ISSN 2313-9757
UNIVERSIDAD NACIONAL DE
TUCUMAN
FACULTAD DE BIOQUIMICA, QUIMICA Y
FARMACIA
ARCHIVOS
DE
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TUCUMAN
TOMO XXI – Nº 1
TUCUMAN
REPUBLICA ARGENTINA
2010 - 2011
AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE
TUCUMAN
Rector
CPN Juan Alberto Cerisola
Vicerrectora
Dra. Alicia Bardón
Secretaria Académica
Dra. Susana Maidana
Secretaria de Ciencia y Técnica
Dra. Dora Miceli
Secretario de Política Administrativa y Gestión
CPN Luis Sacca
Secretario de Bienestar Universitario
Abogado Mauricio Argiró
Secretario de Planeamiento Obras y Servicios
Arq. Carlos Prieto
Secretario de Extensión Universitaria
Dr. Mario Leal
Secretario de Postgrado
AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE BIOQUIMICA,
QUIMICA Y FARMACIA
Decana
Dra. Silvia Nelina González de Elías
Vice Decana
Dra. Aída Ben Altabef
Secretaria Académica
Dra. Alicia Sánchez Riera
Secretario de Bienestar Universitario
Farm. Eduardo Khouri
Secretario de Control y Gestión Económica
Lic. Christian Simensen de Bielke
Coordinador de Rendimientos Científicos
Dr.José Alberto Komaid
Coordinador de Extensión
COMITÉ EDITORIAL
Editor responsable
Dr. José Alberto Komaid
Miembros titulares
Dra. Aída María Suárez
Dra. Mirtha Rachid
Bioq. María A. Véliz
COMITÉ CIENTIFICO
Director honorario
Dr. Raúl A. Salomón
LOS TRABAJOS ORIGINALES
SON ARBITRADOS POR
CALI-FICADOS
PROFESIONALES
QUE CONFORMAN EL
CUER-PO DOCENTE DE LA UNT Y
CUYA NÓMINA SE DETALLA
AL
FINAL
DE
ESTA
PUBLICACIÓN.
DISEÑO GRÁFICO Y DIAGRAMACIÓN : Dr. José Alberto Komaid
REVISIÓN Y EDICIÓN : Dres. José Alberto Komaid; Aída María Suárez; Mirtha Rachid y Bioq. María A. Véliz
REGISTRO DE LA PROPIEDAD INTELECTUAL Ley 23412 Nº 188912 REGISTRO NACIONAL DE PUBLICACIONES EN SERIE ON LINE ISSN Nº 2313-9757 INDICE
INSTRUCTIVO PARA PRESENTACIÓN
DE TRABAJOS 1
EDITORIAL 3
PROLOGO 4
CARTA DEL EDITOR 5
ARTICULOS ORIGINALES DIAGNOSTICO DIFERENCIAL DE ANEMIA FERROPÉNICA Y RASGO BETA TALASÉMICO: VALOR PREDICTIVO DE LAS PRUEBAS DE CRIBADO 8
ARTICULOS ESPECIALES 18
RESUMENES DE TESIS 2010 21
RESUMENES DE TESINAS 2010 48
ARCHIVOS DE BIOQUÍMICA, QUÍMICA Y FARMACIA – TUCUMAN, es una revista de divulgación científico-institucional de la Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia de la Universidad Nacional de Tucumán – Argentina con domicilio legal en calle Batalla de Ayacucho 471 - CPA T4000INI - San Miguel de Tucumán - Tucumán - Argentina - Tel +54 (0)381 4247752 - Fax +54 (0)381 4248169
Sitio web: www.fbqf.unt.edu.ar/PUBLICACIONES
La responsabilidad por el contenido es exclusivamente de los autores que figuran en cada artículo.
ISSN publicación en papel: 0365-0871 ISSN on line: 2313-9757
ARCHIVOS DE BIOQUIMICA, QUIMICA Y FARMACIA - TUCUMAN Contribuciones
Los Archivos de Bioquímica, Química y Farmacia – Tucumán aceptará para su publicación artículos originales, informes breves, resúmenes de tesis, artículos especiales, editoriales y suplementos sobre temáticas relacionadas a la Bioquímica, Química y Farmacia. Este medio de difusión está abierto a autores de todos los ámbitos en que se desarrollen las disciplinas de bioquímica, química y farmacia, así como las ciencias sobre las que estas se sustentan.
Los artículos originales son trabajos de investigación completos y deben presentarse respetando las siguientes divisiones: Introducción, Materiales y métodos, Resultados, Discusión, Agradecimientos y Bibliografía.
Los informes breves son trabajos de menor extensión, entre los que se incluyen casuísticas, casos clínicos, descripción de técnicas avaladas por experimentos concluyentes. Su extensión será limitada y sin divisiones en el texto.
Los artículos especiales son conclusiones o consensos de reuniones de grupos de trabajos sobre temas de interés nacional o regional. Los autores deben ser reconocidos como especialistas en la materia y debe acompañarse de bibliografía amplia y actualizada.
Los editoriales deberán abordar tópicos de actualidad y relevancia para la comunidad científica de las disciplinas motivo de la publicación. Los lineamientos y oportunidad de la temática abordada en este segmento quedan a criterio del Comité Editor para su publicación.
Los Resúmenes de Tesis o Tesinas deben ser trabajos ya aprobados por jurado y se remitirán en su idioma original más una versión en ingles en formato pdf.
Los suplementos corresponden a revisiones sobre un tema específico ampliamente tratados y con el consenso de otros autores especialistas sobre dicho tema. También se incluirán conclusiones arribadas en eventos científicos, siempre que ellas cubran ampliamente la temática propuesta. Estas contribuciones quedan a criterio del Comité Editor para su publicación.
Cada autor es personalmente responsable de su publicación.
Los manuscritos remitidos para su publicación serán sometidos a revisión de arbitros reconocidos en la disciplina o del Comité Editor, según corresponda.
La publicidad de eventos científicos deberán estar ajustado a las normas de presentación del texto y no serán sometidos a revisión.
Normas para presentación de originales.
Los manuscritos serán remitidos via e-mail a: [email protected] .
Los trabajos podrán ser redactados en ingles o en español (si tuvieran otro orígen que el nacional, en su idioma original). Los artículos originales, informes breves y artículos especiales incluirán dos resúmenes de no más de 200 palabras, uno en español y el otro en inglés sin citas bibliográfica ni ilustraciones. Se remitirán dos archivos adjuntos tipeados mediante procesador de texto Word en letra Arial cuerpo 12 para el título y en cuerpo 10 para el resto del texto. Las ilustraciones o tablas serán presentadas en formato jpg en página aparte y una versión completa con textos e ilustraciones, tablas, fórmulas etc en su real presentación, se utilizará la opción papel tamaño A4 con 2,5 cm. de margen. El título se tipeará en mayúsculas y a renglón siguiente los autores en mayúsculas y minúsculas. La versión contendrá el texto y las tablas, figuras e ilistraciones tal como se sugiere su impresión.
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Se sugiere a los autores ordenar la propuesta de la siguiente forma: Título, Autores (apellido e iniciales con superíndice si pertenecieran a diferentes Instituciones), Institución en que se realizó, dirección real y electrónica del responsable, resumen en castellano, resumen en inglés, palabras clave, introducción, material y métodos, resultados, discusión, conclusiones, bibliografía. La citas bibliográficas serán ordenas según el orden en que son citadas y serán expresadas siguiendo las abreviaturas del Index Medicus, es decir en el caso de trabajos originales se notará el autor/es su apellido seguido de sus iniciales, renglón seguido el título del trabajo y luego las abreviaturas de la publicación, volumen en arábigo, página inicial y final y año de la publicación. En caso de cita de libro, apellido y nombre del autor/es, título del libro, año de publicación, número de edición, lugar de publicación, casa editorial, número de páginas, número y título de capítulo (si correspondiera) especificando páginas inicial y final.
La versión electrónica será remitida con título que indique nombre del archivo y/o autor. .
El costo de las publicaciones será de $ 10 por cada página, esto incluye la publicación más un ejemplar del folletin.
Las consultas se recibirán en la misma dirección de e-mail.
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El criterio mayormente empleado para valorar eficiencia y cumplimiento de la labor científica es el número de publicaciones. Sin embargo las actividades científicas que desarrollan nuestros alumnos, docentes y graduados, a menudo y por diferentes motivos, no siempre tienen la oportunidad de reflejarse en este sentido. Cada especialidad genera núcleos de influencia que, si no revisten proyección internacional, no logran traducirse como artículos de revistas consideradas referentes.
Los trabajos con repercusión nacional o regional son igualmente relevantes y marcan tendencia en determinadas áreas del conocimiento, con la misma calidad de los internacionales, pero con injerencias diferentes.
En nuestro país la investigación, tanto básica como aplicada, está fundamentalmente subvencionada por Organismos públicos y por esta razón, a ellos debemos responder. Si los resultados tienen trascendencia regional y contribuyen a fortalecer algún aspecto clínico, productivo y/o ambiental, resultará mucho más lógico dar respuesta científica a una dificultad que ignorarlos por no encuadrarse entre las exigencias de las revistas de impacto internacional.
Nuestra revista será de discusión abierta y de libre acceso. La versión impresa de los trabajos correlacionada con el ISSN, podrá ser consultada desde el dominio http://www.fbqf.unt.edu.ar. La inclusión de un resumen en inglés (reconocido como idioma científico generalizado) permitirá proyección hacia consultas extranjeras, situación que contribuirá a la difusión, aun cuando el manuscrito completo estuviera redactado en idioma español.
La re-edición de ARCHIVOS DE LA FACULTAD DE BIOQUÍMCA, QUÍMICA Y FARMACIA, además de reconocer la visión progresista y el espíritu innovador de los docentes fundadores (en honor a ellos decidimos mantener el nombre original), tiene el propósito de brindar un espacio académico de excelencia para conclusiones con impacto regional.
Nuestro objetivo a mediano plazo es reflejar la producción científica NOA – NEA e instalar la discusión de problemáticas, cuya importancia y calidad actúen como parámetros de orientación para quienes deban definir áreas de vacancia.
La rigurosa originalidad, la periodicidad y la cuidadosa selección de los artículos por dos o más jueces estrictos e independientes, definen el desafío institucional tendiente a posicionar nuestros esfuerzos en niveles de alta competitividad.
Prof. Dra. Silvia Nelina Gonzalez de Elias
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Estimados colegas: cuando, mentalmente, me remonto a los tiempos de los pioneros que se aventuraron a publicar una revista que mostrase la producción de la Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia de la Universidad Nacional de Tucumán, no puedo menos que sorprenderme que con una máquina de escribir y las ganas de llevar adelante esa idea nos hayan dejado el testimonio de una institución, que independientemente de las grandes editoriales, ponía en esas páginas la muestra del esfuerzo diario.
Leer los Archivos de la Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia que se encuentran en la biblioteca, llena de orgullo la intensidad del esfuerzo y lo prolífico y desinteresado de los resultados de ese esfuerzo. Además, de su lectura, surgen retazos de historia, de ejemplos, de anécdotas que, de no haberse escrito en esas páginas, hubieran sido olvidadas. Hoy, todo ese contenido, nos marca el camino recordándonos de dónde venimos y hacia dónde vamos.
Reeditar estas páginas, con nuevas tecnologías, nuevos materiales y bajo otra visión de la sociedad, no tiene otro objetivo que continuar en esa huella que nos dejaron insinuada nuestros maestros y mentores para que, los que nos sigan en el futuro, tengan, al igual que nosotros, una referencia de lo que hicimos como grupo humano, independientemente de los currículos individuales.
Estoy muy agradecido, en primer lugar a la señora decana Dra. Silvia Nelina González de Elías por haberme confiado la concreción de su anhelo de volver a contar con un espacio donde mostrarnos como comunidad, en segundo lugar a todos los colegas que me acercaron el material que volcamos en estas páginas, en tercer lugar a los compañeros del Comité Editor y Científico por la seriedad con que asumieron esta labor y por último a todas las autoridades que acompañan a la señora Decana por haberme facilitado el acceso a toda la información y orientado con sus sugerencias.
A todos los miembros de esta facultad, les deseo un venturoso año 2011 y les pongo a consideración estas páginas para interiorizarse de la labor conjunta y para que consideren este espacio como propio para volcar su aporte y compartir criterios dada la amplitud que propone el nuevo formato.
Finalmente agradezco el apoyo financiero del Rectorado de la UNT y de las firmas anunciantes que posibilitan mejorar la calidad del material gráfico.
Dr. José Alberto Komaid Editor responsable
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Transitamos la primera década del siglo XXI que nos encuentra aún asimilando los grandes descubrimientos y avances de la ciencia y la tecnología del siglo pasado. Pero parece que solo tratamos de capitalizar las enseñanzas positivas cuando de las negativas es de las que más se aprende.
Un caso con bombos y platillos
Sin lugar a dudas uno de los descubrimientos con más connotaciones sociales a nivel mundial fue el del VIH (virus de la inmunodeficiencia humana), sin embargo la historia de este evento puso al descubierto uno de los más sonados fraudes científicos.
El Dr. Robert Gallo, primero en atribuirse la paternidad del descubrimiento, fue puesto en evidencia mediante el llamado ―Informe Crewdson‖ publicado el 9/11/1988 en el «Chicago Tribune» con el título ―The great AIDS quest‖ que dedicó 16 páginas a hacer públicos los resultados obtenidos por el Dr. R. Gallo. El artículo de 50.000 palabras dibuja la zigzagueante carrera del Dr. Gallo y, sobre todo, narra con gran detalle las incidencias habidas entre un laboratorio y otro, refiriéndose al laboratorio del Dr. Luc Mountaigner del Instituto Pasteur de Francia. El propio Crewdson resume así la presentación: «La historia emerge menos heroica de lo que se suele presentar, pero no menos espectacular: datos falseados y experimentos secretos, virus fantasmas y genes desaparecidos, resultados irreproducibles y notas de laboratorio embrolladas, cultivos sin etiquetar y fotografías manipuladas(...). Es la historia de un científico influyente e intimidador que persiguió un virus erróneo durante más de un año para luego emerger con un hermano virtual genéticamente gemelo del virus que había sido realmente descubierto por sus rivales de París. Lo que ocurrió en el laboratorio de Robert Gallo es un misterio que quizá no será nunca aclarado. Pero la evidencia abrumadora es que hubo o un accidente o un robo». El Senado y el Ministerio de Salud ratificaron estas conclusiones.
La historia cobró tales ribetes novelescos que fue llevada al cine bajo el título ― Y la banda siguió tocando‖ en una clara alusión a la impunidad de estas conductas en la comunidad científica.
Habría para llenar varias páginas con esta historia pero su final no es tan trágico, las influencias políticas del Dr. R. Gallo decidieron ignorar su inconducta y actualmente dirige un laboratorio que recibe docenas de millones de dólares destinados a investigaciones sobre leucemias.
La ciencia al servicio del capital
Un capítulo que tampoco capitalizamos son las miríadas de trabajos de investigación que respaldan a medicamentos que deben retirarse del mercado a poco de ser aprobados por los organismos de control. Entre los miles de casos, uno destacable es el del uso de la Talidomida recomendada ¡como antiemético en embarazadas!. ¿Ningún responsable por la teratogenia de la droga?. Los investigadores no fueron penalizados, solo se retiró la droga del mercado, pero entre 1958 y 1963 nacieron miles de niños con malformaciones no informadas por los investigadores que respaldaron el uso del fármaco. Aún hoy se retiran del mercado
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docenas de medicamentos por semana a poco de su lanzamiento debido a denuncias de diferentes grado de toxicidad. ¿Y las pruebas de campo? ¿no encontraron esas fallas o fueron deliberadamente ocultadas?.
El uso de pesticidas de probada toxicidad para el habitat, el uso de aditivos para naftas que contaminan las reservas de agua potable, el paulatino reemplazo de especies por híbridos que no permiten su reproducción, y una larga lista de daño a la habitabilidad futura del planeta sigue ocurriendo.
Ahora la pregunta obligada: ¿porqué sigue sucediendo esto?. Las respuestas surgen desde diferentes campos, la ética, los paradigmas, la economía. Desde la ética tendríamos que decir que, en ciencia como en todos los órdenes de la vida, hay hombres de bien y otros no tanto. Desde los paradigmas podríamos decir que cambiaron para convertir al científico en tan exitoso cuanto más papel venda. O sea cuantos más trabajos publique en ―revistas de alto impacto‖, que no son otra cosa que cadenas comerciales de distribución mundial. No creo que haga falta tratar el campo de la economía, ocultar datos, falsear resultados y respaldar un veneno no puede hacerse sino con fines económicos.
Una pregunta que nadie responde sin dudar es ¿estamos seguros que el número de publicaciones y el ―impacto‖ de la revista definen el éxito o la utilidad del equipo de investigación?.
No publicar no significa no investigar
El bambú es una planta cuya importancia socio-económica no sería posible imaginar por el hombre occidental. Millones de personas basan sus vidas en esta planta, proveyéndose de alimento, vivienda, indumentaria, material de construcción de embarcaciones y una infinidad de productos exportables que permiten su subsistencia. Al producirse la floración, una etapa cíclica que varía de unos 50 a 100 años dependiendo de la especie y una enormidad de otros factores, la colonia de bambúes muere. Esto sería relativamente trágico si no fuera que al caer la semillas atraen y permiten una sobrepoblación de roedores que no solo acaban con las semillas sino que también con las cosechas de cuanto alimento encuentran. Baste decir que este acontecimiento fue causa de las hambrunas ocurridas en China en 1785, 1815, 1833, 1881, 1911, 1929, 1959, y 1977 además de haber puesto a los osos Panda, especie que se alimenta exclusivamente de los brotes del bambú, al borde de la extinción.
Para comprender la manera de prevenir estos desastres se necesitaron de muchos años de estudios ―sin publicaciones‖ hasta llegar a resultados que expliquen las causas concurrentes que canalizan el fenómeno. Si esos investigadores hubieran estado ajustados a los paradigmas que mantenemos, y al no obtener resultados que llenen páginas de tinta, no hubieran podido contar con los fondos para hallar una solución a este fenómeno y estaríamos hablando de las hambrunas del 2006 y de la raza ya extinguida de Pandas.
La perversión, ¿está en el hombre o en el sistema?
En un jardín de infantes, un grupo de estudiantes de psicología de una universidad estadounidense, llevaron a cabo un experimento. Llevaron a una docena
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de niños de entre 4 y 6 años de edad a un parque y les dieron una caja de cartón a cada uno pidiéndoles que tomen un pedacito de parque y lo pongan en la caja, lo lleven a sus casa y lo cuiden para devolverlo a la semana siguiente. A diario preguntaban a los niños sobre el pedacito de parque a su cuidado y recibían respuestas asombrosas como pajaritos comiendo, nidos de hormigas y otras fantasías. Sin esperar al último día fueron a las casas de los niños involucrados en el experimento y constataron que en las cajas solo había un puñado de tierra seca y unas hojas mustias de césped. ¿Qué los llevó a los niños a mentir?, porque podemos apelar a la imaginación en cuanto a la riqueza del relato, pero basado en una mentira. La mentira surge de una exigencia imposible de cumplir independientemente del raciocinio del individuo. Esos niños no tenían ninguna motivación salvo la responsabilidad impuesta.
De lo expuesto, muy sucintamente, podríamos sacar muchas conclusiones, entre otras, que la verdadera autonomía es el mejor pasaporte a la verdad y al éxito del emprendimiento. Y a su vez, es la mejor manera de vivir y servir honestamente.
Para pensarlo ¿no?. ¡Hasta la próxima!.
Los invito a usar este espacio para expresarse libremente sobre los temas que consideren de interés general.
Atentamente
Dr. José Alberto Komaid
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DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL DE ANEMIA FERRÓPENICA Y RASGO BETA TALASÉMICO: VALOR PREDICTIVO DE LAS PRUEBAS DE CRIBADO Lazarte S., Leri de Nofal M., Rossi E, Jiménez C., Ledesma Achem E., Issé B. Instituto de Bioquímica Aplicada. Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia. UNT Balcarce 747. San Miguel de Tucumán. Teléfono/Fax: 0381-4310994
Correo electrónico: [email protected] RESUMEN
Las anemias microcíticas hipocrómicas más frecuentes son la anemia ferropénica (AF) y el rasgo beta talasémico (RBT). Para diagnóstico en grandes poblaciones se han usado índices derivados del hemograma automatizado, y la prueba de resistencia osmótica eritrocitaria tubo único inmediata y 24 horas post incubación (ROETUI y ROETU24). El propósito del estudio fue determinar la seguridad diagnóstica de 5 índices y de la ROETU en la diferenciación de AF y RBT. Los índices examinados fueron: Mentzer (IM), Shine y Lal (S&L), England y Fraser (E&F), Srivastava (IS), y recuento de glóbulos rojos (RGR). Se estudiaron 32 pacientes con RBT y 21 con AF. Se realizó: hemograma (Coulter ACT10), ROETUI y ROETU24, ferremia, transferrina y saturación de transferrina (Wiener Lab), y electroforesis de hemoglobina a pH alcalino. Se determinó la sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y negativo (VPP y VPN), eficiencia (EF) e índice de Youden (IY) de los ensayos. Hubo diferencia significativa (p<0,05) en RGR, volumen corpuscular medio, hemoglobina corpuscular media, ferremia, saturación de transferrina, ROETUI y ROETU24. El IY reveló S&L>IM>RGR=IS>E&F >ROETUI>R mientras que la EF fue S&L>IM> RGR>IS=ROETU24>E&F>ROETUI. El índice de S&L sería útil en el diagnóstico diferencial de AF y RBT si el laboratorio cuenta con hemograma automatizado, y en caso contrario, la ROETUI y ROETU24.
Palabras clave: talasemia, anemia ferropénica, índices eritrocitarios discriminantes, resistencia osmótica eritrocitaria
ABSTRACT
Iron-deficiency anemia (IDA) and beta-thalassaemia trait (BTT) are the most common hypochromic microcytic anaemia. For mass screening, indices derived from the cellular blood count obtained in hematological counter, and immediate and 24 hours post incubation single tube erythrocyte osmotic resistance test (ISTEOR and 24STEOR) have been used. The purpose of this study was to determine the diagnostic accuracy of 5 indices and STEOR in IDA and BTT differentiation. The indices examined were: Mentzer (MI), Shine and Lal (S&L), England and Fraser (E&F), Srivastava (SI), and red blood cell count (RBC). 32 patients with BTT and 21 with IDA were studied. The following tests were performed: blood count (Coulter ACT10), ISTEOR and 24STEOR, iron, transferrin and transferrin saturation (Wiener Lab), and alkaline hemoglobin electrophoresis. Sensitivity, specificity, positive and negative predictive value (PPV and NPV), efficiency (EF) and Youden index (YI) of the trials were determined. A significant difference (p<0.05) in RBC, mean corpuscular volume, mean corpuscular hemoglobin, iron, transferrin, transferrin saturation, ISTEOR and 24STEOR was observed. YI revealed
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S&L>MI>RGR=SI>E&F>ISTEOR>24STEOR, while EF was S&L>MI>RGR>SI= 24STEOR>E&F>ISTEOR. If the laboratory have automated blood count facility, S&L index would be useful in the differential diagnosis of IDA and BTT, and when not, ISTEOR and 24STEOR.
Key words: thalassaemia, iron deficiency anaemia, discriminator red blood indices, erythrocyte osmotic resistance
MATERIALES Y MÉTODOS Diseño
Se realizó un estudio observacional descriptivo, de corte transversal. Población, muestra y criterios diagnósticos
Se estudiaron 53 individuos en el período comprendido entre marzo de 2009 y julio de 2010, que asistieron al Instituto de Bioquímica Aplicada para diagnóstico etiológico de anemia. El Instituto de Bioquímica Aplicada pertenece a la Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia de la UNT, y cuenta con laboratorios donde se realiza el estudio de anemia, hemostasia, endocrinopatías y enfermedad celíaca.
De cada paciente se obtuvo una muestra de sangre. La muestra fue recibida en EDTA tripotásico para la realización del hemograma; en heparina para la realización de la prueba de resistencia osmótica eritrocitaria (ROE); y otra alícuota sin anticoagulante para las determinaciones bioquímicas en suero.
El diagnóstico de β-talasemia menor incluyó la presencia de microcitosis e hipocromía, y el aumento de la fracción de hemoglobina A2 (HbA2) en la corrida electroforética de hemoglobina. El diagnóstico de anemia ferropénica se hizo en base a la disminución de los niveles de hierro sérico, aumento de la capacidad de unión de hierro a transferrina, y disminución de la saturación de tranferrina (<16%).
Una vez diagnosticados, los pacientes se dividieron en 2 grupos: grupo con rasgo β-talasémico (GRBT) y grupo con anemia ferropénica (GAF); los cuales se clasificaron según la edad en adultos (>12 años) y niños (<12 años).
Estudios hematológicos
Las técnicas empleadas en el análisis de las muestras de sangre fueron las siguientes:
Hemograma e índices hematimétricos: se realizó en el contador hematológico automatizado marca Coulter modelo ACT10.
Ferremia: se usó un equipo de Wiener Lab. El CV del ensayo es de 4,2%, y los valores de referencia (VR) son de 50-170 μg/dL en la mujer, y de 65-175 μg/dL en el hombre.
Capacidad Total de Unión de Hierro a Transferrina (CTUT): se determinó con reactivo marca Wiener Lab. El CV del método es de 8,3% y el VR es de 250-400 μg/dL.
Saturación de transferrina: es el resultado del cociente entre ferremia y CTUT, multiplicado por 100. El VR es de 20-50 %.
Electroforesis de Hemoglobina: la corrida se realizó en tiras de acetato de celulosa, en una cuba de electroforesis con fuente de poder marca CHEMAR. Se usó el buffer tris-EDTA-bórico pH 8,5, preparado en el Laboratorio de Hematología de la Cátedra
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de Bioquímica Clínica. Para el control de calidad interno se procesó un hemolizado obtenido de sujetos normales.
ROE tubo único inmediata (ROETUI): se realizó con una solución salina hipotónica de 4 g/L de NaCl en buffer fosfato (4). A 5 mL de esta solución se agregaron 50 μL de sangre heparinizada del paciente. Además se agregó 50 μL de dicha sangre a 2 tubos más: uno con 5 mL de solución salina de 9 g/L de NaCl en buffer fosfato (0% hemólisis), y otro con 5 mL de agua destilada (100% de hemólisis). Luego de mezclar, los tubos se incubaron durante 30 minutos a temperatura ambiente y se centrifugaron. Los sobrenadantes se leyeron en espectrofotómetro a 540 nm, usando como blanco el tubo 0% de hemólisis. Para el cálculo del porcentaje de hemólisis se usó la densidad óptica (DO) del tubo correspondiente al 100 % de hemólisis (% hemólisis [4g/L] = DO 4g/L x 100/DO100%).
ROE tubo único post incubación a 37º durante 24 horas (ROETU24): la muestra de sangre heparinizada se incubó a 37ºC durante 24 horas. Luego se empleó la misma técnica de ROETUI.
Índices eritrocitarios de discriminación
Con los resultados de volumen corpuscular medio (VCM), hemoglobina corpuscular media (HCM) y recuento de glóbulos rojos (RGR) se calcularon los índices de: Mentzer, Shine y Lal, England y Fraser, y Srivastava (6).
En la Tabla 1 se muestran las fórmulas de cálculo de los índices, y los valores discriminantes de las pruebas de tamizaje usadas para la diferenciación entre β-talasemia menor y anemia por deficiencia de hierro (4, 6).
TABLA 1: Valores de corte usados en la diferenciación entre rasgo β-talasémico (RBT) y anemia ferropénica (AF)
PRUEBA DE TAMIZAJE RBT AF
Recuento de glóbulos rojos (RGR) (x1012/L) >5,0 <5,0 Índice de Mentzer (IM) = VCM/RGR <13 >13 Ïndice de Shine y Lal (SyL) = VCM2xHCMx0,01 <1530 >1530 Índice de England y Fraser (EyF) =
VCM-RGR-5Hb-3,4
Negativo Positivo
Índice Srivastava (IS) = HCM/RGR <3,8 >3,8
ROETUI (% de hemólisis) <50 >50
ROETU24 (% de hemólisis) <85 >85
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Las fórmulas de cálculo de la sensibilidad (S), especificidad (E), valor predictivo positivo (VPP), valor predictivo negativo (VPN), índice de Youden (IY) y eficiencia (EF) se muestra en la Tabla 2 (7).
TABLA 2: Fórmulas de cálculo de S, E, VPP, VPN, IY y EF
ÍNDICE CÁLCULO*
Sensibilidad Positivos verdaderos (PV)/Falsos negativos (FN) + PV
Especificidad Negativos verdaderos (NV)/Falsos positivos (FP) + NV
Valor predictivo positivo PV/PV + FP Valor predictivo negativo NV/NV + FN
Índice de Youden S + E - 1
Eficiencia PV + NV/Nº total de casos *Los resultados se multiplicaron por 100 para informarlos en % Análisis de los resultados
Para el estudio estadístico de los datos se usó el programa Statistical Package for Social Sciences (SPSS) 9.0. Los resultados fueron expresados como la media ± desviación estándar, luego de ser sometidos a la prueba de Normalidad de Kolmogorov-Smirnov. Para las comparaciones se usó el t-Test de Student. El nivel de significación fue de 0,05.
Consideraciones éticas
Se obtuvo un consentimiento informado de todos los pacientes para el uso de los resultados obtenidos, donde se garantizó el anonimato y confidencialidad de los mismos. En el caso de los niños el consentimiento fue firmado por el padre o la madre del mismo.
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RESULTADOS
En 32 pacientes se confirmó la presencia de menor mediante electroforesis de hemoglobina donde se observó aumento en la fracción de HbA2; 21 fueron de sexo femenino y 11 de sexo masculino. Los 21 restantes presentaron AF, ya que tenían ferremia y saturación de transferrina disminuidas; 18 eran de sexo femenino y 3 de sexo masculino. 20 pacientes con AF presentaron HbA2 normal en la corrida electroforética, y 1 la mostró disminuida. El GRBT estuvo compuesto por 5 niños con edades de 1 a 12 años, y 27 adultos (19 mujeres y 8 hombres) con edades de 20 a 82 años. El GAF fue integrado por 3 niños de 1, 6 y 9 años, y por 18 adultos (16 mujeres y 2 hombres) con edades comprendidas entre 16 y 54 años.
GRÁFICO 1: RGR (x1012/L), VCM (fL), HCM (pg), hierro (μg/dL), transferrina (μg/dL), saturación de transferrina (%), ROETUI (% hemólisis) y ROETU24 (% hemólisis) en los grupos GRBT y GAF adultos (Instituto de Bioquímica Aplicada, Tucumán, 2010) 29 18 N = DIAGNÓST talasemia ferropenia GR 7 6 5 4 3 29 39 29 18 N = DIAGNÓST talasemia ferropenia V C M 100 90 80 70 60 50 39 36
29 18 N = DIAGNÓST talasemia ferropenia HCM 40 30 20 10 29 47 26 18 N = DIAGNÓST talasemia ferropenia H IE R R O 300 200 100 0 22 6 35 30 A
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25 17 N = DIAGNÓST talasemia ferropenia T R A N S F E R 500 400 300 200 100 25 17 N = DIAGNÓST talasemia ferropenia S A T U R 80 70 60 50 40 30 20 10 0 24 22 6 35
El análisis estadístico demostró variaciones significativas (p<0,05) en el recuento de eritrocitos, volumen corpuscular medio (VCM), hemoglobina corpuscular media (HCM), hierro sérico, transferrina, saturación de transferrina, ROETUI y ROETU24 entre los grupos GRBT y GAF adultos (Gráfico 1).
Los resultados de los grupos GRBT y GAF niños se presentan en la Tabla 3; no se efectuaron comparaciones debido al escaso número de datos. En los pacientes menores de 12 años se observaron valores mayores en los resultados de RGR, hierro, transferrina, y saturación de transferrina en el grupo GRBT, mientras que el VCM, HCM, ROETUI, y ROETU24 mostraron resultados más altos en el grupo GAF.
TABLA 3: Parámetros hematológicos y bioquímicos de los grupos GRBT y GAF niños (Instituto de Bioquímica Aplicada, Tucumán, 2010)
PARÁMETROS GRBT (n=5) GAF (n=3) RGR [x1012 /L] 5,65±0,53 4,66±0,40 VCM [fL] 63,3±6,7 74,5±8,7 HCM [pg] 20,1±2,2 24,2±3,6 HIERRO [μg/dL] 101±50 38±4 TRANSFERRINA [μg/dL] 310±53 216±20* SATURACIÓN [%] 34±19 17±0* ROETUI [% de Hemólisis] 9,7±11,0 56,3±30,5 ROETU24 [%de Hemólisis] 35,6±19,2 88† *n=2; †n=1
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Con respecto a los índices calculados, en la Tabla 4 se muestran los resultados de E, S, VPP, VPN, IY y EF de los mismos, como así también de la ROETUI y ROETU24.
De acuerdo al IY el poder discriminatorio de las pruebas usadas fue: SyL>IM>RGR>IS>EyF>ROETUI>ROETU24. Según la eficiencia el orden fue: SyL>IM>RGR>IS=ROETU24>EyF>ROETUI.
TABLA 4: E, S, VPP, VPN, IY y EF de las pruebas de cribado evaluadas (Instituto de Bioquímica Aplicada, Tucumán, 2010)
PRUEBA E S VPP VPN IY EF RGR 86 88 90 82 74 87 IM 95 84 96 80 79 89 SyL 86 100 91 100 86 94 EyF 95 75 96 71 70 83 IS 95 78 96 74 73 85 ROETUI 55 97 76 92 52 80 ROETU24 41 100 81 100 41 85
La combinación del índice de S&L, que fue el más eficiente, con la ROETUI y ROETU24 determinó: S= 97%, E = 94% , VPP = 97% , VPN = 94%, IY = 91% y EF = 96%.
DISCUSIÓN
De acuerdo a los antecedentes, la ROETU se ha realizado con distintas concentraciones de NaCl, que varían desde 3,2 hasta 4,0 g/L (8, 9, 10, 11). En el presente trabajo, para probar la resistencia de los eritrocitos de forma inmediata y tras una incubación de 24 horas a 37ºC, se usó una solución de NaCl de 4 g/L en buffer fosfato. Aunque en reportes previos ROETU ha mostrado una sensibilidad superior al 91%, la especificidad ha variado desde 64,2% hasta 95% (8). ROETUI y ROETU24 demostraron ser métodos altamente sensibles (97 y 100%, respectivamente), pero poco específicos (55 y 41%, respectivamente), y con un VPN del 92 (ROETUI) y 100% (ROETU24) para el RBT. La baja especificidad se debe a la alta frecuencia de deficiencia de hierro en nuestra población, patología que no fue tenida en cuenta en estudios que informan una especificidad de 91% (9). El resultado del estudio actual coincide con El-Beshlawy et al (10) en niños de edad escolar en Egipto, quien determinó una especificidad de ROETUI también baja (34,1%), con una sensibilidad alta (87%) y un VPN de 82,3%, debido a la alta prevalencia de anemia ferropénica en dicha población. En Italia, ROETUI combinada con la observación de la morfología de los glóbulos rojos en frotis sanguíneo, sin embargo, detectó virtualmente todos los sujetos con RBT (11).
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Los mejores índices diagnósticos de β-talasemia menor fueron el de S&L y el de Mentzer, según el IY (86 y 79%, respectivamente), y la eficiencia (94 y 89%, respectivamente). Asimismo Okan et al (6) en Turquía, encontraron que el índice de S&L fue el mejor para diferenciar AF de RBT, ya que mostró un IY de 88%; mientras que en la India, Rathod et al (12) concluyeron que las fórmulas de S&L y de Mentzer fueron superiores en el diagnóstico de RBT. El IM permitió diagnosticar el 71% de los individuos con RBT en Tucumán (Argentina) (13). Para Ntaios et al (14), el mejor fue el índice de Green y King (G&K) según IY (70,86%), seguido por el índice de E&F, y el RGR; pero el primero no fue calculado en el presente estudio por no contar con el valor de RDW (Red Distribution Width). Los índices G&K, Ricerca y E&F fueron recomendados para discriminar RBT y AF en niños chinos (15). En Nápoles (Italia) el índice E&F presentó el mejor IY (64,2%) y el de G&K la mejor EF (80,2%) (16); y en Palestina el índice más eficiente también fue el de G&K (17). Otros autores concluyeron que el RGR fue superior a todos los índices calculados (18, 19). Las diferencias encontradas podrían atribuirse a las diferencias genéticas, que determinan fenotipos y comportamiento distintos en nuestra población.
Se ha sugerido que la combinación de ROETU con los índices discriminantes es superior a cualquiera de ellos usados individualmente (20). Así, la asociación del mejor parámetro evaluado, el índice de S&L, con ROETUI y ROETU24 demostró ser el procedimiento más eficiente para el diagnóstico de RBT.
El grupo GRBT adulto manifestó diferencias significativas (p<0,05) en el RGR, VCM, HCM, ferremia, transferrina, y saturación de transferrina con respecto al grupo GAF, por lo que una correcta evaluación del metabolismo del hierro también contribuye al diagnóstico diferencial. Sin embargo, dicho estudio no puede ser usado en el cribado de masas de población.
CONCLUSIONES
Para diferenciar RBT de AF, en los laboratorios que cuentan con contador hematológico, sería recomendable el cálculo de los índices de discriminación, teniendo en cuenta que los índices de S&L y Mentzer son los más eficientes en nuestra población. La prueba de ROETU, a pesar de su baja especificidad, sería aconsejable para aquellos laboratorios que carecen de hemograma automatizado, porque permite descartar de manera confiable aquellos individuos que no presentan RBT. Sin embargo, ninguna de estas pruebas de cribado permite el diagnóstico seguro de RBT, por lo que el pacientesospechoso por cualquiera de estos métodos, debería ser derivado a un centro especializado para su confirmación.
AGRADECIMIENTOS
Este trabajo de investigación fue realizado con el subsidio CIUNT 26/D431. BIBLIOGRAFÍA
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AREVISIONES DE LA ACADEMIA NORTEAMERICANA DE PEDIATRÍA DEL USO DE PROBIOTICOS, PREBIOTICOS.
CME/CE News Author: Laurie Barclay, MD
Pediatrics. Published November 29, 2010.
Los beneficios actualmente conocidos de probióticos y prebióticos para la salud, inclusive aquellos agregados a fórmulas infantiles y otros productos alimenticios para niños, fueron revisados en una Academia Norteamericana de la Pediatría (AAP) el informe se publicó el 29 de noviembre en línea en la revista
Pediatrics.
"Los esfuerzos de optimizar el ambiente microbiano intestinal aumentó el interés en agregar probióticos y prebióticos a productos nutricionales. Al igual que con antibióticos, el uso y la eficacia de probióticos y prebióticos deben estar apoyados por evidencia basada en la medicina," escribe R. Franco. Greer, MD, FAAP, y Dan W. Thomas, MD, FAAP, y el Comité en la Nutrición; Sección en la Gastroenterología, Hepatology, y Nutrición. "El propósito de este informe clínico es de revisar los usos médicos de probióticos y prebióticos y para resumir lo que se sabe actualmente de sus beneficios para la salud como suplementos dietarios añadidos a productos alimenticios comerciales para niños, inclusive en fórmula infantil. La guía en este informe ayudará a proveedores pediátricos de asistencia médica a tomar decisiones apropiadas con respecto a la utilidad y el beneficio de probióticos y prebióticos para sus pacientes". 29 de noviembre Pediatrics.
Los probióticos son suplementos o alimentos que contienen microorganismos viables capaces de cambiar la microflora del huésped. Los ensayos clínicos aleatorios (RCTs) (por sus iniciales en inglés) han mostrado que los probióticos son moderadamente efectivos en el tratamiento de la gastroenteritis vírica aguda en niños sanos. Por otra parte, en bebés y niños con diarrea aguda por gastroenteritis viral, la administración de probióticos tempranamente en el curso de la infección puede reducir la duración de la diarrea en 1 día.
A pesar de la falta de evidencia de la eficacia de probióticos para tratar la diarrea asociada a antibióticos en niños saludables, RCTs ha demostrado que son moderadamente efectivos para la prevención.
Aunque se necesitan más estudios, alguna evidencia apoya el uso de probióticos para prevenir enterocolitis necrotizante en niños de bajo peso al nacer (peso de nacimiento entre 1000 y 1500 G).
Se necesitan estudios adicionales antes que un probiótico pueda ser recomendado para el tratamiento de síndrome de intestino irritable, de la enfermedad de Crohn, del cólico, y del estreñimiento, o para la prevención de infecciones y alergia comunes en niños.
Sin embargo, resultados preliminares fueron favorables en RCTs en los que probióticos fueron utilizados para tratar gastritis por Helicobacter pylori en niños, síndrome de intestino irritable, colitis ulcerativa crónica, y cólico infantil, o para
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prevenir atopía de la niñez. La evidencia a la fecha no ha mostrado un beneficio de probióticos en tratamiento o prevención de cánceres humanos ni la enfermedad pediátrica de Crohn.
El uso rutinario de probióticos o prebióticos agregado a fórmula infantil y otros alimentos destinados para el consumo por niños no es apoyado por evidencia de eficacia clínica actualmente disponible, pero estas fórmulas no parecen ocasionar daño a niños sanos. Sin embargo, los probióticos no deben ser administrados a niños con enfermedades crónicas ni graves, inclusive a niños inmunocomprometidos, o desnutridos, o que porten dispositivos médicos.
Los prebióticos son suplementos o alimentos que contienen un ingrediente no digestible que promueve selectivamente el crecimiento y/o la actividad de bacterias probióticas nativas. Los prebióticos encontrados en la leche humana pueden ayudar a reducir infecciones comunes y eczema atópico en niños sanos, pero se necesita más evidencia antes de recomendar agregar prebióticos a la fórmula infantil.
"Preguntas importantes quedan por establecer en las aplicaciones clínicas de los probióticos, inclusive la duración óptima de la administración de probióticos así como dosis y especies microbianas preferidas," concluyen los autores del informe. "El impacto a largo plazo en el microflora visceral en niños es desconocido. También se queda sin establecer si hay beneficio biológico significativo en la administración de probióticos durante embarazo y lactancia comparado al beneficio biológico potencial derivado de fórmulas infantiles conteniendo probióticos".
Información Adicional
The complete Clinical Report—Probiotics and Prebiotics in Pediatrics is available on the American Academy of Pediatrics website.
Definiciones
Los probióticos son productos alimenticios que contienen microorganismos que pueden alterar el microflora del anfitrión con beneficios potenciales, y los prebióticos son ingredientes de alimentos no digestibles que estimulan el crecimiento de bacterias nativas de probiótico. Simbiótico es un producto que contiene tanto probióticos como prebióticos. Esta es una revisión de evidencias de beneficios de probióticos y prebióticos en niños, basados en RCTs recientes y revisiones sistemáticas.
El estudio destaca:
• Un niño al momento de nacer tiene un tracto gastrointestinal estéril, pero la colonización bacteriana ocurre rápidamente, más en el alimentado con biberón que en niños alimentados a pecho.
• Se piensa que la impronta bacteriana ocurre a través de leche materna y puede contribuir a la salud general del niño.
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• RCTs Publicados sugieren que hay un beneficio moderado al dar probióticos para prevenir las infecciones gastrointestinales agudas en niños.
• En el RCTs, el rotavirus fue el organismo más comúnmente estudiado, y los suplementos de probióticos fueron administrados generalmente en servicios de guarderías infantiles.
• En los estudios, los niños alimentados con probióticos tuvieron menos episodios de diarrea, y el número necesario para prevenir a 1 niño de la gastroenteritis ha sido estimado en 7.
• Hay también evidencia que los probióticos pueden reducir la duración de gastroenteritis aguda en niños por 1 día.
• El tratamiento con probióticos ha demostrado reducir el riesgo de diarrea antibiótico-asociado, con un riesgo relativo de 0,44.
• Se demostró que 1 de 7 casos de diarrea antibiótico-asociado puede prevenirse por el uso de un probiótico.
• Los probióticos pueden ser utilizados para reducir la incidencia de diarrea antibiótico-asociado.
• Hay menos evidencia que apoye el uso de probióticos para la dermatitis atópica en niños.
• En 1 estudio, la incidencia de dermatitis crónica atópica en niños fue reducida cuando madres ingirieron probióticos durante embarazo.
• Sin embargo, en otro estudio, la ingestión de probioticos por niños no redujo la incidencia de dermatitis de atópica en niños de alto riesgo.
• En otro estudio más de niños, el uso de probióticos por 8 semanas redujo la severidad de dermatitis de atópica en niños con esa condición.
• Una revisión de Cochrane en 2008 concluyó que había evidencia insuficiente para demostrar la efectividad de probióticos en el tratamiento del eczema.
• Actualmente, hay evidencia insuficiente para recomendar probióticos a madres embarazadas para la prevención de la enfermedad alérgica en la niñez.
• Hay alguna evidencia de un beneficio de probióticos para prevenir enterocolitis necrotizante en niños recién nacidos, en un estudio de 27 niños tratados, previno 1 caso, en otro estudio de 21 niños tratados, previno 1 caso.
• Sin embargo, no todos los probióticos ha sido estudiados, y no puede generalizarse la recomendación de su uso.
• Hay un beneficio moderado de probióticos para la infección de H. pylori en adultos, y se necesitan más estudios antes de recomendar su uso para erradicar gastritis por H. pylori en niños.
• Hay una sugerencia que los probióticos pueden ser beneficiosos en la enfermedad de intestino irritable, pero hay evidencia insuficiente al presente para recomendar su uso para colitis ulcerativa o la enfermedad de Crohn en niños.
• Hay evidencia insuficiente para el uso de probióticos para el estreñimiento o para síntomas de síndrome de intestino irritable.
• En niños exclusivamente criados a pecho, los probióticos han sido encontrado útiles para el cólico infantil, pero se necesitan más estudios antes que puedan ser recomendados generalmente.
• Hay evidencia insuficiente para apoyar el uso de probióticos o prebióticos en infecciones extraintestinales en niños.
• Los prebióticos ha sido utilizados para desórdenes alérgicos e infecciones, pero hay evidencia insuficiente para apoyar recomendarlos al presente.
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• No se hicieron RCTs para probar la eficacia de prebióticos en mantener la remisión en la colitis de ulcerativa en humanos. Aunque estudios en animales hayan apoyado el uso de prebióticos en la prevención de cáncer, se necesitan estudios en humanos. • El uso combinado de probióticos con prebióticos todavía no ha mostrado ser beneficioso en enfermedades alérgicas pero puede mejorar la función inmune en conjunto.
• Los probióticos no debe ser dados a niños que están gravemente o crónicamente enfermos hasta que su seguridad haya sido establecida.
Implicancias clínicas:
• Hay moderada evidencia para apoyar el uso de probióticos, pero no de prebióticos, en la gastroenteritis por rotavirus y cólico infantil en niños exclusivamente criados a pecho.
• Hay evidencia insuficiente para recomendar probióticos o prebióticos para infecciones extraintestinales o desórdenes alérgicos en niños.
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"CARACTERIZACIÓN DE SALIVARICINA CRL 1328 Y SU APLICACIÓN EN EL DISEÑO DE PRODUCTOS FARMACÉUTICOS PARA LA PREVENCIÓN DE INFECCIONES UROGENITALES."
TESISTA: Licenciado Esteban Vera Pingitore
DIRECTORA: Dra. María Elena Fátima Nader de Macías DIRECTOR ASOCIADO: Dr. Fernando Juan Manuel Sesma
COMISIÓN DE SUPERVISIÓN DE TESIS: Dra. Graciela Font de Valdéz; Dr. Faustino Siñeriz
Este trabajo fue realizado en el Centro de Referencia para Lactobacilos (CERELA), dependiente del Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET), de la Fundación Miguel Lillo y de la Fundación para la Educación, la Ciencia y la Cultura (FECIC).
Con el apoyo financiero del Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET) y la Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica (ANPCyT).
RESUMEN
Las infecciones urogenitales femeninas constituyen un problema social y de salud pública con una elevada tasa de incidencia a nivel mundial. Como resultado pueden producirse complicaciones ginecológicas y de embarazos que afectan tanto a la madre como al recién nacido. Por otro lado, la recurrencia de estas infecciones disminuye la calidad de vida de las mujeres que las padecen.
El ecosistema urogenital de mujeres sanas en edad reproductiva esta representado por una amplia diversidad microbiana, en el que están presentes diferentes especies de lactobacilos, que si disminuyen o desaparecen se incrementa el riesgo de infecciones. La aplicación y disponibilidad de antibióticos en el tratamiento de estas infecciones han mejorado significativamente la salud y el bienestar de las mujeres. Sin embargo, la aparición de cepas resistentes a antibióticos se incrementa en forma permanente. Como resultado, se requieren profilaxis alternativas y estrategias terapéuticas. Una alternativa válida es la aplicación de productos probióticos conteniendo bacterias lácticas benéficas y/o bacteriocinas.
Lactobacillus salivarius CRL 1328 es un microorganismo aislado de vagina humana con diferentes propiedades benéficas, entre ellas la producción de bacteriocina (salivaricina CRL 1328) con actividad antimicrobiana frente a patógenos urogenitales.
El objetivo de este trabajo es evaluar la posibilidad de incluir salivaricina en el diseño de un producto farmacéutico a ser empleado en la reconstitución de la microbiota urogenital y en la prevención de infecciones, combinándola con lactobacilos con propiedades benéficas.
Para ello, se iniciaron diferentes estudios básicos y aplicados tendientes a conocer en detalle el sistema de producción de la sustancia antimicrobiana.
Se estudió la influencia de diferentes nutrientes sobre el crecimiento y producción de salivaricina por Lactobacillus salivarius CRL 1328, empleando un medio químicamente definido.
Se caracterizó el locus responsable de producción de salivaricina, el cual está constituido por 9 genes responsables de la producción, inmunidad y secreción
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de salivaricina. Esta bacteriocina pertenece a la clase IIb y está compuesta por dos péptidos estructurales Salα y Salβ.
Se identificó el mecanismo de acción de la salivaricina utilizando Enterococcus faecalis como cepa sensible. Los péptidos maduros de la salivaricina, Salα y Salβ, fueron químicamente sintetizados. Estos péptidos exhiben su actividad antimicrobiana óptima en una razón equimolecular.
Se determinó que salivaricina disipa el potencial de membrana y el gradiente de protones a través de la membrana, ambos componentes de la fuerza protomotriz.
Se evaluó la estabilidad de salivaricina CRL1328 al proceso de liofilización y almacenamiento a diferentes temperaturas.
Se observó que se conserva activa por un periodo de por lo menos 18 meses, tanto a temperatura ambiente como a 4ºC y a -20ºC, obteniéndose mejores resultados a las dos últimas temperaturas, principalmente cuando se liofiliza con polietilenglicol, sacarosa y ácido ascórbico.
Por otro lado se evaluó la resistencia al proceso de liofilización y almacenamiento de distintas formulaciones conteniendo combinaciones de salivaricina y diferentes sustancias y lactobacilos vaginales seleccionados para su inclusión en el diseño de un compuesto farmacéutico.
Los resultados obtenidos de viabilidad de microorganismos y actividad antimicrobiana de salivaricina representan un avance en el diseño de un producto de farmacéutico dirigido a prevenir infecciones urogenitales o reestablecer la microbiota. Y a la vez son originales, ya que no existe en el mercado farmacéutico un producto con las características del obtenido en el presente trabajo de tesis doctoral.
―REACCIONES ENZIMÁTICAS DE INTERÉS EN LA INDUSTRIA QUÍMICA Y/O FARMACÉUTICA‖
TESISTA: Bioq. Cintia Mariana Romero DIRECTOR: Dr. Mario Domingo Baigorí
COMISION DE SUPERVISION: Dra. Licia María Pera; Dra. Virginia Rodriguez; Dr. Raúl Salomón; Dr. Mario Domingo Baigorí.
Este trabajo de Tesis Doctoral se realizó en: Planta Piloto de Procesos Industriales y Microbiológicos.
Con el apoyo financiero de: Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET)
Agencia Nacional de Promoción Científica y Técnica (ANPCYT), Secretaría de Ciencia y Tecnología (SECYT), Consejo de Investigaciones de la Universidad nacional de Tucumán (CIUNT), Planta Piloto de Procesos Industriales y Microbiológicos (PROIMI).
RESUMEN
En la última década las reacciones de hidrólisis y de síntesis han alcanzado gran importancia en la industria química y farmacéutica. Puede mencionarse la hidrólisis de grasas y aceites, la síntesis de ésteres de azúcares y ácidos grasos, la
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Arch. Bioq., Quím. y Farm. – Tucumán Tomo XXI Nº 1 2010-2011
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producción de intermediarios para síntesis orgánica, la acetilación de alcoholes, reacciones de
Transesterificación, la resolución de mezclas racémicas, etc.
Los ésteres de azúcares y ácidos grasos son surfactantes no iónicos naturales. Son sintetizados a partir de componentes naturales de los alimentos y muestran propiedades prebióticas.
La selectividad enzimática, que incluye sustrato, estéreo-, regio- y quimioselectividad, puede ser marcadamente modificada por las condiciones experimentales del entorno. En particular el uso de solventes orgánicos permite incrementar la solubilidad de sustratos no polares, facilitar la separación del producto, suprimir las reacciones enzimáticas no deseadas y favorecer las reacciones de síntesis, imposibles de biocatalizar en agua. Las lipasas (triacilglicerol acilhidrolasas, EC 3.1.1.3) son enzimas que, dependiendo de las condiciones de reacción, catalizan la hidrólisis o la síntesis de ésteres. Algunas de estas enzimas, disponibles comercialmente, se encuentran en uso para una gran variedad de aplicaciones biotecnológicas. Los sistemas no convencionales, constituyen una herramienta interesante para incrementar la productividad de muchos bioprocesos en los que participan estas enzimas.
En este trabajo de tesis doctoral se planteó el estudio de reacciones enzimáticas de interés en la industria química y/o farmacológica utilizando enzimas libres y/o ligadas a la biomasa como así también el desarrollo de sistemas convencionales y/o no convencionales para la producción de sustancias de aplicación industrial.
Se logró identificar actividad lipasa producida por un hongo filamentoso, A. niger MYA 135 tanto extracelular como ligada a la biomasa, ambas con interesantes propiedades biotecnológicas. Del estudio de estas actividades enzimáticas se puede concluir que tienen una promisoria aplicación en diversas reacciones tanto de hidrólisis como de síntesis tales como la producción de biodiesel, ya que ambas actividades libre y ligada a la biomasa mostraron capacidad de síntesis y estabilidad en solventes hidrofílicos, fundamentalmente metanol y etanol, solventes que participan junto a un ácido graso en la producción de este biocombustible.
También estos sistemas fueron capaces de sintetizar distintos esteres de azúcares y ácidos grasos que se utilizan como surfactantes y aromatizantes, respectivamente, en la industria alimenticia.
Estas actividades enzimáticas mostraron ser tipo y regioselectivas como así también resistentes a pH y temperatura propiedades que las hacen muy interesantes para diversas reacciones de aplicación industrial, como la industria de detergentes y la alimenticia.
Se logró purificar e identificar una lipasa extracelular con propiedades interesantes, la que podría ser utilizada en potenciales reacciones en sistemas no convencionales de alto valor agregado.
Por otro lado, los beneficios que presenta la actividad ligada al micelio en la producción de biodiesel, convierten a este sistema en el elegido como proyección en la producción de este biocombustible, debido a que es un sistema económico y de factible manipulación a nivel industrial.