Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2014

EL COACTIVADOR DE CREB 3 (CRTC3) EN SANGRE:

NUEVO MARCADOR ASOCIADO CON OBESIDAD Y

ALTERACIONES METABOLICAS EN EDAD

PEDIATRICA.

Pilar Soriano Rodríguez, Anna Prats Puig, Carme Mora Maruny, Neus Bassa Camps, Paula Gassiot Cordomí, Dolors Ragolta Martí, Judit Bassols y Abel López Bermejo.

INTRODUCCIÓN

El CRTC3 es:



_{El coactivador del factor de transcripción CREB}

_más

abundante en adipocitos

INTRODUCCIÓN



_{Los ratones con silenciamiento del}

_gen

_CRTC3:



Son resistentes a la obesidad inducida por dieta hipercalórica.



Tienen mayor gasto energético



Protegidos contra la esteatosis hepática



_{Atenuación de la actividad de la vía de las catecolaminas. Resultado}

disminuir la lipólisis y la beta oxidación de ácidos grasos en el adipocito.

El gen de CRTC3 es un gen obesogénico

genotipo ahorrador

INTRODUCCIÓN

Hasta el momento no se ha demostrado la

presencia de la proteína CRTC3 en sangre ni su

utilidad como marcador de obesidad en

humanos.

OBJETIVOS

Nuestros objetivos fueron:

1)

Determinar si el CRTC3 es secretado por el tejido adiposo

2) Detectar y cuantificar la proteína en suero de niños

3) Estudiar su relación con variables metabólicas y de obesidad

DISEÑO Y POBLACIÓN



_{Identificación de CRTC3}



_{Estudio transversal}



_{Estudio longitudinal}

Estudio clínico observacional en la población pediátrica de l’Alt

Empordà y Girona.

IDENTIFICACIÓN DE CRTC3

12 Biopsias tejido

adiposo visceral y

subcutáneo

abdominal

12 Extracciones

de sangre venosa

CULTIVO TEJIDO ADIPOSO

1 ml DMEM

48h a 37ºC en 5% CO2

Tejido adiposo Medio de cultivo

Extracción de proteínas totales

Lactato deshidrogenasa  Viabilidad Concentración de CRTC3 fue ajustada por las proteínas totales

Lowry  Proteínas totales

Extracción de proteínas totales

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ELISA

INMUNOBLOT

IDENTIFICACIÓN DE CRTC3



115 niños caucásicos



_{57 niños y 58 niñas}



_10.0

±

0.1 años



_{6% pubertad}

ESTUDIO TRANSVERSAL

Examen clínico

Extracción de

sangre venosa

Ecografía de alta

resolución

3 años



_{211 niños caucásicos}

prepuberales sanos



_{102 niños y 109 niñas}



_7.0

±

0.1 años



_{19.4 sobrepeso y obesidad}

ESTUDIO LONGITUDINAL

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Resultados



_{Identificación de CRTC3}



_{Estudio transversal}



_{Estudio longitudinal}

IDENTIFICACIÓN: INMUNOBLOT

1)

Lisado de MCF-7

2) Lisado tejido adiposo visceral

3) Lisado tejido adiposo subcutáneo

4) Medio cultivo tejido adiposo visceral

5) Medio cultivo tejido adiposo subcutáneo

6) Suero

CRTC3

1 2 3 4 5 6 Anticuerpo policlonal

- 76 kDa

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IDENTIFICACIÓN: ELISA

Biopsia Medio de cultivo

CRTC3 tertiles (ng/mL) 0.090-0.200 0.201-0.316 0.317-1.037 P N 70 71 70 -- Niñas (%) 45.1 54.5 55.6 -- Edad (años) 6.7 (6.4;7.0) 6.8 (6.6;7.1) 7.1 (6.8;7.3) 0.163 Valor Z-IMC -0.19 (-0.39;0.01) 0.35(0.08;0.63) 0.23 (-0.02;0.49) 0.005 Perímetro abdominal (cm) 53.9 (52.3;55.5) 57.0 (55.0;58.9) 57.5 (55.5;59.5) 0.003 TAS (mmHg) 98 (97;101) 103 (101;106) 102 (100;104) 0.007 GIMC (cm) 0.039 (0.038;0.041) 0.039 (0.037;0.041) 0.041 (0.038;0.043) 0.311 HOMA-IR 0.53 (0.39;0.68) 0.71 (0.54;0.89) 0.63 (0.53;0.73) 0.332 Adiponectina APM (mg/L) 9.56 (8.56;10.55) 7.91 (7.00;8.81) 7.51 (6.55;8.47) 0.003 PCRus (mg/L) 1.53 (0.84;2.21) 1.90 (1.04;2.76) 1.36 (0.85;1.87) 0.444

Características antropométricas y metabólicas de los niños incluidos en el estudio divididos por tertiles de CRTC3 (n=211)

ESTUDIO TRANSVERSAL

Análisis de correlación de Pearson entre la concentración de CRTC3 y las variables antropométricas y metabólicas en relación al IMC.

Muestra total n= 211 Niños delgados (IMC Z score < 1; n= 167) Niños sobrepeso (IMC Z score ≥ 1; n= 44) r p r p r p Edad 0.088 0.228 0.149 0.056 0.123 0.445 IMC 0.179 0.010 0.148 0.055 0.431 0.007 Valor Z-IMC 0.166 0.017 -0.022 0.775 0.379 0.015 Masa grasa -0.063 0.369 0.008 0.920 0.124 0.445 Perímetro abdominal 0.207 0.003 0.197 0.010 0.479 0.002 TAS 0.164 0.018 0.184 0.017 -0.083 0.620 TAD 0.123 0.079 0.061 0.437 0.201 0.233 GIMC 0.074 0.396 0.150 0.054 0.410 0.012 HOMA-IR 0.770 0.275 0.128 0.106 0.114 0.480 Adiponectina APM -0.228 0.001 -0.143 0.067 -0.351 0.031 PCRus -0.015 0.833 0.030 0.708 0.373 0.025

ESTUDIO TRANSVERSAL

β p R2 Muestra total (n= 211)

Adiponectina de APM Niños sobrepeso y obesidad (n= 44)

Adiponectina de APM Valor Z-IMC -0.153 -0.340 0.394 0.029 0.024 0.012 0.024 0.235 Estudio multivariante. Regresión lineal múltiple

ESTUDIO TRANSVERSAL

Variable dependiente: CRTC3

Transversal Longitudinal n 211 115 Niñas (%) 51.7 50.2 Edad (años) 6.8 (6.7;7.0) 10.3 (10.3; 10.7) Valor Z IMC 0.13 (-0.01;0.28) 0.12 (-0.10;0.0.33) Perímetro Abdominal (cm) 56.1 (55.0;57.1) 69.9 (67.7;72.1) TAS (mmHg) 101 (100;103) 103 (101;105) GIMC (cm) 0.040 (0.039;0.041) 0.048 (0.044;0.050) HOMA-IR 0.62 (0.53;0.73) 0.94 (0.73;1.16) Adiponectina APM (mg/L) 8.33 (7.81;8.92) 15.39 (11.64;17.87) PCR us(mg/L) 1.60 (1.20;2.03) 1.56 (1.04;1.95)

Cambio en las variables

Antropométricas y metabólicas

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Estudio longitudinal

Se estudió el cambio del valor de Z-IMC y adiponectina de APM en los niños tras 3 años de seguimiento (n=115) respecto a los tertiles de la concentración basal de CRTC3.

Análisis ANOVA de un factor * p<0.01

* * Tertiles CRTC3 Basal Tertiles CRTC3 Basal Ca mbi o va lor z -IMC Ca mbi o a di po n ecti n a APM (mg/ L)

Estudio longitudinal

Regresión lineal múltiple del cambio del valor Z-IMC y la adiponectina de APM como variable dependiente en el estudio longitudinal (n=115)

β p R2

Cambio valor Z-IMC

Valor Z-IMC basal Pubertad Años seguimiento CRTC3 basal -0.205 0.134 0.023 0.327 0.035 0.162 0.807 0.001 0.114

Cambio adiponectina de APM

Adipo APM basal Pubertad Años seguimiento CRTC3 basal Sexo (niñas) 0.133 0.095 0.053 -0.271 0.122 0.205 0.368 0.629 0.014 0.269 0.101



_{En niños prepuberales, el CRTC3 es detectable en suero, en}

parte, por la secreción por el tejido adiposo.



Mayores concentraciones de CRTC3 se asocian con un perfil

metabólico desfavorable.

Conclusiones:



_{Mayores concentraciones de CRTC3 predicen más ganancia}

de peso y menor incremento de adiponectina de APM en el

seguimiento de estos pacientes.

Nuestros resultados sugieren que el CRTC3 detectado en

suero es una nueva adipocina asociada a la obesidad infantil.

SIK2 ATP AMPc Catecolaminas Receptor β-adrenérgico Adenil Ciclasa

CRTC3

Mecanismo regulador de la vía de las catecolaminas

Feedback negativo de CRTC3

GRACIAS

POR SU

ATENCIÓN

Los autores estamos agradecidos a

las familias y los colaboradores que

participaron en el estudio

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