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MANUAL DE
PRÁCTICAS DE
HISTOTECNOLOGÍA
“En la vejez la ciencia es para nosotros un cómodo refugio; y si no la
plantamos de jóvenes, no nos dará sombra cuando seremos viejos.”…
2011
Perteneciente a:
……….……….
LIMA - PERÚ
UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL
FACULTAD DE TECNOLOGÍA MÉDICA
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Edición de la guía de práctica
Cuarta edición 2011 Profesor Eduardo Sedano Gelvet Profesor Carlos Neira Montoya
La edición de la presente guía de práctica, fue posible gracias a la experiencia acumulada de los docentes y colaboradores durante los últimos años.
Asignatura de Histotecnología Año Académico 2011
1. Profesor responsable de la asignatura:
Eduardo Eulogio Sedano Gelvet. Categoría: Auxiliar. Clase: Tiempo parcial 12 horas.
2. Profesores de la asignatura:
Carlos Ricardo Neira Montoya. Categoría: Auxiliar. Clase: Tiempo parcial 12 horas.
Universidad Nacional Federico Villarreal. Facultad de Tecnología Médica.
ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE LABORATORIO Y DE ANATOMÍA PATOLÓGICA.
Jr. Río Chepen 290, El Agustino, Lima-Perú. Correo electrónico: [email protected] [email protected]
2010 Derechos Reservados.
Prohibida la reproducción parcial o total sin autorización escrita de los autores.
Nuestra constante misión es buscar
nuevas tecnologías,... nuevas formas de procedimientos.
Y avanzar osadamente, a donde no ha llegado ningún otro...histotecnólogo
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CONTENIDO
Prologo Pág. 6
Modificaciones sugeridas Pág. 8
Decálogo del estudiante Pág. 9
Test de estilos de aprendizaje Pág. 10
El proceso de estudio Pág. 13
Mapas conceptuales Pág. 15
Formato de desarrollo y de presentación de un proyecto de
Investigación Pág. 17
Departamento de patología del Hospital de Apoyo
“María Auxiliadora” Pág. 21
Laboratorio de procedimientos histológicos del departamento
de patología Pág. 23
Factores de riesgo ocupacional en el laboratorio de
procedimientos histológicos Pág. 33
Medidas generales de seguridad Pág. 34
Clasificación de materiales peligrosos Pág. 36
Procedimientos a seguir en caso de accidente Pág. 37 Recomendaciones de seguridad en caso de sismo Pág. 38
Un programa de garantía de la calidad Pág. 41
Elección de un método histológico o histoquímico Pág. 42
Métodos de estudio en histología Pág. 43
Pasos de las técnicas microscópicas Pág. 44
Tabla de tejidos y fijadores Pág. 49
Deshidratación e inclusión en parafina Pág. 50
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Coloración Pág. 51
Montaje Pág. 53
Recomendaciones útiles Pág. 53
Método de coloración de hematoxilina y eosina Pág. 55 Reacción del ácido peryódico de Schiff (método de P.A.S.) Pág. 57 Reacción de P.A.S (para demostrar glucógeno) Pág. 60 Método del carmín de Best (modificado por Lillie) Pág. 63 Método del hierro coloidal de Hale (método modificado) Pág. 65 Método del azul alciano (método del alcian blue) Pág. 67 Coloración metacromática con azul de toluidina Pág. 69 Observación metacromática de glucosaminoglicanos ácidos
con azul de toluidina Pág. 69
Método de Feulgen (Feulgen-Rossenbeck) Pág. 70
Método del verde de metilo-pironina (Unna-Pappenhein) Pág. 73
Método del rojo Congo de Bennhold Pág. 75
Método de coloración con Sudan III o IV Pág. 77
Método de Sudán Black B (Sudan negro) Pág. 79
Método de Perls (azul de Prusia, azul de Berlín) Pág. 81
Método de von Kossa Pág. 83
Método de Masson Fontana Pág. 85
Panel de tamizado primario y secundario Pág. 87
Procedimiento del complejo streptavidina-biotina fosfatasa
alcalina (método del H.A.M.A) Pág. 90
Método de coloración con luxol fast blue para mitocondrias Pág. 96 Método de hematoxilina férrica de Weigert para ergastoplasma Pág. 98 Método de impregnación argéntica directa de Da Fano
5 Coloración de van Gieson para fibras colágenas Pág. 101
Coloración tricrómica de Masson Pág. 103
Impregnación argéntica de Gomori para de reticulina Pág. 106 Coloración de Verhoeff para fibras elásticas Pág. 108 Coloración de Giemsa (modificación de Wolbach) Pág. 110 Método de Schmorl para demostración de lagunas y
Canalículos óseos Pág. 112
Coloración de azul de toluidina para colorear sustancia
fundamental de tejido cartilaginoso. Pág. 114
Método de coloración con luxol fast blue para bandas de mielina Pág. 115 Coloración de Ziehl-Neelsen para microorganismos
ácido-alcohol resistentes. Pág. 117
Coloración de Wayson para Helicobacter pylori Pág. 119 Impregnación argéntica de Warthin-Starry para
Helicobacter pylori Pág. 120 Impregnación de nitrato de plata-metanamine de Gomori
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PROLOGO
Esta guía de práctica de Histoquímica dedicada al estudiante de Tecnología Médica intenta exponer cada método en forma sintética y a la vez completa, suficiente en extensión y con la profundidad necesaria.
Presentará, un Test de Estilos de Aprendizaje porqué es preciso tener una idea de como aprenden los alumnos para poder ayudarlos, luego de una introducción de lo que es el Departamento de Patología y el Laboratorio de Procedimientos Histológicos del mismo, las cinco etapas principales de las Técnicas Histológicas, que permiten la obtención de preparaciones histológicas permanentes (láminas) para el estudio al microscopio óptico y, además, Histoquímica; cada uno de estos dos últimos tópicos presentará algunos de los métodos más comúnmente utilizados en el estudio de células y tejidos. Los principios en que se basan estos métodos serán explicados sumariamente a fin de que se puedan evaluar debidamente los resultados con ellos obtenidos.
Como es lógico suponer, lo que se desea es llevar al microscopio una preparación en que los tejidos ya sean normales o patológicos estén perfectamente conservados, presentando la misma estructura y composición química que poseían cuando estaban vivos. Sin embargo, a pesar de las medidas adoptadas, este ideal no se alcanza, observándose en todas las preparaciones histológicas ciertos artefactos consecuentes del procesado que sufrieron.
Todas las características que presenta esta guía de práctica han sido elaboradas acorde con la experiencia acumulada durante 20 años en la enseñanza de pre-grado en Técnicas Histológicas e Histoquímica, así como en la investigación y en el trabajo diario realizado en el Laboratorio de Procedimientos Histológicos del Departamento de Patología del Hospital de Apoyo "María Auxiliadora"; que sirven para transmitir destrezas eminentemente prácticas y aplicadas que permitan al alumno: 1) correlacionar el conocimiento histológico con los métodos que permiten su estudio, y 2) el conocimiento de métodos que posee actualmente la histología, para aplicarlos y coadyuvar así, al diagnóstico histopatológico.
Cabe mencionar, que esta guía de práctica está sujeta a las correcciones sugeridas por colegas y alumnos.
Por último, que sirvan estas líneas para agradecer a quienes contribuyeron en nuestro desarrollo en las Técnicas Histológicas, Histoquímica y en la docencia, porque nos enseñaron que los conocimientos no tienen barreras profesionales.
A los doctores MARCOS COPAIRA BELTRÁN y CÉSAR EDUARDO MONTALVO ARENAS nuestro eterno agradecimiento.
CARLOS RICARDO NEIRA MONTOYA EDUARDO EULOGIO SEDANO GELVET
7 Esta guía de práctica ha tenido modificaciones sugeridas por:
Interno T.M. JUAN AUQUI SULCA Interno T.M. LUIS CAPCHA
Alumna de Biología: NANCY ODILE CHANCO APARICIO Interno T.M. CESAR EDUARDO ROJAS NARVAEZ Interno T.M. MOISÉS SALDAÑA OREJÓN
Interno T.M. LUIS VALLEJOS SÁNCHEZ Interno T.M. JAFFET VARGAS VITTORINO
Alumno de T.M. EDUARDO MANUEL CORNEJO RUIZ. Doctor ALFREDO GUILLEN ONEGLIO
En todo tecnólogo médico ha de haber una primavera de dudas, un verano de reposo, un otoño de conocimientos y un invierno de sabiduría.
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REGULACIONES
INFORMACION GENERAL
Antes de cada sesión de trabajo se debe leer la guía de práctica y planificar el trabajo cuidadosamente.
No empezar el trabajo hasta haber recibido las instrucciones. La sesión de trabajo se iniciará con las instrucciones del profesor de prácticas. Si la información del instructor o del manual no están claras, realice las preguntas adecuadas.
Anote las observaciones cuando las realice. El examen práctico incluirá la información que el profesor de prácticas le brindará, la del manual y la de sus propias observaciones y conclusiones.
Responda y discuta las preguntas de la guía con su profesor de práctica, estas serán consideradas en el examen práctico.
REGLAS DEL LABORATORIO
Debe usar un mandil blanco o chaqueta, limpios cuando este en el laboratorio. Este debe ser lavado por lo menos una vez a la semana utilizando agua caliente y lejía. No se permitirá el ingreso o la permanencia de alumnos sin mandil o chaqueta.
Antes de empezar y después de trabajar limpie la mesa del laboratorio y cada vez que sea necesario (derrame de material contaminado).
Coloque sólo el material indispensable sobre las mesas de laboratorio. No colocar bolsas, ni mochilas u otro material que no sea del curso.
Nunca utilice la boca para pipetear, el material puede ser tóxico o infeccioso.
Está PROHIBIDO comer, fumar o aplicarse cosméticos en el laboratorio.
Lávese las manos con agua y jabón antes de retirarse del laboratorio.
Colocar el material usado desechable en envases apropiados al terminar las prácticas, siendo de responsabilidad del alumno N° 1 correspondiente de acuerdo al cronograma.
Algunos de los reactivos con que se trabajan son peligrosos. Use guantes o mascarillas descartables cuando sea necesario y siga las instrucciones del profesor de prácticas.
Reporte todos los accidentes o derrames, incluso los menores, al instructor. Estos reportes no serán tomados en cuenta para la nota pero son importantes para tomar medidas de bioseguridad para todos y evitar la repetición de los accidentes.
MATERIAL NECESARIO (para todas las prácticas)
El alumno debe contar con el siguiente material para el desarrollo de las prácticas:
Guía de prácticas (obligatorio)
Desinfectantes: Alcohol 70%, fenol al 5%
Jabón líquido y toallas de papel
Material de escritorio: Marcador de tinta indeleble, lápiz de cera, caja de colores, papel kraft.
Material de limpieza: detergente, escobillas.
Material de laboratorio: láminas portaobjetos y cubreobjetos, asa de siembra y aguja de cultivo.
Equipos: microscopio compuesto, estufa, balanza y refrigeradora.
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DECÁLOGO DEL ALUMNO
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Test de Estilos de Aprendizaje
Por favor, rodee con un círculo el número (del 1 a 6) que corresponde más a cómo usted se ve o cómo se describiría usted:
1. Yo me describiría como imparcial (de mentalidad
abierta) 1 2 3 4 5 6
Yo me describiría como explícito (tajante)
2. Yo me describiría como
reflexivo 1 2 3 4 5 6 Yo me describiría como orientado a la acción 3. Me gusta permanecer
flexible 1 2 3 4 5 6 Me gusta ser específico 4. Valoro la paciencia 1 2 3 4 5 6 Valoro lograr hacer cosas 5. Me gusta que las cosas
sean variadas y tengan
colorido 1 2 3 4 5 6
Me gusta que las cosas sean exactas y precisas
6. Yo me describiría como
observador 1 2 3 4 5 6 Yo me describiría como activo 7. Tomo un enfoque creativo e
imaginativo para resolver
problemas 1 2 3 4 5 6
Tomo un enfoque preciso y calculado para resolver problemas
8. Me siento bien cuando
entiendo las cosas 1 2 3 4 5 6 Me siento bien cuando logro un impacto en las cosas
9. Me gusta permanecer flexible (no ser tan
específico) 1 2 3 4 5 6
Me gusta ser lo más preciso posible
10.Soy bueno mirando las cosas bajo diversas
perspectivas 1 2 3 4 5 6
Soy bueno logrando hacer cosas
11.Yo me describiría como
receptivo y complaciente 1 2 3 4 5 6 Yo me describiría como evaluativo y lógico 12.Me gusta mirar lo que pasa
a mi alrededor 1 2 3 4 5 6 Me gusta ver los resultados de mis acciones
13.Lucho por ser versátil 1 2 3 4 5 6 Lucho por ser preciso
14.Me considero reservado y
lógico
1 2 3 4 5 6 Estoy preparado para actuar
11
Instrucciones.- Los items impares miden la dimensión EC/CA (Sentir/Pensar).
Los items pares miden la dimensión EA/OR (Actuar/Observar). Por favor, sume los items que correspondan a cada dimensión, tal como se indica a continuación:
EC/CA (Sentir/Pensar) Item 1 3 5 7 9 11 13 Total Puntos EA/OR (Actuar/Observar) Item 2 4 6 8 10 12 14 Total Puntos
Coloque el Total EC/AC (Sentir/Pensar) en el eje vertical de la figura a continuación. Después coloque el Total EA/OR (Actuar/Observar) en el eje horizontal. Luego, coloque una cruz en el lugar de intersección de los dos puntajes. Esta cruz reflejará su modo adaptativo.
EC -7 8- -9 10-- -11 ABEJA 12-- DELFÍN -13 14-- -15 16-- -17 18-- -19 20-- -21 22- EA -23 OR 42 40 38 36 34 32 30 28 26 22 20 18 16 14 12 10 8 41 39 37 35 33 31 29 27 23 21 19 17 15 13 11 9 7 -26 27 - -28 29 - -30 31 - -32 33 - -34 35 - -36 CASTOR 37 - BÚHO -38 39 - -40 41 - -42 CA
12 El diagrama a continuación señala las fuerzas y debilidades de cada estilo de aprendizaje con notas para mejorar
Experiencia concreta
Acomodador (Abeja) (Sentir) Divergente (Delfín
)
Fuerzas: Lograr hacer las cosas Fuerzas: Habilidades imaginativas.
Liderazgo Comprender a la gente.
Toma de riesgos Reconocer problemas.
Tormenta de ideas.
Debilidades: Mejoras triviales. Debilidades: Paralizado por las Actividad sin sentido. alternativas.
No puede tomar
decisiones.
Rasgos típicos: Trabajo terminado a Rasgos típicos: Tener ideas.
tiempo. Reconocer problemas y
Planes prácticos. oportunidades. Dirigido a metas.
Para desarrollar sus habilidades Para desarrollar sus habilidades de
de aprendizaje acomodador, practique: aprendizaje divergente, practique: *Comprometerse con objetivos. *Ser sensible a los sentimientos de *Buscar nuevas oportunidades. la gente.
*Influir y dirigir a otros. *Ser sensible a valores.
*Involucrarse en forma personal. *Escuchar con mente abierta.
*Tratar a gente. *Reunir información.
*Imaginarse las implicaciones de situaciones inciertas.
Experimentación Observación
Activa (Actuar) Reflexiva (Observar)
Convergente (Castor) Asimilador (Búho)
Fuerzas: Solución de problemas. Fuerzas: Planificación.
Tomar decisiones. Creación de modelos. Razonamiento deductivo. Definir problemas. Definir problemas. Desarrollo de teorías. Debilidades: Resolver el problema Debilidades: Castillos en el aire.
erróneo. Falta de aplicaciones Decisiones apresuradas. prácticas.
Rasgos típicos: Presencia de foco. Rasgos típicos: Capaz de aprender Probar las ideas. de los errores. Pensamientos centrados Base sólida para el
trabajo.
Enfoque sistemático. Para desarrollar sus habilidades de Para desarrollar sus habilidades de aprendizaje convergente, practique: aprendizaje asimilador, practique: *Crear nuevas formas de pensar y *Organizar información. actuar. *Construir modelos conceptuales. *Experimentar con nuevas ideas. *Probar teorías e ideas.
*Escoger la mejor solución. *Diseñar experimentos.
*Establecer metas. *Analizar datos cuantitativos.
*Tomar decisiones.
Conceptualización abstracta (Pensar)
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EL PROCESO DEL ESTUDIO
Para concluir con los desagregados referidos al método del estudio, debemos señalar tanto cuanto secuencia el proceso del estudio:
1. Prepara y examina la temática que ha de exponerse durante la clase inmediata posterior.
2. Estudia y analiza el o los temas de las materias que se expusieron en la clase anterior.
3. Busca uno o varios motivos que comprometan el estudio. 4. Precisa una noción clara de los objetivos que debes lograr.
5. Empieza el mapa conceptual siguiente lo antes posible, a fin de repasar con detenimiento y en forma crítica la lección anterior.
6. A través de la práctica, descubre y determina qué te es mejor, si empiezas por la tarea más difícil o por la más fácil cuando te encuentres frente a varios deberes de dificultad desigual.
7. Evalúa y valora diariamente el grado de importancia de los temas que te son presentados, a fin de dedicar tus mayores esfuerzos y fijar permanentemente aquellos que son vitales y fundamentales.
8. Comienza a trabajar tu mapa conceptual lo más pronto posible.
9. Durante tu trabajo, desarróllalo intensamente y mantente concentrado. 10. Cuida que tu atención no se desvíe o confunda cuando estés trabajando. 11. Trata de actuar tú mismo sin pedir ayuda mientras no te sea imprescindible. 12. Elabora tus propios ejemplos concretos y con tus palabras sobre los temas,
principios y reglas que analizas.
13. Subraya y resalta las ideas esenciales en tus libros o toma notas fichadas. 14. Haz un mapa conceptual a fin de dominar el material que se te presente extenso
y complejo. Utiliza tu memoria en forma inteligente.
15. Acostúmbrate a estudiar en forma razonada repasando mentalmente cada párrafo, tan pronto lo hayas leído.
16. Al encontrarte con términos técnicos, fórmulas, definiciones, fechas y bosquejos trata de memorizarlas una vez que las hayas comprendido.
17. Si debes aprender algo de memoria es mejor leer en voz alta que silenciosamente, y es mejor leer rápidamente que despacio.
18. Toma un descanso y deja divagar tu mente antes de empezar otra tarea, después que hayas realizado un estudio intenso de un material difícil y complicado.
14 19. Aplica tus conocimientos en todo trabajo que puedas, a fin de reafirmarlos. 20. Toma apuntes y mantente activo durante tus clases a las que debieras asistir.
BLANCO Lourdes; CÉSPEDES Pablo: Metodología del estudio. El trabajo
intelectual. En: Monografías.com, Newsletter #181,. Visto 25 de Noviembre de 2004.
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UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL
FACULTAD DE TECNOLOGÍA MÉDICA
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE TECNOLOGÍA MÉDICA
LABORATORIO CLÍNICO Y DE ANATOMIA PATOLÓGICA
PROYECTO DE INVESTIGACIÓN
TEMA:
ALUMNO:
LIMA-PERÚ
2010
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INDICE
CAPITULO I
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
Pagina 1.1 Descripción de la realidad
1.2 Delimitaciones y definición del problema 1.2.1 Delimitaciones
a. Delimitación temporal b. Delimitación espacial c. Delimitación social d. Delimitación conceptual 1.2.2 Definición del problema
1.3 Planteamiento del problema 1.3.1 Problema principal 1.3.2 Problemas secundarios 1.4 Objetivos de la Investigación 1.4.1 Objetivo principal 1.4.2 Objetivos específicos 1.5 Justificación e importancia 1.6 Limitaciones
19 CAPITULO II MARCO TEORICO 2.1 Antecedentes de la Investigación 2.2 Marco histórico 2.2.1 Sobre ... 2.2.2 Sobre ... 2.3 Marco conceptual 2.3.1 Relacionado con ... 2.3.2 Relacionado con ... 2.3.3 Relacionado con ... 2.4 Hipótesis de la Investigación 2.4.1 Hipótesis general 2.4.2 Hipótesis específicas 2.5 Variables e indicadores 2.5.1 Variable independiente 2.5.2 Variable dependiente 2.6 Definición de términos
20 CAPITULO III
METODOLOGIA
3.1 Tipo y Nivel de la Investigación 3.1.1 Tipo de Investigación 3.1.2 Nivel de Investigación 3.2 Método y Diseño de Investigación
3.2.1 Método 3.2.2 Diseño 3.3 Cobertura de Estudio 3.3.1 Población 3.3.2 Muestra 3.4 Técnicas e Instrumentación
3.5 Programa de Actividades y Presupuesto 3.5.1 Cronograma de Actividades
3.5.2 Presupuesto
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DEPARTAMENTO DE PATOLOGÍA DEL HOSPITAL DE APOYO "MARÍA AUXILIADORA"
Definición del Departamento
El Departamento de Patología, es el órgano operativo de línea encargado de brindar diagnóstico patológico integral de la más alta calidad a la población usuaria, mediante el estudio macroscópico y microscópico de las piezas quirúrgicas, biopsias y necropsias; y del estudio a nivel citológico y citogenético de exudados, líquidos corporales y células exfoliantes.
Esta integrado por Médicos Especialistas, Tecnólogos Médicos Especialistas, Técnicos y Auxiliares de las Ciencias de la Salud, así como personal de Apoyo Administrativo y de Servicio.
Posición estructural y dependencia.
El Departamento de Patología, es un Órgano de Línea de los Servicios Intermedios de Apoyo al Diagnóstico del Hospital de Apoyo "María Auxiliadora", que depende en lo administrativo y funcional de... y en lo técnico-normativo de ...
Principales funciones y atribuciones:
a) Desarrollar actividades de Apoyo al Diagnóstico para la protección, recuperación y rehabilitación del paciente, en el contexto de la familia y su comunidad.
b) Contribuir en la protección de la salud del usuario y de la comunidad a través de programas de despistaje y prevención de cáncer.
c) Brindar atención y servicios con criterios de calidad y calidez a la población usuaria, en todos los sectores de trabajo del Departamento: Jefatura, Secretaria, Servicios, Laboratorio de Procedimientos Histológicos, y en especial el Servicio de Mortuorio y Necropsias.
d) Promover el desarrollo de los recursos humanos del Departamento de Patología, destinados a lograr la calidad y competitividad en el desempeño de sus funciones, mediante la implementación de programas de capacitación y educación continúa, utilizando metodología de problematización y solución de casos.
e) Promover y desarrollar la investigación científica en los diferentes campos de la patología y de la histotecnología.
f) Brindar apoyo técnico y de asesoría especializada a los directivos de la Institución y a los establecimientos de menor complejidad, interactuando con equipos multidisciplinarios.
g) Desarrollar actividades de docencia universitaria de pre y post grado en patología e histotecnología, según convenios establecidos con las Universidades y las normas Institucionales vigentes.
22 h) Otras funciones afines que le asigne la Institución.
Ubicación y áreas físicas del Departamento de Patología.
El Departamento de Patología se encuentra ubicado en el primer piso al costado del Servicio de Emergencia.
Las áreas físicas con que cuenta el Departamento de Patología son: - Oficina de la Jefatura del Departamento
- Servicio de Citología Exfoliativa - Servicio de Patología Quirúrgica - Servicio de Mortuorio y Necropsia
- Laboratorio de Procedimientos Histológicos.
Todo Departamento de Patología debe contar con un manual de organizaciones y funciones (MOF), Manual de Normas y Procedimientos (MNP), donde se especifica en forma detallada lo que debe hacer cada persona del Departamento, facilitándose el trabajo en equipo y con un Plan Operativo Anual. De igual forma debe existir un fluxograma en el cual se consigna en forma gráfica la organización en relación al movimiento de las muestras en el Departamento.
La organización del Departamento está conformada por: Jefe de Departamento, Jefe de Sección, Patólogo Asistente, Jefe de Laboratorio ( Tecnólogo Médico) que puede ser jefe de sección en caso de que no se encuentre presente un patólogo; Tecnólogo Médico Asistente, Biólogo; Técnico y Auxiliar de laboratorio; empleado de servicio de morgue y limpieza.
"El hombre encuentra a Dios detrás de cada puerta que la ciencia logra abrir."
23
LABORATORIO DE PROCEDIMIENTOS HISTOLÓGICOS DEL DEPARTAMENTO DE PATOLOGÍA
Definición del Laboratorio de procedimientos histológicos del departamento de patología.
El Laboratorio de procedimientos Histológicos del Departamento de Patología, es el órgano tecnológico de línea encargado de brindar el servicio de elaboración de preparados histológicos, histoquímicos e inmunohistoquímicos de la más alta calidad al patólogo (usuario), mediante el procesamiento de las piezas quirúrgicas, biopsias y necropsias por el método de la parafina u obtenidas por congelación.
Esta integrado por Tecnólogos Médicos Especialistas, Técnicos y Auxiliares de las Ciencias de la Salud, así como personal de Apoyo Administrativo y de Servicio.
Posición estructural y dependencia.
El Laboratorio de Procedimientos Histológicos, es un Órgano Tecnológico de Línea de los Servicios Intermedios de Apoyo al Diagnóstico Histopatológico, que depende en lo administrativo y funcional del Departamento de Patología y en lo técnico-normativo del Jefe de Laboratorio.
Principales funciones y atribuciones:
a) Desarrollar actividades de Apoyo al Diagnóstico Histopatológico con la finalidad de satisfacer las necesidades diagnósticas del patólogo.
b) Coadyuvar el diagnostico histopatológico a través de métodos histológicos, reacciones histoquímicas e inmunohistoquímicas.
c) Brindar el servicio de elaboración de preparados histológicos, histoquímicos e inmunohistoquímicos con criterios de calidad y calidez al usuario.
d) Promover el desarrollo de los recursos humanos del Laboratorio de Procedimientos histológicos, destinados a lograr la calidad y competitividad en el desempeño de sus funciones, mediante la implementación de programas de capacitación y educación continua.
e) Promover y desarrollar la investigación científica en los diferentes campos de la histotecnología.
f) Brindar apoyo técnico y de asesoría especializada a los Laboratorios de Procedimientos Histológicos Periféricos.
g) Desarrollar actividades de docencia universitaria de pre y post grado en Histotecnología, según convenios establecidos con las Universidades y las normas Institucionales vigentes.
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Ubicación y áreas físicas del Laboratorio de Procedimientos Histológicos.
El Laboratorio de Procedimientos Histológicos se encuentra ubicado dentro del Departamento de Patología.
Las áreas físicas con que cuenta el Laboratorio de Procedimientos Histológicos son:
• Técnicas Histológicas • Histoquímica.
• Laboratorio de Inmunohistoquímica.
A continuación mostramos un gráfico en el que se refleja un modelo organizativo propio del Laboratorio de Procedimientos Histológicos del Departamento de Patología del Hospital de Apoyo "María Auxiliadora":
"Nunca consideres el estudio como una obligación sino como una oportunidad para penetrar en el bello y maravillosos mundo del saber."
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|LABORATORIOS| |TAREAS ASIGNADAS| | MÉTODOS REALIZADOS | +---+ +---+ +---+
Procedimiento Procesamiento de: Tecnicas histológicas Histoquímica histológicos
Biopsias Hematoxilina-eosina Reacción de P.A.S Piezas quirúrgicas Tricromico de Masson Col.de alcian blue Material de autopsias Impreg. de Gomori Hierro coloidal de Hale Biopsias por congelación Color. de Verhoeef Col.metacromática
Coloración de Gram Col.de carmín Best
Col.de Ziehl Neelsen Reacción de Feulgen
Coloración de Waysson Coloración de sudan
Impreg. argtca.de Grocott Reacción de Von Kossa Coloración de Wolbach Reacción de Perls Inmunohistoquímica Procesamiento de:
Biopsias
Piezas quirúrgicas
Material de autopsias Anticuerpos ligados a enzimás: Método de Biopsias por congelación inmunofosfatasa alcalina.
para estudio con sueros policlonales y anticuerpos monoclonales.
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Del Jefe del Laboratorio
Denominación del cargo:
Jefe del Laboratorio de Procedimientos Histológicos.
Naturaleza del trabajo:
Encargado de dirigir eficaz y eficientemente la planificación, organización, control y mejora, de las actividades y desempeño del Laboratorio de Procedimientos Histológicos; orientados al logro de la misión asignada y el cabal cumplimiento de los objetivos y metas establecidas por el Departamento y la Institución.
El Jefe del Laboratorio de Procedimientos Histológicos, depende administrativa y funcionalmente del Jefe del Departamento de Patología, ejerce autoridad sobre los Tecnólogos Médicos, personal profesional, Internos de Tecnología Médica, personal técnico y auxiliar asignado al Laboratorio; así como sobre el personal que desarrolla funciones administrativas.
Principales funciones y responsabilidades:
1. Coordinar efectiva y permanentemente con el Jefe del Departamento de Patología la planificación, organización, control y mejora de las actividades del Laboratorio.
2. Dirigir la organización y funcionamiento del Laboratorio de Procedimientos Histológicos, en concordancia a las necesidades y expectativas de los usuarios; así como el cumplimiento de los objetivos del Departamento y las metas operativas del Laboratorio.
3. Cumplir y hacer cumplir las normas, disposiciones, directivas y manuales vigentes del Departamento y de la Institución.
4. Cumplir y hacer cumplir las normas, manuales y procedimientos vigentes de Bioseguridad en el Laboratorio.
5. Participar activamente en la formulación del Plan Operativo y el Plan de Capacitación Anual del Laboratorio.
6. Implementar y dirigir la ejecución del Programa Total de Control de Calidad. 7. Coordinar efectiva y permanentemente con los Tecnólogos Médicos
Asistentes, Técnicos y Auxiliares la planificación, organización, control y mejora de las actividades del Laboratorio, según competencias y responsabilidades del personal.
8. Supervisar, monitorear y evaluar las actividades, tareas, procedimientos, resultados y tendencias del Laboratorio.
9. Realizar y participar en el desarrollo de actividades de Docencia e Investigación programadas por el Departamento, los Servicios o el Laboratorio.
27 Departamento de Patología.
Perfil del cargo
Para ocupar el cargo de Jefe de Laboratorio de Procedimientos Histológicos, los requisitos mínimos son:
- Ser Tecnólogo Médico, Especialidad Laboratorio Clínico y de Anatomía Patológica.
- Estar debidamente registrado en el Colegio Tecnólogo Médico del Perú. - Tener Grado Académico de Magíster o estudios de Maestría.
- Tener experiencia mínima de 5 años en Laboratorio de Procedimientos Histológicos.
- Tener capacitación en sistemas de informática básica.
Régimen laboral
Tecnólogo Médico nombrado.
Del Tecnólogo Médico
Denominación del cargo:
Tecnólogo Médico Asistente.
Funciones y responsabilidades: Técnicas:
1. Es responsable de la pieza quirúrgica, biopsia o muestras de necropsias desde su entrada al Laboratorio de Técnicas Histológicas hasta obtener el preparado histológico (lámina) en un lapso de 24-48 horas, además de verificar que las solicitudes anatomopatológicas tengan todos los datos requeridos.
2. Es responsable del control de calidad de las láminas histológicas, verificando siempre que el número de cortes corresponda a la descripción hecha en el estudio macroscópico.
3. Es responsable de los procedimientos histológicos, histoquímicos e inmunohistoquímicos.
4. Es responsable de la preparación y del control de calidad de colorantes y reactivos, para los procedimientos nombrados en el punto 4.
5. Es responsable de implementar procedimientos histológicos, e histoquímicos eficaces y eficientes para coadyuvar el diagnóstico.
6. Responsable de la preparación de piezas para museo y de material didáctico (microfotografías y slide).
28 en el almacén del servicio.
8. Es responsable de evaluar el trabajo de su personal a cargo (técnico y auxiliar) en quien puede designar funciones bajo su responsabilidad.
Administrativas:
1. Cumplir y hacer cumplir en el Laboratorio los reglamentos, normas y procedimientos vigentes en el Hospital.
2. Cumplir y hacer cumplir en el Laboratorio las normas y procedimientos vigentes de bioseguridad.
3. Poner a consideración del Jefe de Laboratorio las necesidades de personal, equipos, materiales y reactivos del Laboratorio de Procedimientos Histológicos.
4. Colaborar y coordinar con el Jefe del Laboratorio en la organización, funcionamiento del Laboratorio de Procedimientos Histológicos y además en la confección de normas que permitan mejorar el trabajo.
5. Colaborar con el Jefe del Laboratorio en la elaboración del Plan Estratégico. 6. Cuidar que las instalaciones, mobiliarios, equipos y materiales se conserven
en buen estado.
7. Informar al Jefe del Laboratorio de los problemas que se susciten por indisciplina, irresponsabilidad o deficiencia del personal a cargo.
Docentes:
1. Participar activamente en el proceso de enseñanza-aprendizaje.
2. Organizar y/o participar en reuniones científicas con las diferentes secciones de Laboratorio Central, de Emergencia y el de la U.C.I.
3. Asistir y/o participar en cursos y congresos nacionales e internacionales. 4. Participar activamente en los programas de capacitación y formación
profesional.
5. Capacitar periódicamente al personal a cargo.
Investigación:
1. Realizar investigación, participar en los proyectos que tengan propósito de efectuarlos y alentar esta actividad.
2. Presentar cuando menos un trabajo científico cada 2 años.
Perfil del cargo
Para ocupar el cargo de Tecnólogo Médico Asistente, los requisitos mínimos son:
- Ser Tecnólogo Médico, Especialidad Laboratorio Clínico y de Anatomía Patológica.
29 - Tener cursos o capacitación en Laboratorio de Procedimientos Histológicos
o en Histotecnología.
- Tener capacitación en sistemas de informática básica.
Régimen laboral:
Tecnólogo Médico nombrado o contratado.
Atender a los pacientes que vienen al laboratorio de procedimientos histológicos no es un trabajo ni una obligación, sino algo que
Eduardo Sedano G. y Ricardo Neira M.
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EQUIPOS DE UN LABORATORIO DE HISTOTECNOLOGÍA
En un laboratorio de procedimientos histológicos, es necesaria la utilización de ciertos instrumentos para llevar a cabo su normal funcionamiento. Los instrumentos más comunes en un laboratorio de procedimientos histológicos son: micrótomo, microscopio, estufa, refrigeradora, baño María, balanza, potenciómetro.
EL MICROSCOPIO Y SUS PARTES
El microscopio, es el instrumento más importante utilizado por los histotecnólogos, de los cuidados y correcto uso dependerán el éxito de las observaciones. Es función del microscopio hacer visible aquellas cosas tan pequeñas que el ojo humano no puede hacerlo, está compuesto de un sistema de lentes de suficiente magnificación y poder de resolución que aquellos elementos que están muy juntos entre sí, se puedan distinguir separados dando una imagen clara y detallada cuando se utiliza suficiente iluminación.
El aumento total de un microscopio se determina multiplicando el aumento que proporciona el ocular por el aumento que proporciona el objetivo.
Parte mecánica esta constituida por: Soporte, Cuerpo con el revólver porta-objetivos, Platina, Reguladores de enfoque: tornillos macrométrico y micrométrico.
Parte óptica, constituida por: oculares, con diferentes aumentos 5X, 10X o 15X, puede ser monocular o binocular, Objetivos secos, bajo poder 10X, alto poder 45X, Objetivo de inmersión de gran definición 96X ó 100X
Sistema de iluminación, constituido por: condensador, diafragma, Fuente de iluminación interna o externa con un espejo plano/cóncavo.
31 Centro de inclusión
Centro de enfriamiento Afilador de cuchilla Microtomo de rotación tipo Minott
Microscopio óptico
32 Refrigeradora Estufa Microondas Cocinilla eléctrica Microondas Criostato
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FACTORES DE RIESGO OCUPACIONAL EN EL LABORATORIO DE PROCEDIMIENTOS HISTOLÓGICOS
Químicos:
1. Colorantes:
a. Naturales: Hematoxilina, carmín
b. Artificiales: Escarlata de biebrich, eosina 2. Reactivos:
a. Ácidos: Ácido clorhídrico, ácido nítrico, ácido sulfúrico b. Alcalis: Hidróxido de sodio, hidróxido de amonio c. Solventes orgánicos: Xilol, alcohol, metanol d. Gaseosos: Formaldehído, amoniaco
e. Sales: Nitrato de plata
Físicos: a. Mecánicos: b. Campos electromagnéticos: c. Temperaturas extremas: d. Electricidad Biológicos: a. Parásitos:
b. Bacterias: Mycobacterium tuberculosis c. Virus: HIV, hepatitis B
d. Hongos: Ergonómicos: Psicosocial: a. Relaciones interpersonales b. Estrés c. Madures emocional
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MEDIDAS GENERALES DE SEGURIDAD
En la manipulación de productos químicos deberían observarse siempre las medidas de seguridad descritas a continuación, incluso en el caso que en la etiqueta del producto químico no haya ninguna caracterización de sustancia peligrosa.
• En todos los trabajos llevar gafas protectoras y si es posible guantes protectores. • Pipetear y medir los volúmenes de sustancias volátiles o de ácidos bajo una campana extractora y protegido con una mascara antigases, ó como mínimo realizarlo en locales bien ventilados.
• Evitar en cualquier caso el contacto con la piel, ojos y mucosas.
• Lavar con agua fría abundantemente y de forma inmediata las salpicaduras sobre la piel, lavar con polietilenglicol las sustancias lipófilicas. No utilizar nunca disolventes orgánicos debido al peligro de reabsorción.
• Los ojos que hayan entrado en contacto con sustancias cáusticas se lavan con un chorro suave de agua (ó con una ducha especial para ojos) poniendo a la persona afectada en posición horizontal y protegiendo el ojo no afectado. Abrir ampliamente los párpados y mover el ojo dañado en todas direcciones. A continuación consultar inmediatamente al oculista indicando la sustancia cáustica.
• Quitarse inmediatamente las prendas de vestir que estén impregnadas de la sustancia corrosiva.
• En caso de accidente o de malestar consultar inmediatamente al médico. • No comer, beber ó fumar en el laboratorio de procedimientos histológicos. • Protección preventiva del trabajo en el caso de sustancias y preparaciones
cancerígenas y mutágenas.
El primer deber que tenemos como persona y como profesional es para con la verdad, ya sea verdad científica, histórica o filosófica.
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RECOMENDACIONES DE SEGURIDAD EN CASO DE SISMO
Todos debemos estar prevenidos y entrenados frente a la ocurrencia de un desastre natural, y saber cual debe ser nuestra participación para protegernos, proteger a nuestra familia, a nuestros compañeros o a nuestros pacientes.
Por eso es importante que participemos solidaria y activamente en cumplir las normas establecidas por el comité de defensa civil nacional, y podamos apreciar cual será nuestro accionar y como coordinar con nuestros compañeros, la conducta a desarrollar frente a un siniestro.
Las siguientes son recomendaciones que el personal de salud, el público en general y usted señor alumno deben de seguir en caso de desastres naturales (terremotos), de tal forma que se evitara la mayor cantidad de daños en usted y los que los rodean.
¿Qué hacer antes de un sismo?:
1. Prepare un plan de protección y seguridad con tus compañeros de sección, crea una conciencia de preparación,
2. Cuando ingrese al Departamento de Patología, localice las zonas de seguridad señalizadas, así como también cuales son las salidas y escaleras de emergencia que tiene el Departamento.
3. En el Laboratorio de Procedimientos histológicos identifica que zonas corren peligro,
4. Reconoce las zonas de seguridad que deben estar señalizadas, generalmente junto a las columnas y vigas de construcción, debajo del marco de la puerta y alejado de las ventanas o puertas de vidrio.
5. Verifica que objetos pesados no estén colocados encima de muebles cuya caída pueda ocasionar daños.
6. Si hay balones de oxígeno, estos deben estar en un ambiente donde no puedan caerse y de preferencia sujetos a las paredes por bridas.
7. Reconoce los lugares de la llave de luz, donde puede cortarse el suministro, igualmente donde esta el ducto que contiene las llaves de agua del servicio. 8. Elabora una ruta de salida, reconociendo las vías que puedan llevarte a un lugar
seguro, en cada piso hay tres escaleras de salida que deben estar libres o cuyas llaves deben de estar disponibles. Las zonas más seguras de cada piso se encuentran en el pasillo entre los ascensores.
9. Ubica donde están los extintores y como se usan.
10. En el hogar, deben de tener cerca de la salida y en lugar visible, una radio portátil, pilas o baterías, linterna, galonera de agua y mantas. Todo esto en una bolsa que pueda ser transportada en forma rápida.
¿Qué hacer durante el sismo?:
1. Cuando se inicie algún desastre, mantenga la calma, solo con eso habrá conseguido mucho, y tendrá más oportunidad para asegurar su integridad.
39 todos los artefactos eléctricos que se encuentren encendidos, también si fuera el caso desconectar las conexiones de gas.
3. Conserva la calma, ubícate en un lugar seguro: colóquese debajo de las señales de seguridad o de las columnas del edificio.
4. Protégete de los objetos pesados
5. Proceda a alejarse de las ventanas, por los vidrios que puedan caer,
6. Colócate debajo de mesas, escritorios o camas fuertes, zonas seguras son los encuentros de columnas y vigas, no salgas del edificio.
7. Durante el sismo los ascensores y escaleras son sumamente peligrosos. Por ningún caso use los ascensores, ya que estos posiblemente no funcionaran, y se pueden convertir en una trampa.
8. Si el movimiento persiste proceda a dirigirse hacia las escaleras de manera ordenada, manteniendo siempre la calma.
9. El personal de salud, debe de proceder a realizar el apoyo de los pacientes que pueden valerse por si mismo para la evacuación, y realizar el apoyo del transporte en los pacientes que no lo pueden hacer.
10. La evacuación del local, debe de realizarse en forma ordenada, recuerde que si el pánico se apodera de usted perderá una gran oportunidad de ponerse a salvo. 11. Cuando este fuera del local, diríjase a lugares abiertos, o aquellos que estén
debidamente señalizados, haga un círculo y mantenga la calma.
12. Recuerde que sus familiares donde estén si siguen estas mismas recomendaciones estarán a salvo, de tal forma que cuando se inicie algún desastre PIENSE EN SU SEGURIDAD Y EN LA DE LOS QUE ESTÉN A SU ALREDEDOR, ya que en ese momento no podrá hacer nada efectivo por sus familiares que se encuentren lejos de usted.
¿Qué hacer después del sismo?
1. Luego de pasado el desastre, ayude a las brigadas de rescate, y piense que pueden existir replicas del sismo, así que no ingrese a locales con peligro de caerse.
2. Si te encuentras atrapado llama o haz ruido para recibir ayuda, en caso contrario calma a los demás. Prepárate para temblores secundarios o réplicas que ocurren luego del sismo mayor.
3. Haz una rápida inspección inicial por si hay incendios, escape de gas, heridos o gente atrapada, establece las prioridades de acuerdo a las circunstancias,
4. Si hubiese fuego trata de controlarlo, debes saber donde están los extintores y como usarlos, de no ser posible ayuda a los heridos y pacientes a salir, abandonando rápidamente el edificio por rutas seguras, que ya conoces.
5. No tocar cables, desconecta el sistema eléctrico de tu sección, ya sabes donde esta la llave.
6. No abras puertas de armarios o reposteros ya que los objetos te pueden caer encima.
7. Presta atención prioritariamente a los que más lo necesitan, impedidos físicos, niños, ancianos.
40 8. Organiza las evacuaciones de pacientes y personal, así como la reanimación,
clasificación y atención de heridos.
Es importante leer con detenimiento estas recomendaciones y prepararnos para participar. No olvidemos que esto puede ocurrir en cualquier momento y a cualquier hora, debiendo todos participar con responsabilidad y solidaridad.
Todo ser viviente proviene de un huevo (Omne vivum ex ovo)
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UN PROGRAMA DE GARANTIA DE LA CALIDAD
Para obtener los mejores resultados posibles en los preparados histológicos, un programa de garantía de la calidad deberá incluir distintos aspectos del funcionamiento adecuado del laboratorio de procedimientos histológicos del departamento de patología. Un programa de este tipo debe tener tres sistemas, que se resumen a continuación:
1. Sistema de Mejoramiento continuo de la calidad
A. Creación de círculos de calidad
B. Elección del método histológico, histoquímico o inmunohistoquímico. C. Desarrollo de un manual de procedimientos estándar
D. Programas de entrenamiento y actualización permanente para el personal del laboratorio de procedimientos histológicos del Departamento de Patología.
E. Recepción adecuada de la muestra y de las solicitudes de estudio anatomopatológico.
2. Sistema de control de calidad interno
A. Adquisición de equipos, de productos químicos y colorantes de calidad para el laboratorio.
B. Procedimientos para la detección de errores, tales como lámina problema, lámina patrón, lámina testigo, lámina blanco y sueros negativos en caso de métodos inmunohistoquímicos.
C. Mantenimiento preventivo de instrumentos y equipos.
D. Decisiones a tomar cuando se presentan resultados fuera de control.
3. Sistema de control de calidad externo.
4. Documentación de la ejecución y resultados del programa de garantía de calidad.
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ELECCIÓN DE UN MÉTODO HISTOLÓGICO O HISTOQUÍMICO
Para implementar un método histológico o histoquímico, es necesario que se estandarice al máximo posible, es cuestión de probar los métodos más asequibles a nuestra realidad para determinar el que tenga precisión en condiciones óptimas y normales de trabajo. A continuación representamos los diversos factores que influyen en la selección de un método:
Interferencias
Costo de materiales Cantidad de personal Desembolso de capital Exactitud
Flexibilidad Utilidades
Colegas Decisión final Precisión
Linealidad Entrenamiento
Láminas/hora Reparaciones
Espacio requerido Tipo de método
Velocidad del procedimiento Indicaciones del fabricante
Todos estos factores se pueden resumir en los siguientes: 1. Debe ser técnicamente simple y de buen rendimiento. 2. Los reactivos deben ser inicuos para el operador. 3. Debe ser de bajo costo.
4. Debe ser sensible, es decir, que tenga capacidad para detectar cantidades pequeñas de la muestra o sustancia que se quiere demostrar.
5. Debe tener precisión. 6. Debe tener exactitud. 7. Debe ser rápido.
Estos siete factores son los más importantes para la elección de un método "ideal".
REFERENCIA: SÁNCHEZ DE ROMERO, Doris.: TÉCNICAS INSTRUMENTALES DE
USO MÁS FRECUENTES EN EL LABORATORIO CLÍNICO Y DE INVESTIGACIÓN. Imprenta IMPOFFOT L.T. Lima-Perú, 1992. pp 39-40
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PASOS DE LAS TÉCNICAS MICROSCÓPICAS
Los pasos de las técnicas microscópicas para obtener un preparado histológico permanente (láminas) son:
1. Toma de la muestra. 2. Fijación. 3. Inclusión. 4. Microtomía. 5. Coloración. 1. TOMA DE LA MUESTRA OBTENCIÓN DE LA PIEZA
El material a utilizar puede ser extraído de los diversos animales de
laboratorio, o bien puede tratarse de material humano. Entre los animales de observación se eligen aquellos que por su semejanza con el ser humano pueden sustituirlo sin grandes diferencias, y cuya obtención y crianza puede ser fácilmente efectuada en el laboratorio.
- Muerte del animal: podemos producirla valiéndonos de un traumatismo brusco, o por la intoxicación a causa de una dosis exagerada de narcótico. Fases en la obtención de material animal:
- Extracción de los órganos: conociendo la anatomía del animal, debemos dirigirnos directamente a los órganos que nos interesan estudiar. En el caso de que estos sean varios, es conveniente extraer primero los que más fácilmente se descomponen, estos son el páncreas y la porción inferior del tubo digestivo.
- Reducción a piezas: teniendo en cuenta que para el tamaño de las piezas debemos considerar muy especialmente las cualidades del fijador a usar, hablaremos de este asunto cuando tratemos la fijación.
Una condición indispensable para la buena confección de preparaciones es el hacer correctamente la toma de tejidos. Para ello hay que observar lo siguiente: el tejido debe ser removido del conejo y colocado en el fijador lo más rápido que sea posible. La velocidad es esencial. Hay que tener el equipo de disección listo y a la mano. Planificar antes; tener las soluciones preparadas antes de matar al conejo. Tener la suficiente cantidad de fijador de modo que cada pieza de tejido quede cubierta por lo menos con una cantidad de líquido cerca a 10 veces su propio volumen (cerca de 100,00 mL de cada fijador). Marcar muy bien todos los recipientes (o cápsulas, si se usan) con lápiz o tinta indeleble.
El conejo debe ser muerto tan rápido como humanamente posible. Colocarlo en un recipiente grande con una tapa ajustada dentro de la cual se habrá colocado antes
45 papel toalla empapada con éter o cloroformo. Poner una toalla seca encima de las otras para prevenir que el conejo entre en contacto con estos líquidos. Tan pronto como el conejo deje de respirar, cortar y sacarle la médula espinal justo debajo de la cabeza. Si Ud. no esta familiarizado con la anatomía interna del ratón, debe trabajar con un compañero que pueda disecar al animal rápidamente. Poner el cuerpo de espaldas en una base de madera, estirar sus miembros y clavar pies y manos sobre la base. Humedecer la piel a lo largo de la línea ventral con agua. Pinzar la piel del abdomen con fórceps. Cortar a través de la piel y de los músculos abdominales con unas tijeras. Con la punta de las tijeras hacer un corte longitudinal anterior a lo largo de la línea ventral media, hacia y a través de la parrilla costal. Conservar la punta de las tijeras cerca de los músculos abdominales para prevenir el cortar accidentalmente los órganos abdominales.
Las células germinales y las células con alto contenido enzimático degeneran notoriamente rápido con la muerte. Por lo tanto es necesario disecar los tejidos en el orden siguiente:
a. Hígado. Cortar piezas no mayores de 5 mm de diámetro del borde del hígado. Enjuagar rápidamente estas con solución salina (cloruro de sodio al 0.7%) y colocar cada uno en su propio fijador.
b. Duodeno. Retirar el hígado a un lado, jalar el estómago y cortar el duodeno longitudinalmente en piezas de no más de 3 mm de largo. Enjugarlas rápidamente en la solución salina. Limpiar gentilmente el lumen a chorro con una pipeta llena de solución salina y colocar cada pieza en su propio fijador.
c. Testículos. Rasgar los sacos escrotales con un par de tijeras. Remover los testículos completos y dejarlos caer directamente en el fijador. Este no es el momento de darse cuenta que uno mato a un conejo hembra.
d. Corazón. Retirar el corazón, cortarlo por la mitad longitudinalmente y enjugarlo vigorosamente con solución salina para retirar los coágulos de sangre. Colocar cada pieza en su propio fijador.
Cuando corten los tejidos manipularlos cuidadosamente. No pincharlos o dañarlos con la pinza. Cortarlos con una navaja de afeitar o con unas tijeras filudas. Permitir que solo herramientas de acero inoxidable entren en contacto con los fijadores a base de cloruro de mercurio, pues son muy corrosivos. Ningún tejido debe tener un diámetro mayor de 5 mm Cuando el testículo ha sido endurecido ligeramente por el fijador (cerca de 5 minutos), rebanarlo cuidadosamente con una navaja de afeitar filuda. El testículo es un tejido sumamente blando y se quiebra fácilmente. El etiquetar cada tejido es muy importante debido a la necesidad de identificarlos durante los muchos pasos. Etiquetar cada envase con el nombre del tejido y el fijador usado. Conservar los tejidos por separado en viales marcados. Tejidos que van a ser lavados luego con agua corriente deben ser puestos en paquetes o en cápsulas disponibles comercialmente. Cuando mucho, mientras más tejidos van a
46 ser procesados se necesitan gran cantidad de envases adecuados. Frascos de comida de bebé son disponibles, tienen tapas rosca resistentes a ácidos y son descartables (especialmente los recipientes que contienen soluciones de cloruro de mercurio. Instrumentos y material de vidrio no deben entrar en contacto con el tejido viviente.
El hombre no es sujeto de experimentación, esta verdad indiscutible hace que sólo en casos excepcionales se pueda obtener material humano en condiciones de ser estudiado histológicamente. De tres fuentes puede provenir el material humano: las necropsias, las biopsias y las piezas operadas. De éstas, sólo la primera puede darnos material normal; las dos últimas proporcionarán tejidos patológicos.
Obtención de material humano:
- Necropsias: son las piezas que se obtienen de un cadáver. Para histología normal es necesario que se trate de un cadáver fresco y que no haya sido atacado por ninguna lesión, por lo menos el órgano que se quiere estudiar. - Biopsias: son trozos de tejido que se obtienen de un sujeto con vida con el objeto de estudiarlos al microscopio y efectuar un diagnóstico histopatológico. - Piezas operadas: los tejidos que han sido extraídos de las intervenciones quirúrgicas, generalmente tumores u órganos inflamados, también pueden darnos material de investigación pero, como en el caso anterior, sólo servirán para anatomía patológica.
2. FIJACIÓN
A fin de evitar la destrucción de las células por sus propias enzimas (autólisis), o por bacterias, los tejidos separados del cuerpo de un animal (especimenes) deben ser fijados, inmediatamente después de ser cortados. Este tratamiento denominado fijación tiene por finalidad endurecer los tejidos, volviéndolos más resistentes para las etapas subsiguientes de las técnicas microscópicas.
PREPARACIÓN DE SOLUCIONES FIJADORAS
Procedimiento general para preparar una solución fijadora:
1. Identificar las sustancias químicas a emplearse teniendo en cuenta su peso molecular o peso formula, densidad, peso específico, grado de pureza, presencia de contaminantes, índices de solubilidad, reacciones y su bioseguridad en su manejo.
2. Realizar los cálculos matemáticos, encontrando los pesos o volúmenes necesarios para su preparación.
3. Contar con el material y equipo necesario para pesar como espátulas, vasijas, balanza con sensibilidad adecuada.
47 4. Tener el material volumétrico necesario a usar como fiolas, pipetas, probetas, etc.
Verificar su limpieza y resistencia.
5. Preparar la solución agregando cantidades crecientes del soluto ya medido sobre una parte del volumen total (1/3 a ½) con agitación constante. Concluir la preparación enrazando con el solvente en una fiola de volumen adecuado. 6. Las soluciones pueden guardarse en frascos de plásticos o de vidrio, este ultimo de
preferencia de color caramelo. Las tapas pueden ser de rosca o esmeriladas, no usar tapas de presión por la peligrosidad que originan cuando se destapan las soluciones fijadoras, ni tapas de metal por la oxidación y corrosión que sufren. 7. Las soluciones fijadoras una vez preparadas, deben ser apropiadamente
identificados y las etiquetas deben contener la siguiente información: a. Nombre del fijador.
b. Concentración de la solución fijadora.
c. Requerimiento de almacenamiento (medio ambiente o refrigeración). d. Iniciales de la persona que preparo la solución fijadora.
e. Fecha de preparación.
f. Expectativa de duración y fecha de expiración. g. Peligros potenciales de la solución fijadora.
h. pH si se trata de una solución fijadora bufferada.
Práctica
Se encargara a cada dos alumnos la preparación de las siguientes soluciones fijadoras:
Fijador simple Solución de formol al 10%
Formol comercial al 37-40% 1 vol.
Agua corriente 9 vol.
Fijadores compuestos o mezclas fijadoras Líquido de Zenker
Dicloruro de mercurio 5.0 g
Dicromato de potasio 2.5 g
Agua corriente 100.0 mL
Ácido acético glacial 5.0 mL
Después que los tejidos son fijados en Zenker, es necesario eliminar el precipitado de mercurio tratando los cortes, primero, con lugol y posteriormente, con tiosulfato de sodio.
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Líquido de Bouin
Solución acuosa de ácido pícrico saturada 15 vol.
Formol comercial al 37-40% 5 vol.
Ácido acético glacial 1 vol.
Líquido de Regaud Dicromato de potasio al 3% 80.0 mL Formol comercial al 37-40% 20.0 mL Liquido de Da Fano Nitrato de cobalto 1,0 g Agua destilada 100,0 mL Formol comercial 15,0 mL
Para lo cual tendrán que realizar los cálculos respectivos, teniendo en cuenta el volumen indicado por sus profesores además, de la información técnica inscrita en los reactivos
Lo peor no es cometer un error, sino tratar de justificarlo, en vez de aprovecharlo como aviso providencial de nuestra ligereza o ignorancia.
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Tabla de tejidos y fijadores
(Anotar el número de piezas de tejido que ponga en cada fijador) Órgano Líquido de Zenker Líquido de Bouin Líquido de Regaud Líquido de DaFano Formol al 10% Cerebro Cerebelo Corazón Aorta Tiroides Pulmón Hígado Bazo Páncreas Riñón Glándula adrenal Próstata Testículo Lengua Esófago Estómago Intestino delgado Intestino grueso Glándula parótida Glándula sublingual Glándula submaxilar
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DESHIDRATACIÓN E INCLUSIÓN EN PARAFINA
Las piezas al ser retiradas del fijador, o después de haberlas lavado, están embebidas en agua; impidiendo que sean penetradas por la parafina. Por lo tanto, en primer lugar, debemos deshidratar los tejidos sumergiéndolos en líquidos anhidros, ávidos de agua. Para evitar alteraciones provocadas por una deshidratación brusca, se aconseja proceder escalonadamente utilizando, preferentemente, alcohol etílico de graduación creciente.
Deshidratación
Las piezas perfectamente deshidratadas se sumergen en el disolvente, xilol o toluol (este último es el que nosotros utilizamos). Al agregar el toluol, no debe aparecer ninguna turbidez. Si se pone blanco-lechoso es que la deshidratación no ha sido bien lograda y debemos repetir el baño de alcohol absoluto cerciorándonos que realmente lo sea: una gota de alcohol agregada a unos ml de toluol no debe enturbiarlo.
Impregnación por un disolvente de la parafina (aclaración)
Se sumergen las piezas en parafina (56-58º de punto de fusión), mantenida líquida en la estufa a no más de 62ºC. Después de 1 a 2 horas se renueva la parafina.
Penetración de la parafina
En moldes de papel o de metal ad-hoc (barras de Leuckart) se vierte la parafina fundida, del mismo punto de fusión de la que ha servido para la penetración. Se colocan las piezas orientándolas y luego se pone el molde en heladera.
Inclusión definitiva o formación del bloque
A los 15-30 minutos la parafina se habrá solidificado completamente, recortamos los bloques en forma de pirámide cuadrangular truncada, lo adherimos a un taquito de madera mediante una espátula calentada con la llama de un mechero y ya podemos realizar los cortes con el micrótomo.
OBTENCIÓN DE CORTES
El objeto de la inclusión que hemos descripto anteriormente es hacer posible la reducción del tejido a cortes lo suficientemente delgados como para permitir el paso de la luz para examinarlo al microscopio. Los micrótomos son instrumentos de gran precisión que nos proporcionan cortes delgados parejos y de espesor graduable. Los cortes más corrientes son los de 4-6 micrones.
Consideraremos cuatro tipos de micrótomos: el de deslizamiento, el tipo Minot, el de congelación, y el crióstato o criótomo.
- Tipo deslizamiento: en este caso la pieza queda fija mientras la cuchilla se desliza por unas guías especiales merced a un soporte al que se sujeta la cuchilla con unos tornillos.
51 - Tipo Minot: en este caso la cuchilla queda fija y es la pieza la que se desliza sujeta a una platina, ésta se desliza verticalmente cuando se hace girar una manivela. Permite obtener cortes seriados en forma de cinta.
- Tipo congelación: se parece al de deslizamiento, pero la cuchilla o navaja, en lugar de deslizarse, gira sobre un eje. Por otra parte, el aparato se caracteriza por tener un sistema de congelación colocado debajo de la platina que utiliza la expansión brusca del anhídrido carbónico contenido en un cilindro con el cual se comunica.
- Crióstato: consta de un micrótomo tipo Minot incluido en una cámara de congelación. El volante de inercia que controla la realización del corte permanece en el exterior, mientras que la cuchilla y el mecanismo de avance están situados dentro de la cámara fría (normalmente a -20º C). Pese a la disposición horizontal de la cuchilla, la obtención de secciones seriadas es posible gracias a la existencia de un sistema anti-enrollamiento que obliga al corte a deslizarse sobre la superficie de la cuchilla. En los modelos más modernos es posible optar por el corte manual o motorizado, así como enfriar rápidamente la muestra a -60º C gracias a la existencia de una placa de congelación instantánea. Frente al micrótomo convencional de congelación, el crióstato posee la gran ventaja de permitir la obtención de cortes mucho más delgados (por lo general de 4 µm y, en manos experimentadas, hasta 2 µm). Los cortes de parafina se extienden, al obtenerlos del micrótomo, en agua tibia contenida en un cristalizador. En ese mismo agua se introducen portaobjetos, previamente desengrasados, cubiertos con una capa de adhesivo de Mayer y, con la ayuda de una aguja histológica, se colocan los cortes sobre el portaobjetos y a continuación se lo levanta.
COLORACIÓN
Luego de realizado el corte, se procede a rehidratarlo para permitir su coloración.
Colorantes: reciben esta denominación las sustancias que pueden conferir color
a otros cuerpos.
Coloración: es el proceso mediante el cual un cuerpo es teñido por una sustancia
colorante, sin perder el color cuando es lavado con el disolvente utilizado al preparar la solución colorante.
Según su origen se clasifican en: Clasificación de los colorantes:
COLORANTES NATURALES: - Animales (carmín)
