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UNIVERSIDAD DE MONTERR EY

OIVISION DE OENCIAS NATURALES Y EXACTAS

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UniVERSIDAD DE monTERREY

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DESCU BRI MlF.NTO E lD~~NTI FICAClON

DE NEISERIAS

_()o Jj _(,o

REPOR'f'F. DEL PROGRAMA DF.

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EVAL.UACION FINAL QUE PRESENTA

1 H M A C R 1.\ T f N A C /J F?. C! A VI/_ 1 ~A t 1) A N nO

:EN OPCION AL T ITULO DE:

LICENCIADO EN OUIMICA CON ESPECIALIDAO EN AN.&.USIS CUNICOS

MONTERREY, N. L. NOVIEMBRE DE 1977

IIIILIOTECA

IINIVUSIIA» lE MONTERR!l

Ll.3 _i!_ZDHES

: · .:1.3

H-:;:RJ,:A.NOS

i.~I A3'RSORA L~~ i.:Ju:,STRA,

Q.F.B. BLA~CA SILVI~ ~ARZA D~ A.

Lh3 PZRSONAS QUE

GF.hER03~.:ENT:C COLABORAROI\

Pl-~.R.tJ. I,A J?EALIZACION DE

c3::.'E 'L:tABAJO.

I N D I C F.

2AGINA

Il·~TrtODJCCIOl~ • . . . . . .. . . . 1

~I!EI SERIAS

...

4

:,~-~-T:E.RIJ._L Y TEC~:IC_/.,3 UTILI z_~DAS • • • • • • • • • • • • 23

RE.SULT}.DJS

... .. ...

^2ó

DISCU5IOI'i Y COj~CLU3IO_,;ES • • • • • • • • • • • • • • • • • • 29

RE S UiliE~J • • • • • • • • • • • • • • • • . • • • • • • • • • • • • • • • • • • 3 3

BI3LIOGR-A.FIA • . . . • • . . • . . • • • . . . • . • . . . • • • 34

L3.s r::<zones q:.1e :.ne iJotivrron a realizar este t:ra- bajo fueron oue ceneral~e~te tn los l aboratorios en

~.:éJ:ico se llev2 a c:1bo la ider:tifié:!ción de l a f2Jnilia

~eisseriaceae, ¡ solo reportan cocos &ra~-neg2tivos

con caracterí sti e as rJorfológi ca s de :\. catarrhal i::.., si se aisló la neis;:;ria de gart;tmta y N. gonorrhoeae si - se 2isló de V2t:Í!1a, uretra o cervlx, b::s8ndose en la prueba de oxidasa positiva y frotis de l a colonia o

·.:ü en por el e:-:2.:..en ;ni ero seó pi e o directo -del fro ti s de

exudado ; este reoorte no ofrece suficiente exactitud y ade;n¿s no per~ite reconocer los portadores de ~. menin gitidis de los que solo tienen N. catarrhalis u otras neivGrias que be~eralmente son inofensivas.

¿ Quién puede decir que de las neiserias que se - han reportado como inocuqs, fueron patógenas y oue si se identificar. se puede evitar brotes en el futuro, reconociendo a portadores ? O bien que la persona sa- na en una determinada época debido a "stress" o bajas defensas de su organismo desarrolle una patología por N. r;:¡eningitidis.

- 2 -

.. r.Ii

inclinaciÓn lJOr id'entificar l as neiserias por -

medio de fermentación de carbohidr~tos se debió a que no se requería un reactivo en especial y que fuese acce

sible a los laboratorios clínicos.

Las muestras que se toman rjormalmente para estudio bacteriológico no se siembran direc-';;amente y debería hacerse ya que l as neiserias son susceptibl es a la de- secación, bajas o altas temperaturas y general~ente no sobreviven mucho tiempo fuera del cuerpo humano; lo que se ::ace normalmente es utilizar un medio para transpor- tar la muestra.

Siendo esta la realidad en el trabajo diario, es- ioportante el uso de un medio de tr2nsporte adecuado para la muestra.

Al hacer un estudio de comparación entre dos me- dios de transporte para ver cual me resultaba más ade- cuado p<:u·.q desr.uhrir, aislar e identificar el mayor nú- mero de neiserias con el fin de descubrir algQnas pató- genas, utilicé caldo de soya tripticaseína y thiogly- collate nutrient medium por ser los más accesibles a los laboratori os clínicos, por su facilidad para conse- guirse en el mercado , y por su costo que puede conside-

·,

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rar se cient:co de los lí::-.i t

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es :1orrnal es de Fdquisici6n • Las ouestras fueron obtenidas del Centro de Salud No. l cuya col2bJraci6n acradezco.

•

Los miembros de l2 familia N e i sseri ::1ceae son e o e os t;re_'Il-n.ega ti vos que ere e en en pares o en masas.

Desde el punto de vista de la bacteriología médica los cocos grarn-negativos r:lás imr)ortantes son los que pertenecen al género r':eisseria. (7)

Hay diez especies reconocidas en el género Neisse- ria, dos de l as cuales son de patogenicidad reconocida para el hombre : N. gonorrhoeae (gonococo) agente causal de la blenorragia y N-. meningitidis (meningococo) res- ponsable de la ~eningitis epidé~ica. Existen otras nei serias que habitan nor;~al;::ente en l a farin~e humana y que son saprofitas, co~o N. catarrhalis, N. flava, N.

si~ca, etc •• La diferenciación de l es ~eiserias pató- gen:1s es il7llJOrtante. (2) (7)

Gonococo.- Neisser fue el primero que observó en 1879, la presencia constante de un coco particular en -

el pus de l a gonorrea. :::ra el único rni croorgani smo que se encontraba, no solo en las secreciones uretrales y - vaginales de la gonorrea ordinaria, sino también en el exudado conjuntival de 12 infección gonorreica. F.n 1885,

~T!m logró cultivos puros de este microorganismo y pudo

de~ostr2r su relación en voluntarios humanos. Rsta bac-

teria, llamada ^{~eneraln.ente} gonococo, se ha deno:niri.ado .i.:icrococcus gonorrhoeae y Ih plococcus gonorrhoeae; pero

el género Neisseria es actualmente aceptado por casi todos, y el nombre correcto del germen es N. gonorrho- eae. (4)

F.n l as preparaciones de pus gonorreico, el gano- coco se presenta en pares y los cocos están en contacto

por sus C2,ras planas; en las preparaciones teñidas la - ima¿;en re:cuerda l a de un grar..o de café. En cultivos puros, l os cocos son ovales o esféricos, y a menudo se

agreg~D en masas i rregulares, falta~do l a disposición- t ípica er.. diplococos. Fn frotis de pus el gonococo es casi exclusivaxente intracelulc:.tr; con frecuencia pueden encontra.rse muchísimos gér;:nenes dentro de un solo leuco cito. En las urimeras fases de la infección hay gono-

~ocos fuera de las células, igual que en l as gonorreas de larga duración. F~ gonococo no es móvil ni forma eSI)oras. (4)

El gonococo es gram-negativo, característica de tinción de gran valor diagnóstico, pues permite difere~

ci&r el gonococo de otros cocos existentes en uretra, - vulva y vagina. Algunas veces pueden encontrarse otros

- 6 -

cocos gram- negativos dentro de los l eucocitos, pero es raro. Algunas cepas son más negativas que otras, y los gonococos que se encuentran dentro d~ m?-sas de pus pue- den conservar la tinci6n, _-uor lo tanto es necesario pre

-

par ar frotis delgados y uniformes. F.l gonococo se tiñe con colorantes de anilina, pero son preferibles los po- licromos, p0r ejemplo la tinci6n de Pappenheim. F.n las pre_-naraciones teñidas pueden encontrarse gránulos intra - celulares, pero en general los gonococos de cultivos j6venes se tiñen uniformemente, en t anto que los de cul tivos viejos (24 hrs. más) contienen gr andes formas de involución hinchadas que se ti:?í.en mal.

( 4 )

F.l gonococo es una bacteria muy exigente ^~n cuanto a sus necesidades nutrit ivas; para su aislamiento pri- mario requiere de medios de cultivo enriquecidos. En un princi_pio, estos eran enriquecidos a.ñadi éndole s lí ouido de ascitis o hidrocele, aunque algQnas cepas pueden de-

sarrollarse sobre agar-gl ucosa digerido por tri psina, y que además contenga cistina. ~1 medio más empleado ha sido agar-chocolate (sangre calentada ). Y el medio fun damental puede enriquecerse con pl asua de caballo y he- moglobina, afadiendo a veces azul A de Nilo. (4)

Hay cenas que re~uieren argi~ina, hiyoxantina y

.

^\

uracilo (lO) ,. o tras nec.e si t an la adi ci6n de glutamina y carboxilasa, pues no pueden fosforilar tiamina, y además ci erte.s ce~ as ne ce si tan gl utation. Es pro bable que l as necesi dades de desarrollo ^que~en refle jadas con mayor ^~-

exacti tud ^~or los ffiedios necesarios cara el aisl amiento o cultivos iniciales. (4)

Es necesario cierto grado de humedad; debe haber aeua de condensación sobr·e los tubos o las pl acas, y la at1u6 sfera de 12. estufa de be satursrse de e.gua. Se desa-

rr~~la mejor si se incuba en una atm6sferQ cue contenga aproxin;e.d.eJnente 107~ de C02 ; esta !r:eü.i de. es f undamental

p3~[, el ai sl ami ento r:riwario. (4)

En caso

e

e cu..I ti vo .J.')rolonGado erl medi os de labora- tor i o el gonococo -pierde al gunas de sus exigencias, y finrlr¡ente al gunas ce_pe.s pueden ll E:gc.r ² desarrollarse en ~edios ordinarios de caldo. Sin embargo, es difícil c:ouse::.'var los c"..Altivos, ya c,ue ';l gonococo muere En 2 a

pero vi ven ^raás t iem}JO si se corlse::.~van en ambi ent e frí o. Aún con resiembras continuas l os gonococos mueren y es - frecuente que los cultivos se 11ierdan. T,a temperatura - 6pti:na para el desarrollo és de 37° C; no hay cultivo

- 8 -

p~r debajo de

30° e, y

l2s ,temperat ras de

40

a

41° e -

son clar~TJente ~e~judiciales. V.l gonococo se desarrolla en anaerobiosis, pero es fundarnentelmeni;e un germen aero bio. (4)

El gonococo es un ger11en muy frágil. Niuere también por efecto de ~tisépticos diluidos; por ejemplo, el fe- nal al 1% mata el germen en 1 a 3 minutos. ~1 gonococo es notablemente sensible a algQ~os colorant es de flavina, y l as seles de plata l o destruyen pronto. Es sensible a la desecación; en condiciones ordinarias suel e resistir poco tiempo a l a exposición al aire de 1 a 2 hrs. aunque en masas de pus desecado puede llegar a vivir seis a siete ^se~~nRs. A diferencia de l a ma¡or parte de las

·bact erias gr~-negativas, es sensi ble tanto a l a penici- l ina como a la estreptomicina y las tetracicl inas. (4)

El gonococo no es muy activo bioquímicamente. Fer- menta solamente l a glucosa, produciendo principalmente - ácido láctico ; esta característica la hace distinguirse de otras neiserias no pigmentadas; l as reacciones de fer mentación son fidedignas y se utilizan para identifica- ción, pero el ~edio basal empleado debe ser tal que ase gure el crecirriento del microorganismo. No produce in-

dol• , ni reduce nitrato~, ni altera la l eche tornasolada.

Produce catalasa y una c&rPctf=rística que Sf= ha er:!1Jle2.do en el diagnóstico diferencial es la formación de oxidasa de indofenol. T,a muestra se cultive. sobre agar-chocola- te en at~ósfera que contenga

8%

^de

co

₂ , se saca

y

se a- plica con un nebulizador, una sol ución al l~ de tetra-

metil-p-fenilendi~ina. T.as coloni as de bacterias que producen o:x:idasa de indofenol toman color púrpura bri- llante. Las bacterias no mueren de inmediato y pueden resembrarse antes de media hora. "Rsta reacción de la oxidasa en unión con el e:;.~amen de :fro ti s en busca de di- plococos grar!l-negativos intracelulares, suele permitir - el diagnóstico de laboratorio de la gonorrea. (4)

Variaciones.- ^.~chos invf=stigadores han encontrado que las características de cultivo del go110 coco cambian. Se ha visto que podían f=ncontrarse dos tipos de colonias, relacionados con el tipo inmunológ~co. tas ^~rimeras de- signadas co::10 T l , son grandes, irregulares, aplanadas, translúcidas, de color obscuro por luz transmitida obli- cua. tas coloni2s del otro tipo, T 2, son menores, re- dondas, elev2das, con una superficie desigual ligeramen- te convexa y opacas. Ar.lbos han demostrado ser virulen-

- lO -

tos inoculouos a voluntarios humanos; T 1, tiende a con vertirse en T 2, nin vivo", y T 2, en T l . Otros dos - tipos de coloni&s denominadas T

3

y T

4 ,

se distinguen por formar colonias meyores, más planas y ~enos colorea das y son avirulentes. (4)

Toxin8 s.- Con ex ce lJción de u_r1a her;¡oli sina débil - los ;onococos no forman substancias tóxicas extracelula res₇ pero l a substancia :~isma del germen resulta tóxica JJara los a.rümal es de experimentación QUe la reciben por vía parenterBl; produce supuración al inst~l~rla en l a uretra hur'lana.. "Rsta toxicidad puelie extre.erse con álca li diluido como "nucleoproteína", y de este material o de l a bacteria co.::pleta mediante ácido tricloro-acéti.co o dietilenglicol , en el Último caso se comporta como antígeno de Boivin, o sea la endotoxina de los bacilos gram-negativos, (lipopolisacárido , polipéptido ) ejemplo la del col ibacilo; se ha demostrado que difería mucho - por carecer de écido di~~inopimélico y glicina y tener menores cantidade8 de otros compuestos aminados. El carbonicirato de esta substancia está formado por D-glu- cosamina, glucosa y galactosa, es probable que los ami- noácidos unan los componentes azúcar y lípido en la mo-

Lrr activld:.d far~acol6gica de la endo toxina del gonococo parece ser inespecífica, al igual - que p2ra otras endotoxinas. Su papel en la patogenia - de l as infecciones gonococicas se desco~oce todavía. (4)

El gonococo es un parásito obligado hwnano ya oue no se encuentra en otros animales, transmitido por el contacto sexual en l a mayorí a de los casos, y es la cau sa de un gran número de infecciones en el hombre, incl~

yendo uretritis purulenta aguda en hombre₁ cervicitis- (en l a mayoría asinto~ática) en mujeres, salpingitis, - proctitis y otras co~plicaciones en los adultos, vulvo- vaginitis en nifias~ y oftalmia del reci~n nacido. La -

- infecci6n puede ocurrir t ambi én por extensión a otros sitios, inclu¡endo articulaciones, criptas rectal es, sangre , etc •. Es menos frecuente la oftalmia gonorrei- ca del recién nacido, la cual es una consecuencia cono- cida de infecci6~ materna durante el parto. Se calcula que alrededor de lO~ de todos los casos de ceguera se - deben a este p2decimiento, l a vulvovaginitis en l as mu- jeres pre-adolescentes es usu2lmente el resultado de un

ataoue cri·_,i:;la.l o por contacto con U..."1 fomi te infectado.

(2) "El ho::.bre es el Ú."lico huésped conocido. La vulvo-

- 12 -

vegirütis go~orreica epidé~·:üca en niñas _pequeílrrs, es el caso de infección transmiticl.a por ropa de cama, toallas, bañeras comunes, étc. y es ger:.er-=>.lmente debida en su to- talidad a infecciones por N. catarrhalis o N. sicca. (5)

Diagnóstico bacterioló~ico.- 3ólo se establece el di agnóstico de gonorrea con ^seg~ridad aislando e iden

tifica~do el I.:Jicroor¿;anis:;iO causan-':;e. (4)

_>i.unq_ue algw1o s in ve sticadore s han dicho que l a éie-

::::ostr:;..ción de diplococos intracelul8.res gra11-negati vos -

en frotis directo e-:3 .)rimitiva, ello permite el diagnós- tico ~robable, pero no securo , de gonorrea. La validez de ta_ d.iagn6 stico aur.-:er..ta con el r2étodo de tinción de -

anti cueruo fluorescente en los frotis. Rl diagnóstico -

e base de frotis teñidos es ^~enos seguro en l a mujer que en el varón; igual ocurre con l os cultivos. (4)

Por estudios que se han l.1echo , _os cultivos de go- nococo dan más resu~tados 9ositivos que el frotis direc- to solamente; ade:nás, per1ni ten identificar los gono cocos cultivados. F.s muy importante l a suuervivencia de estos sicroorganismos ya que es una bacteria relativamente fra gil durante el transporte de muestras. La solución mas satisfactoria parece ser el .medio de transporte de

~ (.9)

:::>t·;¡art, 1.~ara cultivo 'el rueclio de elección es una - infusión de ag:.r-chocolate o algunas r:wdificaciones de la mi srna, ino cula.ndo di re ctan,ente con l a muestra y se di oento si se t rabaja con orina o L.C.R. En l a práct ica,

se auaden antibióticos a los cual es el gonococo no es - sensible , para hacer el JUedio selectivo; por ejer~plo,-

una combinación de lJOlimixina B ( 25., UI/ml. ) y ri sto ce- tina (10 8icrogra~os/ml. ). El cultivo debe incubarse - con l O% de

co

₂ ^{; esta atm}ósfera se logr a poniendo l as - pl acas en un frasco con una vela encendida, y cerrándo- lo hermétic8.t11ente. T,a prueba de la oxidasa sirve uara distinguir las colonias oxi dasa positivas y, si se to- man inmediatamente, pueden preparc.rse subcul ti vos. T.a

identificación se basa en las ferment aciones de azúca- res en un suero con caldo o suero y agar que contenga - un indicador. T,a tinción de anticuerpo fluorescente puede aplicar~e a los frotis de cultivos puros así ais- lados, como a frotis directos. (4)

~eningococo.- Esta bacteria fue descrita por -

~archiafava y Celli en el exudado meníngeo, en 1884;

pero fue -:ieichsel bau:n quien, en 18.37 logró el cul ti vo - puro del germen y lo describió en detall e, como nJi ero-

- 14 -

coco característico encontrado en seis casos de mening!

tis cerebroespinal 2guda. ^~sto fue confirmado con l os trabajos de Jager. ( 4)

El meningococo ha recibido muchos nombres: Iücro- coccus meningitidis, ^r·~~. intracellularis .meningitidis, - };ei sseria intracellularis y según Bergey , N. meningi ti- dis. r;-:ste últi::.o es el gener almente aceptado. (4)

I.iorfologí a y tinción.- N. llleningi ti di s es un di- plococo gr am-negativo, con morfoloeí a ^~arecida a un gra

-

-

no cie café.

F.r- frotis de L.C.R., el menineococo se parece mu-

cho al gonococo : y se 11resenta en IJares o tetradas, ___ _ dentro de l os leucocitos y fuer e. de ellos.- "Los mening~

cocos están a~Jlanados en su unión, igual que los gono- cocos, y puecien vari ar mucho su t amaño en u..r1 mismo fro-

ti s. ~<~los cu~tivos el menin~ococo suele medir algo -

:nenas dE: u...11a :ni era de di?,n:tetro y p:-e sentarse en pares;

a veces hay cadenes cortns. Ta~bién se ha observado variación de t P.rr.a;!o t-n cultivos, en particular los de - má.s de 24 hrs. 3on :recuentes l as formas de invol ución y es JJrO bable que l ::1s células nayore s sean de tipo deg_§_

nerativo.

.~.r:.r \ i fi ~ st~::.> (rea~

ción de Cuellang). (3) (1) "Sl meningococo no es móvil ni forma esporas.

T.e.s formas de involución que se encuentran en los cultivos ~resentan tinción irregular : c§lulas jóvenes - pus den ~o strar gránulos metacromático s cuc:-~ndo se tiñen

con azul de metileno alcalino de LOffler y otros colo-

r~~tes; esta característica es m s Dotable en el menin- gococo oue en el gonococo. No es posible distinguir

con seguridad el meningococo del gonococo por su morfo- loeía; l a identificación depende del cultivo y las fer- mentaciones diferenciales. (4) Se requiere J1ucho más - cuidado eri la decoloración que en el caso de otros orga ni silios gram-negativos. Ocasionalmente organismos muy -

jóvenes pueden ser gr~~positivos y esto puede estar asociado con su suceptibilidad a la penicilina. (8)

Las cepas de ;:¡eningococo varían mucho en cuanto a

posibilid~d de cultivo; algunas cepas se desarrollan, -

a~1que no muy abundantemente, en ~edios ricos oue con- tenga.'1 suero o sangre co.:1!Jleta. F.l agar-chocolate y el agar-saJ1t;re son los :nedios .:nás útiles. Las necesidades nutritivas de el ,_erlingoco co, son semejan tes a las del

- 16 -

gctnococo, pero algunas cepas al parecer ^r!O requieren cis tina. (4)

Al aislar el meningococo, es necesario que el medio de cultivo esté a 37° C en el momento de la inoculación y se conserve a esta temperatura hasta ponerlo en la es- tufa. La incubación en una atm6 sfera de 10~,~ de

co

₂ fa- cilita el desarrollo entre límites de 25°C 42°C con

Au."1nue hay escaso desarrollo en anaero- biosis, el meningococo resulta en la práctica un germen aerobio. (4)

· Kl cultivo continuo en ~edios de laboratorio produ- ce un desarrollo oás abundante, y la bacteria probable- mente reduzca sus exigencias nutritivas. 3in embargo, es difícil conservar cultivos de meningococo , pues tien- den a perecer. Fn casi todos los medios estas bacterias mueren en ;;ocos días si no se resie::nbrc:.n, ¡.Jero la vi tali dad _... nuede cons<:rvarse varias semanas en cultivos

-

uor ino

-

culación nroLmda en ag2r-al::1id6n (l~~ de alr:lidón de maíz en agar nutritivo), el cultivo debe conservarse en la es tufa. (4)

TJc... a:::Jarición relati vaoente pronta de formas de in- vol uci6n en los cultivos de meningococo, así CO!i10 la po-

e~ vi~bil~dad en caso de nd h~ccrse resiembr8s tal vez pueda atribuirse a la formación de una autolisina acti va; en suspensión salina e~ la estufa, puede haber autolisis, en pocas horas. La :=>uto_isina ss terraolá- bil, pues se dastruje a 65° C en 30 minutos, y ~sta es la forme:: couo deben inactivarse l as suspenciones pre-o~

radas -rJ2.ra estudios de agl utinaciór:. ( 4 )

Al ig~al ~ue el gonococo, el ~e~ingococo es un

oicroorg~nismo frágil Que resiste mal l as influencias

~ocivas; a diferencia Je muchas bacterias, muere en

pocos díes a 0° C. (4) ⁽

El weninzo e o e o tiene ··o ca a e ti vid 3d fermenta ti va. A partir de gLJ.cosa y mal tosa, forma grandes cantida- des de ácido, probablemente láctico en su mayor parte.

~a fermentación de la maltosa permite distinguir el me

~inbococo del gonococo. No yosee gran actividad pro-

teolíti~:=., pues no licúa el suero coagula.do. (4) 3e han descri-to coloni as de 1~. :neningi tidis de tipo liso y rugoso. Las ce~as de aislamiento reciente suelen ser lisas en tanto que los cultivos antiguos

son rugo sos. Se observan colonias mucoides. El cam~

bio de liso a rub"o so se acompa~1a de pérdida parcial de la especificidad inrr.Qnol6gica.

IIBUOTEC~

IINIYUSIIAD lE fiiONTEftftfl

- 18 -

N. meningitidis puede, ser clasificada antigénica- mente dentro de los grupos A, B, C y D. T~s grupos A y B son encapsulados, mientras que las clases del gru- po B son generalmente no encapsulados. Los primeros - producen colonias elevadas y más mucosas que l as obser vadas con las clases del grupo B, l as cuales son pequ~

ñas, ásperas y amarillentas. Las ce~1as del grupo A están generalmente involucradas en l as epidemias de meningitis mientras que l as cepas del grupo B son ais- ladas en la mayoria de los casos esporádicos entre los brotes. (2)

La mayoria de l as cepas de N. meningitidis aisla- das de pacientes con infecci6n meningoc6cica o de por- tadores sanos cay6 dentro de los grupos serol6gicos B y C; las cepas del grupo A y D son raramente aisladas en los F..E.D.U •• F~ 1961 Slaterus en Holanda report6 el aislamiento meningococo QUe no rea.ccion6 con anti- suero preparado contra grupos A, B, C y D (cepas), pro

visional~ente clasific6 estos nuevos tipos como X, Y y Z. Vedros y sus colaboradores también describieron una nuev~ cepa, Grupo F.; actualmente Grupo Z (CDC Gru- po 29 F.), :&:>shard (Slaterus Y), y 135 son reconocidos.

(2)

La ~eningit1s por meningococos en el hombre , y la

. '

producida en ~1i~ales de experiment~ción, suel en acampa fiarse de }Jrofunda toxe:ni a, sin embargo, el me!l.ingococo no forma toxina soluble, aunque l e substancia celular

se ha com?robado que es de tipo lipopolisacérido. ~ste

poder t6zico no es afect 2do ;or el calor (100° C duran- te 30 minutos) y l a velocidad con aue desaparece sugie- re que l a en do toxina está formada .~.Jor dos substancias, l a U..'1a rnás ter:nostc.ble que la otra. (4)

Rpidemiologia.- Como todas las infecciones respi- ratori o:.s l s. me~li:r.~i tis ₁Jor :;;enin¡:;oc·Jco se disemina por cont2cto directo e infección ~or gotitas de secreciones de boca, :r:.2.riz y g2.r¿-&nta. La infección es trnns~itida '1~sta cierto _,_Jtlnto -~,or pacie~1tE S y conv2.l ecientes pero son de i:TJ1JortP....:-:.cia :flll1d2.mental en el })roceso portadores sanos. Jügv .. 11as ^~-ersonas son portadores transitorios

~ientras ~~e , los crónicos, eli~inan ~~ningococos ~ás o :Jenos COl"Jtinua..'"1ente o en for.::na esporÉdica.

nes se:nanales :¡:¡ueden ser negativos durante un período, oue en un ce.so llegó a

4

meses v _~ medi o, volviendo a apa

-

recer el __ :is::rlo ti ·]o de mer~ingococo. (4)

Rl estado de ~ortador es nucho más frecuente que los casos de enferwedad. Ocurre con facilidad eoide-

- 20 -

r.tias de r.:eningi ti s por meni nso coco en los ejércitos; la fiebre cerebroes~inGl e~idémica fue, con la influenza una de las enfer:-nedade s mas importantes en los ejércitos de le. .:_JriBere. guerra :nundial. T,a influencia de factores predisponentes que causan mayor sensibilidad es muy im- :JOrta.l1te en la vida militar; es probable que la fatiga, exposici6n al mal tieilli)O y factores semejantes reduzcan la resistencia norme..l de l os nu~=>vos reclutas. T,a baja - resistencia, en general unida a l as posibilidades de di- seminación por la vida en común de los cuarteles, es sin lugar a duda factor importante en la producci6n de estas epidemias. Las epideillias en la poblaci6n civil difieren de las anteriores en el sentido de que suP-len afectar ni .J.os (mayores de 3 meses) y adolescentes. T.a sensibil i- dad parece ser mayor en los niños menores de 10 años, menor en adolescentes y baja después.

(4)

La falta relativa de sensibilidad de la ~oblaci6n ­

general explica el carácter localizado de los brotes de enfermedad; grupos íntimamente relac.ionado s con el foco de infección escapan a la enfermedad en tanto que otros, aparentemente aislados, son víctimas de ella. Rn gene- ral los i-'ortadores constituyen el enlace entre enfermos.

r.as e Jide.Jnio.s consisten frecue:1terne11te en una serie de brotes recurrentes, en lugar de l a ola epidémica única y neta que suele jJroducirse en otras enferrnedades. (4)

Los estudios llevados a cabo en el ej~rcito ha- blan de diferencias raciales de sensibilidad, pues la morbilidad y la ;nortalidad r esultaran dos veces má.s elevadas en los soldados de raza negra que en los de raze. bl221ca. (4)

Diagnóstico bacteriológico.- Rn la meningitis el hallazgo de diplococos característicos gra~-negativos

en el T •• C.R. cer1trifugado , basta par2. establecer ur1 :- diagnóstico de presunci6n. ?uede hacerse cultivo por

inoculación directa en agar-cl1ocolate o agar- sangre de sedimento de L.C.R. o torundas de exudado nasofaríngeo (para r econocer el estado de portadores). El hemocul- tivo es 6til en l as Drimeras etapas y en los casos que no muestren síntomas me~íngeos. T.o s meningococos se - encuentran en la nasofaringe en los p0rtadores asinto- máticos. "Rs fundamental que la muestra no se enfríe - por debajo de la temperatura corporal antes de inocu- larse en el medio caliente ( a 37° C). Igual QUe el gonococo, el meningococo da la prueba de oxidasa posi-

- 22 -

t1va que result~ muy útil en los cultivos nasofaringeos.

Los meningococos pueden identificarse por pruebas de fer mentaci6n y aglutinación utilizando antisueros polivale~

tes. Bs posible establecer el tipo de meningococo me~

diante aglutinación; en los últimos años ha sido útil la reacción de hinchazón de cápsul a o reacción de Quellung de ser ita al tratar de n e urn o e o e o s. ( 4 ) ( l )

?or cada paciente se hicieron dos f rotis (exudado - faríngeo o exudado vaginal) mediant e un apl icador con ')unta de al god6n estéril e inoculado con material del paciente éstos se hicieron rodar sobre una pequeña área de c2da portaobjetos se secaron al aire y se colocaron - en caja par a portaobjetos.

Dos 11isopos estériles e inoculados fueron colocados

en sendos medios de trans1Jorte : caldo de soya triptica-

, ... +

selna y Thioglycollate nutrient medium • Cada tubo con tenía 12 ml . de éste y h~bía sido previ~nente ~reparado.

~1 material anterior f ue trans)ort2do al laborato-

r l O.

Rn él l o primero que se hizo fue poner l as cajas de agar- chocolate (l·uellE:r- Hinton+ al cual se le aiiadi6

;fe: .• oglobina en }Ol vo+) a te:nperatur2. de 36° C aproxi.:-nada

+ C~üdo de soya tripticaseína, (3J:O~·:ON ) + Thioglycollat e nutrient mec~i U..'11, (I.U:.RCK)

~ Agar de r.;uell(;:-- Hinton, ( BBL) + 3-::;.cto- He .. ~oglobin , (DIFCO)

- 24 -

me~te , lo cual se logró colocando l~s cajas en la mesa - de trabajo cerqa del ^{~echero .}

Para el aisl ¿miento se tomaron los hisopos se les quitó el exceso de medio de transporte oprimiendo el aolicador contra l as paredes del tubo y se inocularon sendos ^~edios de agar-chocolate por estrías. Se incuba- -ron a J6° e' en atmósfera húmeda y con un 8-10% de eo2 -

aproxima.dcunente j_:JOr 24 hrs. ("candle jar").

Los frotis se fijaron, se tiñeron según el método de Gr2l.D y se observaron en el microscopio , buscando la presenci8 de diplococos gram-negstivos intracelulares o extracel ulare s.

Después del período de incubación se hizo la prueba de oxidasa. Se tomó un disco Taxo N+, se humedeció--,con agua estéril y 3e colocó cerca de las colonias sospecho- sas (aproximadamente 10 ^{8ID. ).} Las colonias oxidasa posi tiva se tornaron rojas J después ne¿ras. Se tomaron unas coloni e s, se inoculó agar- choco la te se incubaron a 36° e por 24 hrs. en "car..dle jar".

+ Differentation Discs Taxo N, (BBL)

De las colünias sospechosas, aisladas se tomaron a- pro):imadamente cinco y se colocaron en un tubo con cal do de soya tripticaseina (0.5 ml. a temperatura de 36°

e).

Se incubó por 2 hrs •• Se hizo frotis de una colonia, se tiñó por el método de Gram y se observó al microscopio - para compro bar que eran di plo cocos gram-negati vos.

Se inocularon l as superficies de sendos tubos de CTA+ con carbohidratos (dextrosa, maltosa, sacarosa, - l actosa y fructo.sa ). Se incubaron a 36°C. Se observa- ron a las 24,

48,

72 y

96

hrs. para ver si había fermen- tación. Se tomaron muestras de l as superficies de los tubos, se hicieron frotis y se inoculó agar-chocolate por estrías. 3e incubó por 24 hrs. y se observó el ere cimiento (:_¡n:reza del mismo).

+ J-,íedio CTA, ( ::::sL)

R E S U t T A D O S

• '

Los microorganismos aislados en las 78 muestras es tudiadas se encuP.ntran anotados en l as t ablas l y 2.

De las neiserias aisladas se hizo la identifica- ción de es~..:ecie observando fermentación de carbohidra- tos y basándome en la tabla 3. ( 2)

TABLA l

:;:ICROORGP..NISl.iOS AISLADOS 3r 38 CULTIVOS DE :SYUDADO FltRHWEO

Neisseria catarrhalis o

l·~ei sseria flavescens 4 ^10.5

%

1:ei sseria si cea o

eisseria perflava 14 36.8

%

Staphylococcus aureus 3 7.8

%

Staphylococcus al bus 14 36.8

%

Estrepto co e os beta-

hemolíticos 12 31. 5

%

Estreptococos gama 4 ^10.5

%

Estreptococos alfa- hemolíticos o

Di-;)lococcus pneumoniae 9 ^23.6

%

?seudomonas l 2.6

%

TABLA 2

~ICROORGANISMOS AISLADOS EN 40 CULTIVOS DE EXUDADO VAGINAL

Lactob~cil1us 19

47. 5 %

Staphylococcus aureus 2

5. o %

Staphy1ococcus a1bus 2 5.0

%

Estreptococos beta-

hemo1íticos

7 17.5 %

Estreptococos gama 3

7.5 %

Proteus spp. 6 15.

o _1o

Entero8acteriaceas 21 52.5

ia

- 28 -

•

TABLA

3

DIFEREI;CIACION DE LAS rmiSSF.RIAS

FEIDJENTACION DE C.A.RBOHIDRATOS ( CTA Base, incub2ci6n de 1 a 4 di as 36°C)

MICROORGANISMOS DEXTROSA II1ALTOSA SACAROSA LACTOSA FRUCTOSA

..

N • catarrhalis

- - ^- - -

{{. gonorrhoeae A

- - - -

N. meningitidis A A

- - -

N. ^{s1 c:.ca A A A}

-

^A

N. lacta!!lica A A

-

^{A( tardía)}

-

N. hemolisans & A A A

-

^A

-

1

^{He .llava A A}

- ^-

^A

. ^~ JJerflava ^{A A} A

-

^A

N. subflava A A

- ^- -

N. flave scens

-

^-

- ^- -

l

&

Hemolisis beta en el segundo o tercer día.

A Producción de ácido.

• DI3CU~ION Y CO~CLUSIONES

Los medios de transporte utilizados fueron colocados en tubos con tapón de algodón y preparados la tarde ante- rior o bien calentados antes de su utilizaci6n para ~an-

tener el medio en anaerobiosis, y l a ca~tidad que se uti- lizó fue pr:~ra que la muestra con el in6culo ouedara bien

s~~ergida en ellos.

El agar-chocolate que se utiliz6 en este estudio fue _preparado usa:::.cio r;:ueller-Hin ton como b2se, ya que es un - med_:_o útil para cultivar r.ei seriss y He:~~oc:lobina (polvo) en lut;ar de sanGre por encontrarse más accesible.

T,as r.eiserias ·..:.e los cultivo~ necesit Gron de resiem- bras ~Pra aislarlas. ~ los cultivos vaginales no se aisló neiseria alguna. Fosibleuente debido a que los pa- cientes de este estudio fu~ron escogidos al azar, y no debido a que el ~edio r.o fuera el adecuado, ya que por reportes anteriores se ha ti.e.:10 strado l a superioridad del

acs.r-c~1ocolate en el eislamiento de neiseriEJs. (6) Algunas colo~~ias de r_ei seric.s .:.ncubadrc s má.s de 24 hrs. se 2utolisaron; sln emb8rgo si después de incubados

!JOr 2~ hrs. se C.e jar_ a te;::-¡.tJeratura ambiente podían vivir

- 30 -

h~st2 una semana •

•

Las coloni2.s ciP neiserias que se tomaron del medio y se colocaron en caldo de soya tripticaseína, para identificación posterior no se disolvían, algunas se

fragment~bar- al e_gitarlo , y después de 2 hrs. de incuba ción se podíar-1 observar, y el caldo era transparente. Cor- él se hacía 12 identificación.

h...Yltes ::!.e i::::ocular los tubos de CTA se observaba un frotis de l ?.s colc~:ias iJ8T 2 ver pi.lreza de l as mismas, - ya que en l a ~ayoría de las veces las col onias de es- treptococos se encontraron junto a l as cie neiserias y se observ2roL en los frotis.

L2 inoc-v_l2.cJ..ón se 1üzo tomando asadas del caldo y de scE~rGándolas en se:1do s tubos de CTA con carbohidra- tos.

Desnués se observó el crecimiento en los medios y

ferment2ci6~ de carbohidr2tos a l as 24 , 48 , 72 y 96 hrs •• T.2.s ^colo~i2.s en l 2s superficies fueron aproxima- damente de 2~.

Cuando las colo~ias de neiserias no estaban aisla- das, y se colocaron en el caldo de soya tripticaseina,

des~ués de 2 hrs. de incubación, el caldo estPba turbio

y si con él se inoculaban los CTA con carbohidratos a l as 24 hrs. se observaba nuevamente la fermentación de

carbohidratos, y especial1rw:nte de l actosa.

Se tomaron de esas colonias y se sembraron por es- trías en agar-chocolate y posteriormente se inocularon t ubos de CTA con carbohidratos y d spués de 24 hrs. de incubación se observó la fermentación de los carbol":idra tos llegando a la conclusión de ·que le fErlfentación de los carbohidr2.to s e~a de bid a a contaJI1Í!JBCi6n.

En el eear-chocolate se observ?.ron colonias de es- trepto cocos alfe:. y beto hir:10lí tic a que pr-oducían zonas verdes los _pri;ner-os y zon2.s claras los segundos y esto fue confir...ado lJOr frotis e inoculación a agar-sangre, observá..n.dose he.:::.ólisis alfa en los )rimeros y hemólisis

bet~ en l os sebündos.

Las colonias de estre~tococos beta hemolíticos interfirieron en la identificacj6n ya que en las resiem bras se observaron colonias de neiserias rodeadas por

estreptococos las cu2les se est2oan autolizando y se obeervaba !lunC.i:ni:;-r ... ·:o en el centro J.e le colonia; al paso del tie~po se ob~arvaba la superficie rt~osa.

T,as coloni2.s oue se o bserv2.ron en El agar-cho cola- te con pi&íento bl2.nco o 2marillo, fueron identific~das

como Staph. albus o 3taph. aureus Dor frotis e inocula-

ltBUOTECA

wNfVIItSIIAg lE MONTEftR,[Y

- 32 -

ci'Ón a a¿ar- sangre en donde' se observó la misma pi gmen- tación.

Las pseudomonas se identificaron por l a prueba de oxidesa positiva y l a no f erment ación de carbohidr atos.

Rn algunos cultivos de vagina observé crecimiento difuso .sobre el asar-chocolate el cual fue identificado por pr 'J.ebas bioqúírr.icas co:no Proteus. En otras se ob- servaron coloni as ·Jolirnorfas que por frotis se identifi caron como bacilos gram-neg2 ti vos.

T~~bién se observaron colonias blancas trru1slúci- d.2.s de ta.LJ.a:::i.o y for;-n&s variables, l 2.s que por frotis se identificaron corno bacilos grarn- po si ti vos (lacto baci- l lus).

Los medios de transporte utilizados en este; · estu-

~io fueron buenos como medio de transporte de neiserias.

Pero por su f acilidad de adquisición y por su costo re- _sul tó ser mejor el caldo de soya tripticaseína.

..

Se hi cieron cultivos de

78

paci entes,

38

fueron de exudados faringeos y 40 de vaginales.

Se hicieron frotis y se colorearon por la t~cnica

de Gram, con el objeto de observar las neiserias, intra o extracelulares.

Se transpor taron los exudados usando dos medios:

Thiogl ycollate nutrient medium y Caldo de soya triptica se in a.

El . aisl~~iento de neiserias se l l ev6 a cabo en a- ge.r- chocolate y l a. identificaci6n de género, con discos Taxo

r :;

la <ie especie con CTA con carbohidratos.

ne l as

78

muestras tomadas, no se aisl6 N. gono- rrhoeae ni H. ~cningi tidis, solo se aislaron 4 N. cata- rrhalis o r~. flavescens y 14 N. sicca o N. perflava de exudados faringeos.

Los dos medios de trans~orte resultaron efectivos

:-;&.ra l 8.s nei serias.

• B I 5 L I O

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