ADHERENCIA DE CELULAS ROJAS A UNA FASE SÓLIDA:

Técnica especializada anticuerpos antiplaquetarios. Técnica que permite el recubrimiento menos óptimo de los pocillos resultando el mal funcionamiento del test, reduciendo tanto la sensibilidad como la fuerza de las reacciones en los resultados finales del test.

57 Con base en lo analizado de cada una de las técnicas podemos mostrar las diferencias:

- Los estudios que comparan la técnica de MAIPA con el test de linfocitotoxicidad concluyen que el MAIPA es superior.

- La técnica de MAIPA es la combinación de anticuerpos Monoclonales y Elisa por lo cual se puede decir que el MAIPA se encuentra superior con el Elisa.

- La técnica de inmunofluorescencia corre el riesgo de ser poco sensible para la detección de anticuerpos proceso que no ocurre con Citometría de flujo, Elisa y MAIPA.

- En cuanto a la especificidad la aglutinación en látex, adherencia de células rojas a fase solida, linfocitotoxicidad y Elisa son muy baja para la detección de anticuerpos en pacientes con refractariedad plaquetaria, lo cual no sucede en las técnicas de MAIPA, inmunofluorescencia, citometría de flujo ya que por el contrario son técnicas de altas especificidades para lograr detectar el anticuerpo antiplaquetario o HLA.

- La aglutinación en látex es la técnica que puede ser empleada con mayor rapidez para la detección de anticuerpos antiplaquetarios pero corriendo

58 con el riesgo de dar resultados con un margen de error alto.

De acuerdo a la revisión de las técnicas para la identificación de anticuerpos en pacientes con refractariedad plaquetaria de tipo inmune, se puede concluir que no hay una técnica especifica y única que pueda hacer el estudio completo, ya que para la detección de anticuerpos es necesario la utilización e integración de varias técnicas para un completo diagnostico de la refractariedad. Es necesario hacer un test de agrupación en el que se pueden seleccionar las técnicas como combinación de las técnicas de MAIPA, inmunofluorescencia y ELISA que forman el complemento necesario para corroborar y verificar un resultado que se quiera reporta.

La citometría de flujo es una técnica eficiente en la búsqueda de refractariedad plaquetaria de causa inmune y puede ser de mucha utilidad en el diagnóstico clínico, la citometría de flujo nos muestra la utilidad de usar marcadores celulares para la identificación de anticuerpos, es una técnica muy sensible y especifica con la que podemos llegar a reportar con seguridad un resultado al paciente y con ello ayudar al profesional a tener un resultado mas confiable y de utilidad clínica sin olvidar que debe estar apoyada por técnicas como el MAIPA, inmunofluorescencia y ELISA

Según investigaciones realizadas en 3 estudios de la revista Transfusion del mes de junio de 2001(de Sanz y cols., Kurz y cols. y Kiefel y cols.) concuerdan entre ellos y refrendan estudios previamente publicados respecto a que:

- La refractariedad plaquetaria aloinmune es principalmente causada por anticuerpos antiHLA.

59 - Los anticuerpos HLA ocurren con más frecuencia en mujeres con embarazos previos.

- Los anticuerpos antiplaquetarios específicos (anti-HPA) son raros como anticuerpos aislados (0- 2%) en ausencia de aloinmunización HLA.

- Las plaquetas pueden ser destruidas por anticuerpos HLA no citotóxicos, que no se detectan en test de linfocitotoxicidad.

- Los dos estudios que comparan la técnica de MAIPA con el test de linfocitotoxicidad concluyen que el MAIPA es superior.

Hay desacuerdo entre los estudios en cuanto a:

- La presencia de anticuerpos específicos de plaquetas en pacientes con aloinmunización HLA.

- La incidencia de anticuerpos antiplaquetarios específicos, que oscila entre el 2 y 20%. Algunos expertos relacionan la diferencia en la frecuencia de inmunización específica frente a antígenos plaquetarios con diferencias genéticas en los alelos de la respuesta inmune. La Dra. Brand opina que probablemente más que pensar en una causa genética deberíamos tener en cuenta otros factores como: la selección de pacientes estudiados, los donantes usados en los ensayos y las diferencias técnicas, a la hora de explicar las discrepancias en los estudios.

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TABLA 3. Ventajas y desventajas de las técnicas de identificación de anticuerpos.

TECNICA DETECTA VENTAJAS DESVENTAJAS

MAIPA Anti

leucocitarios Anti-HLA

Técnica más sensible que permite definir, simultáneamente, la especificidad del anticuerpo detectado y la Glicoproteína en la cual se localiza el antígeno así como, determinar si las inmunoglobulinas están dirigidas contra antígenos HLA u otros específicos de plaquetas.

El principal inconveniente radica en la necesidad de utilizar un amplio panel de anticuerpos monoclonales dirigidos contra todas las GP cuando se estudian sueros desconocidos. (kiefel et al, 1987)

LINFOCITOTOXICIDAD Anti

leucocitarios Anti-HLA

Se puede observar la reacción a simple vista por el cambio de color. Técnica especial para detectar anticuerpos anti-HLA, basado en la mezcla de leucocitos especialmente linfocitos.

Las plaquetas pueden ser destruidas por anticuerpos HLA no citotóxicos, que no se detectan en test de linfocitotoxicidad AGLUTINACIÓN EN LATEX Anti plaquetarios Anti leucocitarios Anti-HLA

Técnica muy rápida y fácil de realizar por los reactivos e implementos de fácil y ágil uso.

La poca cantidad de antígeno o anticuerpo que puede reaccionar para formar la aglutinación ocasionando la poca visibilidad de la reacción. ELISA Anti plaquetarios Anti leucocitarios Anti-HLA

Principio tiene muchas de las propiedades de un inmunoensayo ideal: es versátil, robusto, simple en su realización, emplea reactivos económicos. Permite obtener resultados cuantitativos, la técnica no es compleja y, por tanto, puede ser realizada por personal relativamente

La principal desventaja estriba en la facilidad que tienen las IgG séricas para adherirse al plástico de las microplacas, lo cual puede ser causa de falsos resultados positivos.

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inexperto, se puede automatizar, y puede utilizarse como método de "screening" con un número limitado de diluciones séricas. Además, permite conocer la respuesta inmunológica de las diferentes clases de Ig.

CITOMETRIA DE FLUJO Anti plaquetarios Anti

leucocitarios Anti-HLA

Frente a este inconveniente la CMF presenta múltiples ventajas frente al

microscopio de

fluorescencia y las técnicas citoquímicas, como: - Posibilidad de empleo de múltiples marcajes frente a un solo marcaje de la citoquímica y la microscopia de fluorescencia. - Posibilidad de analizar un elevado número de partículas en un corto período de tiempo (5000 partículas/segundo). - Posibilidad de cuantificar la intensidad antigénica por medio de los canales medios de fluorescencia. - Mayor sensibilidad y objetividad que le permiten detectar enfermedad mínima residual y caracterizar poblaciones celulares poco abundantes en condiciones normales como los Basófilos.

- Posibilidad de analizar poblaciones celulares y epítopes celulares. - Permite almacenar informáticamente la información del análisis para poderla utilizar en cualquier momento y

Debido a la necesidad de utilizar una suspensión de partículas (células, núcleos, cromosomas, etc.), para ser leídos de una, hace que se pierda información sobre la arquitectura de los tejidos que componen las células o de las propias células, así como la interacción entre estas y el medio que las rodea (patrones nodulares o difusos de los linfomas).

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reanalizar análisis hechos con anterioridad. - Posibilidad de cuantificar las moléculas antigénicas presentes en un grupo celular. INMUNOFLUORESCEN CIA Anti plaquetarios Anti leucocitarios Anti-HLA

Una ventaja de la IF es ser una técnica rápida, reproducible, permite tinciones dobles e incluso se aplica en microscopia confocal.

Las desventajas son su baja sensibilidad, que las reacciones no son permanentes y que es necesario fotografiar las reacciones positivas para documentar los casos. Además, requiere

microscopio de

fluorescencia, que es un instrumento de relativo alto costo.

ADHERENCIA DE