Persistencia de anticuerpos y virus de la gastroenteritis, transmisible de los cerdos en condiciones subtropicales

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(1)PERSISTENCIA DE ANTICUERPOS Y VIRUS DE LA GASTROENTERITIS TRANSMISIBLE DE LOS CERDOS EN CONDICIONES SUBTROPICALES* Camilo Rueda H.** Guillermo González G.. 2. REVISIÓN DE LITERATURA. 1. INTRODUCCIÓN. La presentación de la gastroenteritis transmisible (TGE) en 1973, constituyó un grave problema para la industria porcina, especialmente por la alta morta lidad en lechones. Después del brote no se ha vuelto a reportar la enfermedad,. quedando el interrogante acerca de la permanencia y actividad del virus TGE por largo tiempo en condiciones de campo. Los objetivos generales de este traba jo consisten en demostrar la posible presencia del virus TGE en cerdos que. La. gastroenteritis. transmisible. del. cerdo fue notificada por primera vez en. el año de 1946 (Doyle y Hutching, 1946). La causa de la enfermedad se le atribuye a un Coronavirus (Bohl, 1970 y Caletti et al, 1968). El 90% de los casos ocurre en épocas de invierno cuando el frío es intenso; el virus es muy sensible al calor y a la sequía. Poca evidencia existe acerca de cerdos portadores (Haelterman, 1962 y Pensaert, 1971); investigaciones recientes (Underdahl et al, 1974) informan sobre el aislamiento del virus a partir de pulmones de cerdos. sufrieron la enfermedad y que habita en el medio ambiente subtropical; es proba. aparentemente sanos.. ble que el virus permanezca infectante en cerdos portadores crónicos y que bajo condiciones favorables puedan oca. El diagnóstico por laboratorio se hace por seroneutralización (Bahl, 1970),. sionar una nueva epizootia.. in munofluorescencia (Konishi y Bankosuski, 1967), y otras técnicas de. Contribución del Programa de Estudios para Graduados en Ciencias Agrarias UN-ICA, y de la División de Ciencias Veterinarias. Adaptación y resumen de la Tesis de Grado presentada por el. autor principal al Programa para Graduados, como requisito parcial para optar al título de Magister Scientiae.. Respectivamente:. Médicos. Veterinarios,. M.S.. Laboratorio. de. Investigaciones. Médicas. Veterinarias (LIMV), Apartado Aéreo 29743, Bogotá.. Revista ICA - Bogotá (Colombia) Vol. XII - No. 2 Junio 1977. pp. 165-175. CK. ISSN 0018 - 894. 165.

(2) menor uso (Bohac et al, 1975 y Calletti et al, 1968); se consideran patognomó-. faringe,. tráquea, pulmón, linfonódulos. mesentéricos e intestino.. nicas las lesiones microscópicas del intes. tino delgado (Bohl et al, 1966). Los títulos de anticuerpos son bajos o nulos al cabo de un año después de un brote (Pensaert, 1971). Los lechones son pro tegidos por la inmunidad lactogénica (Haelterman, 1962). El aislamiento del. Se empleó una cepa estándar de virus TGE, suero hiperinmune anti-TGE pro cedentes del. National Animal Diseases. Center, de Ames, Iowa.. virus durante un brote se puede hacer a. partir de órganos, secreciones y de mate ria fecal (Kemeny et al, 1975; Konishi y Bankosuski, 1967; y Underdahl et al, 1974). El cultivo del virus se hace en líneas celulares, especialmente de tes tículo, riñon y tiroides porcino (Bohl, 1970 y Haradaeía/., 1963).. Se usaron células de testículo porcino. (ST) y de riñon porcino (PK-15) sumi nistradas por la Sección de cultivos celu lares del LIMV.. Los anticuerpos circulantes se deter minaron por la técnica de microseroneutralización en placas plásticas desechables* con 96 celdas a fondo plano para cultivo celular. Esta técnica se usa en el. 3. MATERIALES Y MÉTODOS. El trabajo se realizó en dos etapas: la primera se llevó a cabo durante los 12 meses siguientes al brote de TGE. Para determinar anticuerpos circulantes se sangraron 50 cerdos adultos, que habían sufrido la enfermedad cuando tenían cuatro meses o más de edad, y 80 cer. dos jóvenes, de los cuales 18 nacieron entre dos y tres meses antes del brote,. dos que nacieron durante el brote y 60 que nacieron entre uno y seis meses después del mismo (estos no sufrieron TGE).. LIMV para el virus aftoso**,modificada y estandarizada para el virus TGE***. Las muestras recolectadas en hisopos se procesaron para tratar de aislar el virus TGE; los extractos se trataron con. Penicilina, Estreptomicina y Micostatin. Con los tejidos de los cerdos sacrificados se formaron siete grupos con muestras de la misma categoría (amígdalas, farin ges, etc.), las cuales se procesaron de acuerdo a métodos descritos (Witte, 1971). Los tejidos almacenados en congela ción fueron cortados en un micrótomo. Después de dos años de haber com probado el último caso clínico del brote se realizó la segunda etapa en la cual se. de congelación, procesados posterior mente por la técnica de anticuerpos fluorescentes.. tomaron muestras de sangre, secreciones. nasales y orales y materia fecal, por medio de hisopos estériles en 40 cerdos adultos que habían sufrido TGE en 1973. Veinte cerdos fueron sacrificados. para recolectar muestras de amígdalas,. Los frotis dejados por los hisopos en láminas portaobjetos, los cortes de teji dos por congelación y los cultivos celula res en laminillas fueron expuestos a la acción del conjugado anti-TGE; se hizo. Limbro Chemical Co., Inc. New Haven, Conn. (USA). Gutiérrez, A. 1975. Comunicación personal. Ocampo H., M.S. 1975. Comunicación personal.. 166.

(3) control de la fluorescencia con muestras. 4. RESULTADOS. positivas y negativas para TGE.. Los títulos de anticuerpos de anima Las muestras que produjeron ECP y fiuorescencia específica, fueron prepa radas según técnica de Witte y Easterday (1968) e inoculados oralmente en cinco lechones entre 4 y 42 días de edad; dos lechones sin inocular fueron mantenidos. como controles. Los siete lechones fue. ron sangrados previamente para consta tar la ausencia de anticuerpos TGE. Se anotaron los síntomas clínicos, signos postmortem y lesiones histopatológicas. les jóvenes mostraron niveles bajos en la mayoría de los casos (menores de 1:32); pocos de ellos presentaron niveles su periores a 1:64 (Tabla 1). Los títulos de los cerdos adultos que habían sufrido la enfermedad están dados en la Tabla 2.. Se puede apreciar niveles desde 1:64 hasta 1:1024, con predominio de 1:256 (22,5%).. de los lechones que enfermaron y/o 4.1. Efecto citopático y fluorescencia en muestras de hisopos. murieron.. Los cerdos inoculados que sobrevi vieron permanecieron en observación durante tres semanas para determinar anticuerpos circulantes causados por la enfermedad.. Se. recolectaron. muestras. nasales, orales y rectales y tejidos de pulmón e intestino delgado de los cerdos enfermos y/o muertos para preparar extractos; cada extracto se inoculó en. células ST para determinar el ECP y detectar fluorescencia específica. Se hicieron. cultivos de. cada. extracto. en. tubos Leyhton adicionando suero hiperinmune anti-TGE y se dejaron cultivos celulares sin el extracto problema como controles negativos. Se recolectaron muestras de los tejidos de los lechones muertos para el estudio de lesiones his topatológicas.. El efecto citopático (ECP) de las muestras en hisopos se empezó a detec tar a partir del segundo y tercer pase en línea celular, con la excepción de un solo caso en el cual se observó a partir del primer inoculo. El 16,6% de las muestras produjeron independientemente ECP en células ST y 13,7% en células PK-15. El mayor porcentaje de ECP se detectó a partir de muestras nasales (24,9%) siguiendo las de origen rectal (8,2%) y finalmente las de origen oral (2,7%). El ECP observado se caracterizó por pigmentación celular, granulación, sincitios, vacuolización, redondeamiento. con formación de grupos irregulares y desprendimiento de la monocapa. No se detectó fluorescencia en ninguno de los cultivos que mostraron ECP ni en los. Este trabajo se efectuó en tres por querizas situadas cerca a los municipios de Cali y Palmira en las cuales se presen. que aparentemente permanecieron nor. tó el brote de TGE en 1973. Las técni. orales y rectales tomadas en cerdos adul. cas de. tos.. laboratorio. se. realizaron en el. Laboratorio de Investigaciones Médicas Veterinarias (LIMV) del ICA en Bogotá. Los sueros de los cerdos trabajados durante la primera etapa fueron cedidos por el Programa de Salud Animal del CIAT.. males; tampoco se detectó fluorescencia en los frotis de. las. muestras nasales,. Los casos más numerosos de inmuno-. fluorescencia en cortes de tejidos conge lados se presentaron en tráquea, pulmón e intestino delgado (Tabla 3). 167.

(4) Toma de cerdos cuando. Edad de los. 4 1/2. 4. 4. 3. 2 1/2. TGE al 1 1/2 mes. Nacieron 1 MDB. TGE a los dos meses. Nacieron en época TGE. TGE a los tres meses. TGE a los 2lA. 1. 3. 1. 32. 64. Títulos* 128. 25. 11,. 9. Número de cerdos por título de antic. 16. TABLA 1. Títulos de anticuerpos TGE y relación con la edad de cerdos jóvenes en sueros recolectados después. muestra. el. 4 1/2 Nacieron 2 1/2 MDB. brote TGE. MDB. 5 1/2 TGE a 1 MDB. 1. 5 1/2 Nacieron 3 MDB. 3. 1. 6. Nacieron 1 MDB. meses. 6 1/2. 1. 1. 1. 1,25. Nacieron 4 MDB. 4. 1,25. 9. 8. 5,0. Nacieron 5 MDB. 15. 10,0. 11. 9. 18,75. 1. 10. 11,5. Nacieron 5 MDB. 12,5. 12 Totales. Por ciento. MDB = Meses después del brote.. * = Título expresado como el recíproco de la dilución..

(5) TABLA 2. Títulos de anticuerpos TGE en sueros recolectados a los dos años o másdespués del brote en cerdos adultos que sufrieron la enfermedad. Títulos!* I TDB. (meses). 2. 4. 8. 16. 24. 25. 1. 1. 26 Totales Por ciento. 1. 1. 32. 64. 128. 256. 1. 3. 2. 5. 3. 512. 1. 2. 1. 1. 1. 3. 4. 3. 2,5. 2,5. 2,5. 7,5. 10. 7,5. 1024. 1. 1. 2. 3. 1. 4. 4. 2. 4. 9. 7. 6. 10. 22,5. 17,5. 15,5. negativos Totales 13 13. 1. 14 1. 2,5. 40. 100. TDB — Tiempo después del brote.. (*) = Título expresado como el recíproco de la dilución.. TABLA 3. Casos positivos a inmunofluorescencia en cortes de tejidos congelados. Tejido. Casos Casos procesados positivos. Por ciento. Identificación de los cerdos positivos. Amígdala. 20. 2. 10. 187, 188. Faringe. 20. 3. 15. 188, 189, 190. Tráquea. 20. 6. 30. 187, 191, 192, 193, 194, 195. Pulmón. 20. 8. 40. 156, 176, 179, 187, 190, 191, 192, 195. Linfonódulo. 20. 2. 10. 192, 193. Duodeno. 20. 3. 15. 156, 179, 188. Yeyuno. 20. 4. 20. 156, 179, 184, 185. íleon. 20. 6. 30. 179, 184, 188, 190, 193, 194. Ciego. 20. 3. 15. 187, 181, 194. Colon. 20. 1. 5. Recto. 20. 3. 15. 195. 152, 189, 190. 169.

(6) de dichos grupos permitió descubrir a dos cerdos como posibles portadores del virus TGE (Tabla 5); estos resultados se. 4.2. Efecto citopático y fluorescencia. producidos por extractos de tejidos en inoculación celular. relacionaron con los resultados obteni. dos a partir de muestras de hisopos,. En la Tabla 4 se encuentran los datos. referentes al ECP y de fluorescencia. encontrándose. producidos por los extractos de tejidos. ECP de muestras nasales, pero no se detectó fluorescencia específica. Los anticuerpos circulantes para ambos cer dos a los dos años después del brote fueron de 1:64 v 1:16 (Tabla 5).. en células ST y PK-15. Solamente dos grupos de extractos produjeron ECP y fluorescencia específica. El cultivo inde pendiente de cada una de las muestras. relación directa con el. TABLA 4. Efecto citopático producido por extractos de tejidos inoculados en cultivos celulares ST y PK-15. Inmunofluorescencia en ST. Grupo. F. 2. 1. 3. Amígdala Faringe Tráquea. 4. Pulmón. 5. Linfonódulo. 6. Int. delgado. 7. Int. grueso. 8 10. Amígdala Faringe Tráquea. 11. Pulmón. 12. Linfonódulo. 1. 2. 9. 13. Int. delgado. 14. Int. grueso. 15. Amígdala Faringe Tráquea. 16 17 18 19 20 21. Pulmón. Linfonódulo. Int. delgado Int. grueso. —. 4. 3. —. -. —. —. —. —. -. —. -. -. -. -. —. —. 4. 4. 4. 2. —. —. —. 3. —. -. —. 3. —. -. —. —. —. —. —. —. _. —. -. 4. 3. -. —. 4 —. —. 156, 189, 190, 192, 193.. *~. -. -. — ~. —. —. —. —. +. —. -. 4. 2. —. 4. 4. 2 -. 176, 178, 179, 187, 188.. 4. — —. 4. 3. 3. 3. 3. 3. 4. 2. -. 2. -. -. -. —. —. -. —. —. —. —. —. —. -. -. —. —. 4. —. —. 4. —. —. 182, 184, 185, 186, 194.. 3. —. —. -. 4. —. —. -. -. -. -. -. 3. -. —. —. —. 4. 4. 3. —. —. -. -. —•. —. —. —. 1. 1. -. +. 4. —. —. -. -. —. _. -. —. cerdos sacrificados. 3. 2. 1. -. —. —. —. 3. _. —. -. 4. 4* —. Identidad de los. Pases en PK. Pases en ST. Tejido. ~. 22. Amígdala. 23 24. Faringe Tráquea. 25. Pulmón. 26. Linfonódulo. 27. Int. delgado Int. grueso. 28. *. -. -. —. —. —. —. _ .. -. -. —. -. -. 4. 4. 4. 4. —. 4. -. -. —. —. = Número de tubos con efecto citopático (ECP).. F = Fluorescencia; + = Positivo; —= Negativo.. 170. —. —. -. -. -. ~. —. —. —. —. —. —. —. -. —. -. —. -. -. —. -. —. —. —. —. 152, 177, 181, 191, 195..

(7) TABLA 5. Efecto citopático e inmunofluorescencia en cultivo celular ST causado por las suspensiones pulmonares 4 y 11 de tejidos congelados. Relación con anticuerpos circulantes.. Grupo. Identificación. Granja. 4. 11. + =. Efecto. Fluorescencia. +. Anticuerpos Circulantes. Citopafico. de los cerdos. +. 1.64. 156. A. 189. B. 190. B. 192. B. 193. B. 176. B. 177. B. -. -. 1:64. 184. A. -. -. 1:64. 187. B. 188. B. -. -. +. -. -. -. +. +. -. 1:8. 1:512. -. 1:64. -. 1:64. —. +. —. 1:64. 1:16 1:8. Positivo. — = Negativo. 4.3. Reproducción de la enfermedad y recuperación del virus. tras nasales, orales y rectales de los cerditos enfermos produjeron ECP y fluo rescencia específica en células ST (Tabla. Los lechones inoculados con los ex. 6). No se detectó ECP ni fluorescencia. tractos pulmonares de los cerdos 156 y 187, mostraron síntomas clínicos y le siones macroscópicas e histopatológicas compatibles con TGE. Los cortes de teji dos congelados del intestino delgado mostraron fluorescencia específica. Los extractos de pulmón e intestino obteni dos de lechones muertos y de las mues. en los cultivos controles. La fluorescen. cia en cortes de pulmón e intestino de los cerdos inoculados y el ECP y la fluorescencia producida por sus respecti vos extractos, fueron positivos en todos los casos, con una sola excepción nega tiva para la técnica de anticuerpos fluo rescentes en células ST. 171.

(8) TABLA 6. Efecto citopático y fluorescencia producidos por muestras nasales, orales y rectales de le chones inoculados con extractos pulmonares de los cerdos adultos 156 y 187. Efecto Citopático. Identidad. +. 1. 187. 2. 156. 3. 187. +. 4. 156. +. 5. 187. +. 4. •. Totales. -. Control. -. 7. Control. -. *. Nasal. O = Oral. R =. -. O. N. +. -. +. -. +. +. +. +. -. +. +. +. -. 1. 4. 4. -. -. -. -. -. -. R. -. -. +. -. 6. R. 0. N. Lechones. N =. Fluorescencia. Inoculo {*). de los. -. +. -. +. +. 0. -. -. -. -. 4. -. -. Rectal.. = El número del inoculo corresponde al número de los cerdos adultos sacrificados, suministrado. por vía oral. + = Positivo. — = Negativo. 5. DISCUSIÓN. Los resultados de los títulos de anti. cuerpos, Tabla 1, en los sueros de los cerdos que nacieron después del brote de TGE, sugieren la época en la cual actuó el estímulo inmunológico (cerdos que nacieron entre uno y cinco meses después del brote).. suponer que la cepa del virus TGE que estaría actuando no sea patogenicidad suficiente para reproducir la enfermedad. Si esto es así, debe existir algún factor especial que impide la presentación de una nueva epizootia; se sabe que el virus es muy sensible a la sequía y al calor (Pensaert, 1971).. En los países estacionales, el calor es Según experiencias anteriores (Pensaert, 1971), los títulos de anticuer. pos son bajos en cerdos después de un año de haber sufrido la enfermedad. En. el presente trabajo, algunos títulos de anticuerpos son altos en sueros recolec tados aún después de dos años o más (Tabla 2). Los anteriores datos hacen 172. intenso en verano, en cuyo caso el virus eliminado por cerdos portadores puede morir fácilmente; los virus que permane cen en el organismo portador podrían. ser los responsables de la presentación de nuevos brotes en épocas de frío intenso, en cuyo caso el virus que se elimina actuaría sin ningún impedimento.

(9) en un ambiente favorable. En los países con áreas subtropicales en los cuales no hay calor y frío intensos, los cerdos adultos podrían eliminar el virus sin que este fuese atenuado totalmente por el medio ambiente; en tales condiciones podría infectar a cerdos susceptibles y estimular un bajo nivel de anticuerpos, sin causarles enfermedad y crear un mecanismo de inmunidad de grado varia. grado de seguridad. Un diagnóstico rápi do en el caso de la presentación de un brote podría ser por medio de la técnica de anticuerpos fluorescentes en cortes de intestino delgado, teniendo en cuenta que es el órgano más afectado; no obs tante, otros órganos podrían ser utiliza dos con el mismo fin. Las secreciones. nasales pueden ser una fuente de virus durante una epizootia.. ble.. Los resultados del presente trabajo indicaron que se observó fluorescencia específica en los órganos recolectados en cerdos sacrificados; este aspecto concuer da con un trabajo hecho anteriormente (Konishi y Bankosuski, 1967). Sin embargo, no todos los tejidos positivos por la técnica de anticuerpos fluorescen tes produjeron ECP en células ST y PK-15.. McClurkin y Norman (1966) dicen que la fluorescencia solo se detectaría en cierto estado de la replicación viral en el cultivo celular. Es posible que estos fenómenos ocurran en los cultivos celu. lares con algunas muestras tomadas en hisopos, los cuales produjeron ECP pero no fluorescencia. La demostración de la. presencia del virus TGE en pulmones está de acuerdo con otros trabajos (Underdahl et al., 1974). Ya se ha mencionado la posibilidad de que las condiciones del medio am biente subtropical pueden favorecer la formación de portadores crónicos que distribuyen el virus con cierto grado de atenuación, causa por la cual aparecen títulos irregulares de anticuerpos. Las. pruebas de microseroneutralización y la técnica de anticuerpos fluorescentes empleadas en el presente trabajo se con sideran satisfactorias si se tiene en cuen. ta que el comportamiento de los siste mas controles permite confiar en un alto. 6.. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES. En el presente trabajo se pone de manifiesto que hay cierta actividad del virus TGE en las porquerizas que fueron afectadas por esta enfermedad en 1973. La demostración de anticuerpos, aún con algunos títulos altos después de lar go tiempo de haber ocurrido el brote, y de la presencia del virus en los pulmones de algunos cerdos, sugiere establecer una vigilancia científica cuidadosa y continua en todo el país para tratar de descubrir la posible ocurrencia de TGE en su forma clínica y/o subclínica. El sistema de. mercadeo. de. cerdos. desde el área. afectada en 1973 es permanente hacia todo el país; es posible que bajo condi ciones especiales se pueda favorecer la multiplicación del virus TGE y se pre sente otra epizootia de grandes propor ciones.. Por. lo. tanto, se. incrementar. la. educación. recomienda entre. los. Médicos Veterinarios Generalistas y Porcicultores acerca de los riesgos que implica la Gastroenteritis Transmisible; establecer medidas sanitarias claras y precisas en caso de presentación de un nuevo brote; crear un grupo de Médicos Veterinarios para que ejerzan una vigi lancia continua de los cerdos en las gran jas que fueron afectadas en 1973 y en las regiones vecinas. 173.

(10) 8. SUMMARY. 7. RESUMEN. Relacionado con un brote de TGE. Persistence of antibodies and virus in. ocurrido en el Valle del Cauca en 1973,. the transmissible gastroenteritis in pigs. se recolectaron sueros, muestras nasales,. under subtropical conditions.. orales y rectales en hisopo y tejidos de. Serum samples, nasal, oral and rectal. cerdos sacrificados a los dos años des. pués del brote. Se hicieron pruebas de microseroneutralización y de anticuerpos fluorescentes. en frotis de secreciones,. tejidos congelados y cultivos celulares de testículos porcino infectados con mate riales sospechosos de contener el virus TGE. Se detectaron anticuerpos neutrali zantes con títulos altos y se observó fluorescencia específica en los cultivos celulares y en los tejidos de cerdos que. swabs and other tissue samples were collected two years after a TGE outbreak occurred in Valle del Cauca in 1973. Microseroneutralization and fluo-. rescent antibody tests were performed from secretions and swine testicle cells. infected with the suspicious material. The results showed titers of neutra-. lizing antibodies and specific positive. habían sufrido la enfermedad dos años. fluorescence in cell cultures and tissues. antes. Se demostró la presencia del virus TGE en pulmones de dos de estos cer dos, reproduciendo la enfermedad en. of naturally infected pigs. TGE virus was found in the lungs of two pigs. The disease was reproduced in 4 to 42 day oíd piglets.. lechones.. 9. BIBLIOGRAFÍA. 1. BOHAC, J.B.; B. BERBYSHIRE and J. THORSEN. 1975. The detection of transmissible Gastroenteritis viral Comp. Med. J9.67-75.. antigen by inmunodiffusion. Can. J.. 2. BOHL, E.H., et al. 1966. Report of the sub-committee on establishing criteria for the diagnosis of transmissible gastroenteritis of swine. In Proceedings Ann. Meet., U.S. Uve. San. Ass., 70th. pp. 371-375. 3.. . 1970. Transmissible gastroenteritis. In H.W. Dunne, ed. Diseases. of. swine. The lowa State University Press, Ames. I.A. pp. 158-176.. 4. CALETTI, E.M.; M. RISTIC;. D.H. FERRIS and M. ABOU - YOUSSEF. 1968.. Comparison of ¡nmunologic properties of a high and low cell culture. passage of transmissible gastroenteritis (TGE) virus from a single isolant. In Proceedings Ann. Meet. U.S. Live. Sanit. Ass. 72nd. pp. 361-370. 5. DOYLE, L.P. and L.M. HUTCHING. 1946. A transmissible gastroenteritis ¡n pigs. J. Am. Vet. Med. Ass. 705:257-259. 174.

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