4. METODOLOGÍA
4.1 Caracterización de la semilla de huauzontle
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4. METODOLOGÍA
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4.1.2.2 Desengrasado de la muestra
Lotes de 10 g de harina de huauzontle se sometieron a una extracción con hexano por 6 h usando un extractor Soxhlet y una posterior desolvatación en una campana de extracción de humos durante la noche. Finalmente los diferentes lotes desengrasados fueron mezclados en un único lote que se utilizó para realizar los estudios definidos en el proyecto.
4.1.3 Análisis proximal 4.1.3.1 Humedad
La humedad fue determinada utilizando el método 925.5 de la AOAC (2000). Un gramo de harina de huauzontle se colocó en un crisol seco y previamente pesado, posteriormente fue introducido en una estufa de secado a 105 °C por 24 h. Finalmente el crisol se atemperó en un desecador por 20 min para su posterior pesado. La humedad se calculó usando la siguiente ecuación:
% 𝑑𝑒 ℎ𝑢𝑚𝑒𝑑𝑎𝑑 =𝑊ℎ− 𝑊𝑠 𝑊ℎ− 𝑊𝑣
donde Wh es el peso del crisol con la muestra húmeda, Ws es el peso del crisol con la muestra seca y Wv es el peso del crisol vacío.
4.1.3.2 Contenido de cenizas totales
Las cenizas totales fueron determinadas por el método gravimétrico de la AOAC 923.03 (2000). Un crisol fue puesto a peso constante en una estufa de secado a 125 °C por 5 h. Posteriormente se dejó enfriar hasta temperatura ambiente en un desecador.
La masa del crisol fue medida en una balanza analítica.
48 Se colocó 2 g de harina de huauzontle seca en un crisol previamente ajustado a peso constante. Seguido de esto, la muestra fue carbonizada en una parrilla de calentamiento hasta que dejó de emitir humos (aproximadamente 1 h). El crisol con los restos carbonizados se colocó en una mufla a 550 °C por 24 h aproximadamente.
Finalmente el crisol fue puesto en una estufa de secado a 105 °C por 20 min para su posterior pesado. El contenido de cenizas totales fue calculado con la siguiente ecuación:
% 𝑑𝑒 𝑐𝑒𝑛𝑖𝑧𝑎𝑠 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠 =𝐶 − 𝐵
𝐵 − 𝐴 𝑥 100
donde A es el peso del crisol vacío, B es el peso del crisol con la muestra seca y C es el peso del crisol con la muestra calcinada.
4.1.3.3 Contenido de grasa cruda
El contenido de grasa cruda se determinó de acuerdo al método de Soxhlet descrito en la NMX-F-089-S 1978. Un matraz de destilación se colocó en una estufa de secado (105 °C) hasta peso constante. Por otro lado, se cargó un cartucho de celulosa con 2 g de harina de huauzontle y este se colocó en el extractor Soxhlet. Se utilizó hexano para realizar la extracción por aproximadamente 5 h. El disolvente fue removido de la muestra en un rotavapor a 69 °C y 360 mbar. Posteriormente el matraz con la grasa se colocó en una estufa a 105 °C por 20 min para posteriormente ser pesado. El porcentaje de grasa cruda se determinó con la siguiente ecuación:
% 𝑑𝑒 𝑔𝑟𝑎𝑠𝑎 𝑐𝑟𝑢𝑑𝑎 =𝑊2− 𝑊1 𝑚
donde W2 es el peso del matraz con la grasa, W1 es el peso del matraz vacío y m es el peso de la muestra seca.
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4.1.3.4 Contenido de proteína cruda
Para la determinación de proteína cruda se utilizó el método Kjeldahl modificado con ácido bórico No. 46-12 de la American Association of Cereal Chemists (AACC). En un tubo de digestión se colocó 0.2 g de harina de huauzontle en papel libre de nitrógeno junto con cuatro tabletas Kjeldhal (3.5 g K2SO4, 0.1 g CuSO4, 0.1 g TiO2) (Fisher Chemical, USA). Adicionalmente como blanco se usó un tubo de digestión con papel sin muestra. Se añadió además 50 mL de H2SO4 concentrado en cada tubo.
Los tubos fueron colocados en la unidad de digestión. La temperatura para la digestión aumentó progresivamente de la siguiente manera: potencia Nivel 4 por 20 min (o hasta la eliminación de la espuma), potencia Nivel 6 durante 10 min (o hasta la presencia de humo en el tubo) y finalmente en potencia Nivel 10 durante 30 min (o hasta que las paredes del matraz quedaran completamente limpias y la disolución adquiriera un color traslúcido). Después de esto, los tubos se retiraron de la fuente de calor y se dejaron enfriar por media hora.
Posteriormente, se adicionó 50 mL de agua destilada a cada tubo y se mezcló adecuadamente, seguido de lo cual los tubos se colocaron uno por uno en la unidad de destilación Büchi K-350. Para recibir el destilado, en un matraz Erlenmeyer se colocó 60 mL de H3BO3 al 4% junto con cuatro gotas de la mezcla de indicadores verde de bromocresol/rojo de metilo (Sigma-Aldrich, USA). Una vez colocado el tubo con la muestra digerida en la unidad de destilación, así como el matraz para recibir el destilado, se adicionó aproximadamente 90 mL de NaOH al 32% y se programó la destilación de las muestras durante 5 min. Finalmente las soluciones fueron valoradas con H2SO4 0.10 N hasta observar un cambio de color de verde azulado a gris, con la misma intensidad del blanco. La proteína cruda fue calculada utilizando las siguientes ecuaciones:
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% 𝑑𝑒 𝑛𝑖𝑡𝑟ó𝑔𝑒𝑛𝑜 =[H2SO4𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 − H2SO4𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜]𝐿 × 14 𝑔
𝑚𝑜𝑙× 𝑐𝑜𝑛𝑐. á𝑐𝑖𝑑𝑜
𝑚𝑎𝑠𝑎 (𝑔) × 100
% 𝑑𝑒 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎 = 6.25 × (% 𝑛𝑖𝑡𝑟ó𝑔𝑒𝑛𝑜)
donde H2SO4muestra y H2SO4blanco es la cantidad de ácido sulfúrico gastado en la titulación para la muestra y el blanco, respectivamente.
4.1.3.5 Contenido de fibra cruda
Para determinar el contenido de fibra cruda de las semillas de huauzontle se utilizó el método descrito en la NMX-F-090-S-1978. Se colocó 1 g de muestra en un matraz con 200 mL de ácido sulfúrico 1.25% (v/v) y la mezcla se mantuvo en ebullición por 30 min. Posteriormente la mezcla se filtró al vacío en un embudo Büchner con papel filtro libre de cenizas. A continuación la muestra se arrastró por lavado a un matraz con 200 mL de hidróxido de sodio 1.25% (p/v) y se llevó nuevamente a ebullición por 30 min. La muestra se volvió a filtrar al vacío en el embudo y se lavó sucesivamente con agua hirviendo, etanol y acetona. Después de esto, el papel filtro se colocó en un crisol de porcelana y se secó hasta peso constante a 100 °C, seguido de lo cual la muestra fue incinerada en una mufla a 550 °C. Finalmente el crisol se enfrió en un desecador para su posterior pesado en una balanza analítica. El contenido de fibra cruda se calculó con la siguiente ecuación:
%𝑓𝑖𝑏𝑟𝑎 =(𝑝𝑒𝑠𝑜𝑐𝑟𝑖𝑠𝑜𝑙 𝑦 𝑝𝑎𝑝𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑛 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑡𝑟𝑎𝑡𝑎𝑑𝑎− 𝑝𝑒𝑠𝑜𝑐𝑟𝑖𝑠𝑜𝑙 𝑐𝑜𝑛 𝑝𝑎𝑝𝑒𝑙) − 𝑝𝑒𝑠𝑜𝑐𝑒𝑛𝑖𝑧𝑎𝑠 𝑝𝑒𝑠𝑜 𝑜𝑟𝑖𝑔𝑖𝑛𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑥100
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