Clones del híbrido sin brotes antes del cultivo en NPS

Se realizó un segundo experimento utilizando los clones del híbrido que no presentaban brotes antes del cultivo en NPS. La finalidad de este experimento fue complementar los resultados del experimento anterior y evaluar el efecto del NPS en la producción de nuevos brotes considerando la homogeneidad en el explante inicial (sin brotes) en todos los tratamientos.

Este experimento se realizó con 6 repeticiones en cada tratamiento 0, 10, 20, 30 y 40 M NPS. Los valores para las variables de respuesta mostradas en la tabla 19 son el resultado de la diferencia entre el estado final e inicial del cada explante. Con respecto a la altura, ocurrió el mismo fenómeno que se ha presentado en los experimentos anteriores, donde el tejido del ápice de las hojas de los explantes se seca. Sin embargo, dicho efecto disminuyó obteniendo solo

96 un 33.3% del total de explantes que disminuyeron su altura en comparación con el 50% en el experimento de clones con brotes. Es importante considerar que la mitad del número de explantes del 33.3% pertenecen únicamente al tratamiento 40 M. Para el número de brotes (la variable de mayor interés), se observó una disminución con respecto al experimento anterior (clones con al menos un brote) ya que solo el 56.6% del total de explantes fueron estimuladas para la producción de brotes. Con referencia a esto, el tratamiento 40 M tuvo un 83.3% de plantas estimuladas superando al control (66.6%) y a los otros tratamientos con NPS.

Tabla 19. Comparación de las variables de respuesta (altura, hojas y brotes) para los clones del híbrido sin brotes durante el cultivo en medio con NPS. (6 repeticiones por tratamiento)

NPS (M)

0 10 20 30 40

ALTURA (cm)

-2.9 0.5 1.8 3.7 1.7 0.7 4.5 1.5 -3.4 1.8 2.1 1.3 7.8 -2.7 -0.8

-0.3 1.3 1.2 -1.2 0.3 0.0 2.3 2.5 1.2 2.1 1.1 -0.2 -0.2 -1.7 -0.3

HOJAS

6 3 2 4 5 13 1 4 8 4 4 4 3 3 10

4 8 3 5 -2 4 5 2 3 4 2 7 6 2 1

BROTES

2 0 0 0 0 5 0 1 3 1 1 0 2 1 2

1 3 1 1 0 0 2 0 0 0 0 4 2 1 0

En términos de promedio (Tabla 20) para la altura, todos los tratamientos con NPS fueron superiores que el control, sin embargo, esté valor no tiene el suficiente respaldo debido a que sólo uno de los 6 explantes aporto este valor. Por lo tanto, sería más razonable considerar el tratamiento 30 M como el mejor debido a que 5 de 6 plantas incrementaron su longitud. Para la variable número de hojas, el tratamiento 10 M superó al control y los tratamientos 20, 30 y 40 M fueron menores al control. El efecto en el número brotes, y retomando que esta variable es la de mayor interés, los tratamientos 10, 20 y 30 M tuvieron el mismo

97 in vitro de un híbrido del género Polianthes

promedio pero menor al control, únicamente el tratamiento 40 M superó el número de brotes promedio obtenido en el control (Figura 49). Estadísticamente no existió diferencia significativa entre los tratamientos (p= 0.8160, 0.1674 y 0.9914, α = 0.05, para altura, número de hojas y número de brotes respectivamente).

Tabla 20. Promedio y desviación estándar para las variables de respuesta en clones del híbrido con presencia de brotes durante el cultivo en medio con NPS.

NPS (M)

0 10 20 30 40

PROM DS PROM DS PROM DS PROM DS PROM DS

ALTURA

(cm) 0.1 1.65 0.87 1.68 1.43 2.64 1.37 0.87 0.35 3.77

HOJAS 4.33 2.25 4.83 4.79 3.83 2.48 4.17 1.60 4.16 3.31

BROTES 1.17 1.17 1.0 2.0 1.0 1.26 1.0 1.55 1.33 0.82

Figura 49. Efecto del NPS sobre las características morfológicas de los explantes clones del híbrido sin brotes al inicio del cultivo. Las barras de bigotes dentro de las barras de colores indican la desviación estándar para cada tratamiento.

98 7.2.6 Extracción y cuantificación de clorofila

Los explantes clones del híbrido (con y sin brotes) se cultivaron en un medio con diferentes concentraciones de NPS. Después de hacer la evaluación para las variables de respuesta se tomó una muestra de material vegetal de cada explante para extraer la clorofila utilizando etanol por 24 hrs. Posteriormente se cuantificó clorofila a y b por medio de espectrofotometría. Las absorbancias obtenidas para los dos tipos de clorofila en cada explante fueron convertidas a g/mL mediante las fórmulas de Wellburn (1994).

Se obtuvo el promedio de clorofila a y b para cada tratamiento con NPS (0, 10, 20, 30 y 40 M) de acuerdo a los dos experimentos con o sin brotes antes del cultivo. Este promedio representa la cantidad de clorofila en g/mL en los explantes de cada tratamiento. El promedio para la clorofila a y b en el tratamiento 0 M NPS fue menor en los explantes con al menos un brote respecto a los explantes sin brotes. Sin embargo, estadísticamente no existió diferencia significativa para el contenido de clorofila tanto a como b entre ambos experimentos (clorofila a p = 0.2893; clorofila b: p = 0.2802, α = 0.05).

Para los explantes con brotes, el contenido de clorofila a fue menor en el control, seguido de 20, 10, 40 y 30 M NPS. Estadísticamente dicha disminución en el control no tuvo efecto significativo con respecto a todos los tratamientos (p = 0.2062, α = 0.05). Para la clorofila b, en este mismo experimento, los tratamientos 10, 30 y 40 M superaron al control, excepto el tratamiento 20 M siendo una vez más numéricamente el tratamiento 30 M NPS el de mayor contenido y presentando diferencia estadísticamente significativa entre los tratamientos (p = 0.0255, α = 0.05). La diferencia que existió fue para los tratamientos 10 y 30 M con el tratamiento 20 M, lo que sólo confirmó que los niveles más bajos de clorofila se dieron en el tratamiento 20 M (Figura 50).

99 in vitro de un híbrido del género Polianthes

Figura 50. Prueba de rangos múltiples (LSD) para comparar las medias de los tratamientos y saber cuáles son diferentes entre sí.

Respecto a los explantes sin brotes los niveles clorofila a y b fueron mayores únicamente en el tratamiento 20 M donde no existió un efecto estadísticamente significativo entre los tratamientos. Los otros tratamientos tienen niveles menores al control de clorofila a y b pero aún sin presentar una diferencia estadísticamente significativa (clorofila a p = 0.3512, clorofila b p= 0.1379 α = 0.05)

Tabla 21. Promedio para el contenido de clorofila a y b en explantes clones del híbrido después del cultivo en medio con NPS.

Clorofila a (mg/mL) Clorofila b (mg/mL) NPS

(M)

Clones con al

menos un brote clones sin brotes

Clones con al

menos un brote clones sin brotes 0 1.979 ± 0.662 2.101 ± 0.299 1.063 ± 0.193 1.091 ± 0.095 10 2.318 ± 0.093 1.881 ± 0.521 1.189 ± 0.007 1.019 ± 0.138 20 2.046 ± 0.345 2.259 ± 0.351 1.097 ± 0.094 1.124 ± 0.087 30 2.445 ± 0.523 1.943 ± 0.335 1.214 ± 0.124 1.039 ± 0.109 40 2.240 ± 0.191 1.581 ± 0.436 1.167 ± 0.036 0.954 ± 0.142

100 Figura 51. Comparación del contenido de clorofila entre los tratamientos con NPS para los clones del híbrido con o sin brotes durante el cultivo.

7.2.6 Enraizado y aclimatación de explantes clones del híbrido 1008157