Efecto Inhibitorio "In Vitro" Del Extracto Acuoso Y El Extracto Etanólico De La Hoja De Erythroxylum Novogranatense Var Truxillense (Coca) Sobre El Crecimiento De Streptococcus Mutans

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(1)Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA. FO R. MA TI. CA. ESCUELA DE ESTOMATOLOGÍA. MA S. E. IN. “EFECTO INHIBITORIO “in Vitro” DEL EXTRACTO ACUOSO Y EL EXTRACTO ETANÓLICO DE LA HOJA DE Erythroxylum novogranatense var. truxillense (COCA) SOBRE EL CRECIMIENTO DE Streptococcus mutans”.. TE. TESIS. SI S. PARA OPTAR EL GRADO DE. DE. BACHILLER EN ESTOMATOLOGÍA AUTOR. OF. IC. IN. A. CLAUDIA BEATRIZ VERGARA PASTOR ASESOR. DR. ANTONIO AGUIRRE AGUILAR CO-ASESOR DRA. ELVA MEJIA DELGADO TRUJILLO – PERÚ 2011. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. DEDICATORIA. CA. A Dios, por ser el amigo que nunca se irá, por haberme dado fortaleza y. IN. FO R. MA TI. su amor en todo momento, y por regalarme tantas bendiciones.. E. A mi mamá, Flor, por su amor infinito y su comprensión, por saber. MA S. que siempre podré contar con ella, y ser mi modelo a seguir.. TE. A mi papá, Enrique, por su ejemplo de perseverancia y amor, por. OF. IC. IN. A. DE. a día.. SI S. saber vivir y educarnos en valores y por el apoyo que me brinda día. A mi hermano, Ángel, por su cariño tan grande y su alegría y por saber que siempre podré contar con él.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. A mi familia, mis tíos y primos, gracias por su apoyo. IN. FO R. MA TI. CA. desinteresado y por todo el amor y la alegría brindados.. E. A mi Tío Carlos y mi Abuelita Nícida, quienes siempre me. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. de mi familia.. MA S. mostraron amor incondicional y desde el cielo cuidan de mí y. A mis amigos, quienes me han apoyado y han estado conmigo en los momentos más importantes de mi vida. Muchas Gracias.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. CA. AGRADECIMIENTOS. MA TI. Al Doctor Antonio Aguirre Aguilar, mi asesor,. por su amistad y orientación, durante mi formación universitaria y por su. E. IN. FO R. ayuda brindada en la realización de esta investigación.. MA S. A la Doctora Elva Mejía Delgado, mi Co-asesora, por brindarme sus valiosos conocimientos y la oportunidad de contar con. DE. SI S. TE. su amistad y su cariño durante el desarrollo de esta investigación.. A todos mis profesores, quienes con. profesional y como persona.. OF. IC. IN. A. su ejemplo y conocimientos contribuyeron en mi formación como. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. RESUMEN La presente investigación de tipo experimental “in vitro”, tuvo como propósito determinar el efecto inhibitorio de dos tipos de extractos, acuoso. CA. y etanólico, preparados a partir de hojas de coca, sobre el crecimiento de. MA TI. Streptococcus mutans, con el fin de buscar nuevas alternativas para la prevención de caries dental.. FO R. El estudio se realizó utilizando cuatro concentraciones de extracto acuoso (25%, 50%, 75% y 100%) y cuatro concentraciones de extracto etanólico. IN. (10%, 20%, 35% y 50%); las cuales fueron puestas en contacto con el. E. microorganismo de estudio; para así poder determinar el efecto sobre el. MA S. crecimiento de este.. Los resultados, muestran la generación de halos inhibitorios de pequeña. TE. longitud para tres concentraciones de extracto acuoso (25%, 50% y 75%),. SI S. y la generación de halos de mayor longitud para la concentración al 100% de extracto acuoso y todas las concentraciones de extracto etanólico, con. DE. lo que se concluyó que ambos extractos poseen efecto inhibitorio “in vitro” sobre el crecimiento de Streptococcus mutans.. IN. A. Al determinar la concentración mínima inhibitoria (CMI), realizando el. IC. conteo de Unidades Formadoras de Colonias (UFC’s) de Streptococcus. OF. mutans, se concluyó que la CMI para el extracto acuoso es del 75%, mientras que para el extracto etanólico es la concentración al 50%.. Palabras Claves: Coca, extractos vegetales, etanol, síntesis química, crecimiento bacteriano, Streptococcus mutans.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. ABSTRACT. The aim of the experimental “in vitro” research was to determine the. CA. inhibitory effect of aqueous and ethanolic extract of coca leafs, over the. MA TI. Streptococcus mutans growth, to seek new alternatives for prevention of dental decay.. This study was conducted using four concentrations of aqueous extract. FO R. (25%, 50%, 50% and 100%) and four concentrations of ethanolic extract. IN. (10%, 20%, 35% and 50%) which were put in contact with the organism of study and so could be determined the effect on the growth of this.. E. The final results, after performing susceptibility testing, show the. MA S. appearance of low width inhibition rings for three concentrations of aqueous extract (25%, 50% and 75%); and the appearance of bigger. TE. inhibition rings for the aqueous extract concentration of 100% and all the. SI S. concentrations of ethanolic extract. It was concluded that both extracts. DE. have an inhibitory “in vitro” effect over the Streptococcus mutans growth. Likewise, in determining the minimum inhibitory concentration (MIC),. A. making the count of colonies forming units (CFU) it was concluded that the. IC. IN. minimum inhibitory concentration of the aqueous extracts is 75% and for. OF. the ethanolic extract is the concentration of 50%.. Keywords: Coca, vegetable extracts, ethanol, chemical synthesis, bacterial growth, Streptococcus mutans.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. CA. ÍNDICE. MA TI. DEDICATORIA. FO R. AGRADECIMIENTOS RESUMEN. I.. MA S. E. IN. ABSTRACT. INTRODUCCION…………………………………………………....... TE. II. MATERIAL Y MÉTODOS………………………………….……...... Pág. 1 15 26. IV. DISCUSIÓN……………………………….…………………............. 33. V. CONCLUSIONES …………………………………………...…....... 38. DE. SI S. III. RESULTADOS ………………………………………….………….. 39. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS…………………....…………. 40. IC. IN. A. VI. RECOMENDACIONES………………………………….……......... OF. ANEXOS. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. I.. INTRODUCCIÓN. El uso de las plantas medicinales es de gran utilidad, ya que de ellas son obtenidas innumerables sustancias químicas, que son las bases para la. CA. elaboración de muchos fármacos, así como el tratamiento de diversas. MA TI. enfermedades, entre ellas, la caries dental y por lo tanto la presencia de Streptococcus mutans. Una de estas plantas, estudiada hace muchos. actualmente existen trabajos científicos. FO R. años por la diversidad de efectos que posee, es la hoja de Coca y 1-7. que demuestran el efecto. IN. inhibidor de esta planta y de algunos de sus componentes sobre algunas. E. especies bacterianas. Sin embargo muchos de estos trabajos no han sido. realización. de. MA S. realizados sobre cepas bacterianas estandarizadas, siendo necesaria la investigaciones. sobre. este. tipo. de. cepas. de. TE. microorganismos específicos de la cavidad oral, como el Streptococcus. SI S. mutans.. DE. La caries dental, según Bhaskar, es la enfermedad más común del ser humano 8. En el Perú el Ministerio de Salud, notifica una prevalencia de. IN. A. 95% de Caries Dental en la población total 9.. IC. La caries dental ha sido definida como una enfermedad multifactorial, que. OF. comprende la interacción de factores de huésped, la dieta y la placa dental en un determinado lapso de tiempo. 10. . Es considerada como un. proceso patológico, infeccioso y transmisible de los dientes, que se caracteriza por la desintegración progresiva e irreversible de sus tejidos. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. calcificados, debido a la acción metabólica de microorganismos sobre los carbohidratos fermentables provenientes de la dieta 11 - 13. A lo largo del tiempo, se han planteado diferentes teorías del proceso. CA. carioso, siendo Miller en 1890, con la Teoría Acidogénica, el que instituyó. MA TI. el papel esencial de los microorganismos en la etiología de la caries 10,14. Dentro de las especies identificadas que se relacionan con mayores. FO R. capacidades de iniciar el proceso de formación de lesiones cariosas destaca la gran cantidad de estudios sobre las propiedades del género 13. . Siendo considerado el Streptococcus mutans, el. IN. Streptococcus. E. microorganismo más cariogénico de la placa dental, jugando un rol activo. MA S. en el desarrollo de lesiones de caries, especialmente en las primeras. TE. etapas 15.. El Streptococcus mutans es una bacteria Gram positiva, anaerobia. SI S. facultativa que se encuentra normalmente en la cavidad bucal humana. DE. formando parte de la placa dental, asociada al inicio y desarrollo de las caries dentales. 14. . Es acidofílica porque vive en pH bajo, siendo capaz de. A. crecer a pH 5.2; acidogénica porque metaboliza los azúcares en ácido y. IC. IN. acidúrica porque puede mantenerse metabólicamente activa a pesar de 16,17. . Otra característica es su corto efecto post pH, que es la. OF. un pH bajo. rápida capacidad para recuperar su fisiología normal tras unas brusca caída del pH 16. Su participación en la formación de placa bacteriana, está relacionada con la producción de glucosiltransferasas, enzimas que tienen un rol principal. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. en las interacciones adhesivas y expresión de virulencia de estos microorganismos, debido a que catalizan la síntesis de polisacáridos extracelulares (glucanos solubles e insolubles en agua) que promueven la. CA. adhesión de estreptococos cariogénicos a la superficie del diente 16,18.. MA TI. El poder cariogénico de los estreptococos del grupo mutans es, aunque con algunas diferencias, muy similar en todas la especies y está muy. FO R. ligado a la sacarosa, ya que tienen la capacidad de metabolizarla mucho más rápido que cualquier otro microorganismo de la cavidad oral. 16. . A. IN. partir del metabolismo de la sacarosa estos microorganismos producen. E. principalmente ácido láctico, el cual es fundamental en la virulencia. MA S. debido a que, aparentemente, es el ácido más potente que interviene en la desmineralización del diente18.. TE. Debido a estas razones, el S. mutans, actualmente es base de gran. SI S. cantidad de estudios destinados a la investigación sobre prevención de caries dental; y paralelo a esto se están estudiando diferentes alternativas. DE. a los productos antimicrobianos convencionales, en base a sustancias. A. naturales, que posean propiedades farmacológicas antibacterianas, entre. IC. IN. ellas las plantas medicinales19.. OF. El género Erythroxylum, corresponde a lo que comúnmente se conoce como Coca, y es un arbusto originario de los Andes que se encuentra principalmente en el Perú y Bolivia y en menor escala en Colombia, Ecuador, Venezuela y Brasil y. aproximadamente. 20,21. cuenta. . Pertenece a la Familia Erythroxylaceae. con. 90. especies,. siendo. las. más. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. comercializadas en nuestro país las especies Erythroxylum coca Lam. y Erythroxylum novogranatense (Morris) var. truxillense, debido a su contenido relativamente alto en alcaloides. 21 - 23. . Siendo ésta última. CA. especie la que se usará en la presente investigación.. MA TI. Erythroxylum novogranatense var. truxillense, conocida como “Coca de Trujillo”, fue descrita como una especie distinta en el año 1900 por Rugby,. FO R. se cultiva en la costa desértica del norte del Perú, cerca a la ciudad de Trujillo y es la variedad más resistente a la sequía 24. Es un arbusto de 1 a. IN. 3 metros de altura, con hojas membranosas de color verde claro, elípticas. E. y de ápice agudo, las cuales miden de 1,8 a 4,8cm de largo y 0.5 a 2.5cm. MA S. de ancho, las líneas laterales son prominentes en el envés. Las flores son pequeñas, con los pétalos de color blanco o crema y los frutos son drupas. SI S. mm de ancho 24 - 26.. TE. anaranjadas, ovaladas, de aproximadamente 6 a 10mm de largo por 4 a 5. Los arbustos de coca se aprovechan mediante la cosecha de sus hojas. DE. maduras hasta la defoliación casi completa sin dañar ramas ni tallos, ni. A. comprometer la supervivencia de la planta; la recolección se inicia a los. IN. dos años y puede repetirse de 3 a 4 veces al año. 26. . Ha sido cultivada. IC. desde tiempos muy remotos por los habitantes de los pueblos andinos,. OF. donde el uso más conocido que se le da es el “chacchado” o masticación de sus hojas. Esta práctica se emplea como complemento de la dieta y para resistir la realización de trabajos físicos importantes y largas caminatas, debido a su efecto estimulante y nutriente, quitando el cansancio, el hambre y la sed 20,22. 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. La composición química de la hoja de coca depende de factores tanto intrínsecos como extrínsecos, entre los que están la edad de la planta, la identidad de las variedades, el estado de las hojas y como factores. 27. . Dentro de sus principios químicos, la. MA TI. en el que se desarrolla la especie. CA. extrínsecos las zonas geográficas, la forma de cultivo y el medio ambiente. hoja de coca contiene abundante cantidad de minerales, especialmente de calcio, además de hierro, potasio, magnesio, zinc entre otros; así. FO R. mismo posee un alto contenido en metabolitos primarios entre los cuales. IN. encontramos proteínas, carbohidratos, lípidos; y metabolitos secundarios como alcaloides, taninos, flavonoides, monoterpenos, glicósidos y aceites. E. esenciales, a los cuales se les atribuyen muchas de sus diversas. MA S. propiedades 21, 25. (Anexo 1). TE. Los componentes principales de la hoja de coca son los alcaloides, los. SI S. cuales representan del 0.5% al 2% de los principios químicos totales. Hasta la fecha las investigaciones han revelado la presencia de hasta 14. DE. alcaloides, y son precisamente estos los que le dan a la hoja de coca su. A. diversidad de efectos y cualidades medicinales 21,29.. IN. Entre estos alcaloides tenemos a la atropina y la conina, los cuales le dan. IC. sus propiedades anestésicas; la benzoína que estimula la formación de. OF. células musculares, dándole a la coca propiedades terapéuticas para combatir la gastritis y las úlceras; la globulina que regula la carencia de oxígeno. en. el. ambiente,. mejorando. la. circulación. sanguínea,. contribuyendo a superar el mal de altura conocido como “soroche”;. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. además de una larga lista de otros alcaloides como la egnomina, inulina, papaína, pectina, quinolina, y la cocaína 29. Es este último alcaloide, el más conocido de la hoja de coca y el que. CA. genera mayor controversia debido a sus efectos terapéuticos (analgésicos. MA TI. y anestésicos) como tóxicos sobre el organismo. Es muy relevante resaltar que la hoja de coca no es sinónimo de cocaína y que bajo la. 29 - 31. FO R. forma de hoja de coca, ésta no produce toxicidad ni genera dependencia . La concentración de cocaína en la hoja de coca es muy baja,. E. promedio de 0,56 % del alcaloide 29.. IN. teniendo Erythroxylum novogranatense var. truxillense un contenido. MA S. En el campo de la odontología, el crecimiento de la fitoterapia ha estimulado la investigación con el propósito de avalar la actividad. TE. antimicrobiana de distintos extractos de plantas, entre ellos la hoja de. SI S. coca, con el fin de ayudar en el control de la placa bacteriana y por. DE. consiguiente en el control y prevención de la caries dental 19. Las primeras investigaciones respecto a la hoja de coca y sus. A. propiedades anticariogénicas, datan de 1954, con la investigación. IC. IN. realizada por Goicochea, que estudió a 30 masticadores de la hoja de. OF. coca, en los cuales observó que el número de piezas que faltaban y el porcentaje de caries eran relativamente bajos en relación al grupo control. Mientras que el grado de abrasión dentaria fue alto en dicho grupo en comparación con el grupo control 32.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Ayala en 1963. 33. , realizó un estudio similar en 40 individuos (20. masticadores de hoja de coca y 20 controles), el cual dió como uno de sus resultados, que los chacchadores o masticadores de la hoja de coca. CA. presentaban lesiones cariosas en un mínimo porcentaje, mientras que la. MA TI. incidencia de abrasión dentaria fue elevada.. Posteriormente en 1988, Coronel, realizó estudios en comunidades de. FO R. chacchadores de hoja de coca con un tiempo de hábito mayor de 10 años y edades comprendidas entre los 30 y 50 años (30 chacchadores y 30. IN. controles). Entre sus resultados encontró que los índices de abrasión y. E. enfermedad periodontal se vieron incrementados en el grupo de. MA S. chacchadores, pero el índice de CPOD disminuyó en este grupo, ambos con respecto al grupo control, siendo así que los masticadores de la hoja. TE. de coca presentaban un menor número de piezas dentarias cariadas.. SI S. Coronel trató de concluir que posiblemente se debía a la abrasión dentaria marcada, al elevado número de piezas dentarias extraídas e. DE. indicadas para extracción o a la acción neutralizadora de las sustancias alcalinas sobre los ácidos producidos por las bacterias, para la formación. IN. A. de lesiones cariosas 34.. IC. Estas investigaciones condujeron a muchos autores a concluir que el. OF. habito de chacchado de las hojas de coca tiene una relación significativa sobre la incidencia de caries. 34. ; y con el tiempo estudios más recientes. han intentado demostrar el efecto directo de los componentes de la hoja de coca sobre la actividad bacteriana.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Aguilar y col. en 1995. 1. , realizaron un estudio para observar el. comportamiento “in vitro” de algunas especies del género Mycobacterium: Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium fortuitum, Mycobacterium. CA. gordonae, Mycobacterium Boris y Mycobacterium kansasii; frente a. MA TI. Erythroxylum coca y Erythroxylum novogranatense, contenidos en el “Mate de Coca”. Observándose cambios microscópicos y macroscópicos, así como inhibición de crecimiento en las cepas de Mycobacterium que. FO R. fueron expuestas a las distintas concentraciones de Erythroxylum coca y. IN. Erythroxylum novogranatense; también se observó disminución en la captación del colorante de Ziehl-Nielsen en Mycobacterium tuberculosis,. E. Mycobacterium bovis, Mycobacterium kansasii y Mycobacterium fortuitum,. MA S. debido a una probable alteración en la configuración glucolipídica y otros componentes de la pared celular condicionándose la disminución de la. SI S. TE. virulencia de las cepas nombradas.. En el mismo año, Castro y col., realizaron un estudio similar pero sobre. DE. cepas de uropatógenos Gram negativos seleccionados por su carácter de multiresistencia a Amikacina, Amoxicilina, Ácido Nalidíxico, Ácido Carbenicilina,. IN. A. Pipemídico,. Enoxacina,. Gentamicina,. Cefazolina,. Ceftazidina,. Kentamicina,. Neomicina,. IC. Cinoxacina,. Cefalexina,. OF. Norfloxacina, Nitrofurantoína y Trimetoprim-Sulfametoxazol. Este estudio. usó concentraciones de 26,15 μg/ml, 52,30 μg/ml, 209,36 μg/ml, 313,8 μg/ml y 784,5 μg/ml respectivamente del total de principios activos del “Mate de Coca”, reportándose que las cepas de Escherichia coli presentaron inhibición del crecimiento a las concentraciones de 209,36. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. μg/ml, 313,8 μg/ml y 784,5 μg/ml; así mismo, casi todas las cepas de Enterobacter sp. presentaron poco crecimiento a la concentración de 313,8 μg/ml y 784,5 μg/ml; las cepas de Pseudomonas aeruginosa,. CA. Proteus sp., Klebsiella sp. y solo una cepa de Enterobacter sp. no fueron. MA TI. inhibidas por las concentraciones usadas del “Mate de Coca”. Se reportaron además cambios morfológicos bacterianos de algunas cepas de Escherichia coli, asi como algunas cepas de Enterobacter sp., Proteus. FO R. sp., Pseudomonas aeruginosa y Klebsiella sp. 2. IN. Así mismo, Cam y col. en 1996 3, hicieron un estudio de actividad. E. inhibitoria de crecimiento, empleando cepas de bacterias Gram (-), Gram. etanólicos. de. las. MA S. (+) y levaduras aisladas de casos clínicos, utilizando extractos acuosos y hojas. de. coca. de. la. especie. Erythroxylum. TE. novogranatense var. truxillense (Rugby) a diferentes concentraciones de. SI S. 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450 y 500 μg. Se obtuvo como resultados que las 25 cepas en estudio presentaron disminución de. DE. crecimiento conforme se iba aumentando la concentración del extracto. Concluyéndose. que. ambos. extractos,. acuoso. y. etanólico,. de. IN. A. Erythroxylum novogranatense (Morris) var. truxillense poseen acción. IC. inhibitoria de crecimiento frente a algunas cepas de bacterias Gram (-),. OF. Gram (+) y levaduras. Fueron estas investigaciones las que sirvieron como referente para la realización de estudios sobre patógenos propios de la cavidad oral, siendo así que Solano D. en este mismo año, realizó un estudio utilizando estos mismos extractos acuoso y etanólico de principios activos totales de 9. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Erythroxylum novogranetense var. truxillense, sobre Streptococcus de la cavidad bucal. La investigación utilizó 40 muestras; correspondientes a 16 muestras de placa bacteriana, 8 de caries dental, 5 de cálculo dental, 6 de. CA. absceso radicular y 4 de gingivitis, de los cuales se aislaron. MA TI. Streptococcus viridans, tales como S. mutans, S. mitis y S. salivarius. Se emplearon dos extractos (acuoso y etanólico) de E. novogranatense var. truxillense, a concentraciones de 400, 600, 800 y 1000 μg; obteniendo. FO R. como resultado la inhibición de crecimiento de S. mutans y S. mitis a 800. IN. y 1000 μg de concentración de principios activos totales 4.. E. Posteriormente, Borrovic R. en 2006, buscó determinar si el extracto. acción. antibacteriana. MA S. alcohólico de la hoja de E. novogranatense var. truxillense ejercía una sobre. la. flora. mixta. salival,. empleando. TE. concentraciones de 250, 500, 1000, 1500 μg. Sus resultados indicaron. SI S. que este efecto antibacteriano existe, ya que hubo un efecto de inhibición del desarrollo bacteriano en las 4 concentraciones estudiadas, además se. DE. encontró diferencias significativas con respecto al tamaño de los halos de. A. inhibición, el cual fue mayor a medida que aumentaba la concentración 5.. IN. Estas investigaciones dieron paso a su vez a la realización de estudios. IC. con el fin de evaluar la acción antibacteriana, de componentes específicos. OF. de la hoja de coca, como su aceite esencial. Castro L. en el 2008 6, realizó un estudio que evaluó la composición química del aceite esencial de las hojas de Erythroxylum novogranatense var. truxillense, su actividad antioxidante y su actividad como sustancia. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. antibacteriana frente a Streptococcus mutans. El estudio empleó concentraciones de 10, 50 y 100% del aceite esencial aislado de las hojas de coca. Se determinó que el aceite esencial de E. novogranatense var. presenta. actividad. antibacteriana. significativa. frente. CA. truxillense. a. MA TI. Streptococcus mutans, debido a la formación de halos de inhibición, los cuales fueron mayores a medida que aumentaban las concentraciones. FO R. empleadas.. De la misma manera, Ventura en el 2009, realizó un estudio similar, el. IN. cual consistió en evaluar el aceite esencial de Erythroxylum coca Lam.. E. var. Coca (Coca) y determinar su actividad antibacteriana utilizando cepas. MA S. estandarizadas de Bacillus subtilis, Staphylococus aureus, Staphylococus epidermidis, Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa; así mismo,. TE. elucidar su composición química. El estudio empleó hojas secas de Coca,. SI S. que se trataron con un sistema de destilación por arrastre con vapor de agua. El rendimiento del aceite esencial fue de 0,08% v/p y en éste se. DE. practicaron algunos ensayos fisicoquímicos. La evaluación de la actividad antibacteriana in vitro, utilizando concentraciones de 10 y 50% del aceite. IN. A. esencial, mostró mayor actividad a Staphylococcus aureus cepa ATCC. IC. 25923, que frente a las cepas de Escherichia coli, Bacillus subtilis,. OF. Staphylococcus epidermidis, y Pseudomonas aeruginosa cepa ATCC 27853. Lo cual determinó que los componentes químicos del aceite esencial de Erythroxylum coca Lam. Var coca (Coca) poseen actividad antibacteriana contra Staphylococcus aureus 7.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Por todo esto, existiendo antecedentes científicos que demostrarían el efecto antibacteriano por parte de la hoja de coca, así como de algunos de sus componentes específicos, el demostrar un efecto inhibitorio sobre. los. pocos. trabajos. similares. realizados,. además. de. MA TI. validaría. CA. el crecimiento de una cepa estandarizada de Streptococcus mutans,. transformarse en un conocimiento importante en la práctica de la odontología debido a que a partir de dicha sustancia, se podrían elaborar. FO R. diversos productos efectivos para el control de la caries dental,. IN. beneficiando a la población por ser una materia prima económica y. E. natural.. MA S. Por lo tanto el presente estudio tiene como propósito determinar el efecto inhibitorio “in vitro” del extracto acuoso y el extracto etanólico de la hoja. TE. de Erytroxylum novogranatese var. truxillense (Coca) a diferentes. SI S. concentraciones, sobre el crecimiento de Streptococcus mutans cepa. OF. IC. IN. A. DE. ATCC 35668, principal microorganismo en la etiología de la caries dental.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 1.1 PROBLEMA ¿Cuál es el efecto inhibitorio “in vitro” del extracto acuoso y del extracto etanólico de la hoja de Erythrolylum novogranatense var. truxillense mutans cepa ATCC. MA TI. 35668?. CA. (Coca) sobre el crecimiento de Streptococcus. 1.2 HIPÓTESIS. FO R. El extracto acuoso y el extracto etanólico de la hoja de Erythroxylum. IN. novogranatense var. truxillense (Coca) tienen efecto inhibitorio sobre el. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. E. crecimiento de Streptococcus mutans cepa ATCC 35668.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 1.3 OBJETIVOS 1.3.1 Objetivo General  Conocer el efecto inhibitorio “in vitro” del extracto acuoso y el. CA. extracto etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense var.. MA TI. truxillense (Coca) sobre el crecimiento de Streptococcus mutans cepa ATCC 35668.. FO R. 1.3.2 Objetivos Específicos.  Determinar el efecto inhibitorio “in vitro” del extracto acuoso de la. IN. hoja de E. novogranatense var. truxillense a concentraciones de. MA S. mutans cepa ATCC 35668.. E. 25%, 50%, 75% y 100%, sobre el crecimiento de Streptococcus.  Determinar el efecto inhibitorio “in vitro” del extracto etanólico de la. TE. hoja de E.novogranatense var. truxillense a concentraciones de. SI S. 10%, 20%, 35% y 50%, sobre el crecimiento de Streptococcus mutans cepa ATCC 35668.. DE.  Determinar la concentración mínima inhibitoria del extracto acuoso de la hoja de E. novogranatense var. truxillense sobre el. IN. A. crecimiento de Streptococcus mutans cepa ATCC 35668.. IC.  Determinar la concentración mínima inhibitoria del extracto. OF. etanólico de la hoja de E. novogranatense var. truxillense sobre el crecimiento de Streptococcus mutans cepa ATCC 35668.. . Comparar el efecto inhibitorio del extracto acuoso y el extracto etanólico, sobre el crecimiento de Streptococcus mutans cepa ATCC 35668.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. II. MATERIAL Y MÉTODOS. 2.1 TIPO Y ÁREA DE ESTUDIO. CA. La presente investigación, de tipo Experimental, se desarrolló en los. MA TI. ambientes del laboratorio del Departamento de Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.. FO R. 2.2 DEFINICION DE LA POBLACIÓN MUESTRAL. IN. La población muestral fue creada de acuerdo a los parámetros. E. microbiológicos experimentales revisados, quedando constituida por. MA S. 64 discos de difusión.. TE. 2.3 DISEÑO ESTADÍSTICO DE MUESTREO. SI S. 2.3.1 Unidad de análisis. La unidad de análisis la constituyó cada uno de los discos de. DE. difusión observados.. A. 2.3.2 Marco muestral. IN. El marco muestral lo conformó la relación de placas Petri,. OF. IC. establecidas estadísticamente.. 2.3.3 Tamaño de muestra Para determinar el tamaño de la muestra se hizo uso de la siguiente fórmula:. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. : Número de repeticiones a efectuar en cada investigación.. Z α/2 : 1.96. S. : 0.84. para α = 0.05.. para β = 0.20.. FO R. Zβ. MA TI. n. CA. Siendo:. : 0.7. (x1 – x2) valor asumido por no haber estudios previos.. IN. Lo cual dio como resultado ocho, que es el número mínimo de. MA S. E. observaciones para cada concentración.. TE. 2.4 DISEÑO DE CONTRASTACIÓN. SI S. La presente investigación se puede ajustar a un diseño completamente aleatorizado.. Yij = μ + ʈi + εij. IN. A. DE. El esquema puede representarse de la siguiente manera:. IC. Donde:. OF. i = 1, 2, 3,4 j = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8. Cada grupo realizó la prueba en diferentes momentos.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 2.5 PROCEDIMIENTO Y CAPTACIÓN DE LA INFORMACIÓN. 2.5.1 Preparación del extracto acuoso de la hoja de Erythroxylum novogranatense var. truxillense.. CA. El presente estudio, utilizó hojas secas de coca, las cuales fueron. MA TI. obtenidas de un puesto de venta de plantas medicinales de uso popular del mercado “La Unión” de la ciudad de Trujillo.. FO R. Las hojas de coca fueron trituradas hasta reducirlas al menor tamaño posible, quedando completamente pulverizadas. El. IN. extracto acuoso se preparó de forma similar al uso cotidiano. E. (como infusión).. MA S. De las hojas de coca se pesaron 50gr y se combinaron con 100ml de agua destilada, llevándose a ebullición en un recipiente tapado. TE. herméticamente para evitar una cantidad considerable de pérdida. SI S. acuosa por evaporación. Posteriormente se filtró el agua con las hojas de coca para impedir el paso de partículas mayores a la. DE. misma y se llevó nuevamente a volumen (30ml.) Se colocó en 4. A. frascos distintos las cantidades de 10ml, 7.5ml, 5ml y 2.5ml de. IN. infusión de hoja de coca. Luego se añadió a cada frasco la. IC. cantidad faltante en mililitros de agua destilada hasta obtener la. OF. cantidad de 10ml respectivamente a excepción del último frasco que. contuvo. 10ml.. De. esta. manera. se. obtuvieron. las. concentraciones al 25%, 50%, 75% y 100% v/v respectivamente. Cada una de ellas se almacenó en frascos de color ámbar debidamente rotulados, que fueron esterilizados inmediatamente. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. en autoclave por 15 minutos 121°C a 15 libras de presión para su posterior experimentación.. CA. 2.5.2 Preparación del extracto etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense var. truxillense.. MA TI. En este tipo de extracción, también llamado maceración alcohólica, se prepararon 4 diferentes concentraciones.. FO R. En un envase estéril de vidrio ámbar se colocó 60gr de hojas de coca secas previamente molidas. Luego se añadió alcohol etílico. IN. rectificado de 96° hasta que cubrió por completo el contenido de. E. las hojas de coca. Se le agitó tres veces por día, en un tiempo de. MA S. maceración de 7 días a 37°C en estufa. Después de los 7 días de maceración se filtró, con papel filtro numero. 40.. Posteriormente. TE. Whatman. se. procedió. a. la. SI S. evaporación del contenido alcohólico de lo filtrado en un horno a 50 °C, obteniéndose de esta manera los principios activos totales. DE. de la hoja de Erythroxylum novogranatense var. truxillense. Las. A. concentraciones que se utilizaron en el presente estudio fueron al. IN. 10%, 20%, 35% y 50% de principios activos totales.. IC. Cada una de ellas se almacenó en frascos de color ámbar. OF. debidamente rotulados, que inmediatamente fueron esterilizados en autoclave por 15 minutos 121ºC a 15 libras de presión para su posterior experimentación.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 2.5.3 Obtención de la cepa. La cepa de Streptococcus mutans ATCC 35668 fue obtenida del Microbiologics Laboratorio, adquiridos en el Instituto Nacional de. CA. Salud, Lima- Perú.. MA TI. 2.5.4 Preparación de la cepa.. Una vez obtenida la cepa, ésta fue cultivada en tubos de ensayo. FO R. con tapa rosca conteniendo el medio Soya tripticasa, incubándose a 37 °C y en microanaerobiosis, utilizando la Jarra Gas-Pack (con. IN. el método de la vela) mediante el cual se obtuvo un ambiente. E. aproximado de 5 a 10 % de CO2; con el fin de obtener colonias. MA S. jóvenes. Luego de 24 horas de cultivados los microorganismos, se les agregó caldo tioglicolato, hasta obtener una turbidez. TE. semejante al tubo número 1 de la escala de Mac Farland. Los. SI S. tubos que contuvieron la bacteria estudiada, fueron girados entre las manos durante 30 segundos, antes de proceder al sembrado,. DE. para distribuir los microorganismos adecuadamente.. IN. A. 2.5.5 Sembrado.. IC. Con un hisopo estéril, el cual fue embebido en el tubo del cultivo. OF. preparado y a una distancia de 10 cm de la llama del mechero, se hizo el sembrado en placas petri, conteniendo Agar Soya Tripticasa - Sangre, hisopando uniformemente sobre toda la superficie del agar y girando cada placa 30 grados por 10 veces aproximadamente.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 2.5.6 Determinación. del. efecto. antibacteriano. (Prueba. de. Susceptibilidad). Para la prueba de susceptibilidad, se prepararon 4 diluciones de. CA. extracto acuoso de Hojas de coca a concentraciones al 25%,. MA TI. 50%, 75% y 100% y 4 diluciones de extracto etanólico a concentraciones al 10%, 20%, 35% y 50%. Dichas diluciones se conservaron a 4 ºC para el estudio microbiológico.. FO R. Posteriormente de realizado el sembrado de Streptococcus. IN. mutans ATCC 35668 en placas Petri, se realizó la prueba de susceptibilidad, para lo cual, se utilizó el método de Difusión en. E. Discos. Se prepararon discos de papel filtro estériles, los cuales. MA S. fueron sumergidos dentro de cada una de las concentraciones de ambos extractos, luego con una aguja estéril fueron colocados. TE. sobre los cultivos de Streptococcus mutans cepa ATCC 35668 en. SI S. placas petri, previamente preparados. En las placas destinadas al. DE. grupo control se utilizó agua destilada. Posteriormente. las. placas. se. incubaron. a. 37°C. en. A. microanaerobiosis utilizando la Jarra Gas-Pack; dentro del. IN. diámetro de 10 cm. de la llama de un mechero.. OF. IC. La siembra del microorganismo fue para cada una de las ocho concentraciones en total, del. extracto acuoso y el extracto. etanólico de las hojas de Coca. Los valores que se obtuvieron en las distintas concentraciones de ambos extractos se compararon. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. con el valor obtenido en la siembra a la que únicamente se colocó dilución de tioglicolato, la cual sirvió de control. Finalmente, la lectura se llevó a cabo a las 24 horas. Se midieron. CA. los halos de inhibición (susceptibilidad) de cada una de las. MA TI. concentraciones, incluyendo el área del disco de papel de filtro, con una regla milimetrada, procediéndose de igual manera las. FO R. siembras con agua destilada.. 2.5.7 Determinación de la concentración mínima inhibitoria (CMI).. IN. La determinación de la CMI se realizó por el método de Diluciones. E. en tubos, se utilizaron 10 tubos de ensayo enumerados del 1 al. MA S. 10, en el tubo número 1 se colocó el extracto acuoso de la hoja de coca de una determinada concentración, en el tubo número 2 se. TE. colocó 0.2 ml. de extracto acuoso de la hoja de coca y 0.6 ml. de. SI S. tioglicolato, en el tercer tubo se colocó 0.2 ml. de la dilución del tubo anterior y 0.2 ml. de tioglicolato, y así sucesivamente hasta. DE. el tubo número 10; acto seguido se colocó 0.2 ml. de la dilución. A. de la cepa (semejante a tubo #1 de Mac Farland) en cada uno de. IN. los 10 tubos, agitándolos para uniformizarlos. Los tubos fueron. IC. colocados en la estufa a 37 °C en microanaerobiosis por 24. OF. horas. Este procedimiento se realizó con cada una de las diferentes concentraciones de los extractos: acuoso y etanólico, de las hojas de coca. Posteriormente en los tubos que no presentaron turbidez (UFC’s), se determinaron las cuentas viables, sembrando 0.1 ml. de 21. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. solución de cada uno de los tubos en placas petri con agar Soya Tripticasa-Sangre, utilizando el asa de Driglasky para dispersar la muestra, dichas placas fueron colocadas en estufa por 24 hrs. a. CA. 37°C y microanaerobiosis, luego de lo cual se procedió a la. MA TI. observación del crecimiento bacteriano mediante el conteo de las Unidades Formadoras de Colonias (UFC’s), considerándose como la CMI a la menor concentración en la cual no se observaron. FO R. UFC’s. Todo el procedimiento se llevó a cabo dentro del diámetro. MA S. E. IN. de 10 cm. de la llama de un mechero.. TE. 2.6 INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS. SI S. El presente trabajo utilizó dos fichas de recolección de datos (Anexos 02 y 03) que fueron llenados por el investigador; los cuales tuvieron la. DE. función de registrar los datos sobre la medida individual de los halos en mm, formados en cada uno de los discos de difusión presentes en. OF. IC. IN. A. las placas Petri.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 2.7 VARIABLES Y ESCALAS DE MEDICIÓN. Tipo. Escala. Concentraciones. MA TI. Variable. Indicador. CA. Cuadro Nº 01: Operacionalización de las Variables. al 25%, 50%, 75%. Cuantitativa. Ordinal. Cuantitativa. Ordinal. Cuantitativa. Ordinal. Cuantitativa. Ordinal. FO R. Variable Independiente. Extracto Acuoso de Hoja de Coca.. Extracto Etanólico de Hoja de Coca.. MA S. E. IN. y 100%.. Concentraciones. SI S. TE. al 10%, 20%, 35%, 50%.. DE. Variable Dependiente. Efecto inhibitorio “in vitro”. Diámetro de halo de inhibición. IN. A. sobre el crecimiento de. OF. IC. Streptococcus mutans. Unidades Formadoras de Colonias (UFC’s). 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 2.8 DEFINICIÓN DE VARIABLES. 2.8.1 Variables Independientes. CA. Extracto acuoso de hoja de coca: Extracto que posee los. MA TI. principios activos de la hoja de coca, cuyo solvente es el agua, preparado a las concentraciones de 25%, 50%, 75% y 100%. Extracto etanólico de hoja de coca: Extracto que posee los. FO R. principios activos de la hoja de coca, cuyo solvente es el etanol,. E. 2.8.2 Variable Dependiente. IN. preparado a las concentraciones de 10%, 20%, 35% y 50%.. MA S. Efecto inhibitorio “in vitro”: Capacidad para detener la reproducción de una bacteria. Determinado luego de medir el. TE. crecimiento bacteriano, mediante la longitud del diámetro del. SI S. halo de inhibición; y el conteo de Unidades Formadoras de. DE. Colonias (UFC’s).. A. 2.9 ANALISIS ESTADISTICO E INTERPRETACION DE DATOS. IN. Los datos consignados en las correspondientes fichas de recolección. OF. IC. de datos (Anexos 02 y 03) fueron procesados de manera automatizada con el soporte del paquete estadístico SPSS- 15.0; y para analizar la información se construyeron tablas de frecuencias de una entrada con sus valores absolutos.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Para determinar el efecto inhibitorio de cada tipo de solución, se hizo un análisis de varianza de un diseño completamente aleatorizado y la prueba de Duncan para comparaciones múltiples, ambos con un nivel. CA. de significancia del 5%; así mismo, para comparar la cantidad mínima. MA TI. inhibitoria de cada solución, se empleó la prueba de comparación de medias utilizando la distribución T de student, con un nivel de. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. E. IN. FO R. significancia del 5%.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. III.. RESULTADOS. El presente trabajo de investigación de tipo experimental “in vitro”, se. CA. desarrolló en los ambientes de la sección de Microbiología Médica de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo; tuvo como determinar. el. efecto. de. inhibición. de. 4. MA TI. propósito,. diferentes. concentraciones de extracto acuoso (25%, 50%, 75% y 100%) y 4. FO R. diferentes concentraciones de extracto etanólico (10%, 20%, 35% y 50%) de hojas de coca sobre el crecimiento de Streptococcus mutans ATCC. E. IN. 35668; encontrándose los siguientes resultados:. MA S. Respecto al efecto inhibitorio “in vitro” del extracto acuoso de hojas de coca sobre el crecimiento de Streptococcus mutans ATCC 35668, se halló. TE. que de un total de 32 discos de difusión (8 para cada una de las. SI S. concentraciones) todos presentaron halos de inhibición; siendo el promedio de diámetro de los halos al 25% y 50% de concentración de. DE. 6.75 mm y 6.93 mm respectivamente; al 50% de 8mm; y a la concentración al 100% de 12.12 mm. Teniendo estos 3 grupos diferencias. IN. A. estadísticamente significativas. (Tabla 01). IC. Respecto al efecto inhibitorio “in vitro” del extracto etanólico de hojas de. OF. Coca, se halló que de un total de 32 discos de difusión todos presentaron halos de inhibición; siendo el promedio de diámetro de los halos al 10% de concentración de 11.43 mm; al 20% y 35% de concentración de 12.12 mm y 12.5 mm respectivamente y al 50% de concentración un promedio. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. de diámetro de 13.31 mm. Teniendo estos 3 grupos diferencias estadísticamente significativas. (Tabla 02) Todos los resultados obtenidos para el control negativo no presentaron. MA TI. CA. halo de inhibición en el 100% de los casos.. Respecto a los valores de unidades formadoras de colonias (UFC’s) para el extracto acuoso: la concentración al 25% presentó el mayor promedio. FO R. siendo de 139.25 UFC’s, la concentración al 50% tuvo un valor de 110.37. IN. UFC’s, al 75% un valor de 62.62 y al 100% un valor de 46.87. Siendo la. E. concentración al 75% la mínima inhibitoria. (Tabla 03). MA S. Así mismo al determinar la concentración mínima inhibitoria para el extracto etanólico de hojas de coca, se encontró que la concentración al. TE. 10% presentó un promedio de 18.5 UFC’s, la concentración al 20%. SI S. presento un valor promedio de 14.5 UFC’s, al 35% un valor de 11.62 y al 50% no se observaron Unidades Formadoras de Colonias. Siendo esta. DE. última la concentración mínima inhibitoria. (Tabla 04). A. Al comparar el efecto inhibitorio de ambos extractos al mismo porcentaje. IC. IN. de concentración (50%), se observó un promedio de diámetro de 6.93mm. OF. para el extracto acuoso y un promedio de diámetro de 13.31mm para el extracto etanólico. Teniendo este último mayor efecto inhibitorio. (Tabla 05). 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Tabla 01. CA. Medidas descriptivas de Promedios de los Halos de Inhibición como Indicador de la Susceptibilidad de Streptococcus mutans ATCC. MA TI. 35668 frente a Cada Concentración de extracto acuoso de hoja de. ni. alfa = 0.05. 1. 2. IN. Tratamientos. FO R. coca. (Prueba de Duncan). 8. 6.75. 50%. 8. 6.9375. 75%. 8. 100%. 8. 8. X=0. DE. Controles:. 12.125. SI S. TE. MA S. E. 25%. 3. OF. IC. IN. A. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2011. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Tabla 02. CA. Medidas descriptivas de Promedios de los Halos de Inhibición como Indicador de la Susceptibilidad de Streptococcus mutans ATCC. MA TI. 35668 frente a Cada Concentración de extracto etanólico de hoja de. ni. alfa = 0.05. 20%. 8. 35%. 8. 12.125 12.5. 8. 13.3125. SI S. 50%. X=0. DE. Controles:. 3. 11.4375. MA S. 8. TE. 10%. 2. E. 1. IN. Tratamientos. FO R. coca. (Prueba de Duncan). OF. IC. IN. A. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2011. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Tabla 03. CA. Promedios de Conteo de Unidades Formadoras de Colonias (UFC’s) de Streptococcus mutans ATCC 35668 como indicador de la. alfa = 0.05. IN. ni 2. 100%. 8. 46.875. 75%. 8. 50%. 8. 25%. 8. MA S. 1. 3. 4. E. Tratamientos. FO R. acuoso de hoja de Coca. (Prueba de Duncan). MA TI. Concentración Mínima Inhibitoria de 04 concentraciones de extracto. 62.625. 139.25. SI S. TE. 110.375. DE. Control: según la escala de Mac Farland: 3x108 UFC’s. OF. IC. IN. A. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2011. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Tabla 04. CA. Promedios de Conteo de Unidades Formadoras de Colonias (UFC’s) de Streptococcus mutans ATCC 35668 como indicador de la. MA TI. Concentración Mínima Inhibitoria de 04 concentraciones de extracto. ni. alfa = 0.05. IN. Tratamientos. FO R. etanólico de hoja de Coca. (Prueba de Duncan). 8. 20%. 8. 10%. 8. MA S. 35%. 0. 4. 11.625. TE. 8. 3. 14.5 18.5. SI S. 50%. 2. E. 1. DE. Control: según la escala de Mac Farland: 3x108 UFC’s. OF. IC. IN. A. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2011. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. CA. Tabla 05. MA TI. Comparación del efecto inhibitorio “in vitro” de los extractos acuoso. 8. IN. Acuoso. alfa=0.05. 1. 6.9375. 8. 13.3125. SI S. TE. Etanólico. 2. E. ni. MA S. Tipo de Extracto. FO R. y etanólico a la misma concentración (50%).. OF. IC. IN. A. DE. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2011. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. IV. DISCUSIÓN La presente investigación de tipo experimental “in vitro”, tuvo como propósito determinar el efecto inhibitorio de los extractos acuoso y. CA. etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense var. truxillense. MA TI. (Coca) sobre el crecimiento de Streptococcus mutans cepa ATCC 35668, utilizando cuatro concentraciones diferentes para cada tipo de extracto. FO R. (25%, 50%, 75% y 100% para el extracto acuoso y 10%, 20%, 35% y 50%. IN. para el extracto etanólico).. Los resultados indican la existencia de un efecto de inhibición de ambos. E. extractos de Hoja de Coca, sobre el crecimiento de Streptococcus. MA S. mutans, lo cual da sustento a las primeras investigaciones realizadas en personas con el hábito de chacchar coca, como los trabajos realizados 32. , Ayala. 33. y Coronel. TE. por Goicochea. 34. ; quienes hallaron que los grupos. SI S. de chacchadores de coca presentaban una disminución de la incidencia. DE. de caries dental, la cual tiene como uno de sus principales agentes patógenos al Streptococcus mutans. 15. . Sin embargo Coronel indica que. A. existe un aumento de la prevalencia de enfermedad periodontal en este. IC. IN. mismo grupo.. OF. Así mismo, existen estudios que se basan en las propiedades antimicrobianas del mate de coca o Infusión a base de coca de las especies: Erythroxylum coca Lambran y Erythroxylum novogranatense var. truxillense, como los realizados por Aguilar. 1. y Castro 2; los cuales. obtuvieron resultados positivos del efecto antimicrobiano de ambas. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. especies, sobre distintos agentes microbianos como son respectivamente especies. del. género. y. Mycobacterium. uropatógenos. Gram. (-). multiresistentes. 4. y Borrovic 5, basaron sus. CA. Por otro lado, Cam y Villanueva 3, Solano. MA TI. estudios utilizando extractos acuosos y etanólicos de Erythroxylum novogranatense var. truxillense sobre agentes microbianos como. FO R. bacterias Gram (-) y Gram (+), Streptococcus de la cavidad bucal y bacterias de la flora bacteriana mixta salival respectivamente, obteniendo. IN. en ambos casos disminución de crecimiento a medida que aumentaba la. E. concentración.. MA S. De esta manera, se observa que los distintos estudios realizados. 1-5. ,. obtienen un efecto antibacteriano, ya sea utilizando el método de. TE. extracción alcohólica de principios activos totales o el de extracción. SI S. acuosa (Infusión), teniendo esto similar resultado respecto al presente. DE. estudio en el que se encontró un efecto inhibitorio en ambos tipos de. A. extractos, sobre el crecimiento de Streptococcus mutans ATCC 35668.. IN. Respecto a éstos resultados se observó también diferencias altamente. IC. significativas (p<0.001) en relación al tamaño de los halos de inhibición. OF. (Anexos 04 y 05) y el número de unidades formadoras de colonias. (Anexos 06 y 07), en las distintas concentraciones utilizadas de extracto acuoso y extracto etanólico de hojas de coca, siendo además mayor el diámetro del halo de inhibición y el número de unidades formadoras de. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. colonias a medida que aumentaba la concentración; coincidiendo con los trabajos realizados por Solano 4 y Borrovic 5. Así mismo, al comparar los promedios de los halos de inhibición de las. CA. concentraciones al 50% de ambos extractos, se encontró que el extracto. MA TI. etanólico posee un mayor efecto inhibitorio con respecto al extracto acuoso, cuyos promedios de halos de inhibición fueron de 6.93 mm para. FO R. el extracto acuoso y 13.31 mm para el extracto etanólico. Esto podría deberse a que al utilizar un solvente orgánico como el etanol, se. IN. preservan mejor los compuestos biológicamente activos 5. (Tabla 05). E. En la literatura se ha reportado que distintos metabolitos secundarios,. MA S. como polifenoles, entre ellos flavonoides, taninos, etc.; y aceites esenciales de ciertas sustancias naturales, pueden tener un efecto. TE. inhibitorio sobre las células bacterianas. 19, 35. . A su vez diversos estudios. SI S. fitoquímicos han reportado que los metabolitos secundarios más. DE. registrados en especies del género Erythoxylum (Coca) son los alcaloides, flavonoides y terpenoides. 36. . Siendo las hojas, las estructuras. A. de la planta de los que se han aislado la mayoría de estos metabolitos. IC. IN. secundarios (50%) 21, 36.. OF. Los hallazgos encontrados en la presente investigación permiten afianzar estos conocimientos, evidenciados por el aumento del efecto de inhibición. a medida que aumentan las concentraciones de ambos tipos de extractos; por lo que se puede deducir que a mayor concentración, se incrementa. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. también la cantidad de principios activos totales, entre ellos los polifenoles36. Se ha determinado que los polifenoles tienen mecanismos de acción. CA. contra los microorganismos, como la inhibición de la producción de ácidos. MA TI. y de la enzima glucosiltransferasa19, lo que podría explicar su acción contra los Streptococcus mutans, debido a que es ésta enzima, producida. FO R. por la bacteria, la responsable del su rol principal en las interacciones. IN. adhesivas y expresión de la virulencia 16,18.. Por otro lado, se han realizado investigaciones inclinadas a demostrar el. E. efecto antimicrobiano de otros compuestos de la hoja de Erythroxylum. MA S. novogranatense var. truxillense (Coca), como el aceite esencial. En los trabajos realizados por Castro. 6. y Ventura 7, se demostró que el aceite. TE. escencial de Erythroxylum novogranatense var. truxillense presenta. SI S. actividad significativa frente a cepas de Streptoccocus mutans y de. DE. Staphylococcus aureus ATCC 25923 respectivamente.. A. El efecto inhibitorio “in vitro” de los extractos acuoso y etanólico de las. IN. hojas de E. novogranatense var. truxillense, determinado en la presente. IC. investigación sobre el Strepotococcus mutans ATCC 35668, es similar al. OF. que se ha observado en otras investigaciones sobre otras especies bacterianas propias de la microflora oral vegetales. 19,35. 4-6. , así como con otras especies. . Lo que sugiere que podría existir más de una especie. vegetal que posea ésta capacidad inhibitoria sobre el crecimiento de microorganismos patógenos orales, poniendo de manifiesto el potencial. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. terapéutico que tienen las sustancias naturales y en particular la Hoja de Coca, al ser utilizada en el campo de la prevención, siendo este tipo de investigaciones necesarias para proporcionar otras alternativas de. CA. tratamientos preventivos a nivel oral, más económicos y saludables,. MA TI. dando a conocer a la población de manera científica las propiedades medicinales de esta planta.. FO R. De esta manera, el estudio por lo antes expuesto lleva a aceptar la hipótesis alternativa propuesta al inicio de la investigación, pudiendo. IN. afirmar que el extracto acuoso y el extracto etanólico de la hoja de. E. Erythroxylum novogranatense var. truxillense (Coca), tienen un efecto. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. inhibitorio sobre el crecimiento de Streptococcus mutans ATCC 35668.. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. V. CONCLUSIONES. . El extracto acuoso de Erythroxylum novogranatense var. truxillense. CA. (Coca) a las concentraciones de 25%, 50%, 75% y 100%, posee. MA TI. efecto inhibitorio “in vitro” sobre el crecimiento de Streptococcus mutans ATCC 35668, en relación directa con la concentración. . FO R. utilizada.. El extracto etanólico de E. novogranatense var. truxillense a. IN. concentraciones de 10%, 20%, 35% y 50%, posee efecto inhibitorio. E. “in vitro” sobre el crecimiento de Streptococcus mutans ATCC 35668,. La concentración mínima inhibitoria para el extracto acuoso de E.. TE. . MA S. en relación directa con la concentración utilizada.. SI S. novogranatense var. truxillense sobre el crecimiento de Streptococcus. . DE. mutans ATCC 35668, fue del 75%.. La concentración mínima inhibitoria para el extracto etanólico de E.. IN. A. novogranatense var. truxillense sobre el crecimiento de Streptococcus. El extracto etanólico fue el que obtuvo mayor efecto inhibitorio sobre. OF. . IC. mutans ATCC 35668, fue del 50%.. el crecimiento de Streptococcus mutans ATCC 35668.. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. . CA. VI. RECOMENDACIONES. Se recomienda efectuar otras investigaciones utilizando otros. Realizar. estudios. utilizando. componentes. específicos. FO R. . MA TI. microorganismos patógenos específicos de la microflora oral.. de. las. diferentes variedades de hoja de coca con el fin de determinar. IN. exactamente los compuestos químicos que causen el efecto. MA S. . E. antimicrobiano.. Comprobar clínicamente el efecto inhibitorio de las hojas de coca. . SI S. TE. sobre el crecimiento de microorganismos cariogénicos.. Continuar realizando estudios con plantas medicinales para encontrar. OF. IC. IN. A. DE. nuevas y mejores alternativas de prevención de enfermedades orales.. 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. 1. Aguilar E, Montalvo J. Comportamiento in vitro de Erythroxylum coca-. CA. Erythroxylum novogranatense “Mate de coca” sobre Mycobacterium. Químico farmacéutico UNMSM. Lima; 1995.. MA TI. tuberculosis y otras especies de Mycobacterium. Tesis de bachiller para. FO R. 2. Castro V, Chavez D. Acción inhibitoria in vitro de Erythroxylum Lam. Var. coca y Erythoxylum novogranetense var. truxillense “Mate de Coca”. IN. frente a uropatógenos Gram negativos multiresistentes. Tesis de. E. Bachiller para Químico Farmacéutico UNMSM. Lima; 1995.. MA S. 3. Cam O, Villanueva V. Acción Inhibitoria in vitro del extracto acuoso y extracto etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense (Morris). TE. var. truxillense (Rusby) frente a bacterias Gram (-) y Gram (+). Tesis de. SI S. bachiller para Químico farmacéutico UNMSM. Lima; 1996. 4. Solano O. Acción antibacteriana de extractos acuoso y etanólico de. DE. principios activos totales de Erythroxylum Novogranetense (Morris) var.. A. truxillense (Rusby) sobre Streptococcus de la cavidad bucal. Tesis de. IN. Bachiller para Químico Farmacéutico UNMSM. Lima; 1996.. IC. 5. Borrovic Ramos F. Efecto antibacteriano del extracto alcohólico de la. OF. hoja de Erythroxylum novogranatense var. Truxillense (coca) sobre flora mixta salival. Tesis de bachiller para Cirujano Dentista. Lima: UNMSM; 2006.. 6. Castro L. Américo. Composición química del aceite esencial de las hojas de Erythroxylum novogranatense (Morris) "coca", actividad antioxidante. 40 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(48) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. y determinación antibacteriana frente a Streptococcus mutans. TESIS para optar el grado de Doctor en Farmacia y Bioquímica Lima UNMSM; 2008.. CA. 7. Ventura G, Castro A, Roque M, Ruiz J. Composición Química del Aceite. MA TI. Esencial de Erythroxylum coca Lam var. coca y evaluación de su actividad antibacteriana. Ciencia e Investigación 2009; 12(1): 24-28. Lima; 2009.. FO R. 8. Bhaskar. S. N. Patología Bucal. 3ra ed. Buenos Aires, Argentina: El. IN. ateneo; 1977.. 9. Ministerio de Salud del Perú: “Plan de Salud Bucal 2005” URL. E. Disponible en:. MA S. <http://www.minsa.gob.pe/portal/campanas/SBucal/Archivos/RM5382005%20Plan%20de%20Salud%20Bucal.pdf>. TE. 10. Hinostroza G, Arana A. Diagnostico de Caries Dental. Lima: Editorial. SI S. Universidad Peruano Cayetano Heredia; 2005. Operatoria Dental, Arte y. DE. 11. Studervant C. Roberson T, Heymann H.. Ciencia. 3ª ed. Mexico: MC Graw-Hill Interamericana; 2001.. A. 12. Barrancos Mooney, Julio. Operatoria Dental: Integración Clinica. 4ta ed.. IN. Buenos Aires: Médica Panamericana; 2006.. OF. IC. 13. Moncada C, Urzua A. Cariología Clinica, Bases preventivas y restauradoras. Chile; 2008.. 14. Newbrun E. Cariología. 4ª ed. Mexico: Nueva Editorial Interamericana; 1985.. 41 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(49) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 15. Brambilla E, García F, Strohmenger L. Principles of diagnosis and treatment of high-caries-risk subjects. Paediatr Dent; 2000. 16. Liébana U. J. Microbiología Oral. 2ª ed. Granada, España: McGraw-Hill.. CA. Interamericana; 2002.. MA TI. 17. Mouton C, Robert J-C. Bacterias grampositivas. En: Mouton C, Robert J-C. Bacteriología bucodental. Barcelona: Masson; 1995.. 18. Street CM, Goldner M and Le Riche WH. Epidemiology of Dental Caries. FO R. in Relation to Streptococcus Mutans on Tooth Surfaces in 5-Year-Old. IN. Children. Archs. Oral Biol; 1976.. 19. Alvarado V, Moromi N. Plantas medicinales: Efecto antibacteriano in vitro. E. de Plantago major L, Erythroxylum novogranatense var. truxillense y. MA S. Camellia sinensis sobre bacterias de importancia estomatológica. Odontología Sanmarquina 2010; 13(2): 21-25. Lima; 2010.. TE. 20. Burchard R. Una nueva perspectiva sobre la masticación de la coca.. SI S. Instituto Indigenista Interamericano. América Indígena, Vol. XXXVIII, N°. DE. 4, octubre-diciembre. México; 1978. 21. ENACO S.A, Universidad Nacional de Trujillo. I Forum Internacional. A. “Bondades de la Coca: Retos y Propuestas”. Trujillo, Perú: Editorial. IN. Libertad; 1993.. OF. IC. 22. Horna R. La producción de coca en el Perú. Cocaína 1980. Actas del Seminario Interamericano sobre Aspectos Médicos y Sociológicos de la Coca y la Cocaína. Lima; 1980.. 23. Cabieses F. Apuntes de medicina tradicional. A&B S.A. Lima; 1993.. 42 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.