Efecto de la soya vs el suero de leche sobre el daño oxidativo cerebral en Rattus novergicus variedad albinus

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO ESCUELA DE POSGRADO. PO SG. RA. DO. -U. NT. SECCIÓN DE POSTGRADO EN CIENCIAS MÉDICAS. Efecto de la soya vs el suero de leche sobre el daño oxidativo cerebral en Rattus novergicus variedad albinus. DE. TESIS. CA. PARA OBTENER EL GRADO ACADÉMIDO DE:. BL IO TE. MAESTRO EN CIENCIAS CON MENCIÓN EN:. FISIOLOGÍA Y BIOFÍSICA. BI. AUTOR: Br. ALVARO DAVID RODRÍGUEZ SALVATIERRA ASESORA: Dra. LUZ MARINA GUERRERO ESPINO. TRUJILLO - PERÚ 2018 No. De Registro: __________. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN. NT. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO:. -U. Cumpliendo con las disposiciones establecidas en el reglamento de grados y. DO. títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, presento a vuestra consideración y claro discernimiento la tesis titulada: Efecto de la soya vs el suero de leche sobre el daño. PO SG. CA. DE. el grado académico de Maestro.. RA. oxidativo cerebral en Rattus novergicus variedad albinus, con el propósito de obtener. BI. BL IO TE. Trujillo, 22 de Octubre del 2018. ________________________________ Br. Alvaro David Rodríguez Salvatierra. II Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. -U. ____________________________. NT. JURADO DICTAMINADOR. PO SG. RA. PRESIDENTE. DO. Dr. Walter Esteban Obeso Terrones. DE. ____________________________. SECRETARIO. BI. BL IO TE. CA. Ms. Jorge Omar Plasencia Álvarez. ____________________________ Dra. Luz Marina Guerrero Espino MIEMBRO. III Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEL ASESOR. La que suscribe, profesora asesora de la tesis: “Efecto de la soya vs el suero de leche sobre el daño oxidativo cerebral en Rattus novergicus variedad albinus”, deja constancia que ésta ha sido desarrollada de conformidad con los objetivos propuestos en. NT. su perfil académico y que el informe ha sido revisado y acoge las observaciones y. -U. sugerencia alcanzada.. DO. Por lo tanto, autorizo al Br. Alvaro David Rodríguez Salvatierra a continuar con. CA. DE. PO SG. RA. los trámites correspondientes.. BL IO TE. ____________________________ Dra. Luz Marina Guerrero Espino. BI. ASESORA. IV Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. APROBACIÓN. Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran que el presente informe de tesis ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales,. DO. -U. NT. siendo aprobado por UNANIMIDAD. RA. ____________________________. Dr. Walter Esteban Obeso Terrones. DE. PO SG. PRESIDENTE. CA. ____________________________. BI. BL IO TE. Ms. Jorge Omar Plasencia Álvarez SECRETARIO. ____________________________ Dra. Luz Marina Guerrero Espino MIEMBRO. V Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A mi amado padre espiritual Dios y a mis padres, doña Lili Salvatierra Lecca y don Alvaro Rodríguez Cabrera, por guiarme, acompañarme y permitirme seguir mi pasión. -U. NT. académica.. DO. A mis estimados alumnos de la Universidad Nacional de Trujillo, con quienes tuve la. RA. grata experiencia de compartir conocimientos y emociones: Medicina Promoción LVI en. PO SG. el curso de Biofísica Médica, Enfermería Promoción LI en Ciencias Básicas Integradas y. DE. Educación Inicial Promoción XX en Nutrición Infantil.. CA. A mis amigos incondicionales Juan Diego, Fiorella, Sindy, Oscar, Denis, Olga, Wilker,. BI. BL IO TE. Gloria, Lulu, Chale y Aisa por sus consejos, compañía y amistad incondicional.. VI Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTOS. Agradezco a mi asesora y guía Dra. Luz Marina Guerrero Espino, por su apoyo desinteresado, motivación y por contribuir con sus conocimientos y enseñanzas a la. -U. NT. realización de esta tesis.. DO. Agradezco a mi maestro y amigo Ms. C. Orlando Enrique Pretel Sevillano, Director de. RA. Departamento de Química Biológica y Fisiología Animal, por su apoyo y consejos. PO SG. brindados durante la ejecución de esta tesis.. Agradezco a mi maestro y amigo Ms. C. Abhel Arthur Calderón Peña por su. DE. comprensión, apoyo sin igual, aliento y buen humor que me permitieron seguir adelante. BL IO TE. CA. con esta investigación.. Agradezco a mi maestro y amigo Ms. C. Juan Carlos Rodríguez Soto por su explicación. BI. de la ciencia estadística que me permitió organizar esta investigación.. Agradezco a mi amigo Br. Carlos Ludwig Puente de la Cruz por su apoyo constante y compañía durante la ejecución de esta investigación.. VII Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE. RESUMEN……………………………………………………………………………..IX ABSTRACT…………………………………………………………………………….X I. INTRODUCCIÓN…………………………………………………………………….1 II. MATERIAL Y MÉTODOS…………………………………………………………..5. NT. III. RESULTADOS…………………………………………………………………….12. -U. IV. DISCUSIÓN………………………………………………………………………..14 V. CONCLUSIONES…………………………………………………………………..17. DO. VI. RECOMENDACIONES…………………………………………………………...18. RA. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS……………..……………………………...19. BI. BL IO TE. CA. DE. PO SG. ANEXOS……………………………………………………………………………….25. VIII Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. Existen interrogantes sobre los efectos de la proteína dietética en la salud, dependiendo de la fuente de proteína o de la cantidad consumida. El trabajo tuvo como objetivo analizar el efecto de las dietas hiperproteicas de aislado de soya versus concentrado suero de leche sobre el daño oxidativo cerebral en ratas. Se utilizaron 28 Rattus novergicus variedad albinus cepa Sprague Dawley, machos sanos de 4 semanas. NT. con peso inicial 168 gr ± 20 gr procedentes del Bioterio de la Universidad Peruana Cayetano Heredia. Elegimos 12% de contenido de proteína para el grupo control de dieta. -U. balanceada. Se seleccionó un nivel proteico alrededor del 45% (44% en la dieta. DO. suplementada con soya y 43,5 % en la dieta suplementada con suero) para las dietas altas en proteína a expensas de los carbohidratos. Determinamos la peroxidación lipídica con. RA. el método TBARS; resultando un compuesto cromóforo rosado que se midió en el. PO SG. espectrofotómetro a 535 nm. Los valores obtenidos en absorbancia fueron procesados por conversión, expresándose en concentración de MDA por gramo de cerebro (µg/g). Los resultados de esta investigación muestran que la producción de radicales libres de cerebro de rata está relacionado con la fuente de proteína. De este modo, la media en la dieta. DE. balanceada (normoproteica) es 2,69531 ug/g, no difiere con la dieta hiperproteica de concentrado de suero de leche que es de 2,1962 ug/g. Pero la hiperproteica de aislado de. CA. soya sí incrementó la generación de radicales libres a 7,54845 ug/g (P≤0.05). Los. BL IO TE. homogenizados de cerebro de ratas sometidas a una dieta hiperproteica de concentrado de suero de leche presentan menor concentración de radicales libres comparado con la dieta hiperproteica de aislado de soya; esto se debería a la capacidad oxidante de la soya y la antioxidante del suero de leche.. BI. Palabras claves: aislado de soya, proteína de suero, estrés oxidativo, dieta hiperproteica. IX Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. There are questions about the effects of dietary protein on health, depending on the source of protein or the amount consumed. The objective of this work was to analyze the effect of hyperproteic diets of soy isolate versus concentrated whey on brain oxidative damage in rats. 28 Rattus novergicus variety albinus strain Sprague Dawley, healthy males of 4 weeks with initial weight 168 gr ± 20 gr from the Bioterio of the Universidad. NT. Peruana Cayetano Heredia were used. We chose 12% protein content for the balanced diet control group. A protein level was selected around 45% (44% in the diet. -U. supplemented with soy and 43.5% in the diet supplemented with serum) for high protein. DO. diets at the expense of carbohydrates. We determined the lipid peroxidation with the TBARS method; resulting in a pink chromophore compound that was measured in the. RA. spectrophotometer at 535 nm. The values obtained in absorbance were processed by. PO SG. conversion, expressed in MDA concentration per gram of brain (μg / g). The results of this investigation show that the production of rat brain free radicals is related to the protein source. Thus, the average in the balanced diet (normoproteic) is 2.69531 ug/g, does not differ with the hyperproteic diet of whey concentrate which is 2.1962 ug/g. But the. DE. hyperprotein of soy isolate did increase the generation of free radicals at 7.54845 ug/g (P≤0.05). The brain homogenates of rats subjected to a hyperproteic diet of whey. CA. concentrate have a lower concentration of free radicals compared with the hyperprotein. BL IO TE. diet of soy isolate; this would be due to the oxidant capacity of the soybeans and the antioxidant of the whey.. BI. Keywords: soybean isolate, whey protein, oxidative stress, hyperproteic diet. X Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I. INTRODUCCIÓN La definición clásica de estrés oxidativo es “el desequilibrio entre los mecanismos fisiológicos encargados de la producción y la neutralización de compuestos reactivos que provocan daño molecular oxidativo”.1 En la biología redox y la medicina, estrés oxidativo se asocia a: (i) metabolismo aeróbico como equilibrio redox en estado estacionario y (ii) las tensiones potenciales generan respuestas de estrés biológico.2 Entonces, podemos. NT. decir que el estrés oxidativo es el desequilibrio entre oxidantes y antioxidantes, en favor de los primeros, esto conlleva a una ruptura del control y señalización fisiológica que. -U. normalmente ejerce el sistema redox, conduciendo a un daño molecular”.3. DO. Las especies reactivas de oxígeno (ROS) son subproductos del metabolismo celular aeróbico que tienen la capacidad de producir estrés oxidativo.4,5 Las principales enzimas. RA. antioxidantes en el cerebro de la rata son superóxido dismutasa y catalasa.6 Estas enzimas. PO SG. juegan un papel importante a fin de evitar efectos deletéreos de las ROS. De hecho, el desequilibrio entre la generación de ROS y la capacidad antioxidante conduce al estrés oxidativo.4,5 Además, los sistemas de reparación de daños oxidativos son importantes para minimizar los efectos peligrosos de la alta producción de ROS.7,8 Los marcadores. DE. mayormente empleados para investigar el daño oxidativo; en caso de los lípidos es la. BL IO TE. los carbonilos.9,10,11. CA. producción de sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico (TBARS) y en las proteínas son. El cerebro es particularmente vulnerable a la producción de especies reactivas de oxígeno pues solo representa un 2% del peso corporal total. Sin embargo, metaboliza el 20% del oxígeno corporal total, con una cantidad limitada de la capacidad antioxidante.. BI. El cerebro también se considera altamente sensible al daño oxidativo porque posee altas cantidades de fosfolípidos y ácidos grasos poliinsaturados, los cuales son altamente susceptibles a oxidarse.12 En consecuencia, se ha sugerido que el estrés oxidativo cerebral desempeña un papel en trastornos neurodegenerativos tales como la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Alzheimer, la esclerosis múltiple y la esclerosis lateral amiotrófica.13,14,15. La nutrición posee un papel importante en la gestión de la salud y la prevención de enfermedades. El desbalance en la proporción de un macronutriente resulta en cambios. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. compensatorios en los otros macronutrientes. La proteína es uno de los macronutrientes y se requiere para la estructura del cuerpo y la función adecuada. Las proteínas ejercen función como enzimas, hormonas y anticuerpos, así mismo son componentes de transporte y estructurales. La transaminación y la oxidación resultan en la eliminación de proteínas como agua, dióxido de carbono y nitrógeno.16 En dietas de alta ingesta de proteínas, la pérdida de peso es inicialmente considerable debido a la pérdida de líquidos relacionada con la ingesta reducida de carbohidratos, la restricción calórica general y la. NT. supresión del apetito inducida por cetosis. Las dietas ricas en proteínas no se recomiendan. -U. porque limitan los alimentos saludables que proporcionan nutrientes esenciales y no proporcionan la variedad de alimentos necesarios para satisfacer adecuadamente las. DO. necesidades nutricionales. Por lo tanto, los individuos que siguen estas dietas corren el riesgo de sufrir una ingesta comprometida de vitaminas y minerales, así como anomalías. PO SG. RA. cardiacas, renales, óseas y hepáticas potenciales en general.17. La concentración proteica de la soya es la mayor de todas las legumbres. Pero no sólo es importante por la cantidad, sino que también lo es por su calidad. Por lo general, las proteínas provenientes de los alimentos de origen vegetal tienen un bajo contenido de. DE. aminoácidos sulfurados (metionina y cisteína). La soya, en cambio, contiene estos aminoácidos en cantidad suficiente para satisfacer los requerimientos del adulto normal.18. CA. La proteína de soya (y la mayoría de sus productos), tiene un perfil de aminoácidos y. BL IO TE. digestibilidad adecuados, o sea, un PDCAAS (Protein digestibility-corrected amino acid score) que es igual a 1, que es la calificación más elevada.19 La OMS ha establecido que la proteína de soya contiene todos los aminoácidos esenciales y en cantidades suficientes para alcanzar los requerimientos de ingesta de proteínas acordes a las necesidades de edad. BI. y situación biológica.20. En todos los casos evaluados (semilla de soya, aislada de proteína de soya, concentrada de proteína de soya y tofu) la concentración de aminoácidos de los alimentos en estudio supera las concentraciones de los aminoácidos requeridos y establecidos en la Proteína Patrón.21 En pocas palabras: los alimentos de soya presentan un excelente perfil de aminoácidos.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Por otro lado, la proteína de suero de leche se puede producir industrialmente, ésta se obtiene por la filtración de la leche o por métodos químicos para separar las distintas proteínas y azúcares contenidos en la leche. El concentrado de proteína de suero (WPC – Whey Protein Concentrate) puede variar en la cantidad de proteína entre 25-89%. Este tipo de proteína de suero de leche es, por lo general al 80% de concentración proteica. El resto del producto consiste en lactosa (8.4%), grasas, minerales y humedad.22. NT. La proteína de suero de leche puede tener un efecto en el control del metabolismo de. -U. la glucosa en sujetos sanos, con sobrepeso, obesos, y resistentes a la insulina.23 Según dicho estudio, se constataron reducción de marcadores inflamatorios y de estrés. DO. oxidativo, así como reducción de la presión arterial, por lo que, su consumo sería beneficioso para prevenir los riesgos de enfermedades metabólicas. En contraste, otro. RA. estudio en animales de laboratorio, encontró que el consumo de proteína de suero de. PO SG. leche, sin practicar ejercicio físico, favorece la inflamación a corto plazo y a largo plazo puede dañar el hígado.24. Estudios muestran que la ingesta crónica de dietas altas en proteínas (25,7 ó 51,3% de. DE. proteína cruda, caseína) no conduce al estrés oxidativo en ratas adultas cuando las dietas son adecuadas en antioxidantes, en comparación con la alimentación crónica de una dieta. CA. proteica adecuada (13,8 % proteína cruda).25 En los órganos digestivos puede ocurrir. BL IO TE. estrés oxidativo porque la ingesta de dietas altas en proteínas causa un desequilibrio entre la producción de ROS y la capacidad del sistema de defensa antioxidante. Sin embargo, en el mismo nivel, la extensión del estrés oxidativo en ratones alimentados con proteína de soja es menor que en ratones alimentados con caseína.26 El consumo de dietas ricas en. BI. proteínas causan daño oxidativo al cerebro por medio de la oxidación de lípidos y proteínas. Tal aumento del daño oxidativo puede a su vez inducir el sistema endógeno de defensa antioxidante. El ejercicio de alta intensidad (EAI) no empeora los efectos deletéreos causados por la dieta alta en proteínas y puede ser una manera eficaz de proteger el cerebro contra la agresión de la dieta alta en proteína.27. Continúa habiendo interrogantes sobre los efectos de la proteína dietética en la salud, 27. en especial, si existe daño oxidativo cerebral en modelo experimental de ratas,. dependiendo de la fuente de proteína o de la cantidad consumida. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El objetivo principal de esta investigación fue analizar el efecto de las dietas hiperproteicas de aislado de soya versus concentrado suero de leche sobre el daño oxidativo cerebral en Rattus novergicus variedad albinus. Se plantearon los siguientes objetivos específicos: • Determinar el efecto oxidante de la dieta balanceada en el cerebro de Rattus novergicus variedad albinus.. NT. • Determinar el efecto oxidante de la dieta hiperproteica de aislado de soya en el. -U. cerebro de Rattus novergicus variedad albinus.. • Determinar el efecto oxidante de la dieta hiperproteica de concentrado de suero de. DO. leche en el cerebro de Rattus novergicus variedad albinus.. RA. • Comparar el efecto oxidante de las dietas hiperproteicas de aislado de soya y. BI. BL IO TE. CA. DE. PO SG. concentrado suero de leche en el cerebro de Rattus novergicus variedad albinus.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II. MATERIAL Y MÉTODOS. Objeto de estudio Población Rattus novergicus variedad albinus cepa Sprague Dawley. Muestra ) 2 ). NT. + ( − /. -U. (. DO. Donde: Zα/2 =1,96 para α=0,05. RA. Zβ=0,84 para β=0,84. PO SG. S=0,8 (X1-X2), valor asumido por no haber estudios similares. Reemplazando:. DE. n=10 individuos por grupo experimental. Criterios. CA. Para la realización del presente estudio se utilizaron 28 Rattus novergicus variedad. BL IO TE. albinus cepa Sprague Dawley, machos sanos de 4 semanas con peso inicial 168 gr ± 20 gr procedentes del Bioterio de la Universidad Peruana Cayetano Heredia que cumplieron los siguientes criterios: De inclusión:. BI. • Ratas macho • Peso promedio de 168 gr ± 20 gr • Buen estado de salud De exclusión: • Ratas con medicación • Peso fuera del rango establecido De reemplazo: • •. Muerte súbita Enfermedad. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Variable Independiente. Variable. Definición conceptual. Escala Naturaleza. de. Instrumento Indicador. medida. Dieta con 44 % de. de Soya. suplementada con aislado. Cuantitativa Continua. de soya al 90. 43,5 % de. DE. concentración. gr. PO SG. ingesta total. Dieta con. electrónica. RA. %, de la. diaria.. Balanza. -U. Hiperproteica. en proteína,. DO. Dieta. NT. concentración. en proteína. Hiperproteica. con. Cuantitativa Continua. concentrado. Balanza electrónica. gr.. BL IO TE. de Suero. suplementada. CA. Dieta. de suero al 80 %, de la. BI. ingesta total diaria.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Variable dependiente. Variable. Definición conceptual. Escala Naturaleza. de. Instrumento. Indicador. medida. Estrés oxidativo que. cerebral. reducción. Espectrofotómetro Cuantitativa Continua. NT. oxidativo. produce. (para evaluar la. ug/g. absorbancia). -U. Daño. del. DO. potencial. RA. celular. PO SG. Acondicionamiento de las ratas. Todos los animales tuvieron un periodo de adaptación de 1 semana y fueron pesados a diario, además se mantuvieron con un ciclo constante de luz-oscuridad de 12 horas,. DE. luego se separaron en grupos de cuatro a cinco individuos, en jaulas de polipropileno de. BL IO TE. Instrumentación. CA. 60x40x25 cm a temperatura ambiente, comida y agua ad libitum.. Tratamientos. Pasado el periodo de adaptación, se formaron 3 grupos, los animales dispuestos aleatoriamente:. BI. • Grupo control: 8 individuos, su alimentación fue balanceada. • Grupo A: 10 individuos, su alimentación se suplementó con proteína aislada de soya al 90 % • Grupo B: 10 individuos, se suplementó con proteína de suero de leche al 80 %.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 1. Tratamientos, repeticiones y cantidad de alimento en g/100g de dieta en un modelo experimental de dietas.. Tratamientos (Grupos). Repeticiones. Dieta balanceada. 8. g/100g de alimento ingerido 50 de maíz molido 50 de purina 10 de maíz molido. 10. 50 de purina. NT. Dieta hiperproteica de soya. -U. 40 de aislado de soya 5 de maíz molido. 10. 50 de purina. DO. Dieta hiperproteica de suero. RA. 45 de concentrado de suero de leche. PO SG. Formulación de las dietas. Las dietas fueron formuladas para satisfacer las necesidades de nutrientes de las ratas28 siguiendo las recomendaciones del Instituto Americano de Nutrición (AIN-93M) (26), con ligeras modificaciones. Se eligió un 12% de contenido de proteína para el grupo. DE. control de dieta balanceada. Se seleccionó un nivel proteico alrededor del 45% (44% en. CA. la dieta suplementada con soya y 43,5 % en la dieta suplementada con suero) para las dietas altas en proteína a expensas de los carbohidratos (maíz molido) por estudios. BL IO TE. previamente establecidos y similares en ratas. 27,30. Para preparar las dietas hiperproteicas se pesaron los alimentos secos en una balanza electrónica y se combinaron con agua destilada (0,250 L/Kg de masa) hasta obtener una. BI. mezcla granulada húmeda. Luego se extendió en una fuente para hornear y llevó al horno a gas a 175 °C durante 2 horas. La torta obtenida seca, se pesó y dividió a modo de pellets. Las dietas fueron administradas durante 4 semanas y los animales pesados diariamente.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 2. Cantidad de proteína en g/100g de alimento ingerido en las dietas balanceada, hiperproteica de soya e hiperproteica de suero.. Composición. Dieta. proteica por. Hiperproteica de. soya. suero. 7. 1. 0.5. 5. 7. Maíz molido Purina (puricrecimiento) Aislado de soya al. DO. (g/100g). -. 90%. 36. RA. Concentrado de -. % -. Total. 12. 7. -. -. 36. -. -. 44. 43,5. DE. Agua destilada. PO SG. suero de leche al 80. NT. Hiperproteica de. Balanceada. -U. alimento ingerido. CA. Extracción del tejido. BL IO TE. Las ratas fueron anestesiadas con pentobarbital sódico (HALATAL) vía intraperitoneal, de inmediato se procedió a decapitarlas y extraerles el cerebro, entre 30 a 45 seg de morir el animal. Acto seguido, se colocó el órgano en solución Krebs de 2º a 4º C (para conservar el tejido y evitar la oxidación celular). Luego las meninges fueron. BI. retiradas del cerebro que se trituró en un mortero de porcelana de 0 a 4º C, se extrajo 1g de cerebro triturado que se colocó en 5mL de solución Krebs (NaCl: 119mM, KCl: 4,6Mm, NaHCO3: 15mM, CaCl2: 1,5mM, MgCl2: 1,2mM. NaH2PO: 12mM y glucosa: 11mM) a 0º C en tubo de ensayo Potter. El contenido fue homogenizado en un homogeneizador de tejidos.31. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Métodos y Técnicas Determinación de radicales libres. En un tubo de ensayo con rapa rosca que contenía 1,6 mL de solución Krebs se colocó 100 µL del homogenizado extraído con una micropipeta, y se añadió 100 µL de solución hierro (FeCl3 • 6H2O) y 200 µL de solución ascorbato (C6H7NaO6), para ser. NT. incubacibado por 30 minutos a 37 °C. Luego se desproteinizó con 1 mL de ácido tricloroacético (TCA) al 20%, llevándose a baño maría por 15 minutos y después ser. -U. centrifugado a 3500 r.p.m por 30 minutos, obteniéndose un sobrenadante que fue. DO. separado en otro tubo de ensayo. Se determinó la peroxidación lipídica con el método TBARS, de esta manera, al sobrenadante se le agregó 1 mL de ácido 2-tiobarbitúrico. RA. (TBA) de la marca Merck Millipore para medir la cantidad de radicales libres mediante la determinación de malondialdehído (MDA), compuesto formado como subproducto de. PO SG. la peroxidación lipídica.32 La solución se sometió a baño maría por 15 minutos, después se centrifugó a 3500 r.p.m durante 30 minutos; resultando un compuesto cromóforo rosado que se midió en el espectrofotómetro a 535 nm. Los valores obtenidos en. DE. absorbancia fueron procesados por conversión, expresándose en concentración de MDA. BI. BL IO TE. CA. por gramo de cerebro (µg/g).33. Figura 1. La coloración rosada en los tubos que indica la reacción del malondialdehído (subproducto de la acción de los radicales libres) con el ácido tiobarbitúrico. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 3. Resumen de las etapas para determinación de concentraciones de malondialdehído. Testigo ml. Solución Krebs. 1,6. 1,7. Muestra. 0,1. 0,0. Fe. 0,1. 0,1. Ascorbato. 0,2. 0,2. Incubar a 37° C por 30 minutos 1,0. 1,0. -U. TCA. NT. Problema ml. Baño María 100° C por 15 minutos. 1,0. 1,0. RA. TBA. DO. Centrifugar a 3500 r.p.m, trasvasar a tubo limpio y seco. Baño María 100° C por 15 minutos. PO SG. Centrifugar a 3500 r.p.m por 20 minutos Leer en espectrofotómetro a 535 nm de longitud de onda (obtener absorbancias) Las lecturas de las absorbancias se transforman en concentración de. DE. malondialdehído/g de tejido. CA. Análisis de datos. BL IO TE. Para analizar el efecto oxidante de las dietas se empleó el ANOVA de un diseño completamente aleatorizado, y para determinar la diferencia entre las dietas se empleó la prueba de rangos múltiples, ambas pruebas estadísticas con un nivel de significancia del 5%. El programa estadístico utilizado fue Statgraphics para analizar la información, se. BI. elaboraron tablas para ordenar los datos y se organizaron las medias en gráfico de barras.. Bioética. En la manipulación y tratamiento de los animales se cumplió, la normativa del Uso y Manipuleo de Animales menores del Instituto Nacional de Salud, Lima, Perú.34 Así mismo se siguió los principios de la Ley de Protección y Bienestar Animal.35. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III. RESULTADOS. Efecto de la soya vs el suero de leche sobre el daño oxidativo cerebral en Rattus novergicus variedad albinus.. NT. 8 7. -U. 6 5 7.54845. DO. 4. 2. RA. 3 2.69531. PO SG. 1 0 Grupo control (dieta balanceada). Grupo A (dieta hiperproteica de soya). 2.1962. Grupo B (dieta hiperproteica de suero). DE. Concentración de Radicales Libres (malondialdehído ug/g de cerebro). P≤0.05. CA. Figura 2. Gráfico de barras que muestra la cantidad de malondialdehído (radicales libres). BL IO TE. producido en los tres grupos de experimentación.. En el gráfico se aprecia que en el Grupo A con tratamiento de dieta hiperproteica de soya se obtuvo la mayor concentración promedio de malondialdehído (radicales libres) en. BI. cerebro de Rattus novergicus que fue de 7,54845 ug/g de cerebro, por el contrario el en el Grupo B con tratamiento de dieta hiperproteica de suero el promedio de concentración de malondialdehído fue de 2,1962 ug/g de cerebro. En el caso del Grupo Control con tratamiento de dieta balanceada la concentración promedio de malondialdehído fue de 2,69531 ug/g de cerebro.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 4. Concentración de radicales libres en los 3 grupos experimentales.. 2. CONCENTRACIÓN DE RADICALES LIBRES (MDA µg/g de cerebro) 3.0415 4.897. 3. 1.3. Grupo control. 4. 1.4615. Dieta balanceada. 5. TRATAMIENTOS. INDIVIDUO. NT. 1. 3.5155. -U. 6. DO. 7 8. 10. 1.975 2.923 7.268 8.532 8.1765. 12. 6.5965. 13. 9.401. 14. 6.9915. 15. 5.7275. 16. 7.6235. 17. 6.3595. 18. 8.8085. 19. 3.9105. 20. 3.1995. 21. 2.5675. BI. PO SG. 11. RA. 9. 2.449. Grupo B. 22. 1.7775. Dieta hiperproteica con. 23. 2.212. concentrado de suero de. 24. 1.264. leche. 25. 1.3825. 26. 1.027. 27. 1.9355. 28. 2.686. Grupo A. BL IO TE. CA. aislado de soya. DE. Dieta hiperproteica con. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV. DISCUSIÓN. La ingesta por cuatro semanas de dietas normoproteica e hiperproteica de aislado de soya o de concentrado de suero de leche, genera diferentes niveles de daño oxidativo cerebral (Figura 2). Independiente del porcentaje de proteína de la dieta, pero sí de la fuente del alimento. Kalman 36 determinó la composición aminoacídica de lo aislados de soya y suero de leche; donde este último posee mayor proporción en aminoácidos. -U. NT. esenciales (salvo fenilalanina e histidina).. La ingesta de proteínas en la dieta está directamente relacionada con la producción. DO. de ácido endógeno. Empero, los pulmones regulan el pH al excretar el dióxido de carbono. Así mismo, los riñones excretan el exceso de iones en forma de amonio. Por lo tanto,. RA. ambos trabajan juntos en una respuesta homeostática normal para regular el pH de la. PO SG. sangre.37 Generalmente, la proteína de la dieta se consume con cada comida, dividida varias veces, entonces hay suficiente tiempo para la neutralización del ácido y el pH de la sangre permanece estable.38. DE. Sin embargo, las proteínas de la dieta, de acuerdo a su origen, son diferentes en cuanto a su carga ácida potencial renal (PRAL, por sus siglas en inglés) y por lo tanto, en. CA. su efecto generador de acidosis metabólica de bajo grado39 debido a la producción de. BL IO TE. ácidos endógenos.40,41 Alimentos como el pescado y las carnes poseen una PRAL elevada, misma situación en la mayoría de productos de granos y quesos. Por el contrario, la leche y otros derivados lácteos como el yogurt, tienen una PRAL baja. Mientras que las verduras y las frutas tienen una PRAL negativa, esto significa que producen cenizas. BI. alcalinas.42,43. Los resultados de la investigación de Siesjö. 44. aceptan y amplían la observación. original hecha por Bernheim; 45 de que la acidosis aumenta la formación de radicales libres y la peroxidación de lípidos en homogeneizados cerebrales in vitro para un pH 6,06,5. Empero, esta afirmación no es concluyente ya que el término acidosis, correctamente utilizado, se refiere a un proceso que puede o no involucrar acidemia, es decir; sin necesariamente alcanzar un pH de menos de 7,35.41,46. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Los resultados de esta investigación muestran que la producción de radicales libres de cerebro de rata está relacionado con la fuente de proteína. De este modo, la media en la dieta balanceada (normoproteica) es 2,69531 ug/g, no difiere con la dieta hiperproteica de concentrado de suero de leche que es de 2,1962 ug/g. Pero la hiperproteica de aislado de soya sí incrementó la generación de radicales libres a 7,54845 ug/g (P≤0.05).. NT. La ingestión de alto contenido proteico (soya o caseína) incrementa el MDA y el. -U. anión superóxido, también disminuye la acción de la catalasa (CAT), glutatión peroxidasa (GSH-Px), superóxido dismutasa (SOD) y Na+ / K+ -ATPasa, y el contenido de glutatión. DO. reducido (GSH) en los órganos digestivos de los ratones. No obstante, los niveles de los parámetros oxidativos fueron más bajos y la capacidad antioxidante enzimática y no. RA. enzimática fue mayor en los ratones alimentados con proteína de soya que los alimentados. PO SG. con caseína.47 Del mismo modo, sabe que el consumo de una dieta alta en proteína de harina de soya causa cambio significativo en el estado antioxidante del páncreas al disminuir el contenido de glutatión reducido, vitamina C, la actividad de SOD, GSH-Px. DE. y CAT, y aumentar la peroxidación lipídica.16. Una investigación, halló niveles cerebrales mayores de TBARS, contenido de. CA. proteína carbonilo (PCC), CAT, CuZn-SOD, Mn-SOD y SOD total en los grupos. BL IO TE. hiperproteicos suplementados con aislado de soya en comparación con los normoproteicos. También aumentó la expresión del factor nuclear eritroide-2 (Nrf2) en los grupos hiperproteicos y con EAI en comparación con los grupos normorpoteicos y sedentarios, respectivamente.27 En contraste, los niveles medios de productos de. BI. peroxidación lipídica en tejidos cerebrales disminuyeron en las ratas alimentadas con la dieta de soya y aumentaron en las ratas suspendidas en la cola simulando ingravidez, en comparación con las ratas alimentadas con una dieta regular.48. Por otro lado, se ha demostrado que la proteína de soya dietética aumenta la actividad de cinco grupos de conjuntos de genes que controlan el ciclo celular, la transformación oxidoreductiva, la traducción de ARNm, el sistema inmune y las vesículas. Se activaron los factores de transcripción 4 (ATF4) y la pseudoquinase 3 tribble (TRIB3), generando aumento en el metabolismo de los aminoácidos. Destaca la 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. activación del factor de transcripción NFE2L2 (factor nuclear eritroide 2), principal regulador upstream de la expresión de proteínas antioxidantes. No obstante, la soya inhibe a Rictor (compañero insensible a la rapamicina de TOR, complejo 2); relacionado con el ciclo celular, la traducción, la oxidación fosforilación y la cadena de transporte de electrones, también inhibe al factor de transcripción Srebf1 encargada del metabolismo de los lípidos.49. NT. La proteína de suero de leche es una gran fuente en residuos de cisteína. Un. -U. suministro abundante de cisteína se necesita para el catabolismo hepático de cisteína y cistina en sulfato y protones; este proceso disminuye la producción de urea, promueve la. DO. síntesis de glutatión50 y desplaza toda la disposición de nitrógeno corporal a favor de la preservación de la reserva muscular de aminoácidos.51 Así mismo, los resultados de. RA. estudios in vitro mostraron que la β_lactoglobulina y la albúmina sérica, las cuáles son. PO SG. proteínas predominantes en el suero de leche, contienen un grupo sulfhidrilo libre que recoge radicales libre, así inhibe la peroxidación lipídica.52. En un modelo in vivo la proteína de suero de leche protegió contra la formación. DE. de ROS e inhibió el daño al DNA inducido por sobrecarga de hierro en leucocitos y colonocitos,53 El posible mecanismo involucra a la lactoferricina y la lactoferrina,. CA. proteínas presentes en el suero de leche, funcionan como antioxidantes a través de su. BL IO TE. capacidad de fijación de hierro,54,55 y por tanto un potencial anticancerígeno.56 Shertzer et al57 obtuvieron valores 40% más bajos en los biomarcadores de estrés. oxidativo malondialdehído y 4-hidroxialquenales. Las mitocondrias cerebrales. BI. exhibieron una producción de peróxido de hidrógeno y superóxido. Además, tuvieron mayores tasas de respiración con niveles proporcionalmente mayores de citocromos a + a3 y c + c1, y se mejoró la función o se incrementó el número de las mitocondrias cerebrales. La PCR en tiempo real cuantitativa reveló que el gen Pgc-1alfa (regulador de la actividad mitocondrial y biogénesis) se elevó 2,2 veces, al igual que los genes downstream de PGC-1alfa, Tfam, Gabpa / Nrf-2a y Cox-6a1.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V. CONCLUSIONES. •. La dieta balanceada a 12% presenta un nivel daño oxidativo cerebral que podríamos considerar normal. •. La dieta hiperproteica de aislado de soya a 44% incrementa el estrés oxidativo en el cerebro de rata.. •. La dieta hiperproteica de concentrado de suero de leche a 43,5% no incrementa el. Los homogenizados de cerebro de ratas sometidas a una dieta hiperproteica de. -U. •. NT. estrés oxidativo en el cerebro de rata.. concentrado de suero de leche presentan menor concentración de radicales libres. DO. comparado con la dieta hiperproteica de aislado de soya; esto se debería a la. BI. BL IO TE. CA. DE. PO SG. RA. capacidad oxidante de la soya y la antioxidante del suero de leche.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI. RECOMENDACIONES. •. Se recomienda marcar las proteínas para conocer la ruta del metabolismo de sus aminoácidos.. •. Recomendamos hacer una diferenciación en la proteína aislada de soya, al tratarse de una soya transgénica, para determinar si los efectos son causados por la propia proteína de la soya o por la parte transgénica. Realizar estudios para determinar si existe relación entre la acidosis metabólica y. NT. •. BI. BL IO TE. CA. DE. PO SG. RA. DO. -U. la producción de radicales libres.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Fernández JM, Da Silva-Griogoletto ME, Túnez-Fiñana I. Estrés oxidativo inducito por el ejercicio. Rev Andal Med Deporte. 2009;2(1):19-34. 2. Sies H. Oxidative stress: a concept in redox biology and medicine. Redox Biology. 2015;4:180–183. doi: http://dx.doi.org/10.1016/j.redox.2015.01.002. NT. 3. Jones DP. Redefining oxidative stress. Antioxid Redox Signal. 2006;8(910):1865-79.. -U. 4. Sun JZ, Tang XL, Park SW, Qiu Y, Turrens JF, Bolli R. Evidence for an essential role of reactive oxygen species in the genesis of late preconditioning against. DO. myocardial stunning in conscious pigs. J Clin Invest 1996;97(2):562-76.. RA. 5. Cadenas E, Davies KJ. Mitochondrial free radical generation, oxidative stress, and aging. Free Radic Biol Med 2000;29(3-4):222-30.. PO SG. 6. Wang C, Wu HM, Jing XR, Meng Q, Liu B, Zhang H et al. Oxidative parameters in the rat brain of chronic mild stress model for depression: relation to anhedonialike responses. The Journal of membrane biology 2012;245(11):675-81.. DE. 7. Crawford DR, Davies KJ. Adaptive response and oxidative stress. Environmental health perspectives 1994;102 Suppl 10: 25-8.. CA. 8. Davies KJ. Intracellular proteolytic systems may function as secondary antioxidant defenses: an hypothesis. Journal of free radicals in biology &. BL IO TE. medicine 1986;2(3):155-73.. 9. Nielsen F, Mikkelsen BB, Nielsen JB, Andersen HR, Grandjean P. Plasma malondialdehyde as biomarker for oxidative stress: reference interval and effects of life-style factors. Clinical chemistry 1997;43(7):1209-14.. BI. 10. Grotto D SMLD, Boeira S, Valentini J, Charão M F, Moro AM,, Nascimento P C PVJ, Garci S C. Rapid quantifi cation of malondialdehyde in plasma by high performance liquid chromatography visible detection. Journal of pharmaceutical and biomedical analysis 2007(43):619-24. 11. Pandey KB, Rizvi SI. Markers of oxidative stress in erythrocytes and plasma during aging in humans. Oxidative medicine and cellular longevity 2010;3(1):212. 12. Camiletti-Moirón D. Consecuencias de consumo de dietas hiperproteicas, de la administración de anabolizantes androgénicos esteroideos y de la práctica de un 19. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. entrenamiento de alta intensidad sobre marcadores de estrés oxidativo en cerebro y riñón en ratas Wistar [tesis doctoral]. España: Universidad de Granada; 2016. 13. Baillet A, Chanteperdrix V, Trocme C, Casez P, Garrel C, Besson G. The role of oxidative stress in amyotrophic lateral sclerosis and Parkinson’s disease. Neurochemical research 2010; 35(10):1530-7. 14. Surendran S, Rajasankar S. Parkinson’s disease: oxidative stress and therapeutic approaches. Neurological sciences: oficial journal of the Italian Neurological. NT. Society and of the Italian Society of Clinical Neurophysiology 2010;31(5):531-. -U. 40.. of neurochemistry 2006;97(6):1634-58.. DO. 15. Halliwell B. Oxidative stress and neurodegeneration: where are we now? Journal. 16. Sophia D, Ragavendran P, Raj CA, Gopalakrishnan VK. Protective effect of. RA. Emilia sonchifolia (L.) against high protein diet induced oxidative stress in. PO SG. pancreas of Wistar rats. J Pharm Bioall Sci [serial online] 2012;4:60-5. Disponible en: http://www.jpbsonline.org/text.asp?20 12/4/1/60/92735 17. Saint Jeor ST, Howard BV, Prewitt TE, Bovee V, Bazzarre T, Eckel RH, et al. Dietary protein and weight reduction: A statement for healthcare professionals. DE. from the nutrition committee of the council on nutrition, physical activity, and metabolism of the American Heart Association. Circulation 2001;104:1869-74.. CA. 18. Young VR. Soy protein in relation to human protein and aminoacid nutrition, J.. BL IO TE. Am. Diet. Assoc.1991; 91 (7): 828-35. 19. Sarwar G. The protein digestibility, correct aminoacid store method overestimates quality of proteins containing antinutritional factors ando f. poorly digestible proteins supplemented with limiting aminoacid in rats. J. Nutr. 1997;. BI. 127: 758-64.. 20. FAO-OMS. Informe del grupo de trabajo FAO-OMS sobre aspectos analíticos relacionados con la composición de alimentos y calidad proteica. FAO, RomaItalia; 2001.. 21. Food and Nutrition Board/Institute of Medicine. Dietary Reference Intakes (DRI) and Recommended Dietary Allowances (RDA) for energy, carbohydrate, fiber, fats, fatty acids, cholesterol, proteins and amino acids. Institute of Medicine of the National Academies. Washington DC. The Nacional Academy Press; 2002. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 22. Libredelacteos.com. Hombre, olvídate de la proteína de suero de leche (whey). 2015. [Consultado. el. 18. de. febrero. del. 2017].. Disponible. en:. http://libredelacteos.com/lacteos-lactosa/que-es-whey-proteina-de-suero-deleche/ 23. Sousa G, Lira F, Rosa J, De Oliveira E, Oyama L, Santos R y Pimentel G. Universidad de São Paulo (USP) – Universidade do Extremo Sul Catarinense, Criciúma – Universidade Estadual Paulista (UNESP), Botucatu – Universidad. NT. Federal de São Paulo (Unifesp) – Universidad Estadual de Campinas. -U. (UNICAMP), Brasil – “Proteína de suero de leche en la dieta reduce varios factores de riesgo para enfermedades metabólicas: una revisión” (2012) BioMed. DO. Central – NCBI.. 24. Gürgen S, Yücel A, Karakuş A, Ceçen D, Ozen G, Koçtürk S – Celal Bayar. RA. University, Uncubozkoy, Manisa, Turkey – Faculty of Medicine and Health. PO SG. Science Institute, Dokuz Eylül University, İnciraltı, İzmir, Turkey – “Usage of whey protein may cause liver damage via inflammatory and apoptotic responses” (Oct 2014) Human and Experimental Toxicology – NCBI. 25. Petzke KJ, Elsner A, Proll J, Thielecke F, Metges CC. Long-term high protein. DE. intake does not increase oxidative stress in rats. J. Nutr. 2000; 130: 2889-2896. 26. Chunmei G, Yonghui S, Guowei L. Effect of dietary protein level origin on the. CA. redox status in the digestive tract of mice. Int. J. Mol. Sci. 2008; 9: 464-475.. BL IO TE. 27. Camiletti-Moirón D, Aparicio V, Nebot E, Medina G, Martínez R, Kaparavelou G, Andrade A, Porres JM, López-Jurado M, Aranda P. High-protein diet induces oxidative stress in rat brain: protective action of high-intensity exercise against lipid peroxidation. Nutr Hosp. 2015; 31(2): 866-877.. BI. 28. NRC. National Research Council. Nutrient Requirements of Laboratory Animals. National Academy Press, Washington, D C, 1995 (4th edition.).. 29. Reeves PG, Nielsen FH, Fahey GC, Jr. AIN-93 purified diets for laboratory rodents: final report of the American Institute of Nutrition ad hoc writing committee on the reformulation of the AIN-76A rodent diet. The Journal of nutrition. 1993; 123(11):1939-51. 30. Aparicio VA, Nebot E, Porres JM, Ortega FB, Heredia JM, Lopez-Jurado M et al. Effects of high-whey-protein intake and resistance training on renal, bone and. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. metabolic parameters in rats. The British journal of nutrition 2011; 105(6):83645. 31. Calderón A, Torres P, Pretel O. Efecto del extracto hidroalcohólico de Terminalia cattappa L.(combretaceae) sobre radicales libres libres inducidos en cerebro de rata. The Biologist. Lima. 2013; 11 (2): 267-275. 32. Calderón A. Efecto antioxidante del extracto hidroalcohólico de Terminalia catappa L. “almendro de la India” frente a radicales libres inducidos por. -U. título]. Perú: Universidad Nacional de Trujillo; 2009.. NT. tetlacloruro de carbono en cerebro de Rattus rattus variedad albinus [tesis de. 33. Halliwell, B, Chirico S. Lipid peroxidation: it´s mechanism, measurement and. DO. sinificance. Am. J. Clin. Nutr. 1993;57:715-725.. 34. Fuentes F, Mendoza R, Rosales A, Cisneros R. Guía de manejo y cuidado de. RA. animales de laboratorio: ratón. Lima: Ministerio de Salud, Instituto Nacional de. PO SG. Salud. 2008.. 35. Ley 3407 “Ley de Protección y Bienestar Animal”. Publicado en el diario “El Peruano” el viernes 08 de enero del 2016. P. 574725. Disponible en: http://www.leyes.congreso.gob.pe/Documentos/Leyes/30407.pdf. DE. 36. Kalman DS. Amino Acid Composition of an Organic Brown Protein Concentrate and Isolate Compared to Soy and Whey Concentrates and Isolates. Foods.. CA. 2014;3:394-402. doi: 10.3390/foods3030394. BL IO TE. 37. Cuenca-Sanchez M, Navas-Carillo D, Orenes-Piñero E. Controversies Surrounding High-Protein Diet Intake: Satiating Effect and Kidney and Bone Health. Adv. Nutr. 2015;6:260–266. doi:10.3945/an.114.007716. 38. Bonjour JP. Dietary protein: an essential nutrient for bone health. J Am Coll Nutr. BI. 2005;24:526S–36S.. 39. Lopéz-Luzardo M. Las dietas hiperproteicas y sus consecuencias metabólicas. An Venez Nutr 2009;22(2):95-104. 40. Adeva MM, Souto G. Diet-induced metabolic acidosis. Clinical Nutrition. 2011;30(4):416-421. 41. Ferreira JP. Acidosis metabólica. Conceptos actuales.2015;6(1-2):1-54. 42. Hietavala EM. Dietary Acid Load and Acid-Base Balance in Exercise and Health from Adolescence to Late Adulthood [tesis doctoral]. Finlandia: University of Jyväskylä; 2018. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 43. Carnauba RA, Baptisella AB, Paschoal V, Hübscher GH. Diet-Induced LowGrade Metabolic Acidosis and Clinical Outcomes: A Review. Nutrients 2017;538(9):1-16. doi:10.3390/nu9060538. 44. Siesjö BK, Bendek G, Koide T, Westerberg E, Wieloch T. Influence of Acidosis on Lipid Peroxidation in Brain Tissues In Vitro. J Cereb Blood Flow Metabol. 1985; 5(2):253-258. 45. Bernheim F. Biochemical implications of pro-oxidants and antioxidants. Radiat. NT. Res. 1963;3:17-32. -U. 46. Pizzorno J, Frassetto LA, Katzinger J. Diet-induced acidosis: is it real and clinically relevant? British Journal of Nutrition. 2010;103:1185–1194.. DO. doi:10.1017/S000711450 9993047. 47. Gu C, Shi Y, Le G. Effect of Dietary Protein Level and Origin on the Redox Status. RA. in the Digestive Tract of Mice. Int. J. Mol. Sci. 2008;9:464-475.. PO SG. 48. Chowdhury P y Soulsby M. Lipid Peroxidation in Rat Brain is Increased by Simulated Weightlessness and Decreased by a Soy-Protein Diet. Annals of Clinical & Laboratory Science. 2002;32(2):188-192. 49. Song S, et al. Dietary soy and meat proteins induce distinct physiological and gene. DE. expression changes in rats. Sci. Rep. 2016:6;20036. doi: 10.1038/srep20036. 50. Marshall K. Therapeutic Applications of Whey Protein. Alternative Medicine. CA. Review. 2004;9(2):136-156.. BL IO TE. 51. Rodríguez Y. Análisis de la suplementación con proteínas en el deporte: uso y efectos de la creatina y el suero de leche [trabajo de fin de grado en ciencias de la Actividad Física y del Deporte]. Universidad de León. 2014. Consultado el 03 de setiembre. del. 2018.. Disponible. en:. BI. https://buleria.unileon.es/bitstream/handle/10612/4214/RODR%C3 %8DGUEZ%20RAMOS.pdf?sequence=1. 52. Tong LM, Sasaki S, McClementes J, Decker E. Mechanisms of the Antioxidant Activity of a High Molecular Weight Fraction of Whey. J. Agric. Food Chem. 2000;48:1473-1478 53. Kim J, Paik HD, Yoon YC, Parl E. Whey protein inhibits iron overload-induced oxidative stess in rats. J Nutr Sci Vitaminol. 2013;59:198-205.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 54. Ha E. and Zemel MB. Functional properties of whey, whey components, and essential amino acids: mechanisms underlying health benefits for active people (review). The Journal of Nutritional Biochemistry. 2003:14(5);251-258. 55. Luiking Y. C., Deutz N. E., Memelink R. G., Verlaan S., Wolfe R. R. Postprandial muscle protein synthesis is higher after a high whey protein, leucine-enriched supplement than after a dairy: A randomized controlled trial. Nutrition Journal. 2014:13(9). doi:10.1186/1475-2891-13-9. -U. cancer treatment. Anticancer Res 2000;20:4785-4792.. NT. 56. Bounous G. Whey protein concentrate (WPC) and glutathione modulation in. 57. Shertzer HG, Krishan M, Center MB. Dietary whey protein stimulates. BI. BL IO TE. CA. DE. PO SG. RA. Neuroscience Letters. 2013;548:159-164.. DO. mitochondrial activity and decreases oxidative stress in mouse female brain.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) RA. DO. -U. NT. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI. BL IO TE. CA. DE. PO SG. ANEXOS. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) BI. BL IO TE. CA. DE. PO SG. RA. DO. -U. NT. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 1. Constancia de aprobación de proyecto por el Comité Institucional de Ética en Investigación de la Facultad de Medicina UNT.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD PERUANA. CAYETANO HEREDIA. NT. Bioterio - Vicerrectorado de Investigación. DO. -U. CERTIFICADO. PO SG. RA. San Martín de Porres, 18 de septiembre de 2017. Mediante la presente se certifica que las 30 ratas de la cepa albina Sprague. DE. Dawley, machos, de 4 semanas, adquiridas el 18 de septiembre de 2017 por el Sr. Alvaro. CA. David Rodríguez Salvatierra con número de DNI 70801870, están en perfecto estado. BL IO TE. sanitario y fisiológico, para ser utilizadas en cualquier protocolo Biomédico.. BI. Atentamente;. Dr. CHRISTIAN PITOT ALVAREZ. Av. Honorio Delgado 430, Lima 31. Apartado postal 4314, Lima 100 Teléfono: (511) 319-0000 anexo: 2710 E-mail: [email protected]. Anexo 2. Certificado de sanidad de los animales de experimentación.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) BI. BL IO TE. CA. DE. PO SG. RA. DO. -U. NT. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 3. Ficha técnica del Aislado de Soya al 90%. Cortesía: SUMAN. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) PO SG. RA. DO. -U. NT. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI. BL IO TE. CA. DE. Anexo 4. Torta seca de dieta hiperproteica de aislado de soya.. Anexo 5. Cerebro de rata en solución de Krebs.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) RA. DO. -U. NT. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PO SG. Anexo 6. Lectura de las absorbancias en el espectrofotómetro.. Gl 2 25 27. Cuadrado Medio 85.1575 1.18468. Razón-F 71.88. Valor-P 0.0000. P≤0.05. CA. DE. Tabla ANOVA para Col_1 por Col_2 Fuente Suma de Cuadrados Entre Tratamientos 170.315 Error Experimental 29.617 Total (Corr.) 199.932. BL IO TE. Pruebas de Múltiple Rangos para Col_1 por Col_2 Método: 95.0 porcentaje LSD (Límite de significancia de Fisher) Casos 10 8 10. BI. Col_2 3 1 2. Media 2.1962 2.69531 7.54845. Grupos Homogéneos X X X. Contraste Sig. Diferencia 1-2 * -4.85314 1-3 0.499113 2-3 * 5.35225 * indica una diferencia significativa. +/- Límites 1.06332 1.06332 1.0025. Anexo 7. Análisis de varianza (ANAVA) que revela que existe diferencia significativa entre el malondialdehído promedio (radicales libres).. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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