AportAciones de los estudios funcionAles

Tanto la introducción como los artículos y discusiones de esta monografía reflejan la opinión de los autores correspondientes, por lo que la Fundación Dr. Departamento de Farmacología Facultad de Farmacia Universidad del País Vasco Paseo de la Universidad 7 01006 Vitoria.

Nuevos métodos funcionales para el estudio de la interacción fármaco-receptor

S alléS : En vez de utilizar concentraciones máximas, ¿habéis probado concentraciones
D. I vorra : Cuando utilizas concentraciones menores del agonista de los adrenoceptores
S alléS : ¿Y si se aplica la ecuación de Cheng- Prusoff?
S alléS : Entiendo que el método es bueno para antagonistas de alta afinidad, pero que
D’o cón : El método ha demostrado ser válido para los antagonistas de alta y baja afinidad
G IralDo : Creo que valdría la pena desarrollar modelos matemáticos mecanísticos que in-
P érez -v Izcaíno : Parece que definir la con- centración máxima a utilizar es clave en este
l lenaS : En su presentación nos ha mostrado que con los receptores α adrenérgicos exis-
B oSch : ¿Cuál sería su posible aplicación te- rapéutica?
D. I vorra : Intestinal
D’o cón : Además, en este caso concreto, no se observaba un fenómeno de desensibiliza-

Los RCC de relajación o recuperación del tono contráctil obtenidos con antagonistas se ajustan a un sigmoide (GraphPad Software, San Diego, CA) y se calcula el valor pIC50. Otro parámetro que se obtiene de los antagonistas de CCR es la pendiente de la curva (p), y si es importante-.

Actividad vasodilatadora

Orallo
e rIll : ¿Qué concentraciones de t-RESV se consiguen en el organismo tras la ingesta
o rallo : Se consiguen concentraciones en sangre muy parecidas a las que acabo de
o rallo : Se ha descrito en distintas publi- caciones que el t-RESV inhibe la actividad
o rallo : Hasta ahora sólo se han descrito en humanos efectos beneficiosos en trata-
o rallo : No hemos realizado ningún estudio sobre esto
o rallo : Cacahuetes, arándanos y moras de moral, principalmente
P érez -v Izcaíno : Nosotros trabajamos con fla- vonoides y hemos observado que en plasma
o rallo : Prácticamente no se han realizado estudios de este tipo en humanos. De todas
o rallo : Está publicado que atraviesa la ba- rrera hematoencefálica y que accede al SNC,
o rallo : Que yo sepa, no se ha descrito que el t-RESV produzca tolerancia
D’o cón : La tolerancia que generan los ni- tratos se debe en gran parte al metabolismo

Curvas de concentración-respuesta de vasorrelajación inducida por t-RESV (1–30 µM) en anillos intactos de aorta de rata precontraídos con NA (1 µM; panel A) o con altas concentraciones de KCl extracelular (60 mM; panel B). Diagrama de la biosíntesis de O2• – en células vasculares (células lisas y células endoteliales) mediante la activación de NAD(P)H oxidasa y XO.

PlanaS: el efecto protector aún se observa después de cinco horas, pero generalmente se acompaña de un aumento del sangrado y la mortalidad. PlanaS: Creo que lo que acabas de mencionar es un ejemplo muy claro de uno de los problemas que tenemos en los experimentos. A veces vemos efectos que no nos interesan y luego tenemos un gran impacto en otras investigaciones.

Es obligatorio tener muy en cuenta aspectos que pueden no ser convenientes para nosotros para publicar el artículo, pero que siguen siendo muy relevantes para la investigación en general. BaeyenS: Si hay cambios motores muy obvios y otros cambios cognitivos muy sutiles, los cambios cognitivos obvios y otros muy sutiles, usar la escala para evaluar la eficiencia funcional parece clave.

Puede ser que la prueba de fMRI sea una forma de evaluación más objetiva, pero aún no ha sido bien estudiada.

Nuevos modelos funcionales en inflamación

Aplicaciones en patología pulmonar

J. Sanz

A continuación, se realizó el recuento diferencial de leucocitos en el lavado broncoalveolar (BAL) de los diferentes grupos 24 horas después de la exposición al antígeno. Efecto de diferentes inhibidores de la PDE4 sobre la adhesión leucocitaria y la expresión de diferentes MAC. Efecto de diferentes inhibidores de la PDE4 (roflumilast, N-óxido de roflumilast, rolipram y cilomilast) sobre la adhesión de neutrófilos humanos a HUVEC estimulados con TNF-α (A), aumento de E-selectina (B) y ARNm de E-selectina (C) ) sobre HUVEC estimulado por TNF-α en presencia de un inhibidor de PDE3 (motapizona), y sobre el aumento de la integrina CD11b en neutrófilos humanos estimulados por fMLP (D).

En primer lugar, comparamos la potencia de diferentes inhibidores de la PDE4 sobre la adhesión de neutrófilos a HUVEC estimuladas con TNF-α (0,3 ng/ml) durante 3 h. Asimismo, observamos que roflumilast inhibía in vivo el aumento de la expresión de selectina P y E inducido por LPS.

Papel de los canales de potasio dependientes del voltaje, de la PKC ζ

D’o cón : Quería comentar unos resultados que encontramos analizando in vitro la respuesta
P érez -v Izcaíno : A veces la vasoconstricción observada no refleja bien la verdadera vaso-
D’o cón : ¿No crees que en la hipoxia, en condiciones fisiológicas, los vasos ya tienen
P érez -v Izcaíno : Las arterias pulmonares principales se consideran insensibles a la
P érez -v Izcaíno : ése es un problema funda- mental, porque no disponemos de fármacos
l lenaS : ¿Crees que el modelo de la mono- crotalina es todavía un modelo válido para
P érez -v Izcaíno : Sí, es un modelo amplia- mente utilizado por su sencillez y además
S alléS : ¿A qué concentraciones la desipra- mina actúa como inhibidor de las esfingo-
P érez -v Izcaíno : La serotonina es un media- dor implicado en la hipertensión pulmonar,

EL PAPEL DE LOS CANALES KV, PKCζ Y ROS EN LA VASOCONSTRICCIÓN PULMONAR INDUCIDA POR TXA2. En otro experimento funcional, pretratamos las arterias pulmonares con KCl, lo que produjo despolarización de la membrana y vasoconstricción debido a la disminución de la actividad del canal de K+. Sin embargo, esta contracción, a diferencia de la de U46619, no fue inhibida por el péptido inhibidor de PKCζ.

Esto sugirió que la producción de ROS estaba ubicada aguas abajo de PKCζ en la cascada de señalización. La inhibición de la producción de ROS por el péptido inhibidor de PKCζ confirmó esta hipótesis.

Estudios funcionales en aprendizaje y memoria

J. Ramírez
J. r aMírez : Hay distintos protocolos para desarrollar un laberinto acuático de Morris
J. r aMírez : Es un modelo que gusta mucho porque en el Alzheimer la primera área y la
e rIll : Considerando el efecto antiglucocor- ticoide de la progesterona, si pensamos que
M. B aeyenS : Tal vez se debería ser algo más prudente respecto a la generalización sobre

El laberinto de agua es uno de los modelos más utilizados en el estudio de la memoria espacial en roedores. Por lo tanto, dada la participación del hipocampo y la memoria visuoespacial en la enfermedad de Alzheimer, este laberinto acuático de Morris es particularmente útil. Los días 4 y 7 (días de retención, memoria a corto y largo plazo), se retiró la plataforma del pool.

Efecto de la separación materna en la prueba del laberinto de agua de Morris, en la fase de retención, en ratas macho y hembra. BaDay: Cuando usa inhibidores de acetilcolinesterasa en el laberinto de agua de Morris, ¿cuánto tiempo le toma al animal mostrar signos de aprendizaje?

Problemática de los estudios

S alléS : ¿No os interesaría determinar las concentraciones cerebrales en una región
P érez -v Izcaíno : ¿En qué se diferencian los dos posibles métodos del análisis isobolo-
B oSch : Si la única asociación beneficiosa que se repite en los diferentes modelos es la

En la combinación de fenobarbital y fenitoína la eficacia aumenta de forma aditiva y la toxicidad de forma infraaditiva, pero el índice terapéutico de la fenitoína en monoterapia es mayor que el de la combinación4,25. El estudio de eficacia anticonvulsivante, neurotoxicidad y concentraciones cerebrales se realizó de 9 a 14 horas y en el momento de máximo efecto de cada antiepiléptico. Efecto de la asociación de una dosis baja de otros antiepilépticos sobre la dosis efectiva 50 (4-aminopiridina, pentilentetrazol o picrotoxina) o la dosis tóxica 50 (rotarod) de cada antiepiléptico.

La mayoría de las asociaciones beneficiosas se observaron con valproato, seguido de lamotrigina y felbamato. La gabapentina, lamotrigina y el valproato redujeron las concentraciones cerebrales de felbamato, y la vigabatrina redujo las de lamotrigina, reforzando la naturaleza farmacodinámica de las interacciones.

Efectos cognitivos, motivacionales y neuroquímicos de la administración

Robledo
r oBleDo : Los humanos toman 70 a 100 mg/
B oSch : Creo que no has comentado nada sobre el sistema cannabinoide. Si no estoy
B urGueño : Me ha llamado la atención los protocolos tan largos que utilizáis y me gus-
B urGueño : La MDMA induce un aumento de serotonina en la corteza prefrontal, pero en
S alléS : Nos has presentado datos sobre la extinción de la conducta y quisiera rela-

La participación de la 5-HT en las propiedades gratificantes de la MDMA también se ha demostrado recientemente en ratas. En general, estos datos apuntan a la existencia de una dinámica reguladora recíproca compleja entre la DA en el núcleo accumbens y la 5-HT en la corteza prefrontal, que modula los efectos de refuerzo de la MDMA. El papel de la NE en los efectos de refuerzo de la MDMA ha sido poco estudiado.

Los resultados sugieren que los efectos adversos de la MDMA en la consolidación de nueva información podrían ser un problema mayor en el caso de los adolescentes en edad escolar. Esto apunta a una disociación entre los efectos de refuerzo de la MDMA y un aumento aislado de dopamina en el núcleo accumbens.

I. Colado
I. c olaDo : La mayor parte de los estudios coinciden en que no hay una afectación
l lenaS : El metilfenilato es otro derivado an- fetamínico que cada vez tiene más uso entre
S alléS : ¿El motivo de que utilicéis ratas Dark Agouti es por su metabolismo hepático
S alléS : Por lo tanto, esto tendría que te- nerse en cuenta en los individuos que son
e rIll : Las diferencias en los efectos de la MDMA en función de la temperatura me re-
I. c olaDo : Son efectos a largo plazo
J. S anz : En referencia al efecto ansiogénico o ansiolítico observado dependiendo de la

El efecto neurotóxico de la MDMA en roedores es específico de especie, ya que existen marcadas diferencias entre el daño neuronal que causa en ratas y ratones. Es interesante notar que la neurotoxicidad en la rata ya se manifiesta después de la administración de una dosis única de MDMA, mientras que el ratón requiere la administración repetida del fármaco y dosis más altas que en la rata. Estudios realizados en ratas han demostrado que una de las consecuencias a largo plazo de la neurotoxicidad provocada por la MDMA es un cambio en la termorregulación, manifestado por los animales que tienen menos ca-.

Se estudió el efecto de la lesión neurotóxica producida por MDMA sobre la respuesta ansiolítica o ansiogénica a largo plazo de los animales. De acuerdo con estos resultados, se ha demostrado que la exposición a una dosis neurotóxica de MDMA puede afectar significativamente la regulación de la ingesta de alcohol.

Estudios experimentales en dolor agudo e inflamatorio

M. Cendán

El modelo de formalina se diferencia de la mayoría de los modelos basados en estímulos de corta duración (fásicos) y alta intensidad en que es posible determinar la forma en que el animal responde al dolor moderado y continuo (tónico) generado por el daño tisular. El primer período se registró de 0 a 5 minutos después de la inyección de formalina y se consideró que indicaba la primera fase del dolor. Evolución temporal de la respuesta dolorosa (duración del lamido o mordisqueo de la pata tratada) inducida por la inyección intraplantar de formalina al 2,5 % en animales no tratados o tratados con el disolvente del fármaco.

Evolución temporal de la respuesta dolorosa (duración de lamer o morder la pata tratada) inducida por la inyección intraplantar de formalina al 1,25 % en animales deficientes en el receptor σ1 (knockout) y de tipo salvaje. BaeyenS: Sí, pero en el modelo de cola, no en el modelo de formalina.

Modelos animales de dolor neuropático

Resumen: En investigación básica disponemos de algunos modelos para estudiar el dolor neuropático y su tratamiento farmacológico; entre ellos, por su uso habitual, se destaca la manipulación quirúrgica de los nervios espinales, abordaje desarrollado a finales del siglo XX, y la administración de agentes químicos (antibióticos, antitumorales), desarrollado a principios de este siglo y derivados directamente de la observación clínica, ya que se ha demostrado que el uso de estos fármacos puede causar neuropatías periféricas en los pacientes. Aunque muchos de los avances más importantes en el conocimiento del dolor neuropático se han debido al uso del modelo de ligadura de nervios (cambios en la concentración de algunos neurotransmisores o activación de células gliales, por ejemplo), actualmente los modelos se basan en el uso de agentes antineoplásicos están ganando aceptación entre la comunidad científica, en parte debido a su correlación con la clínica humana. La comparación entre ambos modelos muestra que los cambios que se producen en situaciones de daño nervioso son similares a corto y medio plazo (cambios en la inervación periférica, liberación de sustancias proinflamatorias...), que ambos son modelos útiles porque nos permiten mejorar el conocimiento sobre el origen y desarrollo del dolor neuropático, así como el desarrollo de fármacos específicos, y que puedan proporcionarnos datos objetivos para seleccionar el modelo más adecuado para estudiar los diferentes tipos de dolor neuropático.

Goicoechea

Así, por ejemplo, en el modelo de la conexión del nervio ciático, se sabe que es una de las causas de la aparición y mantenimiento del dolor crónico. Evaluación de hiperalgesia (A) y alodinia mecánica (B) en ratas con ligadura del nervio ciático, 14 días después de la cirugía. Evaluación de hiperalgesia (A) y alodinia mecánica (B) en ratas antes (día B), durante (T3-T7) y después del tratamiento con pacilitaxel.

La comparación de los dos enfoques experimentales más utilizados en el laboratorio para inducir el dolor neuropático, el modelo de ligadura del nervio ciático y el modelo de administración de antitumorales, lo demuestra. Las barras muestran la media ± error estándar de la media de los valores obtenidos en grupos de 12 animales.

M. B aeyenS : Parece que cada vez se pone más de manifiesto que el pretratamiento es

El modelo de ligadura del nervio ciático, una vez desarrollada la técnica, es absolutamente reproducible y no hay variaciones. En cambio, parece que los antagonistas de CB2 están más involucrados en la inhibición de la reactividad microglial. Ahora hay más argumentos para el uso de antagonistas CB2 porque este receptor es minoritario en el sistema nervioso central.

BaeyenS: ¿Cuál prefiere entre el modelo de ligadura suelta de ciática y el modelo antitumoral? GoIcoechea: Me gusta el modelo de ligadura del ciático básicamente por razones prácticas: cada animal es su propio control porque se conserva una pata sana y la otra lesionada, hay poca variabilidad dentro y entre individuos, y es menos costoso.

Monografías Dr. Antonio Esteve publicadas