Efectode extractosvegetales yfungicidas químicossobreBotrytissppenazucena(Liliumcandidum),bajo
condicionesdelaboratorioenChachapoyas,Amazonas
Effect ofplantextractsandchemicalfungicidesonBotrytissppinlily flower(Lilium candidum),under laboratoryconditions inChachapoyas,Amazonas
Santos TriunfoLeivaEspinoza1*,Patricia DelgadoCampos2y Nuri Carito VilcaValqui3
RESUMEN
La producción de flores de azucena(Lilium candidum)seconvierte en una importante alternativa de negocioanivel regionaly nacionalpor ser una especieornamental de altademanda enfloristerías de diferentes mercados. Sin
embargo,estecultivo está afectado principalmenteporel hongo fitopatógenoBotrytisspp, quepuede causar una significativa reducción del rendimiento en cantidad y calidad de los botones florales. En atenciónaeste problema fitopatológico, se plantean nuevas alternativasdemanejoycontrol fitosanitarioque permitan una eficiente represión delagentecausal y consiguiente control de la enfermedad. Seproponeel uso de herramientas de control amigables
conelmedio ambienteyde fácil accesoalproductor.En estesentido, sellevó a cabolapresente investigaciónconel
objetivoprincipalde evaluar elefectode extractosnaturales y fungicidas químicos inhibiendo el desarrollo del hongoBotrytissppencondiciones de laboratorio.Para ello se evaluó el efectoquetienen losextractos deEucalyptus
sp, Allium sativum y Chenopodium ambrosioides a razón de 200 pL, y de Carbendazim 4 pL, y
(Cimoxanil+Propineb)2 mg porplacade 20 mi de medio PDA. El análisis estadístico indicó una alta significancia del tratamientoT6(Cimoxanil+Propineb) antelos demás tratamientos,ya queeste inhibió totalmente el hongo,
mientrasque enlaestrategia sosteniblefueelT5 (extracto deajo)elque respondió mejor.
Palabrasclave: ornamentales, fitopatógenos, Taquia,azucena
ABSTRACT
Theproductionof lily flowers(Lilium candidum)becomesanimportant business alternativeatregional and national level asitis an ornamental speciesofhigh demand in floristsofdifferent markets.However,thiscropismainly affected by the phytopathogenic fungusBotrytisspp,which can cause a significant reduction in the quantity and qualityof floral buds.Inviewof thisimportant phytopathological problem,newalternativesofphytosanitarycontrol
andmanagementare proposed,which allow efficient repressionof the causalagentandconsequentcontrolof the disease. Itproposesthe useof environmentally friendly control tools andeasyaccessto the producer. In thissense, thepresentresearchwasearnedout with the mainobjectiveofevaluatingtheeffect of naturalextracts andchemical fungicides inhibiting the developmentof the fungusBotrytissppinlaboratory conditions. Theeffect of theextracts
ofEucalyptussp,AlliumsativumandChenopodium ambrosioidesat 200pL,andCarbendazim4pL, and (Cimoxanil + Propineb)at2mg per20mlofPDA medium were evaluated. Statistical analysis indicated a high significanceofthe T6treatment (Cimoxanil + Propineb) compared to the other treatments, since this totally inhibited the fungus,
whereasinthe sustainablestrategyitwastheT5(garlicextract)thatrespondedbetter.
Keywords:ornamental, phytopathogens,Taquia, lily
'IngenieroAgrónomo.Investigador delINDES-CES,UNTRM.
’BachillerenIngeniería Agrónoma. InvestigadoradelINDES-CES,UNTRM. E-mail: patricia_l [email protected]
’BachillerenIngeniería Ambiental. Investigadora del INDES-CES, UNTRM. E-mail:[email protected]
I.INTRODUCCIÓN
El sector florícola posee una de las industrias más
fuertes en muchospaísesdesarrollados y en vías de
desarrollo (ProEcuador, 2013).Las flores deazucena
(Lilium candidumL.)formanpartede ungéneroque
incluyemásde 100especies nativas tantode Norte
América como de Europa y Asia (Benschop et al., 2010). Hoy endía es una especie ornamental de alta
demanda en diferentes mercados nacionales e
internacionales (Mucajietal.,2000).
Enlos anexosTaquia, Maripata y Opelel,del Distrito
Chachapoyas, en la regiónAmazonas, las azucenas
han encontrado condiciones de clima y suelo ideales
para su producción, motivo porel cual losagricultores
asentados en esta región han encontrado en este
cultivo una importante alternativa productiva, que
además, ha convertidoestaactividad en la principal
fuente de ingresos económicos (Leiva, 2015).
El negocio de floresde azucena, hoy en día se ve
amenazado por la presencia de agentes bióticos
externos como las plagas y enfermedades que
contribuyen con el incremento de los costos de
producción, y disminuyenlacalidad del producto en la
cosecha;en estesentido, las manchas foliares y del
botón floral causadosporel hongoBotrytissppsonel
principal problema fitopatológicoqueamenazaaeste
cultivo.
Porotrolado,habiendoidentificadoelhongoBotrytis
spp como elcausantede una severa patología en elcul¬
tivo deazucena,sehace necesario buscar alternativas
de controlque puedancontribuirconlarepresiónde
este importante problema. Botrytis spp tiene la
capacidad deinfectar unampliorango dehospedantes,
causando diferentesdañosenlos tejidos de la planta y
produciendo la llamada enfermedad del tizón
(Leyva-Miret al.,2009),que generainfecciónenlashojasy botones florales, con colores característicos en el
micelio(Agrios,1995).
Afin de mitigar los daños causadosporBotrytisspp,
los dithiocarbamatos, son el principal grupo de
fungicidasutilizados por losproductoresde azucenas;
en este sentido se reportan altas frecuencias de
aplicación, que van desde10-15aplicaciones por
campaña.El control químico es efectivo en la mayoría
de loscasos,consiguiendo elevadas reducciones de los
daños,aunquetambiénpuede servariableo ineficaz,
dependiendode las condiciones meteorológicas y de
una correcta aplicación del producto en momentos
clave del desarrollo de la enfermedad (Calvo,2013).
Esto lleva a la búsqueda de nuevas alternativas de
manejo de enfermedades como la utilización de
extractosvegetales,queesuna opciónquepermite una
producción agrícolasostenibley menoscontaminante
(ViveroyCastaño, 2006).
Una de las alternativas de control de plagas y
enfermedades, es el uso de productos de origen
natural, como los fungicidas vegetales o biocidas,que
además detener lagran ventajadeser compatibles con
compuestosnaturales,aumentansuefectividad y son
de bajo riesgo de contaminación. La acción de
diferentes extractos de plantas se ha observado y
reportado;porejemplo,las hojas deyucaprotegen las
raícesde la mismaplantacontraorugas,yaquelibera
sustancias de tipo cianogénicasquesontóxicascontra
dicha plaga (Vázquezetal.,2007).
Los extractos de plantas cumplen un rol muy
importante en la agroecología, por el beneficio al
medio ambienteyal ecosistema cuandosonusados
comoalternativaparael tratamiento de enfermedades
infecciosasen las plantas, causadas pororganismos
fitopatógenos (Jiménez yMosquera, 2014).
Por loexpuesto anteriormente,conel siguiente trabajo
se pretende determinar el efecto de tres extractos
naturales; paico(Dysphania.ambrosiodes),eucalipto
(Eucalyptussp) y ajo(A. sativum),ydosfungicidas químicos Carbendazim y (Cimoxanil+Propineb),
sobre Botrytissppbajocondiciones de laboratorio.
II. MATERIALES Y MÉTODOS
Colectade muestras infestadasporBotrytisspp Las muestrasseobtuvieron en la localidad de Maripata
(distrito de Chachapoyas). Para aislar el hongo
Botrytisspp, en primer lugar se colectaronmuestras de
candidum)con síntomasde ataque del hongo. Para
protegerla muestrasecubrió conpapel toalla,para, a
continuación, introducirse en bolsas plásticas dentro
deuna nevera portátil para sutraslado al laboratorio de
la Universidad Nacional Toribio Rodríguez de
Mendoza (UNTRM)deEntomologíay Fitopatología
(Figura1).
Aislamientode hongoBotrytisspp
Setomaron las muestras más representativas (estruc¬
tura central departe sana yenferma de lasazucenas),
secortaronenpequeñostrozosde1cm x1cmde tallo,
dehojas yde flores.De cada muestra, porseparado, se escogió laestructuravegetal y se colocó en unmatraz
dejándose en agua corriente durante una hora.
REPÚBLICADEL PERÚ DEPARTAMENTO
AMAZONAS PROVINCIA
CHACHAPOYAS
Figura1.Ubicación del laboratorio deEntomología y Fitopatología de laUNTRM, localidad de Chachapoyas (provincia de Chachapoyas)
Trascurridoeste tiempo selavó con lejíaal1%por
cuatro minutos, se enjuagó tres veces con agua
destilada esterilizada y se dejó secarenuna placacon
papel toalla estéril. Una vez que las muestras
estuvieron secas, se sembraron en placas Petri con
medio de Cultivo Agar Papa dextrosa (PDA), y se
incubaron a 25 °Cporsiete días.Unaveztranscurrido
este periodo se procedióala identificación del hongo
fitopatógeno.
Preparaciónde los extractos vegetales
Para los extractos de paico (Chenopodium
ambrosioides),eucalipto(Eucalyptussp)y bulbosde
ajo(Alliumsativum),seusaron hojassanas,adultas y sin daños físicos en las dos primeras especies, y bulbos
en el caso de la tercera. Se licuaron por separado,
colocando 200 g de cada especie en 1 L de agua
destilada.Este licuadosefiltró atravésdedoscapas de
gasaparaobtener losextractos.Posteriormente, cada
uno se envasó, codificó y esterilizó en autoclave
durante15minutosa 121 °C.
Porotra parte,se procedióa la preparación del medio
Tratamientos Des cripción
T1 A gar PDA (tes tigo abs oluto)
T2 A gar PDA + extracto de Paico
T3 A gar PDA + extracto de Eucalipto
T4 A gar PDA + extracto de Ajo
T5 A gar PDA + Carbendazima
T6 A gar PDA + Propineb-Cymoxanil untotal de cincoplacas porcadafungicidayextracto
vegetal. Al sumar lostres extractosvegetales, los dos
fungicidas químicos yeltestigoabsoluto, resultaron
untotal de 30placas.
Dosisdeaplicación
Paralosextractos deEucalyptussp,Alliumsativumy
Chenopodium ambrosioides fueron usadas dosis de
200 pL de extracto por placa. Para los fungicidas
químicos Carbendazim, se usaron 4 pL por placa,
mientras que para Cimoxanil + Propineb se
emplearon 2mgpor placa(Tabla1).
La aplicación de los fungicidas y extractos vegetales
serealizóenel momento de servir lasplacas.Teniendo
los medios de cultivo preparados se procedió a
sembrarB. cinérea, ycolocarlos enla incubadora a 25 °Cparainiciar las observaciones de crecimiento cada
24horas.
La investigación se trabajó con unDiseñoComple¬
tamenteal Azar (DCA),y los resultados obtenidos de evaluaciónfueron evaluadosconunANDEVAal5%
de significancia; además se realizó una prueba de
comparaciones miiltiples deDuncan (a< 5%).Para
todasestaspruebas seutilizó elsoftware estadísticoR
(RCoreTeam, 2013).
Tabla1.Tratamientos dela investigación
Fuente:Elaboración propia
T2 T3 T4 T5
96 Horas
4 3,5
3 2,5
£ 9
O Z'
1,5 1 0,5
0
144 Horas
A A
000
B
TI T2 T3 T4 T5
TI T2 T3 T4
120Horas
c
0
T6. |4,14| |4,225|, ,
l3.51l - 3,265
TI T2 T3 T4
III. RESULTADOS
Después deaplicar las dosis correspondientes antes
citadas en función de cada tratamiento, resultóqueel
tratamiento T3 (con extracto de paico) fue el que
provocóunamayorevolución del crecimiento radial
delmiceliopasadoslos siete días de ensayo(Figura2).
Cabe destacarquesuacción se hizo efectiva desde las
primeras48horas,apartir de las cuales su crecimiento
superóal del restoencadaunade las observaciones
realizadas cada 24 horas hasta los siete días
mencionados. Siguiendo al T3, se sitúo el T2 (con
extracto de eucalipto), y a continuación alternaron
posiciones a lo largo de la semana de ensayo los
tratamientosTI (testigoabsoluto),T4(conextracto de
ajo) yT5(con carbendazima). Finalmente, pasadas las
168 horas, fue elTI el que obtuvo un crecimiento
radialmayorde lostres.
En la figura 3, se puede apreciar la evolución del
crecimiento radial del hongo Botrytis cinérea,a lo
largode los sietedías de ensayo,destacando,como
antesseha descrito, a los tratamientos T3 y T2 como
los máximos exponentes del crecimiento, respec¬
tivamente.
Finalmente, resulta destacablequeen el tratamiento
T7(Propineb + Cymoxanil)noseobservó crecimiento
de B. cinérea, sino más bien se evidenció una inhibicióndelmismo.
•o
o 4,5
4
3,5
3
2,5
2
1,5
1
0,5
0
24 Horas 48Horas 72Horas 96Horas 120Horas 144Horas 168Horas
Testigo Paico Eucalipto Ajo Carbendazim +Propineb
Figura3.Curvasde evolución del crecimiento radial delhongoBotrytisspp encentímetros,evaluados cada 24 horasypor tratamiento
IV.DISCUSIÓN
La naturaleza de la investigación indicaqueenla pri¬
meraevaluación noseobtuvierondatos;sinembargo,
a partir de la segunda evaluación (pasadas 48 h) se
encontróque segúnel análisis estadístico y mediante
la probabilidad de Duncan (5%) el tratamiento T6
(Propineb-Cymoxanil) logró inhibir en su totalidad el
crecimiento delhongo fitopatógeno,obteniendo una
alta significancia en comparación con el resto de
tratamientos. Estos datos obtenidos a partir del
Propineb se podrían comparar con otros usando el
mismocompuesto,enotro área delconocimiento, y
con resultados similares(Barrera et al.,2008).Los
tratamientos TI, T4 y T5 no se diferenciaron
estadísticamenteentre sí,sin embargo al compararlos
con T2 y T3, si apareció significancia. Esto se
corroboracon los estudios realizados porBonilla y
fungicidas Octave 50% (prochloraz), Curacarb 50%
(carbendazin), Fundazol 50% (benomyl), Silvacur
Combi 50% (tebuconazol + triadimenol) y TMTD
80%(Thiram)parael control deSarocladium oryzae, agentecausal dela pudrición de la vaina del arroz. En
dicho estudioseobtuvoque losproductos Octave50%
(prochloraz), Fundazol 50% (benomyl) y Curacarb
50% (carbendazin) producieron una inhibición
completadel crecimiento micelial delhongo apartir
de 5 ppm.Eneste sentido, y alcompararlo con los
resultados obtenidos en lapresente investigación,se
podría asemejar estos productos al Propineb +
Cymoxanil.
De los tres extractos naturales evaluados (paico,
eucalipto y ajo), solo el extracto de ajo superó la
inhibición del crecimiento radial del micelio de
Botrytis. Estudios realizadosporJiménez yMosquera
(2014) obtuvieron que de los nueve extractos
evaluados, solo el extracto diclorometánico de las
hojasde Rutagraveolens inhibió la germinación de
conidios deBotrytiscinéreaenun 57,5%, con unvalor
de CIM de62,5pg/mL.Lasrazones seríanqueaesta
planta se le atribuye la presencia de metabolitos
secundarios como curaminas, flavonoides y
alcaloides,quefueron los más abundantes detectados
en este extracto. Por otro lado estos resultados son
congruentes a la conclusión queseextraede Pardo
(2013),enla cualseexpresa que el extractoalcohólico
de eucalipto no muestra actividad fungicida a las
concentraciones ensayadas. En esta investigación el
extracto deeucalipto se trabajó enla concentración de
200 pL, lo que significa que a la concentración
utilizada no ayuda en el control del hongo. Según
estudios realizadosporZambranoetal.(2013),donde se evaluó el control de Colletotrichum sp, agente
causal de la antracnosis en el cultivo de tomate de
árbol, mediante el uso de sieteextractosvegetales de
hojas yfrutosdeneem(Azadirachta indica),hojasde
limoncillo (Swinglea glutinosa), hojas de papaya
( Carica papaya), hojas de pringamosa (Urtica
dioica), hojas de eucalipto (Eucalyptus camaldidensis),frutos de ajo{Alliumsativum)y frutos
de ají {Capsicum annuum),se obtuvieron mejores resultados con la aplicación de hojas de eucalipto,
seguidosporfruto de neem y bulbos de ajo. Eneste
caso el eucalipto pudo destacar debido a sus
propiedades antimicóticas (Alzateetal.,2009), o a la presenciadequinonas,lactonasycuraminas,también
antimicóticas(Cázaretal.,2015).Sin embargo,estos
resultados son diferentesa los obtenidos enlapresente
investigación,ylascausas puedenestarenelusode
altas dosis y etanol, además detratarse de otro hongo.
Alcalá deMarcanoelal.(2005)comprobaron elefecto
antifúngico de extractos de tártago {Ricinus
communis)albahaca{Ocimum basilicum),mastuerzo
{Lepidium virginicum),y ajo{Allium sativum).Para terminar, existenotros extractos de plantas con efectos
antifúngicos, como las hojas de Manihot escalenta
(Vázquezetal.,2007),las hojas deLarreatridentata, Quercus sp,oFlourensiacernua(Galvánet al.,2014)
Los resultados señalaron alajo como una alternativa a
ser incorporada enuna estrategiade manejo deestos
hongos.Enestesentido, son numerososlos estudios
que describen al ajo como solución natural y
sostenibleenel control deBotrytiscinérea(Jiménez y Mosquera,2014),asícomodeotrasplagas, debido a
sus características antifúngicas (e. g. Miño y
Uricoechea, 2001; Ramírez et al., 2007;
Astorga-Quirós et al., 2014), repelentes, bactericidas e insecticidas, precedentes desuscontenidos en aliña,
alieina, cicloide de alitina, y disulfato de dialil(Dávila
etal.,2013).
V.CONCLUSIONES
El crecimiento del hongo Botiytis frente a los tres extractosvegetales secomportóde manera diferente,
resultandoqueni elextracto de paico ni el de eucalipto
inhibieronelcrecimientodel hongo, en comparación
con el de ajo, a partir del cual si se apreció cierta
inhibición.
Lostratamientos químicos establecidos, a la dosis de
carbendazim(4 pLpor placa de 20 mi de medio y
Cimoxanil+ Propineb:2 mg por placade20 mide
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hongo,pero no en su totalidad.Por el contrario, el
fungicida compuesto por carbendazin + propineb
inhibe el crecimiento micelial del hongo comple¬
tamente,porloqueeste fungicida resultó ser el más
efectivoyeficienteenel control deesta enfermedad
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