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Arch. Bioq., Quím. y Farm. – Tucumán Tomo XXI Nº 1 2010-2011
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resultados resultan muy alentadores considerando que el requerimiento mínimo BAL para ejercer su efecto en el huésped oscila entre de 106- 107 UFC/ml. Poder contar con fermentos probióticos que no requieran cadena de frío, constituye un interesante propuesta desde el punto de vista económico y tecnológico.
Palabras claves: PB a Temp. Ambiente.
MÉTODOS DE RECUPERACIÓN DE ADN DE PAPILOMAVIRUS HUMANO (HPV) DE TEJIDOS FIJADOS, FRESCOS Y CONGELADOS PARA APLICACIÓN DE REACCIÓN DE POLIMERASA EN CADENA - POLIMORFISMO DE FRAGMENTOS DE RESTRICCIÓN (PCR- RFLP)
Nombre: Zareath Pamela Terán Baptista - [email protected]
Directora: Dra Aída María Suárez - Cátedra de Virología – 4247752 interno 7066 - [email protected]
Lugar de trabajo: Cátedra de Virología - Instituto de Microbiología ¨Dr Luis Verna¨ - Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia - Universidad Nacional de Tucumán - Ayacucho 471
RESUMEN
Los Papilomavirus Humanos (HPV) son virus epiteliotropos pertenecientes a la familia Papilomaviridae. El gran impacto de estos virus en el campo sanitario surgió a través de su asociación etiológica con tumores humanos, en particular con el cáncer de cuello uterino.
En base a estudios epidemiológicos, los virus HPV han sido clasificados en virus de alto y bajo riesgo oncogénico. Elgenotipo viral es uno de los factores de riesgo asociados a la infección que determinan la progresión maligna de lesiones cervicales.
El principal obstáculo para el diagnóstico de laboratorio de estos virus es la incapacidad de propagarse en cultivos celulares convencionales por ello el laboratorio virológico utiliza diversas técnicas de biología molecular para detectar y/o tipificar el HPV presente en células y tejidos, como la amplificación génica por medio de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y la tipificación viral por el análisis de los fragmentos obtenidos mediante endonucleasas de restricción (RFLP)
El objetivo de este trabajo fue seleccionar un método que permita detectar y tipificar por PCR-RFLP el mayor número de tipos de HPV a partir de ADN extraídos de tejidos fijados, frescos y congelados.
Se estudiaron biopsias de cérvix uterino producto de conizaciones y LEEPs (loop electrocautery excision procedure), cepillados endocervicales y tejido fijado y parafinado (material de archivo) de pacientes concurrentes al Instituto de Maternidad y Ginecología Nuestra Señora de las Mercedes de Tucumán. A todas las muestras se les realizó el diagnóstico cito-histológico aplicando el criterio de Bethesda 2001.
Se requirió del consentimiento individual de las participantes, todas completaron un cuestionario donde se relevó información asociada según la Agencia Internacional para la Investigación en Cáncer y la Organización Mundial de la Salud (IARC-OMS), acorde con la legislación internacional (Declaración de Helsinki).
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Se seleccionaron 4 protocolos para extracción y purificación de ADN. Todos ellos utilizaban proteinasa K para la digestión de la muestra. En tres de los métodos se llevó a cabo una etapa de purificación con distintas metodologías: fenol- cloroformo, precipitación con acetato de amonio y columna de sílice.
La detección genérica del genoma viral fue realizada por PCR utilizando el sistema de cebadores consenso MY 09/11 que amplifican un fragmento de 450 pb del gen viral L1. Para esta reacción se preparó un control positivo con ADN extraído de la línea celular HeLa C 229, cultivada in vitro que contiene 10-50 copias de HPV- 18.
La genotipificación viral se realizó por RFLP. Los amplificados fueron sometidos a análisis de restricción con un panel con 7 enzimas, pudiendo de esta manera identificar más de 40 genotipos de HPV mucosotropos.
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Dra SABRINA INÉS VOLENTINI - Doctor en Ciencias Biologicas.
Dra.SUSANA ALICIA BORKOSKY - Magister en Ciencias Químicas y Dra en Bioquímica.
PASTORIZA DE TARIFA, ADRIANA DEL VALLE - Ingeniero Agrónomo - Magíster en Desarrollo de Zonas Áridas y Semiáridas.
DRA. CINTIA ROMERO - Dra. en Bioquímica.
DRA. MARCELA FÁTIMA MEDINA - Dra. en Bioquímica. DR. ARQ. GUILLERMO E. GONZALO - Dr. en Arquitectura.
DIEGO A. SAMPIETRO - Ingeniero Agrónomo - Doctor en Bioquímica. DRA. MARÍA DE LOS ÁNGELES BULACIO - Doctora en Odontología DRA. MARÍA PAOLA GAUFFIN CANO – Dra. en Bioquímica.
DR. ALFREDO GRAU - Ingeniero Agrónomo (UNT) Doctor en Ciencias Naturales (U Hamburgo).
MARTA ADRIANA CORREA ZEBALLOS - Magíster en Estadística Aplicada. Magíster en Metodología de la Investigación Científica y Licenciada en Matemática. DR SERGIO E. PASTERIS - Doctor en Bioquímica.
MARIA JOSE RODRIGUEZ VAQUERO - Doctora en Bioquimica. DRA. SUSANA ALVAREZ - Dr. en Bioquímica.
ING. QUIMICO SUSANA B. CHAUVET - Quality Engineer -Especialista en Higiene y Seguridad en el Trabajo - Especialista en Ingenieria Ambiental.
DRA. MÓNICA B. GRAMAJO - Doctora en Química - Licenciada en Química. DRA MIRTA SARA SANTANA - Dra en Estadística.
CATIANA ZAMPINI - Dra. en Ciencias Biológicas. MARCELA S. MEDINA - Dr. en Bioquímica.
DRA MARIA GRACIELA AGÜERO - Dra en Bioquimica. ADELA VICTORIA ABREGÚ - Dra. en Bioquímica.
DRA MARÍA ROSA ALBERTO - Dra en Ciencias Biológicas.
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ADRIANA MARÍA SALES - Dra en Química.
SUSANA ESTELA GONZÁLEZ DE GALINDO - Magister en Enseñanza de la Matemática Superior
MARGARITA DEL VALLE VELIZ DE ASSAF - Licenciada en Matemática Magister en la enseñanza de la Matemática Superior.
PATRICIA MARÍA VILLALONGA DE GARCÍA - Licenciada en Matemática y Magíster en Enseñanza de la Matemática Superior.
ING. FRANCO DAVOLIO - Ingeniero Químico; Ingeniero Sanitario; Ingeniero Laboral.
LILIA CRISTINA DE LA CRUZ RODRÍGUEZ DE DANTUR - Dra en Bioquímica. DRA SILVIA COLOMBO DE HOLGADO - Doctora en Medicina. Medizinische Hochschule Hannover.año 1981 Especialista en Anatomía Patológica
MG. ANA MABEL JUÁREZ - Magister en la Enseñanza de la Matemática en el Nivel Superior .
DRA. BETTINA BRAVO - Doctor por la Universidad Autónoma de Madrid DRA. SUSANA B. GENTA Dra. en Bioquímica.
PROF. DRA. LILIANA FRACCHIA - Prof. Asociada a Cargo de Cátedra Metodología de la investigación científica. Facultad de Medicina UNT.
GRACIELA BENZAL - Doctorado en Matemática Aplicada
CARMEN M. TORRENTE - Magíster en Sociología Aplicada y Esp. en Metodología de la Investigación Científica.
SERGIO ORLANDO GÓMEZ - Médico especialista en Pediatría
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El Tomo XXI Nº 1 – 2010/11 se terminó de imprimir en Abril de 2011 en San Miguel de Tucumán – República Argentina.