Resultados
Aplicaciones
Métodos Cromatográficos
Métodos Cromatográficos
Clasificación
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Aplicaciones
En la cromatografía se separan los componentes de las mezclas a medida que son transportadas por un fase
fluida móvil a través de una fase estacionaria sólida o líquida.
esta separación se puede realizar en función de sus
cargas, masas, tamaños moleculares, la polaridad de sus
Introducción
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Según su fase móvil:
Cromatografía de gases: la fase móvil es un gas. Cromatografía líquida: la fase móvil es un líquido Cromatografía en papel
Cromatografía en capa fina Cromatografía en columna
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Cromatografía en columna
Según el mecanismo de separación:
C. de reparto: separa los solutos basándose en la solubilidad. C. de adsorción: se basa en la afinidad de adsorción.
C. de exclusión: separa solutos según el peso molecular. C. de intercambio iónico: separa solutos según la carga
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Cromatografía de reparto (L-L): según la solubilidad
Según el mecanismo de separación
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Cromatografía de exclusión: según el tamaño
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Cromatografía de intercambio iónico: según cargas
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Cromatografía de papel: la fase estacionaria es el agua
adsorbida presente en el papel, y el soporte es el papel mismo.
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Cromatografía de papel:
Es una técnica barata pero relativamente lenta, con
limitaciones en el uso de agentes reveladores, algunos de los cuales pueden atacar y destruir el papel. Las manchas tienden a ser difusas.
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Cromatografía de capa fina (CCF): la fase estacionaria es una capa fina de una sustancia hidrofílica (sílice, alúmina o acetato de celulosa) colocada sobre un soporte inerte. La fase móvil es una mezcla de disolventes en diferentes proporciones que migra por la fase estacionaria en base a capilaridad dentro de una cubeta cerrada y que se encuentra saturada de vapor de la fase móvil.
9/24 de la fase móvil.
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Cromatografía de capa fina (CCF):
Pasos:
1ª Preparación de la placa cromatográfica: Constan de un soporte liso, inerte (placas de vidrio, láminas de aluminio o de fibra) sobre las que se dispone el sorbente formando un
espesor lo más homogéneo posible (por lo general 0,25 mm); dependiendo de la separación a realizar, se tratará de silicagel,
Según la fase móvil
dependiendo de la separación a realizar, se tratará de silicagel, óxido de aluminio, poliamida, celulosa, etc o mezclas.
2ª Aplicación de las muestras y los patrones: con micropipetas a 1,5cm del borde inferior y con 1-2cm de distancia entre sí. 3ª Desarrollo del cromatograma: el eluyente se pone 30’ antes en la cubeta (unos 0.5cm de altura) para que sature de
vapores. Se coloca la placa. El eluyente asciende por la placa por capilaridad a través del recubrimiento.
4ª Revelado y detección
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Según la fase móvil
Tras el desarrollo del cromatograma, se saca la placa de Tras el desarrollo del cromatograma, se saca la placa de la cubeta y (después de marcar el frente) se seca
cuidadosamente al aire o con un secador. La posición de las manchas se determina:
por su color propio por su fluorescencia
por la disminución o amortiguación de la fluorescencia por reacción química: la placa una vez seca se rocía
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La identificación de cada una de las manchas se realiza de acuerdo con su color y del denominado
valor Rf (factor de retención, llamado también factor Rf, es
13/24 llamado también factor Rf, es
decir, el cociente entre el recorrido de la sustancia (ls) y el del
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Cromatografía bidimensional de capa fina:
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Cromatografía en columna:
La cromatografía en columna es un tipo de cromatografía líquida en que la fase móvil se deje percolar por gravedad a través de una columna rellena de fase estacionaria.
La cromatografía en columna se lleva a cabo mediante un
Según la fase móvil
tubo de vidrio dispuesto en sentido vertical, de un diámetro
interno de aproximadamente un centímetro y de unos 15 cm de longitud, en los modelos clásicos.
Se utilizan muchas clases de materiales de empaque (fase estacionaria) que van desde la alúmina (Al2O3), gel de sílice, tierra de diatomeas, hasta resinas sintéticas y derivados
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Cromatografía en columna:
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Cromatografía HPLC:
Para HPLC se emplean distintos detectores dependiendo de la naturaleza de la muestra.
-Detectores selectivos: responden a una propiedad del soluto en disolución. Son los detectores ultravioleta/visible
19/24 (UV/Vis), detector de fluorescencia y detector electroquímico.
El más utilizado es el UV/Vis, sobre todo el
espectrofotómetro, que registra sustancias que absorben la radiación ultravioleta o visible. Los hay muy sensibles, son relativamente independientes de las oscilaciones de
temperatura y se pueden utilizar en la elución en gradiente. -Detectores universales: responden cuando una
propiedad de la fase móvil es cambiada por la presencia de un soluto. Son el detector del índice de refracción (RI) y el
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Cromatografía de gases:
1 - Depósito de gas y Controles de flujo / Presión. 2 - Inyector (Vaporizador) de la muestra.
3 - Columna Cromatográfica y Horno de la Columna. 4 - Detector.
5 - Amplificador de Señal.
6 - Registro de la Señal (Registrador o Computador).
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Cromatografía de gases:
Detectores:
Podemos realizar una clasificación de los detectores, los que dependen de la concentración de las especies en el gas portador:
•Detector de conductividad térmica (TCD), •Detector de fotoionización (PID)
Según la fase móvil
•Detector de fotoionización (PID)
•Detector de captura de electrones (ECD). •Espectrómetro de masas (MS)
El otro grupo de detectores son los que dependen de la masa y velocidad de flujo de las especies detectadas. Son:
•Detector de ionización de llama (FID)
•Detector fotométrico de llama (FPD) •Detector termoiónico específico (TSD) •Detector nitrógeno-fósforo (NPD)
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HPLC:
Detección y cuantificación de azúcares y edulcorantes Detección de colorantes.
Separación de ésteres de ácidos grasos Separación de Triglicéridos
Determinación del contenido de Vitaminas.
Aplicaciones
Determinación del contenido de Vitaminas. Determinación de azúcares
Determinación de plaguicidas
Gases:
Determinación de plaguicidas
Determinación de multitud de compuestos orgánicos (ácidos
