSOB24h< 10) y permisivos ó susceptibles aquellos que permiten la replicación de la Brucella y presentan un mayor valor de supervivencia bacteriana a las 24 horas con respecto a las 0 horas (por tanto rSOB24h> 10). Protocolo de desafío infeccioso in vivo: Los trabajos de desafío infeccioso in vivo se realizaron en La Estación Experimental El Nus, situado en el nordeste del departamento de Antioquia, Colombia. En este trabajo se utilizaron animales de la raza BON previamente evaluados por su capacidad para controlar la supervivencia bacteriana in vitro, (Metodología descrita por Price et al., 1990), y clasificados como permisivos ó restrictivos y de los que se seleccionaron 10 animales de cada grupo. Además de evaluar 10 animales de la raza Cebú Brahman, con edades entre 18 y 28 meses, los cuales.

(3) IX Simposio Iberoamericano sobre Conservación y Utilización de recursos Zoogenéticos. no habían sido previamente vacunados, ni expuestos al agente infeccioso. Previamente por ELISA competitiva (ELISA-c) se comprobó, la seronegatividad para anticuerpos contra Brucella abortus, La bacteria fue suministrada por la empresa oficial de producción de vacunas (VECOL, Colombia), y corresponde a la Cepa S19 de Brucella abortus. Los animales fueron infectados experimentalmente, mediante inoculación conjuntival con 500 μl de una suspensión que contenía 3x109 Unidades formadoras de colonia (UFC) /ml de Brucella abortus (Cepa 19) (250 μl en cada ojo). Después de la infección se realizaron tomas de muestras de sangre para la determinación de producción de anticuerpos específicos de respuesta al desafío, mediante la metodología de ELISA-c. usando un kit Svanovir™ Brucella-Ab ELISA-c kits (Svanova Biotech AB Uppsala, Sweden). El umbral para determinar la seropositividad fue establecido de acuerdo con las recomendaciones del fabricante (≥40%), con títulos de anticuerpos registrados como porcentajes de inhibición (PI) Este procedimiento se evaluó la magnitud y la persistencia de anticuerpos anti-brucella a los 15, 30, 60 y 90 días post-infección. Se estimaron las diferencias entre animales catalogados como resistentes y susceptibles en ambas razas BON y Cebú Brahman, Todos los animales fueron Genotipados para los polimorfismos SNP presentes en la secuencia codificante del gen Slc11a1. se genotiparon para cuatro polimorfismos del tipo SNP localizados en el gen Slc11a1 previamente descritos por Martínez et al. (2008a). Los fragmentos de amplificación utilizados para la detección de SNPs en regiones codificantes del gen Slc11a1 en bovinos fueron: SNP4 (p.D321N), SNP5 (p.P356A), 3ÙTR (GT)10/(GT)12. SNP6 (p.Q542del). Se utilizó la técnica de ELISA indirecta para determinación de niveles de interferon gamma, mediante el uso de un kit comercial (Recombinant interferon-gamma r- IFN-y) (Sigma; St. Louis, USA). Análisis de la información: Para la evaluación de desafío infeccioso in vitro, las variables de interés fueron el número de bacterias fagocitadas, evaluado como número de bacterias a tiempo cero (NBTO), y el índice de supervivencia bacteriana (rSOB24h) descrito anteriormente. Para el desafío infeccioso in vivo, la variable dependiente fue el valor del porcentaje de inhibición, que corresponde al título de anticuerpos anti-brucella determinado por ELISA competitivo en muestras tomadas a los 15, 30, 60 y 90 días post-infección. Además, se calcularon componentes de varianza y el valor de la heredabilidad para el carácter rSOB24h para la población de animales de la raza BON. Para el cálculo de los componentes de varianza y parámetros genéticos, se utilizó el programa DFREML (Derivative Free Restricted Maximum Likelihood; Meyer 1988), Para contrastar la existencia de asociación entre los polimorfismos SNP y las características fenotípicas se utilizó la prueba no paramétrica de Kruskal wallis, mediante el procedimiento Npar1way de SAS (SAS, North Carolina USA, 2004). Además, para el análisis de títulos de anticuerpo se ajustó un modelo mixto con medidas repetidas, que incluyó como efectos fijos la raza, la clasificación, el grupo, y el genotipo y como efectos aleatorios el animal. Para esto se utilizó el procedimiento Mixed del programa SAS (North Carolina USA, 2004) .. RESULTADOS Para determinar el componente genético de la resistencia/susceptibilidad a brucelosis en ganado bovino, se realizó inicialmente la determinación de fenotipos para rSOB24h (capacidad de control de la supervivencia bacteriana in vitro), evaluados en macrófagos obtenidos de una población de animales de la raza Criolla BON, de la cual se seleccionaron padres y madres clasificados como fenotipo resistente (R) y fenotipo susceptible (S), que se utilizaron para hacer cruces dirigidos y obtener grupos de animales R x R, R x S, S x R y S x S, para tener poblaciones segregantes con las que poder estudiar el control genético del carácter.. 685.

(4) 686. Facultad de Ciencias Agrarias | UNLZ. En este trabajo se encontró que el 38% de los individuos originados de cruces de animales R x R, tuvieron un fenotipo que podría catalogarse como resistente, y presentaron un valor bajo de rSOB24h (7,72±2,89), similar al presentado por los animales resistentes obtenidos en los cruces de R x S ó S x R (5,79±3,23 y 6,70±3,26 respectivamente), en los que también se acerca al 42% de individuos con fenotipo resistente. Por el contrario, como se esperaba, el 75% de los individuos producto del cruce de animales S x S resultaron con un fenotipo susceptible, con un elevado valor de supervivencia bacteriana (22,71±6,75) (tabla 1.). Tabla 1. Número y porcentaje de animales resistentes y susceptibles y valor del parámetro rSOB24h en función de grupo de apareamiento Grupo de apareamiento RXR RXR RXS RXS SXR SXR SXS SXS. Clasificación R S R S R S R S. No. de animales 8 13 6 8 4 5 6 18. %* 38,10% 61,90% 42,86% 57,14% 44,44% 55,56% 25,00% 75,00%. rSOB24h 7,72±2,89 20,78±9,32 5,79±3,23 22,71±6,75 6,70±3,26 16,91±4,40 8,84±1,56 22,64±9,79. S(susceptible), R(Resistente), * Porcentaje de animales de cada clasificación por grupo de apareamiento . Estos resultados están de acuerdo con Templeton et al. (1990) y Adams y Templeton, (1998), quienes han determinado que aproximadamente un 20% de animales en una población no vacunada, pueden presentar resistencia natural a brucelosis, además se ha encontrado (Davies et al., 1980; García Carrillo, 1980; Price et al., 1990) en experimentos de vacunación que cerca del 30% de vacas que no fueron vacunadas son naturalmente resistentes a la infección. Para la capacidad de control de supervivencia bacteriana in vitro, no se encontraron diferencias significativas entre razas (P>0,05) pero sí una interacción significativa entre la raza y la clasificación como resistente ó susceptible, puesto que los animales de la raza CEBU en la población clasificada como susceptible, presentaron significativamente (p<0,05) mayores valores de supervivencia bacteriana que los animales susceptibles de la raza BON. Los valores de heredabilidad directa y materna tanto para supervivencia bacteriana h2d=0,58±0,037 y h2m=0,16±0,096 respectivamente, como para el número de bacterias a tiempo cero (NBTO) h2d=0,56±0,037 y h2m=0,17±0,086 (tabla 2.) muestran valores de moderados a elevados. Tabla 2. Parámetros genéticos para número de bacterias a tiempo cero (NBTO) y supervivencia bacteriana a las 24 horas (rSOB24h) en la raza BON. Parámetro σ 2a σ 2m σ 2e σ 2p h 2d h 2m. NBT0 7634619 1987036 1855721 11477377 0,56±0,03 0,17±0,08. rSOB24h 322 87 138 548 0,58±0,11 0,16±0,096. σ2a=Varianza genética aditiva, σ2m =Varianza materna, σ2e =Varianza del error , σ2p =Varianza fenotípica, h2d =Heredabilidad directa, h2m=Heredabilidad materna.

(5) IX Simposio Iberoamericano sobre Conservación y Utilización de recursos Zoogenéticos. El parecido entre padres e hijos a efectos de resistencia/susceptibilidad, como en nuestro caso, el 40% de los individuos hijos de padres resistentes son también resistentes, refleja las elevadas heredabilidades presentadas en el apartado de resultados y permiten predecir respuestas a la selección elevadas. Por otro lado, los elevados valores de la heredabilidad (h2>0,50) tanto para la eficiencia de la fagocitosis (NBT0) como para la supervivencia bacteriana podría estar indicando la implicación de pocos genes en la expresión de ambos caracteres, como fue sugerido por Barthel et al., (2001). El resultado del desafío infeccioso in vivo fue determinado como Porcentaje de Inhibición (PI), que indica el valor del titulo de anticuerpos anti-brucela. En esta característica el valor promedio fue de 83,2±14,3 % a los 15 días post-infección, y estos valores fueron descendiendo con el tiempo hasta llegar a un valor de 42,2±19,5%, a los 90 días post-infección, cuando el 50% de los animales mostraron un valor de PI inferior al umbral (40%), que indicaría que son animales negativos a la infección. Evaluando conjuntamente todo el periodo de tiempo, no se encontró un efecto significativo de la raza (p>0,05), pero cuando se evaluó cada uno de los tiempos (15, 30, 60, 90 días pos-infección), solamente se detectaron diferencias significativas entre razas, para los títulos de anticuerpos a los 30 días pos-infección. La raza CEBU, presentó valores significativamente más altos (PI=85,8±5,9%) que los encontrados en la raza BON (PI=75,6±3,7). En cuanto a la condición de resistente/susceptible, se encontró que los individuos clasificados como resistentes presentaron generalmente valores más altos a los 30 y 60 días post-infección (PI=88,4±5,7 y 73,5±4,8 % respectivamente) y significativamente diferentes (p<0,01) comparados con los individuos clasificados como susceptibles (PI=73,1±3,8 y 64,3±3,2 % respectivamente). En este caso, las principales diferencias se encontraron a los 30 y 60 días (figura 1.), pero no a los 15 y 90 días post-infección. Figura 1. Efecto de la raza y clasificación (resistente-R-/susceptible-S-) sobre la variación en títulos de anticuerpos antibrucela en suero de animales infectados experimentalmente in vivo (PI: Porcentaje de Inhibición). 100. 100. 90. 90. 80. 80. 70. 70. 60. 60. PI. 50. PI. 50 40. 40. 30. 30. 20. 20. 10. 10. 0. 0 T0. T15. Tiempo. T30. BON. T60. CEBU. T90. T0. T15 tiempo. T30 RRES. T60. T90. S SUSC. Se encontró también que los animales de la raza CEBU clasificados como resistentes presentaron valores de títulos de anticuerpos más altos a los 15 días, pero a los 60 y 90 días solamente los animales de raza BON clasificados como resistentes mantuvieron títulos más altos de anticuerpos, aunque no significativamente diferentes (p>0,05). Sólo se evidenciaron afecciones patológicas a nivel ocular en la primera semana post-infección, pero no existieron evidencias de abortos en hembras ó daños genitales en los machos evaluados. El aislamiento bacteriano solamente fue posible en el 16% (5 animales) de las muestras de biopsia de ganglio linfático. Los aislamientos bacterianos se obtuvieron en tres animales de la raza BON, provenientes del cruce S x S y clasificados también como susceptibles, (promedio de rSOB24h= 16,96±2,93) y de dos animales de la raza CEBU clasificados como susceptibles, (promedio de rSOB24h=13,61±5,71), pero estos animales no tuvieron valores significativamente diferentes (p<0,05) para títulos de anticuerpos.. 687.

(6) Facultad de Ciencias Agrarias | UNLZ. A pesar de que es sabido que la Brucella abortus S19 puede provocar el aborto en vacas adultas (vacunadas y no vacunadas), o generar problemas genitales en machos adultos (Corner y Alton, 1981; Nicoletti, 1990; Moriyon et al., 2004; Chin, 2000), los resultados de este trabajo podrían indicar que la cepa S19 no presenta suficiente patogenicidad como para detectar todos los individuos susceptibles, contrariamente a lo encontrado por Price et al. (1990) y Qureshi et al. (1996), quienes realizaron el desafío infeccioso in vivo con la cepa 2308 de Brucella abortus. Variación en los niveles de IFNγ en animales infectados in vivo: En cuanto a los niveles de interferón gamma, encontrados en animales de las razas BON y Cebú, después de un desafío infeccioso in vivo, con Brucella abortus (cepa 19), se encontró que los niveles variaron drásticamente entre los 15 y los 30 días, teniendo un incremento más marcado en la raza BON, para posteriormente presentar una disminución de los valores hacia los 60 días, donde también presentó valores superiores en la raza BON, comparado con la raza Cebú, pero sin diferencias, solamente a los 120 días pos infección se encontraron diferencias significativas (p<0.05), debido a que los niveles de interferón gamma descendieron más rápidamente en la raza Cebú, comparado con la raza BON, donde presentaron un ligero aumento y posteriormente una disminución hasta los 150 días (Figura 2.). Efecto del Fenotipode resistencia sobre los niveles de Interferon. Efecto de la raza sobre el nivel de Interferon gam m a. 12 12. nivel de interferon gam m a. 10. 10 nivel de interferon. 688. 8 6 4 2 0 Int15. Int30. Int60. Int90 tiem po. Int120 BON. Int150 Cebu. 8 6 4 2 0 Int15. Int30. Int60. Int90 Tiem po. Int120 resistente. Int150 susceptible. Figura 2. Títulos de IFNγ detectados por ELISAi en los animales de dos razas bovinas infectados experimentalmente y efecto del fenotipo de resistencia o susceptibilidad sobre la variación de los niveles de IFNγ. Por otra parte, al evaluar el efecto de la capacidad de control de la sobrevivencia bacterial in vitro, que nos permitió diferenciar entre individuos con un fenotipo relacionado con resistencia, ò susceptibilidad, se encontró que no existieron diferencias significativas a lo largo del período de experimentación, lo que nos permite definir que en este caso, la bacteria cepa 19 de Brucella abortus, no ejerció suficiente poder infeccioso, como para diferenciar la respuesta de sus macrofagos en función de la respuesta de los linfocitos T, para producir citoquinas y permitir el montaje de una respuesta pro-inflamatoria y anti-infecciosa. Efecto de polimorfismos SNP en el gen Slc11a1 sobre la supervivencia bacteriana in vitro: Los polimorfismos de tipo SNP evaluados en la población de estudio, fueron los descritos por Martínez et al., (2008) y se encontró que para el marcador SNP4, la frecuencia más elevada correspondió al genotipo GG (0,59), y la más baja al genotipo AA (0,11). Además, se encontró un efecto de sobredominancia significativo (p<0,04) de este marcador sobre la variabilidad de la supervivencia bacteriana in vitro, al ser los heterocigotos los que presentaban menores valores (15,2±4,8), lo que indicaría una mayor capacidad de control sobre la supervivencia bacteriana. Por el contrario, los individuos con el genotipo homocigoto mutado GG presentaron el mayor valor de supervivencia bacteriana (21,1±4,1). En el marcador SNP5, la mayor frecuencia genotípica correspondió al homocigoto CC (0,57), mientras que para el heterocigoto CG fue de 0,31 y para el homocigoto GG 0,12. En este caso no se encontró un efecto significativo del marcador.

(7) IX Simposio Iberoamericano sobre Conservación y Utilización de recursos Zoogenéticos. sobre la supervivencia bacteriana in vitro (p<0,05). El marcador 3ÙTR, que corresponde a la variante descrita por Horín et al. (1999), sí afectó significativamente (p<0,05) la variabilidad del carácter, manifestando el genotipo BB un valor de supervivencia bacteriana muy superior (58,3±7,2) a cualquiera de los otros genotipos. Este resultado indicaría su posible relación con una elevada susceptibilidad a la brucelosis. Por otro lado, se detecta un efecto de ligamiento entre los marcadores SNP4 y 3’UTR, pues los individuos con el alelo B en el marcador 3’UTR, presentan también el alelo G en SNP4, siendo los animales con mayores valores de supervivencia bacteriana. Por otro lado, el marcador localizado en el exón 15 del gen Slc11a1, denominado SNP6, presentó un alto nivel de polimorfismo, detectándose nuevos alélos que no habían sido previamente identificados por Martínez et al., (2008a). Los encontrados en este trabajo corresponden a inserciones de un fragmento que va de 2 a 8 repeticiones, correspondiendo el genotipo más frecuente (0,66) al homocigoto 158/158, sin que se detectara efecto significativo de ninguno de los genotipos sobre la variabilidad del carácter (P<0,05). En cuanto al efecto de estos polimorfismos sobre la variabilidad de los títulos de anticuerpos anti-brucella, no se encontraron efectos significativos de ninguna de las variantes genéticas analizadas. Solamente se observó que para el marcador SNP4, los individuos que tienen el genotipo GG presentan los menores títulos de anticuerpos (63,00±10,11) comparado con los individuos con genotipo AA (68,4±6,2) y los heterocigotos (67,10±5,04), de forma similar para el SNP5, donde los individuos que presentaron el alelo más frecuente (CC) presentaron los mayores valores de títulos de anticuerpos (68,38±4,61). En nuestro trabajo se evaluaron marcadores localizados en regiones codificantes del gen Slc11a1 y se encontró que la mutación presente en el exón 10 (SNP4), se encuentra relacionada con resistencia/susceptibilidad a brucelosis y está ligado al polimorfismo en 3’UTR, por lo que habría que analizar si la mutación que provoca un cambio de aminoácido de ácido aspártico por asparragina, en la posición 321 de la proteína (Martínez et al., 2008), es una mutación funcional que hace que el macrófago reduzca su capacidad de control de la supervivencia bacteriana. En conclusión, se ha demostrado que una importante componente genética, subyace al carácter de resistencia/susceptibilidad a brucelosis, evaluado mediante un desafío infeccioso in vitro. Además, el elevado valor de la heredabilidad permitiría ser optimista ante un programa de selección para resistencia a brucelosis. También, se ha confirmado el ligamiento que existe entre el polimorfismo 3ÙTR y un polimorfismo ubicado en el exón 10, que puede provocar un cambio en la funcionalidad de la proteína. Por otro lado, se encontró que los individuos clasificados como resistentes presentan una respuesta de anticuerpos anti-brucela significativamente diferente de la presentada por los animales que fueron catalogados como susceptibles, aunque no se encontró ninguna asociación significativa entre la respuesta de títulos de anticuerpos antibrucella y las variantes genéticas tipo SNP encontradas en el gen Slc11a1. Posiblemente esta falta de asociación sea debido a que la respuesta de anticuerpos es consecuencia de la inmunidad humoral, posterior a la presentación de antígeno y que permite la generación de anticuerpos. De acuerdo a estos resultados, podría ser de interés el estudio, del efecto del polimorfismo localizado en el exón 10 sobre la funcionalidad de la proteína y por otro lado, determinar que factores están implicados en las diferencias entre animales resistentes y susceptibles, que provoca variación en la respuesta de producción de anticuerpos anti-brucela.. BIBLIOGRAFIA. 1. Adams L. G., Templeton J. W. 1998.. Rev. Sci. Tech. 17:200–219. 2. Barthel R., Feng J., Piedrathia J.A., McMurray D.N., Templeton J.W. Adams G.L. 2001. Infect. Immun. 69: 3110–3119. 689.

(8) 690. Facultad de Ciencias Agrarias | UNLZ. 3. Borriello G., Capparelli R., Bianco M., Fenizia D., Alfano F., Capuano F., Ercolini D., Parisi A., Roperto S., Iannelli D. 2006. Infect Immun. 74:2115-20. 4. Capparelli R., Alfano F., Amoroso M.G., Borriello G., Fenizia D., Bianco A., Roperto S., Roperto F., Iannelli D. 2007. Infect Immun. 75:988-96. 5. Capparelli R., Borriello G., Marabelli R., Roperto S., Roperto F., Iannelli D. 2007. Mamm Genome. 18:137-43. 6. Chin J. 2000. Washington, DC: American Public Health Association; Pp. 624. 7. Corner L.A., Alton G.G. 1981. Res Vet Sci. 31: 342–344. 8. Davies G., Cocks E., Hebert N. 1980. J. Biol. Stand. 8:165-175. 9. Feng J., Li Y., Hashad M., Schurr E., Gross P., Adams L.G., Templeton J.W. 1996. Gen Res. 6:956-964. 10. Garcia-Carrillo C. 1980. Zentralbl. Veteterinaermed. Reihe B 27:131-138. 11. Gibson J.P., Bishop S.C. 2005. Rev. sci. tech. Off. Int. Epiz. 24:343-353. 12. Horîn P., Rychlik I., Templeton J. W., Adams L. G. 1999. Eur. J. Immunogenet. 26:311-313. 13. Martinez R., Dunner S., Barrera G., Cañon J. 2008a. J Anim Breed Genet. En prensa. 14. Martinez R., Toro R.,Montoya F., Burbano M., Tobón J., Gallego J., Dunner S., Cañón J. 2008 b. J Anim Breed Genet. En prensa. 15. Martínez R., Toro R., Montoya F., Tobón J., Burbanm M., Gallego J., Ariza F. 2005. Arch Zoot 206:333-340 16. Meyer K. 1988. J Dairy Sci. 71:33-34. (Suppl. 2). 17. Meyer M.E., 1985. Am J Vet Res. 46: 902–904. 18. Moriyón I., Grilló M.J., Monreal D., González D., Marín C., López-Goñi I., Mainar-Jaime R.C., Moreno E., Blasco J.M. 2004. Vet Res. 35:1-38. 19. Nicoletti P.L., Vaccination, in: Nielsen K.H., Duncan J.R. 1990. CRC Press, Boca Raton, Florida USA, pp. 283–299. 20. Nielsen K., Smith P., Yu W.L., Elmgren C., Nicoletti P., Perez B., Bermudez R., Renteria T. 2007. Vet Microbiol 124:173-177 21. Nielsen K. 2002. Vet. Microbiol. 90: 447-459 22. Paixao T.A., Ferreira C., Borges A.M., Oliveira D.A., Lage A.P., Santos R.L. 2005. Vet Immunol Immunopathol. 109:3742 23. Price R.E., Templeton J.W., Smith R. Adams L.G. 1990. Infect Immun. 58:879–886. 24. Qureshi T., Templeton J.W., Adams L.G. 1996. Vet Immunol Immunopathol. 50:55-65 25. Templeton J.W., Estes D.M., Price R.E., Smith R., Adams G. 1990. Proceedings of the 4th World Congress on Genetics Applied to Livestock Production, Edinburgh, 23-27th July 1990..

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