Preparación de Azul de Metileno 131 l

AG ISSN 0020-0867

CNEA 371 Preparación de Azul

de Metileno

l

Comisión

Nacional

de Energía

Atómica

República Argentina

Buenos Aires, 1974

INIS C L A S S I F I C A T I O N A N D KEYWORDS B13 L A B E L L E D C.OMPOUNDS I O D I N E 131 M E T H Y L E N É B L U E C H E M I C A L P R E P A R A T I O N I M P U R I T I E S L A B E L L I N G N U C L E A R M E D I C I N E

COMISIÓN NACIONAL DE ENERGÍA ATÓMICA DEPENDIENTE DE LA PRESIDENCIA DE L A NACIÓN

PREPARACIÓN DE AZUL DE METILENO l t f lt

G»N. Bianco de Salas y A . E . A . Micta

RESUMEN

Se describe la preparación de azul de metileno (cloruro de 3.7 dimetila-minofenazotionio) marcado con radioyodo con un rendimiento radioquímico del 63-%.

Se ensayaron diferentes métodos de purificación del producto marcado, llegándose a obtener una pureza radioquímica del 99%. También se estudia-ron las condiciones de estabilidad del mismo.

SUMMARY

Preparation of methylene blue 131¡

The labelling of methylene blue (3,7 dimethylamino phenazotíonio chlo-ride) with radioiodine with a radiochemical yield of 63% is described. Diffe-rent methods of purification for the labelled product were assayed, and the radiochemical purity obtained was 99 %. The stability conditions for the conv pound were al so studied.

INTRODUCCIÓN

La obtención de un compuesto marcado para ser utilizado en scanning de paratiroides, es aún un problema sin solución, Brien yfteaveny (1) en 1968 sugirieron el empleo de azul de toluidina marcado con radioyodo, ob-teniéndose un rendimiento radioquímico de 10-35%, posteriormente el ren-dimiento fue mejorado por Czemiak y Boruchowski (2), finalmente en 1972

se describió un método que permite alcanzar un rendimiento radioquímico del 98% (3). No obstante, su empleo en humanos para scanning de parati-roides no ha dado buen resultado.

En este trabajo, estudiamos la incorporación del radioyodo al azul de metileno, para ser ensayado con igual fin, ya que este colorante ha sido empleado por los cirujanos para identificar intra operatoriamente la parati-roides, teniendo en esta aplicación la ventaja sobre el azul de toluidina para igual uso, de no tener la toxicidad de este último.

En la bibliografía no encontramos métodos de marcación de este colo-rante con radioyodo y dada la relación estructural entre el azul de metile-no y azul de toluidina, ambos derivados de las tiazinas, ensayamos la mar-cación de azul de metileno con radioyodo en forma similar al azul de tolui-dina (3) obteniéndose un rendimiento radioquímico de 63 % (valor pormedio).

MÉTODO DE MARCACIÓN

Se coloca 1 mi de azul de metileno (lmg/ml) en un tubo provisto con ta-pón esmerilado y se añaden 50 ¿il de Cloramina T recientemente preparada (1 /ig/Vl) y 0.5-10 mCi de 1 3 1I N a en 20 - 30 ¡A libre de portador y reductor.

Se ajusta el pH a 5J0-5.5 con un microelectrodo de vidrio, se tapa el tubo y deja 30 minutos a temperatura y luz ambiente. Se detiene la reacción median-te el agregado de una gotas de S20?N a2 0.1 M. Rendimiento radioquímico 6i%

MÉTODO DE PURIFICACIÓN

Se debió recurrir a la cromatografía en papel Whatman N9 1, utilizando

la mezcla indicada por Lederer y Lederer(4) EtOH : NH? : H20 ( 8 : 0 , 4 : 1,6)

en cromatografía descendente, durante 4 horas. La detección de los produc-tos marcados se hizo por radiocromatografía mediante un radiocromatógrafo

5

-Packard, modelo 7200. La evaluación de los picos sé efectuó por planime-tría y pesada.

Se separaron tres fracciones del producto marcado;

Rf colorante: 0.10, 0,34 y 0.92 como se ve en el Gráfico N2 1.

Rf: I 3 II : 0,70

Con otra relación de solventes en iguales condiciones, se identifica una sola mancha correspondiente al producto.

Solvente: EtOH: NH3 : H20 ( 4 : 2 : 4 )

Tiempo de desarrollo: 2.30 horas Rf colorante: 0.10

Rf: 1 3 11 : 0.90

La evaluación se efectuó igual que en el caso anterior.

ELUCIÓN

Una vez efectuada la corrida se corta la zona correspondiente al colo-rante y se eluye en cámara cerrada con H2 O : EtOH ( 9 : 1 ) durante 6-8

ho-ras. Se recupera más del 90 % con una pureza radioquímica superior al 99 %. Se esteriliza pasando por milliporo de 0.45 /¿. El control de esterilidad y pirógenos se efectuó de acuerdo a lo indicado por el Manual de Controles Radiofannacéuticos ( 5 ) . Las mediciones de actividad se efectuaron en una cámara de ionización Mediac, modelo 6362.

VARIABLES ESTUDIADAS

Se estudió el efecto de distintas variables: pH, tiempo, temperatura, ma-sa e iluminación sobre el rendimiento de reacción.

Efecto del pH

Se hicieron series de ensayos a distintos pH y sin variar los demás pará-metros se evaluó el porcentaje de marcación.

Rendimiento % p H _{de marcación} 4.6 32 4.8 35 5.0 61 5.1 63 5.3 .64 5.5 62 5.8 48 6.2 37

Influencia del tiempo de reacción

Ajustando el pH entre 5.0 y 5.5 y dejando fijos los otros parámetros, se hicieron ensayos a diferentes tiempos de reacción.

Tiempo R % (minutos) de marcación 5 17 10 50 20 58 30 63 45 64 60 63 EFECTO DE MASA

Una variación en la masa no mostró influencia; la concentración utiliza­ da permite una adecuada actividad específica según lo requerido.

EFECTO DE LA TEMPERATURA

Se probó a 50° C y a 100 ° C, no mejorando el rendimiento radioquímico; por lo tanto, indicamos efectuar la marcación a temperatura ambiente.

EFECTO DE LA ILUMINACIÓN

Se hicieron intentos colocando una lámpara incandescente de 200 W pró­ xima al tubo de reacción e iluminación con luz ultravioleta. En ambos casos disminuyó el rendimiento de marcación.

MÉTODOS DE CONTROL

Se controló por cromatografía en papel, empleando las mezclas de sol­ ventes indicadas en la parte de purificación.

Por radiocromatografía se determinó la pureza del colorante, que resul­ tó en todos los casos superior al 99%.

ESTABILIDAD

Se tomaron muestras con diferentes actividades específicas (0.3 y 6 mCi/mg). De ambas muestras se guardaron alícuotas en la heladera y en estufe a 37° C. Las guardadas en estufa a 37 °C, liberaron algo más del 5% de ioduro libre a las 48 horas. Las conservadas en heladera, conte­ nían al cabo de 7 días, un porcentaje de radioiodo libre inferior al 5%, va­ lor éste aceptado por el Manual de Controles Radiofarmacéuticos (5).

GRÁFICO N> 1

BIBLIOGRAFÍA

1) T.G. BRIEN and V. KEAVENY. Int. J. of Appl. Rad. and Isotopes 19 (1968) 821, 822.

2) P. CZERNIAK and S. BORUCHOWSKI. J. Lab. Comp. 7 (1971) 541. 3) G.N.B. de SALAS y A.E.A. MITTA. Informe N9 ?57 CNEA (1973).

4) E. LEDERER y M. LEDERER "Cromatografía" Editorial El Ateneo 1960.