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MATERIAL+Y+MÉTODOS+

5.+ ANÁLISIS ESTADÍSTICO

Primer+estudio+

La posible asociación entre la immunoexpresión de EGFR y las característi- cas clínicas / histopatológicas se determinaron con la prueba de chi cuadrado. Cuando el número de casos fue menor de 10 se utilizó la prueba exacta de Fisher en tabla de cuatro por cuatro.

Se utilizó un modelo de regresión logística multivariante para estudiar si el género, la localización del tumor, el estadio tumoral, el estadio de los ganglios linfáticos, la diferenciación del tumor y el estatus de EGFR eras predictores independientes de respuesta completa patológica.

Los análisis de datos se realizaron con el software estadístico SPSS (SPSS, Inc., Chicago, IL).

En todo el análisis estadístico se uso un nivel de significación estadística (ni- vel alfa ) de p= 0.05.

Segundo+estudio++

Las posibles asociaciones entre inmunoexpresión EGFR y características clí- nicas/ histopatológico se determinaron mediante la prueba exacta de Fisher. El tiempo de seguimiento y el tiempo hasta la recurrencia se calcularon a par- tir de la fecha de inicio del tratamiento hasta la fecha de resultado pertinente o el último control.

La supervivencia libre de enfermedad (DFS) se calculó como el intervalo en- tre la fecha de inicio del tratamiento y la fecha de la primera recurrencia de la enfermedad (recidiva local o metástasis a distancia) o el último seguimiento. El control local y la supervivencia libre de metástasis se definieron como el intervalo entre la fecha de inicio del tratamiento y la fecha de recidiva local o metástasis a distancia, respectivamente.

La supervivencia global (OS), supervivencia libre de enfermedad (DFS), con- trol local y la supervivencia sin metástasis libre se calcularon según el método de Kaplan-Meier.

Los análisis de la asociación entre las variables y el fallo local, metástasis a distancia, DFS y OS generales se realizaron utilizando la regresión Cox. Para determinar si la expresión de EGFR era un factor independiente de DFS, se utilizó el modelo de regresión de riesgos proporcionales de Cox.

La expresión de EGFR y las co-variables relevantes estaban en una base de datos y se analizaron con el paquete estadístico SPSS (SPSS V.11.0, Inc., Chicago, IL). Los test de significación estadística utilizados en este estudio fueron de dos caras y con un nivel de significación de p= 0,05.

Tercer+Estudio+

Descripción de las principales características de los pacientes en total y en función de la expresión EGFR. Las variables categóricas nominales son des- critas por medio del número de casos, el porcentaje con respecto al total por categoría y el número de datos ausentes. Las variables categóricas ordinales son descritas como las categóricas nominales, o bien por medio del número de casos, la media, el rango intercuartílico y el número de datos ausentes. Las variables continuas son descritas por medio del número de casos, la media, la desviación estándar, la mediana, el rango intercuartílico y el número de datos missing.

Análisis de supervivencia libre de recidiva local / Metástasis / Libre de enfermedad / Global:

El tiempo de supervivencia desde el diagnóstico se analiza por el método de Kaplan-Meyer y se presenta gráficamente para cada una de las medidas de resultado para toda la muestra y en función de la expresión de EGFR tumor pre-tratamiento. Además se estiman los hazard ratio (HR) crudos y ajustados de EGFR positivos respecto EGFR negativos mediante un modelo de Cox para cada una de las medidas de resultado.

Asociación entre la expresión de EGFR tumor pre-tratamiento y recidiva local / metástasis:

Se presenta la asociación entre la expresión de EGFR tumor pre-tratamiento y recidiva local / metástasis por medio de una tabla de frecuencias. La aso- ciación se analiza mediante el test exacto de Fisher.

Acuerdo entre la expresión de EGFR tumor pre y post tratamiento

Se presenta la asociación entre la expresión de EGFR tumor pre-tratamiento y post tratamiento por medio de una tabla de frecuencias. Se analiza el tiempo del diagnóstico hasta la supervivencia libre de recidiva local/ Metástasis / Li- bre de enfermedad / Global en función de la expresión de EGFR tumor pre y post tratamiento. Se crea una variable con las diferentes opciones de coinci- dencia y discrepancia entre el EGFR pre/ post tratamiento: ++/+-/-+/--. Se estiman los HR crudos y ajustados de cada categoría frente al riesgo de ++ mediante un modelo de Cox para cada una de las medidas de resultado.

Análisis de la intensidad y la extensión EGFR tumor pretratamiento

Se analiza el tiempo del diagnóstico hasta la supervivencia libre de recidiva local /Metástasis /Libre de enfermedad /Global en función de la extensión y la intensidad de la expresión de EGFR tumor pre-tratamiento. Se estiman los HR crudos y ajustados de la intensidad, la extensión y la interacción mediante un modelo de Cox para cada una de las medidas de resultado.

Análisis de la respuesta en función de EGFR tumor pretratamiento

Se analiza el tiempo del diagnóstico hasta la no respuesta /respuesta local /respuesta completa en función de la expresión de EGFR tumor pre-trata- miento. Se estimaran los HR crudos y ajustados de EGFR+ respecto EGFR- mediante un modelo de Cox para cada una de las medidas de resultado.

En todos los modelos de Cox se analizará la asunción de riesgos proporcio- nales y en caso de violación de la proporcionalidad se procederá en conse- cuencia. En los modelos de Cox se han utilizado como variables de ajuste la edad, el sexo, el grado de diferenciación y el esquema de tratamiento.

La significación estadística se ha fijado en un nivel de probabilidad <0,05. El paquete estadístico que se ha utilizado para hacer los análisis es el R versión 3.2.2 para Windows.

puesta completa patológica, es decir, sin tumor primario residual en la pieza quirúrgica, ni en el tumor primario ni en los ganglios. Trece pacientes pre- sentaron respuesta parcial. En cuanto a la respuesta a nivel ganglionar, no se encontró tumor residual en 11 pacientes de los 25 que inicialmente tenían afectación.

En nuestra serie de 45 pacientes, 29 biopsias fueron EGFR positivas, por lo que la tasa de expresión de EGFR fue del 64%.

En cuanto a la extensión de la expresión, en 19 biopsias, la extensión EGFR fue mayor que 75%; en 6 casos, fue entre 25% y 75%; en 4 casos, fue entre el 5% y el 25%.

La intensidad fue de grado 1 en 13 biopsias, grado 2 en 7, y grado 3 en el 9.

La Tabla 14 muestra la asociación entre la expresión de EGFR en las biopsias tumorales y las características clínicas.

No se encontraron diferencias significativas entre el sexo, la edad, la locali- zación del tumor, estadio tumoral, estadio de los ganglios linfáticos, la dife- renciación del tumor, o el tratamiento con quimioterapia y la expresión de EGFR.

Tabla 14. Expresión de EGFR vs variables clínicas

Sin embargo, se encontraron diferencias de significación marginal en la tasa de respuesta al tratamiento preoperatorio y la expresión de EGFR. Un 62% de los pacientes con EGFR negativo respondieron a la radioterapia preopera- toria frente al 44% de aquellos con EGFR positivo (p = 0,07). Donde si se encontraron diferencias significativas fue en las respuestas completas patoló- gicas. Sólo 1 de los 29 pacientes con EGFR positivo presentaron respuesta respuesta completa patológica (3%), en comparación con el 38% (6/16) de los pacientes EGFR (p = 0,003).

El único factor predictor de respuesta al tratamiento con significación esta- dística en el análisis multivariante fue el estado de EGFR, con una odds ratio de 0,06 (IC: 95%, rango: entre 0,006 y 0,557, p = 0,013). Hay una clara rela- ción entre la expresión de EGFR positivo y la falta de respuesta completa patológica.

La expresión de EGFR se evaluó también en las piezas quirúrgicas de 38 pa- cientes. En los 7 pacientes restantes hubo una respuesta completa por lo que

no se pudo determinar la expresión de EGFR. De las 38 muestras estudiadas, 31 resultaron ser positivos y 7 negativos. Al comparar la expresión en las muestras de biopsia con las de la pieza quirúrgica, encontramos que 25 tu- mores siguieron siendo positivos de los 29 que lo eran inicialmente, sólo 3 se negativizaron; en una muestra no se encontró tumor (Tabla 15). De las 16 muestras de biopsia que inicialmente fueron EGFR negativas, en 6 muestras no se encontró tumor, ,sólo el 4 permanecieron negativas, mientras que 6 se convirtieron en positivos.