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Abreviaturas
Resumen
En el presente trabajo, la formación de múltiples brotes fue inducida por organogénesis y proliferación de yemas a partir de híbridos interespecíficos de lisianthus utilizando diferentes concentraciones de auxinas y citoquininas como fuente de reguladores del crecimiento. Obtención de más de 18 brotes al utilizar concentraciones equivalentes de AIA y BA (0,5 mg/L) formados directamente de yemas axilares; Además, por organogénesis directa se pudieron observar hasta 14 brotes utilizando la misma citoquinina, aunque a mayor concentración (1,0 mg/L BA) y en combinación con 0,5 mg/L de ácido giberélico, estos brotes se formaron a partir de segmentos. foliar. Además, se estimuló el desarrollo de callos embriogénicos (determinado por la presencia de células polarizadas) a partir de segmentos de hojas utilizando concentraciones bajas de 2,4-D y KIN (0,5 mg/l y 0,5-1,0 mg/l, respectivamente) en combinación con una alta concentración de sacarosa (60 g/L) como fuente de carbono.
Introducción
Antecedentes
- Importancia del mercado florícola en México
- Importancia del lisianthus en el mercado florícola
- Cultivo de lisianthus en México
- Lisianthus Eustoma grandiflorum
- Origen y distribución
- Morfología
- Ciclo de cultivo del lisianthus
- Técnicas de cultivo in vitro
- Reguladores de crecimiento empleados en el cultivo de tejidos
- Organogénesis
- Proliferación de yemas axilares
- Embriogénesis somática
La sensibilidad del lisianthus a las altas temperaturas es elevada, especialmente en el periodo inmediatamente posterior a la germinación de las semillas hasta el desarrollo de 3-4 pares de hojas, momento en el que pueden inducir la formación de una roseta de hojas en la planta. permiten el desarrollo del tallo floral, retrasando su floración (Harbaugh et al., 1992; Harbaugh, 2006; Hernández, 2011). La germinación se refiere al desarrollo de la raíz y la parte aérea o brote y la conversión al proceso de desarrollo de plantas enteras en condiciones ex vitro a partir de embriones somáticos. Asimismo, la nutrición juega un papel en la optimización de la embriogénesis somática ya que la forma en que se dispone de nitrógeno es una variable importante ya que la reducción de este elemento mejora la iniciación y maduración de los embriones (Rose, 2004) y si la concentración de sacarosa es demasiado alta, se afecta el desarrollo embrionario (Von Arnold, 2008), lo cual se ha demostrado que al utilizar diferentes concentraciones de sacarosa (1 o 2%) en combinación con auxinas (6,25 o 12,5 mg/L NAA), se logró inducir la formación de embriones somáticos. embriones en soja utilizando cotiledones inmaduros como explantes, encontrando una interacción significativa (Lazzeri et al., 1988).
Justificación
Objetivo general
- Objetivos particulares
Hipótesis
Metodología general
- Obtención de explantes
La aplicación de 0,5 mg/L de AIA en combinación con diferentes concentraciones de BA en los tratamientos T6, T7 y T8 también promovió la formación de brotes. Aunque se incrementó la concentración de 2,4-D a 1.0 mg/L en el tratamiento T9 (Figura 20I), los explantes no mostraron ningún tipo de respuesta. La misma respuesta se observó en el tratamiento T13 (Figura 20M) cuando KIN estaba ausente y la concentración de 2,4-D se aumentó a 2,0 mg/L.
Organogénesis
- Metodología
- Medio de cultivo
- Análisis Estadístico
- Resultados
- Discusión
Proliferación de yemas axilares
- Metodología
- Medio de cultivo
- Análisis estadístico
- Resultados
- Discusión
89 En particular, cuando se utilizaron concentraciones bajas y equivalentes de ambos reguladores del crecimiento (IAA y BA a 0,5 y 1,0 mg/L), además del desarrollo de las yemas axilares presentes en el explante original, también se vio afectada la formación de algunos brotes. observado. en la parte del pecíolo donde se cortó la lámina de la hoja. Encontrando una disminución en la respuesta a concentraciones medias y altas de ambos reguladores (1.0 mg/l y 2.0 mg/l), donde se observó que se forma menor cantidad de callo con la aplicación de NAA (tratamientos T3 y T4) y El desarrollo de los brotes también se ve afectado en los tratamientos que contienen AIA (tratamientos T6 y T7). En consecuencia, la aplicación de mayores concentraciones de AIA en T6 y T7 resultó en una disminución en el número de brotes, contándose hasta 3 estructuras vegetativas utilizando 2.0 mg/L de ambos reguladores en el tratamiento T7.
Así, con bajas concentraciones de ambos reguladores de crecimiento (0.5 mg/L) luego de 7 semanas de cultivo en el tratamiento T5, se indujo la formación de hasta 18 brotes por explante, la cual se redujo a un promedio de 3 brotes con el uso de altas concentraciones de los reguladores mencionados (2,0 mg/l en el tratamiento T7). Al revelar la relación entre el número de brotes y la concentración de reguladores utilizados, es comprensible que a una dosis de 0,1 mg/L BA, muchos de los brotes reportados por Ördögh et al., (2006) ocurrieran al aumentar a 0,5 mg/L L. BA en este ensayo y especialmente en combinación con 0,5 mg/L de IAA afectó el número de brotes. Además, en esta evaluación se utilizó BA en combinación con diferentes concentraciones de auxinas (IAA o NAA), lo que permitió la formación directa e indirecta de brotes, cuyo número es bajo cuando el medio se suplementa con NAA y BA, debido a que el diferentes explantes de las tres concentraciones evaluadas desarrollaron un abundante callo del cual surgieron algunos pequeños brotes, pero por lo demás cuando se adicionó IAA y BA se formaron hasta 35 brotes al tratar con T5 (con un promedio de 18 brotes por explante). que contenía la mitad de la dosis utilizada por los autores antes mencionados (0,5 mg/L de IAA y BA); observación de una relación inversamente proporcional entre la concentración de reguladores y el número de brotes formados.
Recientemente, en una evaluación de Pop et al. (2016), indicaron que el medio de cultivo suplementado con 1,0 mg/L de BA y 0,5 mg/L de IAA fue el más efectivo para la recuperación. Así, con una dosis equivalente de ambos reguladores (0,5 mg/L), el máximo número de brotes se obtiene en el tratamiento T5, mientras que se observa una reducción a la mitad cuando se duplica la dosis de auxina y citoquinina a 1,0 mg/L ( tratamiento T6). Se formó el mismo número de brotes en un período equivalente cuando se añadió la misma combinación de reguladores al medio de cultivo en concentraciones bajas y equivalentes cuando se trató con T5 (IAA y BA 0,5 mg/L).
En conjunto, estas observaciones explican cómo altas dosis de reguladores del crecimiento interfieren negativamente en el desarrollo cuantitativo y cualitativo de los brotes debido a la existencia de interacciones entre auxinas, citoquininas, ácido giberélico y ácido abscísico; y así cómo las bajas concentraciones de IAA y BA (0,5 mg/L) utilizadas en la presente evaluación generaron el mayor número de brotes.
Embriogénesis somática
- Metodología
- Medio de cultivo
- Análisis Estadístico
- Resultados
- Discusión
Al finalizar los correspondientes ciclos de cultivo en el medio de expresión, se determinó la tasa de regeneración, considerada como el porcentaje de callos que presentan desarrollo de estructuras embriogénicas. Sin embargo, la determinación de la capacidad embriogénica sólo pudo demostrarse mediante tinción diferencial, que es un requisito previo para su desarrollo posterior en embriones somáticos en el medio de expresión. La dependencia de la concentración y combinación de reguladores del crecimiento en el medio de inducción fue notable cuando la aplicación de citoquinina KIN sola indujo la formación de brotes directamente a partir del explante original (tratamientos T1-T4), en contraste con cuando se administró 2,4-D-auxina. administrado. añadió, porque se favoreció el desarrollo de callos.
El callo formado en el tratamiento T5 (0,5 mg/L 2,4-D; Figura 19E) se caracterizó por cubrir aproximadamente la mitad de la superficie del explante, tenía una consistencia no quebradiza (es decir, era una masa compacta de células y difícil de desintegrar), de apariencia nodular y de color amarillo. El callo desarrollado a baja concentración de ambos reguladores del crecimiento (0,5 mg/L 2,4-D y KIN) en el tratamiento T6 (Figura 19F) tiene características típicas de un callo embriogénico, es decir, 'un color amarillo cremoso, de De consistencia blanda (quebradiza) aunque de apariencia algodonosa y de las células embriogénicas que iban formando pequeños grupos, aún mantenían la mayor proporción de tamaño en la parte suspensora respecto a la cabeza embrionaria. Como en el tratamiento T8 (Figura 20F) donde al medio de cultivo se le agregó la misma dosis de 2,4-D pero en combinación con una dosis alta de KIN (2.0 mg/L) se indujo la formación de callo, sin embargo esto no pudo ser considerado embriogénico, ya sea porque carece de células polarizadas.
El uso de concentraciones altas y equivalentes de ambos reguladores de crecimiento en el tratamiento T16 (2,0 mg/L de 2,4-D y KIN) dio como resultado la formación de callo blanco no embriogénico con apariencia algodonosa (Figura 20O), principalmente en el área del corte del explante. 113 Luego de 60 días de cultivo en el medio de expresión seleccionado, se examinó el tipo de respuesta generada en cada caso. 120 Cuadro 14 Respuesta morfogénica generada en medio de inducción para embriogénesis somática en hojas de híbridos interespecíficos de lisianthus.
122 Cuadro 15 Respuesta morfogénica generada en el medio de inducción para la embriogénesis somática en hojas de híbridos interespecíficos de lisianthus. En el tratamiento donde se eliminaron los reguladores de crecimiento T6/MS (Figura 27B), el callo cambió a ser de apariencia más fibrosa y de color verde, aunque permaneció compacto (no quebradizo) y no creció demasiado en comparación con el tamaño original. . Dicho esto, la segmentación y exclusión del callo para subcultivo posterior en el medio de expresión en ambas evaluaciones del presente estudio puede ser un factor influyente en la mala conversión de embriones somáticos.
Conclusiones
Perspectivas
Literatura citada
Calidad y vida post cosecha de Eustoma grandiflorum ((Raf.) Shinners) cultivated with bacteria promotoras de crecimiento y coverita con poly (acetate de vinilo -co- alcohol vinílico). Effects of genotype, light regime, explant position and orientation on direct somatic embryogenesis from leaf explant of Phalaenopsis orchids. In vitro flowering and micropropagation of lisianthus (Eustoma grandiflorum) in response to plant growth regulators (NAA and BA).
Plant regeneration from mesophyll protoplasts of lisianthus (Eustoma grandiflorum) by adding activated charcoal to protoplast culture medium. Efecto de diferentes agents gelificantes en la germination y desarrollo in vitro de plántulas de Echinocactus platyacanthus Link et Otto (Cactaceae). Somatic embryogenesis induced by the simple application of abscisic acid to carrot (Daucus carota L.) seedlings in culture.
Epekto ti temperatura ti angin ken oras iti panagporma ti rosette kadagiti semilia ti Eustoma grandiflorum (Raf.) Shinn. Dagiti cytokinin, auxins ken ti aktibo a karbon ket mangimpluensia ti organogenesis ken anatomiko a pakabigbigan dagiti kultura ti murdong ti saringit ti Lisianthus (Eustoma grandiflorum (Raf.) Shinn). Epekto ti sodium nitroprussiate iti in vitro a panagpabaro ti mestiso ti henero ti Polianthes.
Somatic embryogenesis and de novo shoot organogenesis can be alternatively induced by reactivating pericycle cells in Lisianthus (Eustoma grandiflorum (Raf.) Shinners) root explants.
Anexo 1