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06_ Microscopía

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(1)

EL MICROSCOPIO

Tema 06 del Programa

Unidad 1 del libro

Página 3

IES Miguel de Cervantes. Murcia

(2)

HISTORIA: EL INVENTO

• Se inventó,

hacia 1610, por Galileo, según los italianos, o por Jansen, en opinión de los holandeses

(3)

EL NOMBRE

• La palabra

microscopio fue utilizada por

primera vez por los componentes de la "Accademia dei

Lincei“

(4)

GALILEO GALILEI

• 1609:Desarrolla un occhiolino o

microscopio compuesto de una lente convexa y una cóncava.

• La “Accademia dei

Linceii” era una sociedad científica a la que

pertenecía Galileo y publicaron un trabajo sobre la observación

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MALPIGHI

• Las primeras publicaciones

importantes aparecen en 1660 y 1665

cuando Malpighi

observa los capilares sanguíneos y Hooke publica su obra

(6)

ANTONY VAN

LEENWENHOEK (1632-1723)

En el siglo XVII un comerciante

holandés, utilizando microscopios simples de fabricación propia describió por primera vez protozoos,

bacterias,

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CARACTERÍSTICAS DEL

MICROSCOPIO DE LEEUWENHOEK

• El primitivo

microscopio de

Leeuwenhoek tenía dos lupas

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(12)

ERNST ABBE

• Las mejoras mas importantes de la óptica surgieron en 1877 cuando Abbe publica su teoría del

(13)

CALR ZEISS

• Mejora la

microscopía de inmersión

sustituyendo el

agua por aceite de cedro lo que

(14)

FUNDAMENTO DE LA MICROSCOPÍA

• Cuando el observador se acerca el objeto se agranda

• Pero a menos de 25 cm no se ve con

claridad

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(16)

EVOLUCIÓN DEL MICROSCOPIO

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ESQUEMA DEL MICROSCOPIO

• Un tubo cilíndrico aloja el sistema óptico

ocular/objetivo. Una

platina de original diseño permite observar las

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(19)

PARÁMETROS ÓPTICOS

• Aumento

• Poder de resolución

• Nº de campo

• Profundidad de foco

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AUMENTO

• Se calcula

multiplicando el aumento del

(21)

PODER DE RESOLUCIÓN

• Distancia si dos

puntos se distinguen • Mayor, cuando menor

es la longitud de onda

• Mayor, cuanto mas grande es la apertura numérica

(22)

Apertura numérica (A.N.) de un objetivo

El producto de n sen a

constituye una las características más importantes de la lente.

Los fabricantes marcan el número de la apertura numérica en la montura del objetivo junto con el aumento.

La calidad de un objetivo es tanto mayor cuanto más elevada es su apertura

numérica.

Es aconsejable situar el aumento total entre 500 y 1000 veces el valor de A.N.

Ejemplo: Para un objetivo de aumento 40X  y A.N. 0,65  debemos usar un ocular que logre valores comprendidos entre los siguientes aumentos:

500· 0,65=325 aumentos 1000·0,65=650 aumentos

Debemos por tanto emplear oculares de 10X y 15X

(23)

Número de campo

• Es el diámetro de la imagen observada a través del

ocular,

expresado en milímetros

(24)

PROFUNDIDAD DE CAMPO

Es inversamente proporcional al cuadrado de la apertura numérica

(A.N.)

Cuanta mayor sea la Profundidad de campo, tanto menor

(25)

CONTRASTE

• Diferencia de

absorción de luz entre el objeto y el medio

• Puede

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PARTE MECÁNICA QUE SE PUEDE DESMONTAR

Estativo

Oculares

Objetivos Condensador

Cabezal

(29)

SISTEMA DE SOPORTE O ESTATIVO

Píe

Brazo Tubo

(30)

SISTEMA DE AJUSTE (1)

Anillo de ajuste de los

oculares Tornillo que permite mover el cabezal Tornillos reguladores de la platina Tornillos del

condensador

(31)

SISTEMA DE ENFOQUE

Tornillo micrométrico

Tornillo macrométrico

(32)

PLATINA

(33)

PARTE ÓPTICA

• Sistema de iluminación: fuente de luz, condensador y diafragma

(34)

SISTEMA DE ILUMINACIÓN: FUENTE DE LUZ

• Suele ser una

lámpara halógena de intensidad graduable

• Se enciende y apaga con un interruptor

• En el exterior puede tener un filtro

Interruptor y graduación de la luz

(35)

CONDENSADOR Y DIAFRAGMA

• Condensador:

concentra la luz de la lámpara en un punto de la preparación

• Diafragma o iris (está dentro del

condensador):si se cierra mejora el

contraste, pero

(36)

LENTES: OBJETIVOS

• Están colocados en el revolver

• Tienen un sistema de amortiguación

• Un anillo coloreado indica los aumentos

(37)

OBJETIVOS

Azul 40x

Amarillo 10x

Rojo 4x

(38)

Tipos de objetivos.

(a) Objetivo acromático que contiene una lente frontal y dos pares internos

(b) (b) objetivo semi-apocromático, con cuatro pares de lentes

(39)

LENTES: OCULARES

Ajuste de la distancia interpupilar

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ACEITE DE INMERSIÓN

• Hoy no son de

madera de cedro, sino sintéticos

• Los hay de baja, media y alta

viscosidad

• Su empleo es

(44)

MANEJO DEL MICROSCOPIO

• No poner la

preparación al revés

• Regular la luz a intensidad media

• Ajustar condensador y diafragma al medio

• Empezar por poco aumento

• Mirando por fuera subir la platina

• Enfocar y ajustar

• Pasar al siguiente aumento y enfocar

• Al acabar retirar la preparación

(45)

CONSERVACIÓN DEL MICROSCOPIO

• Ponerle su funda al guardarlo

• Limpieza de lentes con papel de gafas • El exceso de

disolvente al limpiar las lentes desgasta el cemento de unión.

(46)

TIPOS DE MICROSCOPIOS Tipos de microscopios Microscopio óptico Microscopio electrónico •Microscopio óptico Simple •Microscopio óptico Compuesto

•M.O. Normal

•Campo oscuro

•Contraste de fases

•Fluorescencia

•Transmisión (TEM)

•Barrido (SEM)

Lupa

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MICROSCOPÍA DE CAMPO OSCURO

(50)

MICROSCOPÍA DE

CONTRASTE DE FASES

(51)
(52)

Microscopio electrónico.

ERNST RUSKA

• El microscopio electrónico de transmisión

(T.E.M.) consiguió aumentos de

100.000 X. Fue desarrollado por Max Knoll y Ernst Ruska en

(53)

PRIMER MICROSCOPIO ELECTRONICO

• Utilizó un haz de

electrones en lugar de luz para enfocar la muestra.

• Posteriormente, en 1942 se desarrolla el microscopio

(54)
(55)
(56)

MICROSCOPIO

(57)

Otros microscopios

Otros microscopios

Microscopio de Fuerza Microscopio de Fuerza

Atómica

Atómica (AFM, de sus siglas en

inglés Atomic Force Microscope):

Es de tipo mecano-optico.

(58)

Otros microscopios

Otros microscopios

Microscopio de Fuerza Atómica

Microscopio de Fuerza Atómica (AFM, de sus siglas en inglés Atomic Force

Microscope):

• Es un instrumento mecano-óptico capaz de detectar fuerzas del orden de los piconewtons. Al rastrear una muestra, es capaz de registrar continuamente

su topografía mediante una sonda o punta afilada de forma piramidal o cónica. La sonda va acoplada a un listón o palanca microscópica muy flexible de sólo unos 200 µm

• Es similar al Microscopio de Efecto Túnel, pero a

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(60)
(61)
(62)
(63)

Microscopio confocal:

• Utiliza iluminación

puntual y un "pinhole" espacial (colimador de orificio delimitante) en un plano óptico

conjugado frente al detector para eliminar la información que

está fuera del plano focal.

• La muestra debe ser

- Es un microscopio que emplea una técnica óptica de imagen para incrementar el contraste y/o reconstruir imágenes

(64)

Microscopio confocal:

• Puesto que sólo se ilumina un punto cada vez en el microscopio

confocal, se requiere una exploración (scanning) en el espécimen para

obtener imágenes bi o tridimensionales.

• Se impone la

“Microscopía Confocal Laser de Barrido”.

-Sólo la luz que está dentro de este plano puede ser

(65)

Microscopio confocal:

• (a) grano de polen

• (b) muestra de hígado de ratón

• (c) corte grueso de

corteza cerebral de rata.

Se emplearon varios marcadores fluorescentes.

• (d) auto fluorescencia de una porción de raíz de helecho.

• Tomado de Claxton N, Fellers T, Davidson M. (2008). Laser Scanning Confocal Microscopy (119). En

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Microscopio confocal:

• Micrografías comparativas entre las técnicas de fluorescencia con iluminación convencional o de campo amplio (serie superior, a, c, e) y la iluminación en microscopía confocal (serie inferior b, d, f).

Izquierda: hipotálamo de ratón

Centro: músculo

liso de rata.

(marcadas con diversos fluorocromos)

Derecha: Grano

de polen de girasol,

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Microscopia confocal en dermatología y oftalmología.

http://www.grupodedermatologia.es/web/detalleCV/116/6/

microscopia_confocal_laser_examen_lunares_cancer.aspx

http://www.dermatolarg.org.ar/index.php/dermatolarg/article/viewArticle/632

(68)

Microscopio de fuerza atómica:

Imagen tomada con microscopio de fuerza atómica:

(69)
(70)

M.E. DE BARRIDO

(71)
(72)

Microscopio óptico

(73)

FIN

FIN

Referencias

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