UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUDOR FACULTAD DE ODONTOLOGÍA CARRERA DE ODONTOLOGÍA

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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUDOR FACULTAD DE ODONTOLOGÍA

CARRERA DE ODONTOLOGÍA

“DETERMINACION IN VITRO DEL EFECTO INHIBITORIO DEL ALOE VERA (L.) BURM.F. AL 100% Y LA CLORHEXIDINA AL 0,12% SOBRE

LA PORPHYROMONA GINGIVALIS DERIVADA DEL ATCC 33277”

Proyecto de investigación presentado como requisito previo a la obtención del título de Odontóloga

Autor: Suárez Cerón Jhoselin Andrea Tutora: Dra. Marina Antonia Dona Vidale

Quito, junio 2017

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DERECHOS DE AUTOR

Yo, JHOSELIN ANDREA SUÁREZ CERÓN, con C.I. 1002532784, en calidad de autora de la tesis realizada sobre: “DETERMINACIÓN IN VITRO DEL EFECTO INHIBITORIO DEL ALOE VERA (L.) BURM.F. AL 100% Y LA CLORHEXIDINA AL 0,12% SOBRE LA PORPHYROMONA GINGIVALIS DERIVADA DEL ATCC 33277.

Por la presente autorizo a la UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR, a hacer uso de todos los contenidos que me pertenecen o de parte de los que contiene esta obra, con fines estrictamente académicos o de investigación.

Los derechos que como autora me corresponden, con excepción de la presente autorización, seguirán vigentes a mi favor, de conformidad a lo establecido en los artículos 5, 6, 8, 19 y demás pertinentes a la Ley de Propiedad Intelectual y su Reglamento.

También, autorizo a la Universidad Central del Ecuador a realizar la digitalización y publicación de este trabajo de investigación en el repositorio virtual, de conformidad a lo dispuesto en el Art. 144 de la Ley Orgánica de Educación Superior.

--- Jhoselin Andrea Suárez Cerón

C.I. 1002532784

[email protected]

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APROBACIÓN DEL TUTOR/A DEL TRABAJO DE TITULACIÓN

Yo, Marina Antonia Dona Vidale, en mi calidad de tutora del trabajo de titulación, modalidad Proyecto de investigación elaborado por JHOSELIN ANDREA SUÁREZ CERÓN; cuyo título es: “DETERMINACIÓN IN VITRO DEL EFECTO INHIBITORIO DEL ALOE VERA (L.) BURM.F. AL 100% Y LA CLORHEXIDINA AL 0,12% SOBRE LA PORPHYROMONA GINGIVALIS DERIVADA DEL ATCC 33277”, PREVIO A LA OBTENCIÓN DEL GRADO DE ODONTÓLOGA considero que el mismo reúne los requisitos y méritos necesarios en el campo metodológico y epidemiológico para ser sometido a la evaluación por parte del tribunal examinador que se designe, por lo que APRUEBO, a fin de que el trabajo sea habilitado para continuar con el proceso de titulación determinado por la Universidad Central del Ecuador.

En la ciudad de Quito a los 30 días del mes de junio del 2017.

--- Dra. Marina Antonia Dona Vidale DOCENTE-TUTORA

C.I. 1708884422

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APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL

El Tribunal constituido por: Dr. Marco Medina, Dr. José Cerda

Luego de receptar la presentación oral del trabajo de titulación previo a la obtención del título de Odontóloga presentado por la señorita JHOSELIN ANDREA SUÁREZ CERÓN

Con el título:

“DETERMINACIÓN IN VITRO DEL EFECTO INHIBITORIO DEL Aloe vera (L.) BURM.F. AL 100% Y LA CLORHEXIDINA AL 0,12% SOBRE LA Porphyromona gingivalis DERIVADA DEL ATCC 33277”.

Emite el siguiente veredicto:

Fecha: 30 de junio del 2017 Para constancia de lo actuado firman:

Nombre Apellido Calificación Firma

Presidente: Dr. Marco Medina ……… ………

Vocal 1: Dr. José Cerda ……… ………

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DEDICATORIA

A los seres que me dieron la vida y guían mi camino mis Padres Crnl.

(S.P) Germán A. Suárez C. y Dra.

Q.F. Inés del Rocío Cerón I. y a mi hermana Jenniffer C. Suárez C. que siempre estuvo a mi lado en todo este camino.

Jhoselin A. Suárez C.

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AGRADECIMIENTO

Por mi formación religiosa católica, deseo iniciar agradeciendo a mi Señor de la Justicia y a la Virgencita de Guadalupe que con su protección siempre estuvieron guiando desde el cielo todos mis pasos desde el inicio de mi educación.

Agradezco a mis Padres Germán y Rocío que me dieron la vida, me apoyaron en todo este trayecto de mi vida, nunca me dejaron decaer en los momentos difíciles y me motivaron para vencer todos los obstáculos que se presentaron.

Agradezco con todo mi corazón, a mi Hermana Jenniffer por ser mi fortaleza, siempre me escuchó, derramó lágrimas junto a mí y no me dejó darme por vencida, una amiga incondicional, departimos momentos felices y tristes, pero siempre salimos adelante.

No puedo olvidarme de mis Abuelitos (Carmelita, Inesita, Arturito y Juanito) que a pesar de que los tres últimos años ya no están conmigo, desde el cielo me envían sus bendiciones.

Agradezco a mis tíos, en especial a mi tío Alonzo, y primos que siempre estuvieron presentes con una llamada, un mensaje e incluso confiaron en estas manos y en mi conocimiento para que atendiera su salud bucal.

A mi tutora y profesora Dra. Marina Dona que me impartió y brindó sus conocimientos apoyándome para el desarrollo de mi investigación en forma incondicional.

A la MSc. Alma Koch, MSc. Jesica Maisincho y Ing. Patricia Gutiérrez quienes me abrieron las puertas, me brindaron su amistad, sus conocimientos, su experiencia y facilitaron todos los elementos necesarios para realizar la investigación y siempre estuvieron pendientes.

Jhoselin A. Suárez C.

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ÍNDICE DE CONTENIDO

AUTORIZACIÓN DE LA AUTORÍA INTELECTUAL¡Error! Marcador no definido.

INFORME DE APROBACIÓN DEL TUTOR .... ¡Error! Marcador no definido.

APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL ... iv

DEDICATORIA ... v

AGRADECIMIENTO ... vi

ÍNDICE DE TABLAS ... x

ÍNDICE DE GRÁFICAS ... xi

ÍNDICE DE FIGURAS ... xii

ÍNDICE DE ANEXOS ... xiv

RESUMEN ... xv

SUMMARY ... xv

INTRODUCCIÓN ... 15

CAPÍTULO I ... 16

1. EL PROBLEMA ... 16

1.1. Planteamiento del problema... 16

1.2. Objetivos ... 17

1.2.1. Objetivo general ... 17

1.2.2. Objetivos específicos ... 17

1.3. Justificación ... 18

1.4. Hipótesis ... 19

1.4.1. Hipótesis de Investigación ... 19

1.4.2. Hipótesis Nula ... 19

CAPÍTULO II ... 20

2. MARCO TEÓRICO ... 20

2.1. ENFERMEDAD PERIODONTAL ... 20

2.1.1. Periodontitis ... 21

2.1.1.1. Periodontitis Crónica ... 22

2.1.1.1.1. Características Generales ... 23

2.1.1.1.2. Características Clínicas ... 23

2.2. BIOFILM ... 24

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2.2.1. Fases o Estadios del Biofilm ... 25

2.2.2. Complejo Microbiano de Socransky... 26

2.2.3. Genero Porphyromona ... 27

2.2.3.1. Porphyromona Gingivalis ... 28

2.2.3.1.1. Morfología y Estructura ... 28

2.2.3.1.2. Factores de Virulencia ... 29

2.3. FITODONTOLOGÍA ... 30

2.4. ALOE VERA ... 30

2.4.1. Descripción Taxonómica y Botánica ... 30

2.4.2. Estructura y Composición ... 31

2.4.3. Usos Medicinales ... 31

2.5. CLORHEXIDINA ... 34

2.5.1. Mecanismo de acción... 35

2.5.2. Usos ... 35

2.5.3. Sustantividad ... 36

2.5.4. Efectos Adversos ... 37

CAPÍTULO III ... 38

3. METODOLOGÍA ... 38

3.1. Tipo de Diseño de la Investigación ... 38

3.2. Población y muestra de estudio ... 38

3.2.1. Tipo de muestreo ... 38

3.2.2. Unidad de muestra ... 39

3.3. Criterios de inclusión y exclusión ... 39

3.3.1. Criterios de inclusión ... 39

3.3.2. Criterios de exclusión ... 39

3.4. Operacionalización de variables ... 40

3.5. Materiales y métodos ... 41

3.5.1. Materiales para realizar el cultivo ... 41

3.5.2. Materiales para determinar el efecto antimicrobiano ... 41

3.5.3. Materiales para recolección de datos ... 42

3.6. Procedimientos y técnicas ... 42

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3.6.1. Activación de la cepa de Porphyromona gingivalis ATCC 33277

………..42

3.6.2. Determinación del efecto inhibitorio ... 46

CAPÍTULO IV ... 52

4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN ... 52

4.1. Resultados ... 52

4.2. Discusión ... 60

CAPÍTULO V ... 62

5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ... 62

5.1. Conclusiones ... 62

5.2. Recomendaciones ... 63

BIBLIOGRAFÍA ... 64

ANEXOS ... 68

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x

LISTA DE TABLAS

Tabla 1: Cuadro de Operacionalización de variables ... 40 Tabla 2: Tabla de advertencias ... 52 Tabla 3: Prueba de normalidad ... 53 Tabla 4: Resultados de la medición de los halos de inhibición sobre la cepa Porphyromona gingivalis, después de 48 hora de aplicación de cada tratamiento 54 Tabla 5: Comparaciones por parejas de sustancias a las 48 horas ... 56 Tabla 6: Resultados de la medición de los halos de inhibición sobre la cepa Porphyromona gingivalis, después de 72 hora de aplicación de cada tratamiento 57 Tabla 7: Comparaciones por parejas de sustancias a las 72 horas ... 59

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LISTA DE GRÁFICOS

Gráfico 1: Medias de los halos de inhibición de cada tratamiento a las 48 horas.. 54 Gráfico 2: Prueba de Kruskal-Wallis para muestras independientes ... 55 Gráfico 3: Comparaciones por parejas de sustancias a las 48 Horas ... 56 Gráfico 4: Medias de los halos de inhibición de cada tratamiento a las 72 horas.. 57 Gráfico 5: Prueba de Kruskal-Wallis para muestras independientes ... 58 Gráfico 6: Comparaciones por parejas de sustancias a las 72 Horas ... 59

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LISTA DE FIGURAS

Fig. 1: Periodontitis ... 21

Fig. 2: Periodontitis crónica ... 22

Fig. 3: Biofilm o placa bacteriana ... 24

Fig. 4: Primer estadio o fase I (A. Superficie del diente limpia; B. Formación de la biopelícula; C. Diente cubierto por biopelícula.) ... 26

Fig. 5: Segundo estadio o fase II (Adhesión bacteriana: A. cocos; B. bacilos y cocos) ... 26

Fig. 6: Tercer estadio o fase III (multiplicación bacteriana) ... 26

Fig. 7: Cuarto estadio o fase IV (A. agregación bacteriana; B. maduración del biofilm) ... 26

Fig. 8: Complejo microbiano de Socransky ... 27

Fig. 9: Porphyromona gingivalis ... 28

Fig. 10: Planta de Aloe vera ... 30

Fig. 11: a) clorhexidina al 2% b) clorhexidina al 0,12% ... 34

Fig. 12: Autoclavado del material ... 42

Fig. 13: Materiales autoclavados... 43

Fig. 14: Tubos de ensayo con caldo de nutrientes ... 43

Fig. 15: Cepa de Porphyromona gingivalis derivada del ATCC 33277. ... 44

Fig. 16: Activación de Porphyromona gingivalis por técnica de contacto. ... 44

Fig. 17: Etiquetado ... 45

Fig. 18: Cámara anaerobia ... 45

Fig. 19: Incubadora a 37° ... 46

Fig. 20: Siembra en agar sangre. ... 46

Fig. 21: Obtención de extracto de Aloe vera... 47

Fig. 22: Colocación de los tratamientos en los vasos de precipitación ... 47

Fig. 23: Cultivo de Porphyromona gingivalis (15 días). ... 48

Fig. 24: Etiquetado. ... 48

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xiii

Fig. 25: Sembrado de Porphyromona gingivalis. ... 49

Fig. 26: Colocación de discos de filtro con tratamientos. ... 49

Fig. 27: Cajas Petri con Porphyromona gingivalis... 50

Fig. 28: Medición del halo de inhibición a las 48 horas. ... 50

Fig. 29: a) Clorhexidina b) Suero fisiológico c) Aloe vera a las 48 horas de incubación. ... 50

Fig. 30: Medición del halo de inhibición a las 72 horas de incubación. ... 51

Fig. 31: a) Clorhexidina b) Suero fisiológico c) Aloe vera a las 72 horas de incubación. ... 51

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xiv

LISTA DE ANEXOS

Anexo 1: Certificado de traducción ... 68

Anexo 2: Solicitud al Director del Departamento de Ciencias de la Vida y la Agricultura de la Universidad de las Fuerzas Armadas ... 69

Anexo 3: Permiso de ingreso al Laboratorio de Microbiología de la Carrera de Ingeniería en Biotecnología de la Universidad de las Fuerzas Armadas ... 70

Anexo 4: Certificado de elaboración de la Clorhexidina al 0,12% ... 71

Anexo 5: Certificado de Autenticidad de la cepa Porphyromona gingivalis derivada del ATCC 33277 ... 72

Anexo 6: Ficha para lectura de los halos de inhibición ... 73

Anexo 7: Desechos de la muestra ... 74

Anexo 8: Certificado del Estadístico... 89

Anexo 9: Certificado de realización de las pruebas microbiológicas ... 90

Anexo 10: Certificado de Esterilización ... 91

Anexo 11: Certificado de Aprobación del SEISH-UCE ... 92

Anexo 12: Análisis URKUND ... 93

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TEMA: “Determinación in vitro del efecto inhibitorio del aloe vera (l.) Burm.f. al 100% y la clorhexidina al 0,12% sobre la porphyromona gingivalis derivada del atcc 33277”

Autor: Jhoselin Andrea Suárez Cerón Tutora: Marina Antonia Dona Vidale

RESUMEN

Bacteria en forma de cocobacilo o bacilo, Gram negativa denominada Porphyromona gingivalis, que en conjunto con otras bacterias son causantes de la enfermedad periodontal. Buscar alternativas de origen natural para contrarrestar el efecto dañino que produce, con buenos resultados, además que no presente efectos secundarios y se encuentre al alcance del ser humano lleva a realizar este estudio in vitro, de tipo experimental, para determinar el efecto inhibitorio del Aloe vera (L.) Burm.f. al 100% y la clorhexidina al 0,12% como control positivo sobre la Porphyromona gingivalis. Se empleó la prueba de sensibilidad antibacteriana (antibiograma) con el fin de determinar el efecto inhibitorio del Aloe vera (L.) Burm.f. al 100%, la clorhexidina al 0,12% como control positivo y suero fisiológico como control negativo, con quince repeticiones de cada uno de los tratamientos. Los resultados obtenidos indicaron que la cepa de Porphyromona gingivalis ATCC 33277 es sensible a Aloe vera (L.) Burm.f.

al 100% y a la clorhexidina al 0,12% y resistente al suero fisiológico. Se concluye que el Aloe vera (L.) Burm.f. posee efecto inhibitorio sobre la Porphyromona gingivalis.

PALABRAS CLAVES: DETERMINACIÓN IN VITRO, EFECTO INHIBITORIO, BACTERIA PATÓGENA ORAL, ANTIBIOGRAMA.

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TITLE: Determination in vitro of the inhibitory effect of aloe vera (l.) Burm f. To 100% and chlorhexidine to 0,12% on porphyromona gingivalis strain atcc 33277

Author: Jhoselin Andrea Suárez Cerón Tutora: Marina Antonia Dona Vidale

SUMMARY

Coccobacillus or bacillus, Gram-negative anaerobes called Porphyromona gingivalis produce periodontal disease with other associated bacteria. Alternatives of natural origin for counteract the pathogen effect with good results, no secondary effects and easy to find have lead to this in vitro experimental research in order to determine the inhibitory effect of Aloe vera (L.) Burm. f. to 100% and chlorhexidine to 0,12% as positive control over Porphyromona gingivalis. It was applied susceptibility bacterial testing technique (antibiotic discs sensitivity) to determine the inhibitory effect of Aloe vera (L.) Burm. f. 100%, chlorhexidine 0,12% as positive control and saline solution as negative control. Fifteen repetitions were made for each treatment. The results obtained in this study show that Porphyromona gingivalis strain ATCC 33277 is sensitive to Aloe vera (L.) Burm.

f. to 100% and to the chlorhexidine to 0,12% and is resistant to saline solution. This study leads us to conclude that Aloe vera (L.) Burm. f. has an inhibitory effect on Porphyromona gingivalis.

KEYWORDS: IN VITRO DETERMINATION, INHIBITORY EFFECT, ORAL BACTERIA PATHOGEN, ANTIBIOGRAM.

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15 INTRODUCCIÓN

Desde mucho tiempo atrás, el ser humano ha utilizado las propiedades curativas de una diversidad de plantas que se encuentran al alcance de sus manos, logrando extraer sus componentes orgánicos, para sanar una serie de enfermedades causadas por gran cantidad de microorganismos existentes en el ambiente en que vivimos¹.

De la gran variedad de plantas que existen en nuestro medio, Aloe vera ha sido utilizado como remedio eficaz para curar o retrasar el progreso de algunas enfermedades existentes en la medicina moderna tales como el cáncer y el sida¹.

Con el paso de los años el Aloe vera se ha ido introduciendo en varios campos como la medicina, la cosmetología y el comercio, también utilizándola en la decoración, además para quemaduras, incluso como planta que emite buena energía¹.

De esta manera, al ser el Aloe vera una planta que posee beneficios en la medicina, en este caso con acción antibacterial⁹, se pretende averiguar si causa efecto inhibitorio sobre la Porphyromona gingivalis, cocobacilo gramnegativo que acompañado por otro conjunto de bacterias presentes en la placa bacteriana de la cavidad bucal², constituyen el factor etiológico de las enfermedades periodontales³. Porphyromona gingivalis se encuentran en un biofilm o biopelícula que se fija al diente y a los tejidos blandos, estructura conformada por varias bacterias y rodeada por una matriz o glicocálix compuesto por polisacáridos extracelulares³. La Porphyromona gingivalis en asociación con otras bacterias causa gran destrucción de tejidos periodontales o periodontitis. La bacteria se encuentra en la microbiota subgingival y produce degradación del colágeno².

Para las enfermedades periodontales se está usando la clorhexidina como una sustancia local ya que se adhiere sobre las superficies dentarias y produce la inhibición de bacterias que ocasionan las enfermedades periodontales, pero al ser un producto químico sintético, causa diversos efectos secundarios como la pigmentación de las piezas dentales¹⁹. Por esta razón, se pretende realizar la investigación para comprobar si el Aloe vera posee efecto inhibitorio sobre la Porphyromona gingivalis, para utilizarla como alternativa ya que no presenta reacciones adversas, además es de origen natural y de fácil acceso para el ser humano¹.

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16 CAPÍTULO I 1. EL PROBLEMA

1.1. Planteamiento del problema

En la actualidad, la población al encontrarse con múltiples actividades se ha ido descuidando de su salud, en especial de la salud bucal, por lo cual ya no tenemos tiempo para realizar una correcta higiene oral causando la proliferación de varias bacterias dañinas, entre ellas la Porphyromona gingivalis, que causa enfermedades periodontales, tal como la periodontitis.

El presente estudio tiene por objetivo comparar el efecto inhibitorio que produce el Aloe vera y la clorhexidina como control positivo sobre la Porphyromona gingivalis con el fin de identificar una alternativa de origen natural, sin efectos secundarios, al alcance del paciente y eficaz para inhibir el crecimiento de Porphyromona gingivalis.

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17 1.2.Objetivos

1.2.1. Objetivo general

Evaluar el efecto inhibitorio del Aloe vera (L.) Burm.f. al 100% sobre la Clorhexidina al 0,12% sobre la Porphyromona gingivalis.

1.2.2. Objetivos específicos

i. Describir el halo de inhibición del Aloe vera (L.) Burm.f. al 100%

sobre la Porphyromona gingivalis a las 48 horas.

ii. Analizar el halo de inhibición del Aloe vera (L.) Burm.f. al 100%

sobre la Porphyromona gingivalis a las 72 horas.

iii. Comparar el efecto inhibitorio del Aloe vera (L.) Burm.f. y la clorhexidina al 0.12% sobre la Porphyromona gingivalis.

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18 1.3. Justificación

Actualmente se aplica una serie de medicamentos o fármacos de síntesis química que tienen efectos secundarios en el ser humano; por ejemplo, la clorhexidina es una sustancia que produce pigmentación de las piezas dentales y afecciones en el sentido del gusto, entre otras. Se hace necesario buscar otras opciones, por lo que se puede acudir a la medicina de origen natural y de fácil acceso que actúa en forma eficiente para contrarrestar una de las enfermedades periodontales causada por la Porphyromona gingivalis en conjunto con una diversidad de otras bacterias.

El Aloe vera al ser un producto de origen natural el cual no presenta ningún tipo de contraindicaciones y efectos secundarios, constituye una alternativa de fácil acceso.

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19 1.4. Hipótesis

1.4.1. Hipótesis de Investigación

a. H1: El Aloe vera (L.) Burm.f. al 100% tiene efecto inhibitorio sobre la Porphyromona gingivalis en 48 horas de exposición.

b. H2: El Aloe vera (L.) Burm.f. al 100% tiene efecto inhibitorio sobre la Porphyromona gingivalis en 72 horas de exposición.

c. H3: El Aloe vera (L.) Burm.f. al 100% y la clorhexidina al 0,12% tienen diferencias en el efecto inhibitorio que producen sobre la Porphyromona gingivalis.

1.4.2. Hipótesis Nula

a. H1: El Aloe vera (L.) Burm.f. al 100% no tiene efecto inhibitorio sobre la Porphyromona gingivalis en 48 horas de exposición.

b. H2: El Aloe vera (L.) Burm.f. al 100% no tiene efecto inhibitorio sobre la Porphyromona gingivalis en 72 horas de exposición.

c. H3: El Aloe vera (L.) Burm.f. al 100% y la clorhexidina al 0,12% no tienen diferencias en el efecto inhibitorio que produce sobre la Porphyromona gingivalis.

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20 CAPÍTULO II 2. MARCO TEÓRICO

2.1.ENFERMEDAD PERIODONTAL

Es una infección crónica³, lesiones inflamatorias de las encías que con su progresión pueden llevar a la destrucción ósea y su posterior perdida de estructuras dentarias²².

Las enfermedades periodontales están causadas por gran cantidad de microorganismos³⁹ ente ellos la Porphyromona gingivalis es una bacteria precursora de la enfermedad periodontal principalmente de la periodontitis crónica³.

Las enfermedades periodontales se clasifican en:

a. Enfermedades gingivales^24,36.

o Enfermedades gingivales provocadas por biofilm². o Enfermedades gingivales no inducidas por biofilm². b. Periodontitis crónica^24,36.

o Localizada².

 Leve².

 Moderada².

 Severa². o Generalizada².

 Leve².

 Moderada².

 Severa². c. Periodontitis agresiva ^24,36.

o Localizada².

 Leve².

 Moderada².

 Severa². o Generalizada².

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21

 Leve².

 Moderada².

 Severa².

d. Periodontitis como manifestación de enfermedades sistémicas^24,36. o Asociada con desórdenes genéticos².

o Asociada con enfermedades hematológicas². o Asociada a enfermedades no especificas². e. Enfermedades periodontales necrosantes^24,36.

o Gingivitis ulceronecrotizante². o Periodontitis ulceronecrotizante². f. Abscesos del periodonto^24,36.

o Absceso coronal². o Absceso gingival². o Absceso periodontal².

g. Periodontitis asociada con lesiones endodónticas^24,36. h. Deformidades y anomalías del desarrollo o adquiridas^24,36.

o Trauma oclusal².

o Elementos afines al diente predisponente a gingivitis o periodontitis relacionada al biofilm².

o Condiciones y deformaciones mucogingivales alrededor del diente².

2.1.1. Periodontitis

Fig. 1: Periodontitis

Fuente: (Sociedad Española de Periodoncia y Osteointegración, 2009)³

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22

Enfermedad inflamatoria de principio infeccioso el cual produce lesiones en los tejidos de sostén del diente, la misma que al no ser controlada a tiempo, puede causar pérdida de las estructuras dentarias³. (Fig.1)

2.1.1.1. Periodontitis Crónica

Fig. 2: Periodontitis crónica Fuente: (Negroni, 2009)²

Es la pérdida de las estructuras de soporte de tejido conectivo. Ocurre la pérdida de hueso alveolar y de uniones del ligamento periodontal al cemento, además ocasiona la migración del epitelio de unión hacia apical produciendo, a su vez, la formación de bolsas en torno a la estructura dentaria²³. (Fig. 2)

La periodontitis crónica se inicia como gingivitis inducida por biofilm o placa bacteriana y es una lesión irreversible^{23, 39}.

El agente etiológico primario de la periodontitis crónica es el biofilm y puede ser agravada por factores locales como restauraciones con insuficiente pulido o desbordantes, trauma oclusal, apiñamiento dentario, prótesis sobrecontorneadas.

También pueden intervenir otros factores de riesgos sistémicos como el estrés, osteoporosis, diabetes e incluso por el consumo de medicamentos y tabaco³.

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2.1.1.1.1. Características Generales

a) El principal factor etiológico es la formación de biofilm o biopelícula en donde encontramos una gran variedad de bacterias entre ellas la Porphyromona gingivalis^3,23.

b) Se puede presentar en adultos con mayor incidencia²³.

c) La enfermedad puede agravarse por varios factores locales como el hábito de fumar, el estrés y factores sistémicos que son considerados factores de riesgo²³.

d) También es un predisponente la cantidad de bacterias que forman parte de la biopelícula subgingival la cual puede variar de persona a persona²³. e) Puede haber la presencia de cálculos subgingivales²³.

f) Se presentan dos tipos de periodontitis crónica: localizada que afecta a menos del 30% del sitio, y generalizada la cual afecta a más del 30%²³. g) También se puede clasificar la periodontitis crónica de acuerdo al grado

de pérdida de inserción: leve (1 a 2 mm), moderada (3 a 4 mm) y avanzada (mayor o igual a 5 mm)²³.

2.1.1.1.2. Características Clínicas

La periodontitis crónica presenta características tales como:

a) Cambios del color, textura y del volumen de la encía marginal^3,24.

b) Puede existir sangrado el momento que se realiza el sondeo en la región de la bolsa gingival e incluso durante el cepillado^3,24.

c) Se produce la formación de bolsas periodontales^3,24. d) Pérdida del nivel de inserción^3,24.

e) Contracción del margen gingival^3,24. f) Se va perdiendo el hueso alveolar^3,24.

g) Puede existir o no visualización de la furcación radicular. Según Hamp y cols en 1975 se clasifican en: grado I (perdida horizontal del soporte periodontal no excede de 1/3 de ancho del diente), grado II (compromiso del soporte periodontal que excede 1/3 del ancho del diente), grado III (destrucción completa del soporte periodontal)²⁴; Según Ramfjord y Asch

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24

en 1979 se clasifica en: grado I (ligera pérdida ósea), grado II (parcial destrucción ósea) y grado III (completa destrucción ósea)²².

h) Se puede presentar movilidad de las estructuras dentarias. Se tienen tres grados: grado 1 (movilidad en sentido vestibulolingual no mayor a 1 mm), grado 2 (movilidad en sentido vestibulolingual entre 1 y 2 mm) y grado 3 (movilidad en sentido vestibulolingual que sobrepasa los 2 mm y el diente se puede introducir en el alveolo)^3,24.

i) Desplazamiento y pérdida de las estructuras dentarias^{3, 24}.

2.2.BIOFILM

Bacterias se adheridas a una superficie rígida y crean una película adherida conocida como placa dental o biofilm, este es causante principalmente de las enfermedades periodontales y las caries dentales³ (Fig.3).

Microorganismos adheridos a una superficie y recubierta por matriz extracelular³⁷.

La Porphyromona gingivalis es una de las colonizadores secundarios la cual puede encontrase en las etapas iniciales de la acumulación del biofilm³⁹.

Fig. 3: Biofilm o placa bacteriana

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Según varios autores definieron a la placa bacteriana o biofilm como:

 En 1683 Anthony van Leeuwenhoek indico que la placa bacteriana está compuesta por depósitos blandos de restos alimenticios y microorganismos³.

 En 1898 Black menciono que la placa bacteriana son placas gelatinosas blandas³.

 En 1965 Egelberg y cols. presenciaron formación de estadios de la placa bacteriana³.

 1970 en el congreso de Edimburgo se dio como definición que la placa bacteriana se constituía por polisacáridos extracelulares y microorganismos y este se encontraba cubierto por células epiteliales, leucocitos y restos de comida³.

 En los 90 gracias al microscopio laser definen a la placa bacteriana como biofilm el cual esta constituidos por una colectividad

bacteriana sumergida en líquido llamada matriz extracelular³.

2.2.1. Fases o Estadios del Biofilm

El biofilm o placa bacteriana consta de cuatro fases o estadios los cuales se define como:

 Fase I o primer estadio: Formación de la biopelícula (compuesta por anticuerpos y glicoproteínas) sobre la superficie dentaria, favorece a la posterior adhesión de bacterias³. (Fig. 4)

 Fase II o segundo estadio: Se produce adhesión bacteriana en la biopelícula especialmente cocos gram positivos, anaerobios

facultativos, bacilos gram positivos que irán aumentando en cantidad formando una estructura de mazorca de maíz³. (Fig. 5)

 Fase III o tercer estadio: Existe multiplicación bacteriana principalmente de filamentosas gram positivas³. (Fig.6)

 Fase IV o cuarto estadio: Se provoca coagregación bacteriana, hay adhesión de bacterias gram negativas³. (Fig. 7)

(28)

26

Fig. 4: Primer estadio o fase I (A. Superficie del diente limpia; B. Formación de la biopelícula; C. Diente cubierto por biopelícula.)

Fig. 5: Segundo estadio o fase II (Adhesión bacteriana: A. cocos; B. bacilos y cocos) Fuente: (Sociedad Española de Periodoncia y Osteointegración, 2009)³

Fig. 6: Tercer estadio o fase III (multiplicación bacteriana)

Fig. 7: Cuarto estadio o fase IV (A. agregación bacteriana; B. maduración del biofilm) Fuente: (Sociedad Española de Periodoncia y Osteointegración, 2009)³

2.2.2. Complejo Microbiano de Socransky

Socransky y cols. en 1998 describierón la presencia de cinco complejos (rojo, naranja, púrpura, amarillo y verde), los cuales se encontraban estrechamente relacionados entre sí, donde el complejo rojo y naranja se encontraban agrupados significativamente y los complejos amarillo, verde y púrpura asociados entre ellos²(Fig. 8).

(29)

27

El complejo púrpura y amarrillo se encargan de la colonización inicial acompañados por especies de Actinomyces y la posterior colonización de los complejos verde y naranja estos son los complejos de colonización temprana. El complejo de colonización tardía es el complejo rojo².

Los complejos predominantes en las enfermedades periodontales son el complejo rojo y naranja².

Fig. 8: Complejo microbiano de Socransky

Fuente: (Negroni, 2009)²

2.2.3. Genero Porphyromona

Son anaerobios, cocobacilos o bacilos Gram negativos, no esporulados y no móviles. Se desarrollan en agar sangre, mostrando colonias pequeñas brillantes, circulares y lisas, con pigmento negro o marrón oscuro¹⁹.

Este género contiene a varias especies:

 Porphyromona gingivalis¹⁹. (Fig. 9)

 Porphyromona asaccharolytica¹⁹.

 Porphyromona endodontalis¹⁹.

 Porphyromona salivosa (presente en gatos)¹⁹.

(30)

28 2.2.3.1. Porphyromona Gingivalis

Fig. 9: Porphyromona gingivalis Fuente: Investigación – J. Suárez, 2017.

Es una especie que se encuentra principalmente en el surco gingival, cuando no se presenta una correcta salud periodontal, en ocasiones se encuentra en la legua, amígdalas y raras veces en la saliva. Esta bacteria se puede asociar con varias enfermedades como la gingivitis, infecciones endodónticas, abscesos periapicales y periodontales, pero principalmente se asocia a la destrucción y progresión de la periodontitis¹⁹.

Se encuentra principalmente en el biofilm subgingival y se relaciona con patologías periodontales, principalmente con la periodontitis crónica²⁰.

2.2.3.1.1. Morfología y Estructura

Ramos y cols.^20(p34) menciona “Porphyromona gingivalis es un bacilo corto o cocobacilo, que mide de 0.5 a 0.8 um * 1 – 3.5 um, es anaerobio estricto, Gram negativo.” En la membrana externa se encuentran endotoxinas. Posee cápsula y no es esporulado, no presenta flagelos, contienen gran cantidad de fimbrias y vesículas en cuyo interior presenta enzimas que son las causantes de la virulencia de la bacteria, estas enzimas, además, son capaces de relegar a agregados proteicos^20,38.

(31)

29

Al ser un bacilo Gram negativo, anaerobio obligado y asacarolítico, es el principal causante de la periodontitis, además es el agente de la enfermedad cardíaca arterioesclerótica, así como de la neumonía por aspiración. La Porphyromona gingivalis presenta varios factores de virulencia como proteasas de cisteína, hemaglutininas, lipopolisacáridos y fimbrias²¹.

La Porphyromona gingivalis posee capacidad de adherirse a varios tejidos y células, además presenta la habilidad de multiplicarse e invadir varios tejidos. Las fimbrias facilitan su adhesión y coagregación².

2.2.3.1.2. Factores de Virulencia

Posee una cápsula de polisacáridos, que produce evasión en el sistema inmunológico evitando la fagocitosis, opsonización y accionar del complemento²⁰.

En la membrana externa se encuentra la endotoxina, formada por lípidos, la cual a su vez es causante de la interrupción de la homeostasis inmunológica del huésped, además ocasiona inflamación gingival que se relaciona con la destrucción del tejido conectivo y la reabsorción ósea del hueso alveolar. Se produce aceleración de los osteoclastos y liberación de las prostaglandinas²⁰.

Por otro lado, en la membrana externa también se encuentran vesículas o sacos cerrados que contienen en su interior enzimas tales como: fosfolipasa C, proteasas, fosfatasa alcalina, hemolisinas, lipopolisacáridos, causantes de daño en las células periodontales y en los neutrófilos²⁰.

Las hemaglutininas son proteínas que causan la colonización por medio de la agregación de bacterias a los receptores oligopolisacáridos de las células y tiene la capacidad de aglutinar hematíes²⁰.

P. gingivalis posee fimbrias capaces de unirse a los diferentes sustratos, moléculas y a las células tales como las células epiteliales, fibrinógeno, fibronectina y lactoferrina; presenta también propiedades quimiotácticas y de estímulo de citoquinas en el proceso de adhesión a los diferentes tejidos del hospedador²⁰.

(32)

30

Las proteínasas cisteinproteasas facilitan nutrientes que permiten el crecimiento de la bacteria y producen degradación del colágeno²⁰.

La proteinasa degenera el colágeno tipo I y IV, que forman gran parte del tejido conectivo y proteínas de la matriz intracelular²⁰.

Gingipainas son uno de los genes que favorecen a la virulencia de la

Porphyromona gingivalis^31,32. Es una proteasa que cumple múltiples papeles entre ellos encontramos que ayuda a la bacteria a colonizar, como mecanismo de defensa y a la producción de nutrientes³³.

2.3. FITODONTOLOGÍA

Cavalcante^4(p5) indica “que la fitodontología estudia de manera científica las plantas medicinales utilizadas en el área odontológica”.

2.4. ALOE VERA

Fig. 10: Planta de Aloe vera Fuente: J. Suárez, 2017.

2.4.1. Descripción Taxonómica y Botánica

La página de trópicos⁵ indica textualmente:

“Clase: Equisetopsida C. Agardh

(33)

31 Subclase: Magnoliidea Novák ex Takht Superorden: Lilianea Takht

Orden Asparagales Limk Familia: Asphodelaceae Juss Género: Aloe L”⁵.

Hirscher^6(p9) señala que Aloe es una palabra del latín es un ajuste del árabe alloeh, del sirio alwai o del hebreo halal el cual tiene significado de una “sustancia amarga y brillante”, jugo que se encuentra en la pulpa de la planta, cubierto por la piel⁶.

2.4.2. Estructura y Composición

El Aloe vera posee raíz, tallo, hojas y flores, sus hojas nacen alrededor del tallo localizado cerca del suelo en forma de una roseta. Las hojas presentan forma lanceolada y dentada con pinchos que sirven de protección. La hoja está compuesta por una corteza recubierta por una cutícula delgada de color verde, el parénquima o pulpa, también llamado gel se encuentra en el centro de la misma⁷. (Fig. 10).

Las plantas de Aloe vera, al llegar a la edad adulta, pueden alcanzar desde 45 cm a 1,20 metros de altura y 15 hojas aproximadamente. Las hojas miden 7 cm de ancho, cada una llega a pesar de 500 gramos a 1,5 kilogramos, dependiendo de las condiciones en donde se desarrolla. Para que la planta de Aloe vera alcance su madurez, puede tardar desde un año y medio a cinco años⁸.

2.4.3. Usos Medicinales

El Aloe vera tiene varias propiedades medicinales tales como:

 Ayuda a estimular el funcionamiento correcto del aparato gastrointestinal, tiene actividad gastroprotectora (ante enfermedades gastrointestinales como úlceras y gastritis, entre otras)⁹.

 Produce una mejor cicatrización en heridas y quemaduras⁹.

 Es antibacterial⁹.

(34)

32

 Se utiliza como laxante⁹.

 Se utiliza además para la alopecia (pérdida de cabello)¹⁰.

 Para eliminar barros y espinillas¹⁰.

 Para aliviar dolores y heridas ¹⁰.

 Antiulcerosa¹¹.

 Antituberculosa¹¹.

 Analgésica¹¹.

 Antiinflamatoria ¹¹.

 Efecto inmunoestimulante e inmunosupresor⁷.

 Ayuda a disminuir los niveles altos de azúcar y grasa en la sangre, puede ser utilizada en tratamientos para diabetes⁷.

 Puede ser utilizado como antioxidante⁷.

Antonio Vega y cols. nos indican que el Aloe vera es una planta con varias propiedades medicinales como antimicrobianas (antiviral y antibacterial) al contener antraquinonas y acemanano, también posee propiedades nutricionales al conservar gran cantidad de vitaminas¹².

En la investigación realizada por Mohammadmehdi y Jamshid del Aloe vera sobre bacterias cariogénicas y periodontopáticas usaron métodos de difusión de disco y microdilución con Aloe vera puro y diluido, como resultado se presentó actividad inhibitoria sobre las bacterias en especial sobre la Porphyromona gingivalis¹³.

M. Saavedra y cols. en su estudio con el Aloe vera y la clorhexidina en Streptococcus mutans utilizando como método la dilución en agar, demostraron que el Aloe vera es una sustancia que no poseen efecto antimicrobiano que actué sobre esta bacteria presentando resistencia¹⁴.

Reinaldo Rivero Martínez y cols. en la investigación con Aloe vera sobre el herpes simplex tipo I, determinaron la inhibición del virus por

(35)

33

medio de observación mediante microscopio y así demostraron que presentaba actividad antiviral¹⁵.

María Julia Martínez y cols. determinaron que la actividad antimicrobiana del Aloe vera sobre Staphylococus areus, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Pseudonomas aeruginosa y Candida albicans, utilizando el método de difusión en agar, el efecto inhibitorio que se produjo fue únicamente sobre Staphylococus aureus siendo muy ligero este efecto¹⁶.

Alarcón y Fernández indicaron que la planta de Aloe vera posee múltiples propiedades como antiinflamatorias, cicatrizante, antibacterial, se ha utilizado en enfermedades como las caries dentales y enfermedades periodontales¹⁷.

Musmeci y Lezcano determinaron que la acción antimicrobiana que produce el Aloe vera sobre Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa y Candida albicans utilizando la técnica de difusión, realizando soluciones etanólicos al 70% y 50% de Aloe vera demostraron que existe inhibición bacteria¹⁸.

(36)

34 2.5. CLORHEXIDINA

Fig. 11: a) clorhexidina al 2% b) clorhexidina al 0,12%

Fuente: J. Suárez, 2017.

Es una sustancia bicatiónica con pH mayor a 3,5²⁵ y actúa sobre agentes tensioactivos aniónicos como fosfatos, sulfatos y clorados presentes en pastas de dientes². (Fig. 11)

La clorhexidina se encuentra en varias formas que se puedan administrar como enjuagues bucales, pastas o geles y barnices².

La clorhexidina posee una fuerte carga positiva y presenta gran absorción en las estructuras bucales, así como gran actividad antimicrobiana sobre las superficies bacterianas que a su vez causa la muerte de los microorganismos²⁶.

La clorhexidina se adhiere a la película adquirida, en el esmalte de las estructuras dentarias y además a las proteínas que forman parte de la saliva; esta sustancia se va liberando en un período de 12 hasta 24 horas después de su adherencia y de esta manera evita que las bacterias se unan y formen enfermedades periodontales²⁵.

a b

(37)

35 2.5.1. Mecanismo de acción

La clorhexidina es una sustancia antimicrobiana que interviene en la membrana citoplasmática de la bacteria³.

Destruye la membrana de la bacteria causando variaciones en la permeabilidad, cuando se administra en bajas concentraciones se produce eliminación de los elementos citoplasmáticos con menor peso molecular y en concentraciones altas se produce la coagulación de citoplasma².

2.5.2. Usos

La clorhexidina presenta varias utilidades entre ellas tenemos:

 En endodoncia se utiliza como un irrigante, por presentar efecto antibacterial²⁵.

 En implantología se realiza una irrigación del lugar en donde se va a colocar el implante para evitar que se produzca periimplantitis²⁵.

 En cirugía oral se aplica para producir la desinfección de la cavidad bucal el momento de realizar la cirugía²⁵.

 En periodoncia, al igual que en cirugía, se usa para eliminar microorganismos que producen una serie de enfermedades a nivel de las encías²⁵.

 En prótesis se utiliza para limpiar prótesis totales y removibles²⁵.

 Para desinfectar cavidades cariosas²⁵.

 Antiséptico para pacientes que van a ser sometidos a procesos quirúrgicos³⁴.

 Es utiliza para realizar el lavado de manos quirúrgico³⁴.

 Posee efecto antiplaca³⁵.

(38)

36

Donald Ramos y cols. nos indican que la Porphyromona gingivalis es una de las bacterias causantes de la periodontitis crónica, su tratamiento es la remoción el biofilm y la utilización una sustancia local antimicrobiana como la clorhexidina al 0,12%²⁰.

María Valentina Camejo Suáres demostró en su estudio in vitro realizado sobre Streptococcus mutans para comprobar que enjuague bucal es más efectivo teniendo como controles compuesto fenólico, sanguinarina y gluconato de clorhexidina, al medir los halos de inhibición dio como resultado que el enjuague con gluconato de clorhexidina produce sensibilidad a Streptococcus mutans ²⁷.

Según Herrera, Herrera y Chávez en su investigación del gluconato de clorhexidina al 0,12% para disminuir la cantidad de Estreptococos mutans presentes en el cepillo dental, pepes (chupones) y biberones, demostraron que el gluconato de clorhexidina al 0,12% en spray disminuyo la cantidad de Estreptococos mutans en 99.99% en pepes (chupones), 99.58% en cepillos dentales y 96.72% en biberones ²⁸.

Yévenes y cols. demostraron el efecto inhibitorio de colutorios de clorhexidina al 0,12% y 0,1% en pacientes determina que esta sustancia disminuye la cantidad de placa bacteria (biofilm), los resultados que obtuvieron fueron que la clorhexidina al 0,1% tiene la capacidad de evitar la producción de placa bacteriana o biofilm y ser antimicrobiana como colutorio.²⁹

2.5.3. Sustantividad

El efecto antimicrobiano de la clorhexidina es prolongado por poseer alta sustantividad, la clorhexidina es una sustancia que se suspende en boca al unirse con proteínas de la saliva y se liberan durante un periodo de 8-12 horas

(39)

37

e incluso puede liberarse bajas cantidades hasta 24 horas después de la administración³.

2.5.4. Efectos Adversos

 Produce tinción en las estructuras dentarias y en la lengua³.

 Causas afecciones en el sentido del gusto³.

 Puede ocasionar ulceraciones de la mucosa³⁰.

 Deja un sabor amargo³⁰.

 Sensación de quemazón en la cavidad bucal³⁰.

(40)

38

CAPÍTULO III 3. METODOLOGÍA

3.1. Tipo de Diseño de la Investigación

Según las características presentes en la investigación, el estudio de tipo experimental in vitro y prospectivo

Experimental in vitro: Se va a evaluar el efecto inhibitorio del Aloe vera (L.) Burm.f. al 100% sobre la Porphyromona gingivalis.

Prospectivo: Los datos se registrarán en un periodo de tiempo determinado desde el desarrollo del estudio en el presente hacia su posterior evolución.

3.2. Población y muestra de estudio

Población: 15 cajas Petri inoculadas con Porphyromona gingivalis derivada del ATCC 33277, con tres repeticiones en cada caja Petri de los diferentes tratamientos (15 repeticiones de cada tratamiento).

Muestra: 15 cajas Petri inoculadas con Porphyromona gingivalis derivada del ATCC 33277, con tres repeticiones en cada caja Petri de los diferentes tratamientos (15 repeticiones de cada tratamiento).

3.2.1. Tipo de muestreo

Muestra no probabilística: Se utilizaron 15 cajas Petri inoculadas con Porphyromona gingivalis ATCC 33277, con tres repeticiones en cada caja Petri de los diferentes tratamientos (15 repeticiones de cada tratamiento) con tres tratamientos de Aloe vera (L.) Burm.f. al 100% y clorhexidina al 0,12% como control positivo y suero fisiológico como control negativo, la muestra cumplió con los criterios de inclusión.

(41)

39 3.2.2. Unidad de muestra

Se trabajó con una cepa de Porphyromona gingivalis ATCC 33277, importado por Medibac-Inc S.A identificadas por el laboratorio microbiológico.

3.3. Criterios de inclusión y exclusión

3.3.1. Criterios de inclusión

Cajas Petri que contengan colonias de Porphyromona gingivalis ATCC 33277 no contaminadas.

Halo de inhibición formados por el Aloe vera (L.) Burm.f. definidos, que permitan su descripción y medición.

3.3.2. Criterios de exclusión

Cajas Petri que contenga colonias de Porphyromona gingivalis ATCC 33277 contaminadas.

Halo de inhibición formado por el Aloe vera (L.) Burm.f. que no sea definido y a su vez no permita su descripción de manera correcta por ser ambiguo.

(42)

40 3.4. Operacionalización de variables

VARIABLES DEFINICIÓN CLASIFICA- CIÓN

INDICADOR CATEGÓRICO

ESCALA DE MEDICIÓN

Independiente Aloe vera (L.)

Burm.f.

Es una sustancia de origen natural que presenta grandes propiedades como un antibacterial

Cuantitativo Concentración

100% Ordinal

Dependiente Porphyromona gingivalis ATCC

33277 Halo de inhibición (mm)

Es una especie bacteriana que se encuentra

principalmente en el surco gingival, cuando no se presenta una correcta salud periodontal, en

ocasiones se

encuentra en la legua, amígdalas, raras veces en la saliva.

Cuantitativo

Halo inhibición (mm) (escala)

De razón

Control Clorhexidina

Es una sustancia que actúa sobre agentes tensioactivos

aniónicos.

Agente antiplaca

Cuantitativa

Concentración

0.12% Ordinal

Tabla 1: Cuadro de Operacionalización de variables Fuente: J. Suárez, 2017.

Elaboración: J. Suárez, 2017.

(43)

41 3.5.Materiales y métodos

3.5.1. Materiales para realizar el cultivo

 Caldo nutriente: Tripticasa de soya

 Medio de cultivo estéril: Agar sangre en caja Petri.

 Solución salina estéril.

 Hisopos.

 Mechero.

 Autoclave.

 Plancha caliente con agitación.

 Refrigeradora.

 Cámara para cultivo de anaerobios.

 Bolsas para anaerobios.

3.5.2. Materiales para determinar el efecto antimicrobiano

 Cepa de Porphyromona gingivales ATCC 33277

 Aloe vera (L.) Burm.f. al 100%

 Clorhexidina al 0.12%

 Suero fisiológico

 Papel filtro cortado en discos pequeños

 Vaso de precipitación con etanol al 70%

 Vasos de precipitación

 Pinzas

 Mechero

 Incubadora

 Cajas Petri

 Gradillas

 Utilería (5) o Gorro o Mascarilla o Mandil

(44)

42 o Guantes

o Libreta de apuntes

 Tubo de ensayo

 Asa de inoculación

3.5.3. Materiales para recolección de datos

 Ficha para lectura de los halos.

 Regla en mm.

3.6. Procedimientos y técnicas

3.6.1. Activación de la cepa de Porphyromona gingivalis ATCC 33277 1. Se realizó el autoclavado durante una hora a 121°C de los

materiales (cajas Petri, discos de fieltro, caldo de nutrientes (tripticasa de soya), hisopos) para realizar la activación de la cepa Porphyromona gingivalis ATCC 33277. (Fig. 12) (Fig. 13)

Fig. 12: Autoclavado del material Fuente: Investigación – J. Suárez, 2017.

(45)

43

Fig. 13: Materiales autoclavados.

Fuente: Investigación – J. Suárez, 2017.

2. Una vez esterilizados los materiales para la activación de la cepa Porphyromona gingivalis ATCC 33277, se procedió a realizar el cultivo en siete tubos de ensayo que contenían caldo nutriente (tripticasa de soya) estéril (Fig. 14) y la bacteria que se encontraba en pellets (Fig. 15). La activación se realizó mediante la técnica de contacto (Fig. 16).

Fig. 14: Tubos de ensayo con caldo de nutrientes Fuente: Investigación – J. Suárez, 2017.

(46)

44

Fig. 15: Cepa de Porphyromona gingivalis derivada del ATCC 33277.

Fig. 16: Activación de Porphyromona gingivalis por técnica de contacto.

3. Se etiquetó (Fig. 17) y colocó los tubos de ensayo ya inoculados con la bacteria en cámaras anaerobias con sobres captadores del oxígeno (Fig. 18), en la incubadora a 37°C durante un periodo de 15 días (Fig. 19).

(47)

45

Fig. 17: Etiquetado

Fig. 18: Cámara anaerobia Fuente: Investigación – J. Suárez, 2017.

(48)

46

Fig. 19: Incubadora a 37°

Fuente: Investigación – J. Suárez, 2017

4. Transcurridos los 15 días, se procedió a inocular la bacteria la cual se encontraba en caldo de nutrientes (tripticasa de soya), en agar sangre (Fig. 20) y se colocó en la incubadora a 37°C durante un periodo de 15 días más.

Fig. 20: Siembra en agar sangre.

3.6.2. Determinación del efecto inhibitorio

1. Se realizó la obtención del extracto de Aloe vera. (Fig. 21)

(49)

47

Fig. 21: Obtención de extracto de Aloe vera.

2. Se procedió a colocar los tres tratamientos (suero fisiológico, clorhexidina al 0,12% y Aloe vera al 100%) en vasos de precipitación. (Fig. 22)

Fig. 22: Colocación de los tratamientos en los vasos de precipitación Fuente: Investigación – J. Suárez, 2017.

3. Al transcurrir los 15 días de activación de la cepa en agar sangre, se procedió a etiquetar y sembrar la bacteria Porphyromona gingivalis ya activada en 15 cajas Petri las cuales contenían agar sangre. (Fig. 23) (Fig. 24) (Fig. 25)

(50)

48

Fig. 23: Cultivo de Porphyromona gingivalis (15 días).

Fig. 24: Etiquetado.

(51)

49

Fig. 25: Sembrado de Porphyromona gingivalis.

4. Se embebieron las sustancias en los discos de papel filtro y se colocaron tres discos en cada caja Petri. (Fig. 26) (Fig. 27). Se procedió a colocar las cajas Petri en cámaras anaerobias con bolsas captadoras de oxígeno y esto a su vez en la incubadora a 37°C hasta que se cumpla las 48 hora de exposición de cada tratamiento.

Fig. 26: Colocación de discos de filtro con tratamientos.

(52)

50

Fig. 27: Cajas Petri con Porphyromona gingivalis.

a) Clorhexidina, b) Suero fisiológico, c) Aloe vera Fuente: Investigación – J. Suárez, 2017.

5. Se realizó la primera medición a las 48 horas de incubación de los tratamientos. (Fig. 28) (Fig. 29)

Fig. 28: Medición del halo de inhibición a las 48 horas.

Fig. 29: a) Clorhexidina b) Suero fisiológico c) Aloe vera a las 48 horas de incubación.

(53)

51

6. La segunda medición se la realizó a las 72 horas de haber incubado los tratamientos. (Fig. 30) (Fig. 31)

Fig. 30: Medición del halo de inhibición a las 72 horas de incubación.

Fig. 31: a) Clorhexidina b) Suero fisiológico c) Aloe vera a las 72 horas de incubación.

a b

c

(54)

52

CAPÍTULO IV

4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 4.1. Resultados

Prueba de Normalidad:

Primeramente, se debe verificar que las muestras tomadas provienen de una población con distribución Normal, esto se realiza con las pruebas de Kolmogorov - Smirnov o con la prueba de Shapiro - Wilk (menor a 20 datos).

Si las muestras provienen de poblaciones con distribución normal entonces se realizan pruebas paramétricas (media, desviación estándar): T student, ANOVA.

Si las muestras No provienen de poblaciones con distribución normal entonces se realizan pruebas no paramétricas (orden, signos): Mann Whitney, Kruskal Wallis, Wilcoxon.

Para cada prueba de Hipótesis, se compara el valor de significación con el 0,05 (95% de confiabilidad), si el nivel de significación es superior a 0,05 se acepta Ho (hipótesis inicial), si es inferior a 0,05 se acepta Ha (hipótesis alterna).

Hipótesis a demostrar

Ho: Las muestras SI provienen de poblaciones con distribución Normal.

Ha: Las muestras NO provienen de poblaciones con distribución Normal.

Advertencias

Suero Fisiológico 48 horas de incubación es constante.

Aloe vera 48 horas de incubación es constante.

Suero Fisiológico 72 horas de incubación es constante.

Aloe vera 72 horas de incubación es constante.

Tabla 2: Tabla de advertencias Fuente: Investigación Autor: Ing. Jaime Molina

(55)

53

Pruebas de normalidad

Kolmogorov-Smirnov Shapiro-Wilk

Estadístico Gl Sig. Estadístico Gl Sig.

Clorhexidina 48 horas 0,339 15 0,000 0,728 15 0,001

Clorhexidina 72 horas 0,355 15 0,000 0,746 15 0,001

Tabla 3: Prueba de normalidad Fuente: Investigación Autor: Ing. Jaime Molina

De la prueba de Normalidad de Shapiro-Wilk, todos los valores de significación (Sig) de los grupos experimentales son inferiores a 0,05 (95% de confiabilidad), esto es, se acepta Ha, las muestras NO provienen de poblaciones con distribución Normal, por lo que para la comparación de medias o medianas se realiza con pruebas NO paramétricas: Kruskal Wallis.

(56)

54

Pruebas no paramétricas Kruskal Wallis: 48 horas

Ho: (hipótesis nula) Las muestras proceden de poblaciones con la misma distribución de probabilidad (Medias similares).

Ha: (hipótesis alternativa) Existen diferencias respecto a la tendencia central de las poblaciones.

Tabla 4: Resultados de la medición de los halos de inhibición sobre la cepa Porphyromona gingivalis, después de 48 hora de aplicación de cada tratamiento

Fuente: Investigación Elaboración: Ing. Jaime Molina

Gráfico 1: Medias de los halos de inhibición de cada tratamiento a las 48 horas de incubación.

En la tabla 4 y grafico 1 podemos observar la suma y la obtención de una cantidad media de los halos de inhibición de cada uno de los tratamientos a las 48 horas de exposición.

Descriptivos TRATAMIENTO 48 Horas de incubación.

N Media

Desviación Estándar

Error Estándar

95% del intervalo de confianza para la media

Mínimo Máximo Límite inferior Límite superior

Suero Fisiológico 15 0,00 0,000 0,000 0,00 0,00 0 0

Clorhexidina 15 10,13 6,446 1,664 6,56 13,70 5 20

Aloe vera 15 21,00 0,000 0,000 21,00 21,00 21 21

Total 45 10,38 9,403 1,402 7,55 13,20 0 21

0,00

10,13

21,00

0,00 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00

Suero Fisiológico Clorhexidina Aloe vera

TRATAMIENTO 48 Horas

(57)

55

Gráfico 2: Prueba de Kruskal-Wallis para muestras independientes.

En el grafico 2 se observa los intervalos de medición de cada una de las sustancias es decir del suero fisiológico es de 0, de la Clorhexidina va a ir de 5 a 20 mm y del Aloe vera es de 21mm a las 48 horas de exposición.

De la Prueba de Kruskal-Wallis el valor de significación calculado (Sig. asintótica = 0,000) es menor a 0,05 (95% de confiabilidad), luego aceptamos Ha, esto es, existen diferencias significativas con respecto a la tendencia central de las poblaciones. Para verificar cuáles son diferentes se realizan pruebas dos a dos:

(58)

56

Gráfico 3: Comparaciones por parejas de sustancias a las 48 Horas de incubación.

Fuente: Investigación Autor: Ing. Jaime Molina

Tabla 5: Comparaciones por parejas de sustancias a las 48 horas de incubación.

Fuente: Investigación Autora: Ing. Jaime Molina

En el grafico 3, tabla 5 se puede observar que cada sustancia es diferente una de la otra ya que se realizó comparaciones dos a dos, y se presentó datos menores a 0,05 a las 48 horas de exposición.

(59)

57

Pruebas no paramétricas: 72 horas de incubación.

Ho: (hipótesis nula) Las muestras proceden de poblaciones con la misma distribución de probabilidad (Medias similares).

Ha: (hipótesis alternativa) Existen diferencias respecto a la tendencia central de las poblaciones.

Tabla 6: Resultados de la medición de los halos de inhibición sobre la cepa Porphyromona gingivalis, después de 72 hora de aplicación de cada tratamiento

Gráfico 4: Medias de los halos de inhibición de cada tratamiento a las 72 horas de incubación.

En la tabla 4 y grafico 1 podemos observar la suma y la obtención de una cantidad media de los halos de inhibición de cada uno de los tratamientos a las 72 horas de exposición.

Descriptivos TRATAMIENTO 72 Horas

N Media

Desviación Estándar

Error estándar

95% del intervalo de confianza para la media

Mínimo Máximo Límite inferior

Límite superior

Suero

Fisiológico 15 0,00 0,000 0,000 0,00 0,00 0 0

Clorhexidina 15 10,33 6,287 1,623 6,85 13,81 5 20

Aloe vera 15 21,00 0,000 0,000 21,00 21,00 21 21

Total 45 10,44 9,368 1,396 7,63 13,26 0 21

0,00

10,33

21,00

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Suero Fisiológico Clorhexidina Aloe vera