Microestructuras observadas en ácido láctico mediante microscopía óptica con aumentos de 40X y 10X (e), tomadas con una cámara Samsung HD de 16 megapíxeles y 5X. Foto del autor. Microestructuras observadas en ácido láctico mediante microscopía óptica con un aumento de 40X y tomadas con una cámara Samsung HD de 16 megapíxeles y 5X. Foto del autor.
INTRODUCCIÓN GENERAL
Cano (2012) menciona que en el engrosamiento del cladodio del cactus no se encuentran presentes virus que puedan ser transmitidos mecánicamente o por los insectos Chelinidea tabulata o Hesperolabops gelastops (Kirk) porque no pudieron transmitir los síntomas. Debido a que no está establecido qué tipo de agentes son los causantes del engrosamiento del nopal y la necesidad de identificarlos, el objetivo de este trabajo de investigación fue comparar morfológica y molecularmente hongos obtenidos de cladodios de plantas con y sin síntomas e identificarlos. de engrosamiento.
HIPÓTESIS
OBJETIVO GENERAL
Objetivos específicos
REVISIÓN DE LITERATURA
Origen y distribución
Características ecológicas
Características morfológicas
Taxonomía
Usos
El uso de los nopalitos se encuentra principalmente en medicina y alimentación (Pérez, 1998), debido a componentes como vitaminas, minerales, antioxidantes, fibra dietética, hidrocoloides y colorantes naturales (Sáenz, 2004). Uno de los usos más importantes del cactus a nivel mundial es el uso de las hojas para el cultivo de la cochinilla (Dactylopius coccus Costra). Es la fuente del pigmento rojo natural ácido carmínico, que se utiliza en las industrias cosmética, farmacéutica, gastronómica y textil. ; además del uso decorativo (Llanderal y Nieto, 1999).
Importancia mundial
Por su variedad, aroma, sabor y textura única, uno de los principales usos del nopal es el consumo fresco del fruto, llamado tuna. Esta verdura se ha convertido en un alimento muy valorado porque, además de su contenido nutricional, tiene un impacto positivo en la fisiología de los humanos y animales que lo consumen, con beneficios para la salud y prevención de enfermedades (Sáenz, 2006).
Importancia nacional
- Zonas productoras
- Estado de México
- Cultivares
- Densidad de siembra
- Riego
- Labores culturales
- Cosecha
- Plagas
- Pudrición suave o bacteriana
- Mancha negra
- Mal de oro
- Engrosamiento del cladodio
En el Cuadro 2 se enumeran los principales estados productores de cactus forrajeros, siendo Coahuila el primer productor. En el Estado de México se cultivan 16,774 hectáreas de nopal para la producción de espinas y 869.5 hectáreas para nopalito, concentradas principalmente en los municipios de San Martín de las Pirámides, Otumba, Axapusco y San Juan Teotihuacán, con un valor de producción de
- Marcadores morfológicos
- Marcadores genéticos
- Técnicas moleculares
- Purificación del DNA
- Reacción Cadena Polimerasa (PCR)
- Internal Transcribed Spacer (ITS)
- Polimorfismos de fragmentos de restricción (RFLP)
- Enzimas de restricción
- Inter Simple Sequence Repeats (ISSR)
- Secuenciación
- Antecedentes en la identificación de agentes causales de enfermedades en nopal El uso de estas o algunas herramientas moleculares para la identificación de agentes
La primera técnica, conocida como hibridación Southern, tiene como objetivo investigar las variaciones en la longitud de los fragmentos de ADN provocadas por la restricción del genoma, en particular por algunas endonucleasas. El método implica la realización de una serie repetitiva de ciclos, cada uno de los cuales incluye la desnaturalización del ADN, la asociación del cebador con la cadena desnaturalizada y la síntesis, a partir del cebador, de una doble cadena por acción de la polimerasa. Los genes de ARNr de los eucariotas, conocidos como ADN ribosomal o ADNr, se encuentran como unidades repetitivas dispuestas una detrás de otra.
Estos genes están ubicados en los sitios espaciadores de los genes de ARNr 18S, 5.8S y 28S; el espaciador interno transcrito se conoce como ITS1 e ITS2. Estas regiones del ADN permiten diferenciar especies dentro de un género mediante el análisis de las regiones divisorias de los genes del ADN. Los alelos detectados están determinados por las diferentes longitudes de los fragmentos de ADN creados por varias enzimas de restricción.
El análisis de los polimorfismos de longitud de los fragmentos de restricción (RFLP) fue el primer marcador de ADN utilizado por los biólogos de poblaciones (Parker et al., 1998). Las secuencias de cebadores de microsatélites pueden anclarse con uno o dos nucleótidos adicionales en sus extremos 5' o 3' (Wolfe, 2005).
MATERIALES Y MÉTODOS 5.1 Área de estudio
Aislamiento y purificación de hongos
Los cladodios de cactus se lavaron con agua corriente, luego se dividieron en tres partes correspondientes a la parte apical, la parte media y la base del cladodio, de cada parte obtenida se realizaron 5 cortes de aproximadamente medio centímetro, se colocaron en Tazas de 25 ml de agua destilada; Se obtuvieron un promedio de 125 cortes. Las secciones de cladodio se sumergieron en una solución de cloro comercial al 25 % durante 45 segundos, se enjuagaron con agua destilada estéril y se transfirieron a otra solución de alcohol etanol al 70 % durante 45 segundos, y luego se les dio otro enjuague con agua destilada estéril. y el exceso de humedad se eliminó con hisopos estériles. Los 5 cortes correspondientes a una sección del cladodio se colocaron en cajas de Petri con medio de cultivo PDA acidificado (BIOXON®) (25 gotas de ácido láctico/L), se sellaron y se incubaron a 2°C por un minuto.
Los cultivos monoconidiales se obtuvieron a partir de levadura hifal en agua-agar, se transfirieron y almacenaron en medio PDA acidificado.
Caracterización fenotípica
Caracterización molecular
- Protocolo de extracción de DNA en hongos
- Cuantificación y calidad de DNA
- Condiciones de PCR-ITS para la amplificación de DNA ribosomal
- Electroforesis de la amplificación
- RFLP-ITS
- Gel de acrilamida 6%
- PCR-ISSR
- Secuenciación
- Reacción de secuenciación
- Análisis de datos
- Análisis PCR-RFLPs. Este se realizó una vez obtenido el perfil electroforético
- Análisis PCR-ISSR
- Análisis de secuencias
- Elaboración de árboles filogenéticos
Se realizó una amplificación por PCR con la mezcla de los componentes de la reacción por muestra, como se indica en la Tabla 7. La electroforesis de los productos de la PCR se realizó en un gel de agarosa al 1,2%, se realizó una mezcla de 4μL de producto. de PCR con 4 µL de tampón de carga, las muestras se procesaron en una cámara horizontal GIBCO BRL® y un tampón de procesamiento de acetato de tris-sodio-EDTA (TAE) 1X. Para la posterior estimación de los pesos moleculares de los productos de PCR se utilizó un marcador molecular con un peso de 1kb marca GeneRuler™.
Para caracterizar los fragmentos de ITS fúngicos obtenidos con el par de cebadores 5HP-NL4, Ramírez (2013) propone su uso para la digestión. Los productos amplificados se visualizaron en geles de acrilamida al 6% como se describe para los RFLP. Como primer paso, se estimó el tamaño de los fragmentos a obtener utilizando marcadores de peso molecular de ADN estándar y digestión virtual realizada en el programa BioEdit como referencia.
Con la información sobre los fragmentos en los geles, se construyó una matriz binaria de 0 y 1. El análisis de los perfiles obtenidos se realizó mediante la construcción de una matriz binaria (0 y 1) como en RFLP.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Aislamientos y purificación de hongos asociados a cladodios de nopal con y sin síntomas de engrosamiento
De 11 plantaciones de cladodios de cactus sin síntomas de engrosamiento, dos aislados de Fusarium sp., uno de Phoma sp.
Caracterización fenotípica
Las estructuras que se observaron para su identificación se obtuvieron de crecimientos en medio de clavo, que eran microconidias de elipsoidales a fusiformes producidas en las cabezas secas de polifiálidas en micelios aéreos (Figura 5). Microestructuras observadas en ácido láctico mediante microscopía óptica con un aumento de 40X y capturadas con una cámara Samsung HD de 16 megapíxeles y 5X. Microestructuras observadas en ácido láctico mediante microscopía óptica con aumentos de 40X y 10X (e), tomadas con una cámara Samsung HD de 16 megapíxeles y 5X.
Junto con Simmons (2007), este hongo produce micelio abundantemente ramificado con septos de color marrón dorado. 2008) afirma que están presentes conidióforos de color marrón claro, simples o ramificados, relativamente cortos, con conidios en las partes fértiles apicales. Los conidios se desarrollan acropétalos, de color marrón (oscuro), cilíndricos o fusiformes, con espigas a menudo cilíndricas, muriformes, compuestos por 3-4 (8) paredes transversales y 1-2 paredes longitudinales, lo que coincidió con lo observado. las cepas obtenidas (Figura 7). La apariencia de la colonia es algodonosa, con colores que varían en tonos oliva, gris, amarillo y marrón dependiendo de la edad y condiciones del cultivo (Figura 8), así lo describen Aveskamp et al.
Crous y Johannes (2012) describen colonias discontinuas para M. aloe, con micelio aéreo moderado; en PDA el crecimiento es lento, alcanzando sólo 25 mm de diámetro a las 3 semanas, con micelio aéreo delgado y márgenes de plumas, de color marrón, marrón con manchas y rosado, coincidiendo con las colonias como se ve en la figura 10. 48. Forma pseudotecios gregarios; Cuando el ostiolo madura, entra en erupción; El pseudotecio es esférico o piriforme, de color negro.
Caracterización molecular .1 Extracción de DNA
- Amplificación de fragmentos ITS
- RFLP-ITS
- PCR-ISSR
- Análisis de secuencias
- Análisis filogenético
Lo que sugiere la existencia de polimorfismos entre los organismos amplificados, según Pallas et al. 2007), que enfatiza que el fragmento de ADN representa variación genética debido a diferencias de longitud entre individuos. El análisis del patrón polimórfico generado por la enzima HinfI formó cuatro grandes grupos correspondientes en orden descendente del dendrograma: grupo I (Montagnula sp.), grupo II (Phoma sp.), grupo III (Alternaria sp.) y grupo IV (Fusarium). sp.) (ver Figura 13), esto coincidió con la morfología descrita anteriormente. Las técnicas modernas basadas en el ADN pueden contribuir en gran medida a la identificación y taxonomía de especies de hongos.
Sin embargo, el número de estudios que utilizan enfoques moleculares para definir nuevas especies en Phoma y resolver complejos de especies dentro de este género es relativamente pequeño (Torres et al., 2006). La Figura 17 muestra los perfiles de huellas dactilares del genoma obtenidos con el cebador ISSR (GGAT)4 utilizado para caracterizar los aislados de hongos. La región TEF fue amplificada para el caso de Fusarium, así lo sugieren O'Donnell et al. 1998), obtuvieron fragmentos de un promedio de 750 pb, lo que coincide con lo reportado por Geiser et al.
Es un patógeno común del maíz domesticado (Zea mays sp. mays) y del teosinte silvestre estrechamente relacionado (Zea sp.) en México y América Central (Desjardins et al. lo reportan por la malformación en el mango. Se ha informado de foma como patógeno en los tallos de las plantas (Saccardo, 1882), pero hoy el género incluye patógenos oportunistas.
CONCLUSIONES
LITERATURA CITADA
Biología y desarrollos recientes en la sistemática de Phoma, un género complejo de gran importancia cuarentenaria. Estudio de aspectos bióticos y fisiológicos relacionados con el engrosamiento de cladodios del nopal tunero (Opuntia ficus-indica). En: Actas del X Congreso Nacional y VIII Congreso Internacional sobre el Conocimiento y Uso del Nopal y otras Cactáceas de Valor Económico.
Proceso de producción y comercialización de espinas en dos comunidades del estado de Puebla. Detección del patotipo sin hojas de Verticillium dahliae en plantas de olivo infectadas mediante PCR anidada. Patogenia y epidemiología del mango “escoba de bruja” (Fusarium subglutinans y F. oxysporum) en Michoacán, México.
Phylogenetic relationships of the downy mildew (Peronosporales) and related groups based on nuclear large subunit ribosomal DNA sequences. Phylogenetic analysis of Aspergillus based on the internal transcribed spacer regions and the 5.8 S rRNA gene. Identification of species in Aspergillus section Flavi based on sequencing of the mitocondrial cytochrome b gene.
Environmental influences on the yield, quality and cold hardiness of cactus pears, and the development of hybrids with improved cold hardiness.
