EL MICROSCOPIO
Tema 06 del Programa
Unidad 1 del libro
Página 3
IES Miguel de Cervantes. Murcia
HISTORIA: EL INVENTO
• Se inventó,
hacia 1610, por Galileo, según los italianos, o por Jansen, en opinión de los holandeses
EL NOMBRE
• La palabra
microscopio fue utilizada por
primera vez por los componentes de la "Accademia dei
Lincei“
GALILEO GALILEI
• 1609:Desarrolla un occhiolino o
microscopio compuesto de una lente convexa y una cóncava.
• La “Accademia dei
Linceii” era una sociedad científica a la que
pertenecía Galileo y publicaron un trabajo sobre la observación
MALPIGHI
• Las primeras publicaciones
importantes aparecen en 1660 y 1665
cuando Malpighi
observa los capilares sanguíneos y Hooke publica su obra
ANTONY VAN
LEENWENHOEK (1632-1723)
En el siglo XVII un comerciante
holandés, utilizando microscopios simples de fabricación propia describió por primera vez protozoos,
bacterias,
CARACTERÍSTICAS DEL
MICROSCOPIO DE LEEUWENHOEK
• El primitivo
microscopio de
Leeuwenhoek tenía dos lupas
ERNST ABBE
• Las mejoras mas importantes de la óptica surgieron en 1877 cuando Abbe publica su teoría del
CALR ZEISS
• Mejora la
microscopía de inmersión
sustituyendo el
agua por aceite de cedro lo que
FUNDAMENTO DE LA MICROSCOPÍA
• Cuando el observador se acerca el objeto se agranda
• Pero a menos de 25 cm no se ve con
claridad
EVOLUCIÓN DEL MICROSCOPIO
ESQUEMA DEL MICROSCOPIO
• Un tubo cilíndrico aloja el sistema óptico
ocular/objetivo. Una
platina de original diseño permite observar las
PARÁMETROS ÓPTICOS
• Aumento
• Poder de resolución
• Nº de campo
• Profundidad de foco
AUMENTO
• Se calcula
multiplicando el aumento del
PODER DE RESOLUCIÓN
• Distancia si dos
puntos se distinguen • Mayor, cuando menor
es la longitud de onda
• Mayor, cuanto mas grande es la apertura numérica
Apertura numérica (A.N.) de un objetivo
• El producto de n sen a
• constituye una las características más importantes de la lente.
• Los fabricantes marcan el número de la apertura numérica en la montura del objetivo junto con el aumento.
• La calidad de un objetivo es tanto mayor cuanto más elevada es su apertura
numérica.
• Es aconsejable situar el aumento total entre 500 y 1000 veces el valor de A.N.
Ejemplo: Para un objetivo de aumento 40X y A.N. 0,65 debemos usar un ocular que logre valores comprendidos entre los siguientes aumentos:
500· 0,65=325 aumentos 1000·0,65=650 aumentos
Debemos por tanto emplear oculares de 10X y 15X
Número de campo
• Es el diámetro de la imagen observada a través del
ocular,
expresado en milímetros
PROFUNDIDAD DE CAMPO
Es inversamente proporcional al cuadrado de la apertura numérica
(A.N.)
Cuanta mayor sea la Profundidad de campo, tanto menor
CONTRASTE
• Diferencia de
absorción de luz entre el objeto y el medio
• Puede
PARTE MECÁNICA QUE SE PUEDE DESMONTAR
Estativo
Oculares
Objetivos Condensador
Cabezal
SISTEMA DE SOPORTE O ESTATIVO
Píe
Brazo Tubo
SISTEMA DE AJUSTE (1)
Anillo de ajuste de los
oculares Tornillo que permite mover el cabezal Tornillos reguladores de la platina Tornillos del
condensador
SISTEMA DE ENFOQUE
Tornillo micrométrico
Tornillo macrométrico
PLATINA
PARTE ÓPTICA
• Sistema de iluminación: fuente de luz, condensador y diafragma
SISTEMA DE ILUMINACIÓN: FUENTE DE LUZ
• Suele ser una
lámpara halógena de intensidad graduable
• Se enciende y apaga con un interruptor
• En el exterior puede tener un filtro
Interruptor y graduación de la luz
CONDENSADOR Y DIAFRAGMA
• Condensador:
concentra la luz de la lámpara en un punto de la preparación
• Diafragma o iris (está dentro del
condensador):si se cierra mejora el
contraste, pero
LENTES: OBJETIVOS
• Están colocados en el revolver
• Tienen un sistema de amortiguación
• Un anillo coloreado indica los aumentos
OBJETIVOS
Azul 40x
Amarillo 10x
Rojo 4x
Tipos de objetivos.
(a) Objetivo acromático que contiene una lente frontal y dos pares internos
(b) (b) objetivo semi-apocromático, con cuatro pares de lentes
LENTES: OCULARES
Ajuste de la distancia interpupilar
ACEITE DE INMERSIÓN
• Hoy no son de
madera de cedro, sino sintéticos
• Los hay de baja, media y alta
viscosidad
• Su empleo es
MANEJO DEL MICROSCOPIO
• No poner la
preparación al revés
• Regular la luz a intensidad media
• Ajustar condensador y diafragma al medio
• Empezar por poco aumento
• Mirando por fuera subir la platina
• Enfocar y ajustar
• Pasar al siguiente aumento y enfocar
• Al acabar retirar la preparación
CONSERVACIÓN DEL MICROSCOPIO
• Ponerle su funda al guardarlo
• Limpieza de lentes con papel de gafas • El exceso de
disolvente al limpiar las lentes desgasta el cemento de unión.
TIPOS DE MICROSCOPIOS Tipos de microscopios Microscopio óptico Microscopio electrónico •Microscopio óptico Simple •Microscopio óptico Compuesto
•M.O. Normal
•Campo oscuro
•Contraste de fases
•Fluorescencia
•Transmisión (TEM)
•Barrido (SEM)
Lupa
MICROSCOPÍA DE CAMPO OSCURO
MICROSCOPÍA DE
CONTRASTE DE FASES
Microscopio electrónico.
ERNST RUSKA
• El microscopio electrónico de transmisión
(T.E.M.) consiguió aumentos de
100.000 X. Fue desarrollado por Max Knoll y Ernst Ruska en
PRIMER MICROSCOPIO ELECTRONICO
• Utilizó un haz de
electrones en lugar de luz para enfocar la muestra.
• Posteriormente, en 1942 se desarrolla el microscopio
MICROSCOPIO
Otros microscopios
Otros microscopios
• Microscopio de Fuerza Microscopio de Fuerza
Atómica
Atómica (AFM, de sus siglas en
inglés Atomic Force Microscope):
Es de tipo mecano-optico.
Otros microscopios
Otros microscopios
Microscopio de Fuerza Atómica
Microscopio de Fuerza Atómica (AFM, de sus siglas en inglés Atomic Force
Microscope):
• Es un instrumento mecano-óptico capaz de detectar fuerzas del orden de los piconewtons. Al rastrear una muestra, es capaz de registrar continuamente
su topografía mediante una sonda o punta afilada de forma piramidal o cónica. La sonda va acoplada a un listón o palanca microscópica muy flexible de sólo unos 200 µm
• Es similar al Microscopio de Efecto Túnel, pero a
Microscopio confocal:
• Utiliza iluminación
puntual y un "pinhole" espacial (colimador de orificio delimitante) en un plano óptico
conjugado frente al detector para eliminar la información que
está fuera del plano focal.
• La muestra debe ser
- Es un microscopio que emplea una técnica óptica de imagen para incrementar el contraste y/o reconstruir imágenes
Microscopio confocal:
• Puesto que sólo se ilumina un punto cada vez en el microscopio
confocal, se requiere una exploración (scanning) en el espécimen para
obtener imágenes bi o tridimensionales.
• Se impone la
“Microscopía Confocal Laser de Barrido”.
-Sólo la luz que está dentro de este plano puede ser
Microscopio confocal:
• (a) grano de polen
• (b) muestra de hígado de ratón
• (c) corte grueso de
corteza cerebral de rata.
Se emplearon varios marcadores fluorescentes.
• (d) auto fluorescencia de una porción de raíz de helecho.
• Tomado de Claxton N, Fellers T, Davidson M. (2008). Laser Scanning Confocal Microscopy (119). En
Microscopio confocal:
• Micrografías comparativas entre las técnicas de fluorescencia con iluminación convencional o de campo amplio (serie superior, a, c, e) y la iluminación en microscopía confocal (serie inferior b, d, f).
Izquierda: hipotálamo de ratón
Centro: músculo
liso de rata.
(marcadas con diversos fluorocromos)
Derecha: Grano
de polen de girasol,
Microscopia confocal en dermatología y oftalmología.
http://www.grupodedermatologia.es/web/detalleCV/116/6/
microscopia_confocal_laser_examen_lunares_cancer.aspx
http://www.dermatolarg.org.ar/index.php/dermatolarg/article/viewArticle/632
Microscopio de fuerza atómica:
Imagen tomada con microscopio de fuerza atómica:
M.E. DE BARRIDO
Microscopio óptico