← Volver a los detalles del artículo Cultivo tridimensional sin matriz extracelular de glándula tiroides

CULTIVO TRIDIMENSIONAL SIN MATRIZ EXTRACELULAR DE GLÁNDULA TIROIDES

EXTRACELLULAR MATRIX WITHOUT THREE-DIMENSIONAL

CULTURE OF THYROID GLAND

1,2 1,3 5 1,3 1,4

Herrera M , Rivera J , Curtidor H , Ondo A , Spinel C

1

_{Centro Internacional de Física, Centro de Telemidicina, Departamento de Química,}

2 3 4

_{Departamento de Biología, Universidad Nacional de Colombia. Sede Bogotá, Fundación de}

5

Inmunología de Colombia.

RESUMEN

La unidad morfológica funcional de la glándula tiroides es el folículo, estructura ovoide rodeada por células cúbicas con el coloide que secreta dentro del lumen folicular. Excepto el cultivo de 12 días de folículos cerrados de rata que conservan morfología y función como in vivo, en la mayoría de los cultivos de tiroides se pierde la estructura del folículo a partir de 24 horas, en pocos conservan la reconstrucción del folículo hasta 6 días sin especificar la función. El objetivo fue lograr un cultivo de folículos porcinos cerrados.

Se realizó una digestión enzimática y mecánica de la tiroides de cerdo para obtener los folículos cerrados, confirmados por análisis morfológico y funcional. Se realizó el cultivo a largo plazo sobre agarosa con 1 mU/ml y sin hormona tireotrópica (TSH) y su análisis morfológico.

El tejidoin vivomuestra una morfología de glándula hipotiroidea, células planas, poco retículo endoplásmico rugoso (RER) y complejo de Golgi, microvellosidades escasas y cortas. Los folículos aislados realizan las funciones

-125 -125

de la glándula, presentando una relación de organificación de I /captación de I de 70%, demostrándose que la mayoría son cerrados. Los folículos cultivados sin TSH conservan la forma ovoide y el coloide en su interior y la misma ultra-estructura del tejido de donde se obtuvieron, con RER y complejo de Golgi muy escasos, pero aumentan la microvellosidades y el espesor del epitelio. En presencia de TSH el espesor del epitelio, el RER y el complejo de Golgi aumentan desde el primer día y se reducen considerablemente las cavidades foliculares. Los folículos aislados y cerrados conservan su arquitectura y función. En cultivo a largo plazo (8 días) con y sin TSH se mantiene un cultivo tridimensional de la unidad funcional de tiroides; además, responden al estímulo de la TSH como una glándulain vivo.

ECOS-Nord/Colciencias/ICFES/ICETEX, y la Fundación de Inmunología de Colombia (FIDIC).

Palabras claves: Folículo tiroideo, disociación de la tiroides, cultivo tridimensional primario.

ABSTRACT

The functional morphological unit of the thyroid gland is the follicle, ovoid structure surrounded by cuboidal cells that secretes the colloid within the follicular lumen. Except the 12-day culture of rat follicles remain closed morphology and function in vivo, in most cultures of thyroid follicle structure lost after 24 hours, few retain the reconstruction of the follicle up to 6 days unspecified function. The aim was to achieve a culture of porcine follicles closed. We performed an enzymatic digestion and mechanical pig thyroid follicles for closed, confirmed by morphological and functional analysis. We performed long-term cultivation in agarose with 1 mU / ml and no thyrotrophic hormone (TSH) and morphologic analysis. The tissue in vivo shows a hypothyroid gland morphology, flat cells, little rough endoplasmic reticulum (RER) and Golgi complex, few and short microvilli. The isolated follicles perform the functions of the gland, presenting a list of organification of I-125 / I-125 uptake 70%, showing that most are closed. Follicles cultured without TSH retain the ovoid shape and inside the colloid and the same ultra-structure of the tissue from which they were obtained, with RER and Golgi complex of very low, but increase the microvilli and the thickness of the epithelium. TSH is the thickness of the epithelium, the RER and Golgi complex increase from the first day and considerably reduced the follicular cavities. The follicles remain isolated and closed architecture and function. In long-term culture (8 days) with and without TSH remains three-dimensional culture of thyroid functional unit, also respond to stimulation of TSH as a gland in vivo. This work was made possible thanks to support from: Colciencias (110140521161), A Research Unit in Bogotá (8003029) and the program ECOS-Nord/Colciencias/ICFES/ICETEX and Immunology Foundation of Colombia (FIDIC).

Keywords:

Thyroid follicle, dissociation of the thyroid, primary

three-dimensional culture.

Recibido:

agosto 30 de 2009

Aceptado:

julio 28 de 2009

Correspondencia:

Universidad Nacional de Colombia, sede Bogotá.

INTRODUCCIÓN

glicosilación N-osídica se realiza en el La tiroides es una de las glándulas abundante retículo endoplásmico endocrinas más importantes del rugoso (RER) ubicado alrededor del organismo, tiene múltiples efectos en núcleo; la maduración y finalización de el desarrollo y el metabolismo de los la glicosilación de la Tg se hace en el vertebrados. Regula la taza metabólica complejo de Golgi (CG) de la región basal y es esencial para mantener alta y supranuclear, y en vesículas de constante la temperatura corporal en exocitosis es secretada al coloide. La los animales homeotérmicos (37ºC). El

captación del yoduro

se efectúa en la efecto de las hormonas tiroides sobre el membrana basal (5-7), y pasa al metabolismo de las proteínas y de los coloide folicular a través de la lípidos es de naturaleza bifásica: a membrana apical del tirocito (8-9). La bajas concentraciones fisiológicas son tiroperoxidasa de la membrana apical y anabólicas y a altas concentraciones dentro del coloide une el yoduro a la Tg catabólicas (1,2). Las alteraciones de la y luego forma las yodotironinas T3 y función de la tiroides ocasionan T4 (10,11,12) sobre la Tg. Por último, patologías importantes, entre las que se la Tg yodada es endocitada (13) y cuentan numerosos casos de bocio degradada en prelisosomas y lisosomas e n d é m i c o , h i p e r t i r o i d i s m o , (14), liberando las hormonas a la hipotiroidismo y cáncer de tiroides en c i r c u l a c i ó n ( 1 5 ) d o n d e s o n el mundo y en Colombia. transportadas a los tejidos del La unidad morfológica y funcional de organismo (16). La glándula tiroides la tiroides es el folículo: estructura esta bajo el control de la hormona ovoide, constituido por una capa de t i r e o t r ó p i c a ( T S H ) y d e l a células epiteliales cúbicas (tirocitos) concentración del yoduro (1-3).

alrededor de una solución viscosa de Uno de los mayores problemas del proteínas que secretan: el coloide (1-3). cultivo del tejido tiroideo es mantener El tamaño de los folículos varía según la arquitectura folicular y la polaridad la especie (50 a 150 µm en rata y ratón; de los tirocitos, por lo tanto la función 150 y 500 µm cerdo y humanos), edad se pierde (17) debido a la desaparición y su localización: los más grandes al del lumen coloidal y de la polaridad del exterior de los lóbulos (2). tirocito (18-21). Algunos cultivos con La tiroides sintetiza y secreta las elementos de la matriz extracelular h o r m o n a s t i r o i d e a s 3 , 5 , 3 ' - como colágeno u artificiales como triyodotironina (T3) y 3,5,3',5'- matrigel y en presencia de TSH se tetrayodotironina (T4), que se realizan logra la formación denominadas en tres procesos ligados a su seudofolículos y algunos autores los m o r f o l o g í a f o l i c u l a r y a l a llaman folículos (21-28) o a partir de ultraestructura de los tirocitos (4, 5). La transfección de células madre

de corta duración y no reproducen in concentraciones creciente de yoduro

vitrola función de organificación de la (42), demostrándose que responden a Tg ni formación de hormonas T3 y T4. la TSH y al yoduro de una manera muy La polaridad del tirocito en cultivo es similar a la glándula in vivo. Se fundamental para conservar los hicieron modificaciones de esta dominios de membrana y por lo tanto la disociación de tiroides de rata y se expresión de moléculas específicas de logró folículos cerrados de tiroides de estos dominios (28). cerdo, ratón y humana (43). En este Han sido reportados métodos para artículo nos basamos en estos cultivar folículos cerrados y abiertos resultados y describimos un análisis (19,30-34), o recubriéndolos de morfológico y funcional de los colágeno (35-38) pero se conoce muy folículos aislados de tiroides de cerdo; poco de las relaciones entre estructura y su cultivo conservando la estructura y función. La incubación de folículos tridimensional de estos folículos abiertos de rata sobre agarosa durante cerrados por 8 días con y sin TSH. 12 horas conservan la ultra-estructura

del tirocitos, (3,10,39,40) y se

MATERIALYMÉTODOS

mantienen hasta 3 días (30) y

Extracción y disección de tiroides de

responden a la TSH (3, 31,40).

cerdo

La TSH estimula la función de los

Los lóbulos de tiroides de cerdo se

tirocitos de folículos abiertos de cerdo

obtienen en Frigoríficos Guadalupe,

y humanos durante el cultivo en los dos se lavan durante un minuto en alcohol primeros días (31,37-39), este hallazgo al 70% y luego se colocan en medio de y otros de disociación de tiroides de cultivo COON (44) (Sigma) con 100 rata (3,10,39) y de cerdo (34,39) mg/ml-100 mU/ml penicilina-modificados para la tiroides de rata, se estreptomicina (Gibco) (medio que logró el cultivo de folículos cerrados denominamos de ahora en adelante hasta 12 días. En este cultivo se COON), y se lleva directamente al demostró que conservar desde el inicio laboratorio. Se retira la cápsula del del cultivo a los folículos cerrados lóbulo y se seccionan segmentos del mantienen la forma folicular y la parénquima que es cortado en polaridad del tirocito, y al mismo f r a g m e n t o s p e q u e ñ o s d e

3

tiempo, expresan una función como la aproximadamente 1mm .

y se realiza cuatro veces sin pasar una gamma de pozos (Auto Gamma hora (h) de acción enzimática. Antes de Counter Cobra II Packard) y se realiza tomar el precipitado con los folículos, la medida de la radioactividad de las se realiza una disociación mecánica muestras en tubos Beckman, así como con la ayuda de pipetas de 10 y 5 ml de controles positivos de medio con cada una 10 veces evitando la radioactividad. La captación (C). se

125

formación de burbujas y turbulencia en evalúa calculando la proporción de I

125

el flujo. Para retirar la solución de en los folículos con respecto al I total colagenasa los folículos son lavados en el medio de solución.

-125

tres veces con COON + 2% de suero

Organificación deI

fetal bovino (SFB, Gibco) cada uno Una vez determinada la captación de

125

centrifugando 5 min a 50 gravedades I , se adiciona 1mL de ácido (g). Los sobrenadantes se eliminan y tricloroacético (TCA) al 21%(p/v) + con ellos los deshechos celulares y 100µL de albúmina sérica bovina al células aisladas. 5%(p/v) y 1mL de PBS que contiene

-7

De las cuatro disociaciones de 10 min NaI 10 M, se agita vigorosamente por

o

se reúne todos los precipitados y se un minuto y después se deja a 4 C filtra a través de una malla con poros de durante 16 horas. Se realizan 3 lavados 300m de diámetro con el fin de con TCA al 10%(p/v) que contiene NaI

-7

homogeneizar el material disociado y 10 M con centrifugación a 3.400g por eliminar el tejido no disociado. Antes 10min y se mide la radioactividad del de iniciar la pre-incubación se realiza precipitado previa determinación del una prueba de viabilidad con azul background de la máquina y de los Tripan 0,5%. Se pre-incuban durante tubos vacios, esto permite evaluar la 12 horas en COON + 0,5% de SFB en cantidad de yoduro unido a las cajas de Petri de 75mm recubiertas con proteínas (PBI) u organificación del agarosa tipo I al 1% para impedir la yoduro.

adhesión celular, se mantienen en la

Cuantificación del ADN

(Schenider incubadora a 37ºC, con una atmósfera 1957)

de 95% de aire -5% de CO y saturada2 Una vez medida el PBI, el precipitado en humedad. (p/v). Para el análisis se resuspende en 600µL de etanol al funcional se pre-incuba 10 seguido de 95% a 4ºC y se centrifuga a 3.400g por 2 horas en presencia de yoduro 10min. Se resuspende en 600µL de

125

radiactivo (5 mCi/mL de NaI ). etanol al 95% y se calienta por 21min a

-125

Captación deI

70ºC seguido de centrifugación a

Finalizado el tiempo de pre- 3.400g por 10min. El precipitado se incubación, se lavan 3 veces con resuspende en éter etílico y se eleva la tampón fosfato salino (PBS) que temperatura a 30ºC por 10min.

-7

HClO4 0,5 N 21 min a 70°C, se añade 2,5% en tampón cacodilato 0,1 M, pH NaOH 5 mM y se calienta 15 min a 7.4. Tres lavado de 10 min con tampón 70°C, y por último se añade el reactivo cacodilato 0,1 M pH 7.4. Se continúa de difenilamina, al mismo tiempo se inmediatamente con la posfijación en realizan los blancos de la curva de mg 1% de tetróxido de osmio (OsO4) en ADN. Las muestras y los blancos se tampón cacodilato 0,1 M. Tres lavado dejan en obscuridad mínimo 18 h, y se de 10 min con tampón cacodilato 0,1 l e e e l s o b r e n a d a n t e e n u n M, pH 7.4. Como los folículos se espectrofotómetro a 600 nm l. Primero encuentran en suspensión son la curva de ADN y luego las muestras centrifugando a 210 g por 5 min para La cuantificación del ADN se realiza cada paso hasta su impregnación en para tener un factor de normailzación r e s i n a . S e c o n t i n ú a c o n l a tanto para la C como para el PBI. Los deshidratación en concentraciones resultados funcionales de captación y ascendentes de etanol, cada una de 5 organificación se correlacionan con lo min 75%, 85%, 90% y 5 veces alcohol observado en el microscopio invertido absoluto. La infiltración a la resina se (MI) del análisis con el azul Trypan. realiza 4 veces 15 min en oxido de

Cultivodefolículos

propileno, 2 veces en una mezcla oxido

El análisis del cultivo se realizo de 1 propileno/1 resina Epon 812 morfológicamente en microscopios (Ladd), la primera de 15 min y la invertido (MI), óptico (MO) y segunda de 2 h. Se culmina con la electrónico (ME). Los folículos se inclusión en la resina una noche y cultivan en cajas de Petri de 75mm de c a m b i o a l d í a s i g u i e n t e . L a diámetro recubiertas con agarosa tipo polimerización se realiza 6 h a 30°C, 12 II (agar-bearing marine algae typeII, h a 40°C y 2 días a 60°C, una vez Sigma) en COON + 0.5% de SFB a formada la pirámide de resina se 37°C y una atmósfera 95% aire-5% realizan cortes semi-finos de 0,5?_{m de}

CO2 y saturada en humedad. El medio espesor, coloreados con azul de se cambia a las 24 horas y después cada toluidina 1% y examinados al MO. Los 3 días tanto para renovar el medio cortes ultra-finos se montan en rejillas como para eliminar los desechos de cobre y se contrastan con acetato de remanentes. Se hicieron cultivos con y uranilo y citrato de plomo y sin 1 mU/ml de TSH desde el inicio del examinados al ME (45).

cultivo.

Procesamiento para el análisis RESULTADOSYDISCUSIÓN

morfológico

El estudio morfológico se

Tejidotiroideodecerdo

realizó en base al procesamiento de La morfología de las muestras de tiroides empleadas al observarlas en folículos abiertos (3) modificado para

MO muestra unos folículos de folículos cerrados de rata (41).

diámetro variable, pero en todos una La fijación del tejido completo 2 h y de

Los tirocitos en ME presentan exiguo experimentos diferentes) de las células RER y complejo de Golgi, cortas y son viables, similar a lo reportado para muy pocas microvellosidades y rata (41). Los folículos abiertos escasos lisosomas (Fig. 1B). Esta es la pueden resellarse, es decir, recuperan morfología a la descrita in vivo para su morfología folicular cerrada una glándulas hipotiroideas (46). después de 12 horas; si no se cierran se Concluyendo que el tejido original es desorganizan y las células mueren y característico de una glándula son eliminadas con el cambio de hipotiroidea. cultivo (41), Para comprobar si eran cerrados se realizó la captación (C) y la

-125

organificación (PBI) del I , cuya relación PBI/C es directamente proporcional al número de folículos cerrados (41), se logró obtener una proporción de 72% sin TSH y 80% con TSH (Fig. 2). Demostrándose que los cultivos se inician con una proporción elevada de folículos cerrados.

A.

En microscopio óptico del tejido de la tiroides de cerdo presenta folículos con células muy planas limitando el coloide y de diferentes diámetros. H y E, MO, Barra 130 mm.

B.

Imagen en microscopio electrónico de un tirocito de la imagen A. El polo a p i c a l p r e s e n t a e s c a s a s microvellosidades muy cortas en relación directa con el coloide. El polo basal en contacto con la membrana o lámina basal. Note la escasa presencia de reticulo endoplásmico rugoso y las vesículas en la región apical de la célula. ME, Barra 1,5 mm.

Folículosrecién disociados

Después de 12 horas de pre-incubación los folículos que presentan un contenido homogéneo son cerrados comparándolos con los abiertos que presentan un contenido heterogéneo (3,41), aproximadamente 95% (n=6

Figura 1. Aspecto morfológico de la glándula de tiroides.

siendo de 8?_{m, pero con el tiempo de}

cultivo se incrementa a 25?_{m en el día}

8. La ultra-estructura del primer día (Fig. 3B) es similar a los folículos del tejido de origen (Fig. 1B), las células conservan su polarización con escasas microvellosidades y organelos como el RER y complejo de Golgi, pero se distinguen bien los complejos de unión en la región apical entre los tirocitos separando los dominios de membrana basolaterale de la apical como in vivo. Aunque son folículos de

Cultivodefolículos

pared epitelial muy delgada se logran

En los folículos cultivados sin TSH _{conservar con el coloide. A los 8 días} persiste la luz de los folículos con _{de cultivo en ME es evidente el} coloide desde el primer día (Fig. 3A) _{aumento del espesor del epitelio y de} hasta el octavo (Fig. 3C). Al iniciar el _{las microvellosidades (Fig. 3D), pero} cultivo se evidencia que el epitelio es _{con exiguo RER y complejo de Golgi.} plano similar al tejido de origen

Figura 2.

Porcentajes de captación y

_-125

organificación de I de la dosis por µg

de ADN en folículos de tiroides de

cerdo pre-incubados durante10 horas

_-125

+ 2 horas con I (5 mCi/mL). Los

colores claros muestran los valores de

captación en ausencia (verde) y en

presencia de 1mU/mL de TSH (azul),

mientras que los colores oscuros

muestran la organificación por µg de

ADN para ambos tratamientos. N=3, ±

SEM.

A

B

C

D

Figura 3.Cultivo de folículos de tiroides de cerdo sobre agarosa sin hormona tireotrópica. A y B. Un día de cultivo. C y D. 8 días de cultivo.

A. Los folículos cerrados conservan la estructura y su coloide de aspecto hialino y la capa de células parecen planas aunque, algunos presentan un epitelio folicular cúbico (derecha arriba). MI, Barra 40 mm.

B. Imagen en microscopio electrónico de un fragmento de folículo de tiroides de A, se distingue el coloide del folículo y las células presentan núcleos redondos. En la región apical del núcleo se encuentran estructuras vesiculares densas a los electrones, similares a lisosomas. ME, Barra 1,5 mm.

Los folículos cultivados con TSH (1 tejido de origen. En el día 8, aunque en mU/ml) a partir del primer día el MI no se distinguen las cavidades (Fig. epitelio presenta una morfología típica 4C), en ME se observan (Fig. 4D) y los de epitelio cúbico y la luz folicular se folículos presenta un epitelio de 30 conserva con su aspecto hialino (Fig. mm. Es evidente que el incremento en 4A). A partir del cuarto día y hasta el la altura del epitelio de los folículos de octavo (Fig. 4C) el epitelio presenta el cerdo en presencia de TSH es doble de altura que el primer día de respuesta de las células a la hormona y cultivo, y las cavidades de los folículos va acompañado del abundante RER disminuyen siendo muy difícil alrededor del núcleo (Fig. 4D1), el distinguir la cavidad folicular (Fig. complejo de Golgi en la región

4C). perinuclear, además de largas y

El epitelio de los folículos cultivados 1 abundantes microvellosidades y día con TSH (1 mU/ml) presentan un cavidades folicular muy estrechas epitelio menos plano (Fig. 4A), pero el (Fig. 4D2). Igual que sin TSH se espesor de las células es mayor distinguen bien los complejos de comparado con los folículos sin TSH unión en la región apical entre los (Fig. 3A), aunque se agregan más que tirocitos separando los dominios de

sin TSH. En ME el aspecto de los membrana basolaterale de la apical

tirocitos (Fig. 4B) es similar al del (Fig. 4D2)como in vivo.

A

B

C

D1

D2

Figura 4.Cultivo de folículos de tiroides de cerdo sobre agarosa con 0,1 mU/mL de hormona tireotrópica. A y B. Un día de cultivo. C y D. 8 días de cultivo.

A. Los folículos conservan la estructura, los que son cerrados desde el inicio presentan un límite neto entre la membrana apical y el coloide (los dos folículos centrales), mientras que los que se resellaron presentan un límite irregular y la cavidad tiene aspecto heterogéneo (izquierda arriba). Los folículos tienden a agruparse desde el primer día. MI, Barra 50 mm.

B. Tirocito de un folículo de la imagen A en microscopio electrónico se distingue el coloide del folículo y las células presentan núcleos redondos. No se observan en la región apical del núcleo estructuras vesiculares densas a los electrones. Presenta la misma ultraestructura que un tirocito del tejido (Fig. 1B) y no se evidencia retículo endoplásmico rugoso. ME, Barra 1,9 mm.

C. Los folículos pierden su estructura ovoide y es muy difícil de distinguir las cavidades, pero persisten algunas con contenido de aspecto hialino. MI, Barra 22 mm.

La metodología desarrollada permitió cultivos de tejido tiroideo (44). En el la obtención de folículos cerrados de cultivo de folículos de rata se reporta la epitelio plano y algunos abiertos como presencia de numerosas vacuolas lo reportados para la tiroides de rata autofágicas en ausencia y con 0,1 (41,42) o de ratón (43) y humana (40), mU/ml de TSH (41), probablemente además de agrupaciones celulares y las vesículas que se observan al 4 día células aisladas (30,31,32). La (dato no mostrado) de cultivo sin TSH arquitectura folicular se mantiene sean vacuolas autofágicas o lisosomas durante el tiempo de cultivo en secundarios.

presencia o ausencia de TSH Los folículos responden a la TSH (3,41,42), confirmándose que la clave como una glándula in vivo (1) está en colocar al inicio del cultivo los aumentando la proporción de

-125

folículos cerrados y estos conservan su captación del I en la pre-incubación estructura en cultivo con o sin soporte y durante el cultivo el espesor del de elementos de la matriz extracelular epitelio y disminuyen notablemente (44). Los folículos aislados y cerrados las cavidades foliculares como fue no requieren la TSH para mantener la descrito para el cultivo de 9 y 12 días cavidad ni la estructura folicular como de folículos de rata (46) o en glándulas lo descrito en la mayoría de los hipertiroides (46), es evidente que el c u l t i v o s d e s e u d o f o l í c u l o s incremento en la altura del epitelio de (22,23,24,25,26,37) y tampoco estos folículos es respuesta de las n e c e s i t a n m a t r i z e x t r a c e l u l a r células a la TSH. Los receptores de la (21,21,36,37) demostrándose que si TSH se encuentran en la membrana desde el inicio del cultivo se tienen basal y en folículos humanos y en folículos cerrados no importa el condiciones de cultivo similares de 24 soporte empleado ni hormonas, ellos horas, péptidos sintéticos derivados de conservan su arquitectura folicular en la TSH se unen a las membranas cultivo. Una característica descrita por basales de los tirocitos de estos diferentes autores como rasgo folículos (40). Un método ha sido importante de polaridad son los descrito para aislar folículos de cerdo complejos de unión tantoin vivo(46) (34) que responden a iodolactonas comoin vitro en folículos abiertos (3) (47), pero no describen si estos o su reconstrucción con colágeno folículos se mantienen más de 24 h en (43,35), los folículos de cerdo también cultivo.

La principal particularidad del modelo internalization of thyroglobulin: descrito es su sencillez respecto a lo Selectivity, pH dependence and planteado en 34 y 47, además, puede l a c k o f t i s s u e s p e c i f i t y . realizarse con folículos de glándula Endocrinology 1997;138(6):

2325-hipotiroidea. 2332.

En conclusión, la clave para conservar 5. Spinel C. (2002) Biología molecular la arquitectura del folículo de tiroides _{de la célula eucariótica animal. 1era} y la ultra-estructura del tirocito en _{ed. Medellín: Biogénesis Fondo} cultivo de manera similar a la tiroides _{Editorial; 2002. p. 201-214.}

in vivo es extraer desde el inicio los _{6. Spitzweg, C, Heufeider A. Morris J.} folículos aislados y cerrados. Además, _{Thyroid iodide transport. Thyroid} estos folículos responden a la TSH de _{2000;10(4):321-330.}

manera similar a una glándulain vivoy _{7. de la Vieja A, Dohan O, Levy O,} no requieren de esta hormona para _{Carrasco N. Molecular analysis of} conservar su arquitectura. _{the sodium/iodide symporter:} impact on thyroid and extrathyroid

AGRADECIMIENTOS _{pathophysiology. Physiol Rev}

Agradecemos a Marcela Camacho, a _{2000;80(3):1083-105.}

Thierry Pourcher y a Manuel Elkin _{8. Kopp P. Pendred's syndrome:} Patarroyo con sus aportes científicos y _{identification of the genetic defect a} personales. A Frigoríficos Guadalupe. _{century after its recognition.} A la financiación de: Colciencias _{Thyroid 1999;9(1): 65-69}

Programa Ciencias Básicas y

Ecos-9. Rodríguez AM, Perron B, Lacroix

Nord; Universidad Nacional de

L , C a i l l o u B , L e b l a n c G , Colombia, Departamento de Biología

Schlumberger M, Bidart JM, y Centro Internacional de Física.

Pourcher T. Identification and characterization of a putative

BIBLIOGRAFÍA _{iodine transporter located at the}

apical membrane of the thyrocites. 1. Werner CS, Ingbar HS. The thyroid.

J C l i n E n d o c r i n o l M e t a b 3th ed. New York: Harper & Row:

2002;87(7):3500-3503. 1971. p. 5-40.

10. Björkman U, Ekhölm R. 2. Wollman, SH. Structure of the

Generation of H2O2 in isolated thyroid gland. En: Vissher M.

p o r c i n e t h y r o i d f o l l i c l e s . editor. The thyroid gland.New

Endocrinology 1984; 115:392-398. York: Raven Press; 1980.

11. Medeiros-Neto G, Targovnik H, 3. Denef J-F, Björkman U, Ekhölm R.

Vassart G. Defective thyroglobulin S t r u c t u r a l a n d f u n c t i o n a l

synthesis and secretion causing characteristics of isolated thyroid

goiter and hypothyroidism. Endocr follicles. J Ultrastruct Res 1980;71:

Rev. 1993;14(2):165-183 185-202.

12. Vono-Toniolo J, Kopp P. 4. Giraud A., Sandrine S, Lanet J,

Thyroglobulin gene mutations and F r a n c J L . B i n d i n g a n d

with congenital hypothyroidism. 1982;91:157-166.

Arq Bras Endocrinol Metab 20. Kimura T, Keymeulen AV, 2004;48(1):70-82. Golstein J, Fusco A, Dumont JE, 13. Marino M, McCluskey RT. Role of Roger PP. Regulation of thyroid thyroglobulin endocytic pathways cell proliferation by TSH and other in the control of thyroid hormone factors: A critical evaluation of in release. Am J Physiol Cell Physiol vitro models. Endocrine Reviews 2000;279:C1295-C1306. 2001;22(5):631–656.

14. Dubois B, Couvreur M, Spinel C, 21. Eggo MC, Quiney M, Campbell Denef J-F, van den Hove M-F. VS. Local factors regulating Thyroglobulin (Tg) hydrolysis growth and function of human starts in prelisosomes. Proceeding thyroid cells in vitro and in vivo. of the 10th International Thyroid Mol Cell Endocrinol 2003;213:47-Conferences, Amsterdam, The 58

Netherlands: 1999. p. 111. 22. Fayet G, Michel-Bechet M, 15. van den Hove-Vandenbroucke M- Lissitzky S.1971. Thyrotrophin-F. Secretion of thyroid hormones. i n d u c e d a g r a g a t i o n a n d In: De Visscher M, editors. The reorganization into follicles of thyroid gland. New York: Raven isolated porcine-thyroid cells. 1. Press; 1980. p. 61-79. Ultrastructural studies. Eur. J 16. Richardson SJ. Cell and molecular Biochem 1971;24:100-111.

biology of transthyretin and thyroid 23. Curcio F, Ambesi-Impiombato FS, h o r m o n e s . I n t R e v C y t Perrela G, Coon HG. Long term 2007;258:137-193. c u l t u r e a n d f u n c t i o n a l 17. Fayet G, Hovsépian S, Dickson characterization or follicular cells JG, Lissitzk S. Reorganization of from adult normal human thyroids. porcine thyroid cells into functional PNAS 1994;91(19):9004-9008. follicles in a chemically defined, 24. Toda S, Yonemitsu N, Minami Y, s e r u m - a n d t h y r o t r o p i n - f r e e Sugihara H. Plural cells organize m e d i u m . J C e l l B i o l t h y r o i d f o l l i c l e s t h r o u g h 1982:93(2):479-488. aggregation and linkage in collagen 18. Ambesi-Impiombato FS, Parks gel culture of porcine follicle cells. LAM, Coon HG. Culture of Endocrinology 1993;133(2): 914-hormone-dependent functional 920.

epithelial cells from rat thyroids. 25. Mauchamp J, Mirrione A, Alquier P r o c N a t l A c a d S c i C André F. Follicle-like structure 1980;77(6):3455-3459. and polarized monolayer: role of 19. Chambard M, Gabrion J, the extracellular matrix on thyroid Mauchamp J.Influence of collagen cell organization in primary gel on the orientation of epithelial c u l t u r e . B i o l C e l l cell polarity: Follicle formation 1998;90:369–380.

the three-dimensional organization 33. Herzog V, Miller F. Structural and of thyroid epithelial cells into functional polarity of inside-out f o l l i c l e s t r u c t u r e s b y t h e follicles prepared from pig thyroid m a t r i c e l l u l a r p r o t e i n , g l a n d . E u r J C e l l B i o l thrombospondin-1. Endocrinology 1981;24(1):74-84.

1999;140(3):1094-1103. 34. Gärtner R, Greil W, Stübner D, 27. Toda S, Watanabe K, Yokoi F, Permanetter W, Horm K, Pickardt Matsumura S, Suzuki K, Ootani A, CR. Preparation of porcine thyroid Aoki S, Koike N, Sugihara H. A follicles with preserved polarity: new organotypic culture of thyroid functional and morphological tissue maintains three-dimensional properties in cokmparation to follicles with C cells for a long inside-aot-follicles. Mol Cell term. Biochem Biophys Res Endocrinol 1985;40:9–16.

Comun 2002;294: 906–911 35. Kusakabe T, Kawaguchi A, Hoshi 28. Kuliawat R, Lisanti MP, Arvan P. N, Kawaguchi R, Hoshi S, Kimura

Polarized distribution and delivery S. Thyroid-specific enhancer-of plasma membrane proteins in the b i n d i n g p r o t e i n / N K X 2 . 1 i s thyroidal follicular epithelial cells. required for the maintenance of J Biol Chem 1995; 270(6);2478- ordered architecture and function

2482. of the differentiated thyroid. Mol

29. Lin R-Y, Kubo A, Keller GM, Endocrinol 2006;20:1796–1809. Davies TF. Committing embryonic 36. Massart C, Gibassier J, Raoul ML, stem cells to differentiate into Le Gall F, Lancien G, Genetet N, thyrocyte-like cells in vitro. Denais A, Darcel F, Lucas C. Endocrinology 2003;144(6):2644- A c t i o n o f p e r i p h e r a l o r

2649. intrathyroidal lymphocytes on

30. Nitsch L, Wollman SH. 1980. autologous thyrocytes cultured in Suspension culture of separated follicles in collagen gel. J Mol follicles consisting of differentiated Endocrinol 1997;18:137-145. thyroid epithelial cells. PNAS 37. Takasu N, Ohno S, Komiya I, 1980;77(1): 472-476. Yamada T. Requeriments of follicle 31. Nitsch L, Wollman SH. 1980. structure for thyroid Hormone Thyrotropin preparations are síntesis; cytoskeletons and Iodine mitogenic for thyroid epithelial M e t a b o l i s m i n p o l a r i z e d cells in follicles in suspension monolayer cells on collagen gel an culture. PNAS 1980; 77(5):2743- in double layered , follicle-forming 2747. c e l l s . E n d o c r i n o l o g y 32. Karlsson F, Westermark K, 1992;131(3):1143-1148.

Suppl :84-85. thyroid hormone secretion, iodide

44. Ambesi-Impiombato FS, Parks uptake and organification, cyclic

LAM, Coon HG. Culture of a d e n o s i n e m o n o p h o s p h a t e

hormone-dependent functional formation, gene expression, and

epithelial cells from rat thyroids. c e l l g r o w t h . T h y r o i d

PNAS 1980;77(6):3455-3459. 2000;10(1):53-57.

39. Westermark K, Karlsson FE,

45. Hayat MA. Positive staining for Westermark B. Thyrotropin

electron microscopy. 1st ed. modulates EGF receptor function

Cincinati, Toronto, London: Wan in porcine thyroid follicles cells.

Nostrand Reinhold Company; Mol Cell Endocrinol

1985;40:17-1975. p.57-125 23.

46. Many M-C. L'involution de la 40. Orozco J, Guzmán F, Orozco O,

hyperplasie thyroïdienne chez la Spinel C. Detección en tirocitos

s o u r i s C 3 H . [ d i s s e r t a t i o n ] . humanos de péptidos sintéticos

Bruselas: Univ. Católica de d e r i v a d o s d e l a h o r m o n a

Lovaina: 1982. t i r e o t r ó p i c a . R e v B o l i v a

47. Langer R, Burzler C, Bechtner G, Endocrinol 1997;6(1),14-20.

Gärtner R. Influence of iodide and 41. Spinel C, Colin I, van den Hove

M-iodolactones on thyroid apoptosis. F, D e n e f J - F. C o r r e l a t e d .

Evidence that apoptosis induced by morphological and functional

iodide is mediated by iodolactones study of isolated rat thyroid

in intact porcine thyroid follicles. follicles in suspension culture. Mol

Exp Clin Endocrinol Diabetes Cell Endocrinol 1990;71:141-153.

2003;111:325-329. 42. Spinel C, Yildiz I. High doses of

48. Rodríguez AM, Perron B, Lacroix iodide are not toxic for rat thyroid

L , C a i l l o u B , L e b l a n c G , follicles in culture. Proceeding of

Schlumberger M, Bidart Pourcher the 10th International Thyroid

T . I d e n t i f i c a t i o n a n d C o n f e r e n c e s , N e t h e r l a n d s ,

characterization of a putative 1991;259.

human iodide transporter located at 43. Cabezas R, Ondo A, Arias J, Spinel

the apical membrane of thyrocytes. C. Isolation and culture of closed

J C l i n E n d o c r i n o l M e t a b thyroid follicles in mouse, pig and