Condiciones del área estéril de trabajo

Las áreas limpias para la manufactura y análisis de productos estériles son clasificadas de acuerdo a las características ambientales requeridas. Cada operación requiere un nivel de limpieza ambiental apropiado para minimizar los riesgos de contaminación microbiana en el producto.

Un área limpia o cuarto limpio es un espacio definido en el cual la concentración de microorganismos en el aire, en superficies y en el personal, se encuentra entre límites o niveles específicos a una clase.

Para la fabricación normal de productos estériles pueden distinguirse cuatro calidades de cuartos limpios:

- Grado A: es la zona para operaciones de alto riesgo, tales condiciones son proporcionadas por un trabajo bajo cámara de flujo laminar.

- Grado B: es el ambiente de los alrededores de la zona A.

- Grado C y D: áreas limpias donde se realizan las fases menos críticas, pero igualmente importantes, en la fabricación de productos estériles.

Esto es un punto importante que se debe tener en cuenta para que la preparación de los productos estériles se lleve de una forma controlada, evitando riesgos de contaminación y garantizando la calidad de estos productos para su comercialización. (WORLD HEALTH ORGANIZATION, 2002)

Para lograr las condiciones asépticas en la prueba de esterilidad, el entorno de la prueba tendrá que adaptarse a la manera en que se realice. Se deben tomar precauciones para evitar la contaminación de modo que no afecte a ningún microorganismo que deba detectarse en esta prueba. Las condiciones asépticas para la ejecución de la prueba deben ser usadas en una cabina de flujo laminar (cuarto limpio clase A) localizado en un cuarto limpio clase B. (Ver tabla Nº 5) (EUROPEAN PHARMACOPOEIA 5.0., 2005)

Las condiciones de trabajo en las que se efectúan las pruebas se controlan regularmente mediante un muestreo adecuado del área de trabajo y la realización

de controles adecuados para verificar que estas condiciones sean apropiadas. (EUROPEAN PHARMACOPOEIA 5.0., 2005) El control microbiológico de las áreas estériles se puede realizar por diferentes métodos como el método de sedimentación, el método de impactación utilizando un equipo muestreador de aire y también por muestreo de superficies. (WORLD HEALTH ORGANIZATION, 2002) Al realizar los análisis de esterilidad en estas condiciones y con los debidos controles se reduce la incidencia de resultados falsos positivos debido a contaminaciones extrañas introducidas durante la realización del análisis. (HUGO y RUSSEL, 1998)

Las condiciones de trabajo donde se realizó la evaluación práctica, laboratorio de microbiología de AQM Ltda., presenta especificaciones ambientales establecidas mediante estudios previos y resultados históricos. (Ver tabla Nº 6)

Debido a que las pruebas de esterilidad constituyen un procedimiento cuya asepsia debe garantizarse para lograr una interpretación correcta de los resultados, es importante que el personal esté debidamente entrenado y calificado. (USP 29, 2006) Es importante que los materiales en los que se va a analizar la esterilidad no sufran contaminaciones procedentes de los operadores o del ambiente durante la realización del análisis. (HUGO y RUSSEL 1998)

Por ello, estas pruebas deben llevarse a cabo en laboratorios adecuados y por personal competente y experto usando técnicas y equipo, lo cual minimiza los riesgos de contaminación microbiana accidental en las pruebas y en el muestreo ambiental.(AUSTRALIAN GOVERNMENT, 2006)

El personal que ocupa el área aséptica durante la prueba de esterilidad debe llevar vestimenta estéril. (Ver tabla Nº 7) Igualmente todo el material, equipo y demás objetos que pueden entran en contacto durante el curso de la prueba deben ser esterilizados antes de su uso. (AUSTRALIAN GOVERNMENT, 2006)

En conclusión el ensayo de esterilidad debe realizarse en condiciones muy estrictas, respetando las exigencias en cuanto a los procedimientos establecidos por la Farmacopea.

Tabla Nº 5. Clasificación de ambientes controlados para la industria farmacéutica. Área grado Denominación US Nº máximo de partículas/m3 Nº máximo de microorganismos viables/m3 A 100 3530 < 1 B 1000 35300 5 C 10000 350000 100 D 100000 3530000 500 Fuente: USP 29, 2006.

Tabla Nº 6. Límites microbiológicos para el área aséptica manejados por AQM Ltda. Ambiente del área aséptica Nº máximo de microorganismos

viables/placa Cabina – Clase 1001 < 1 Mesa 5 Sobre cabina 5 Puerta 8 1 Según USP 29, 2006.

Tabla Nº 7. Límites microbiológicos para el control de personal.

Área Nº máximo de microorganismos

viables/guante

Clase 100 3

Clase 10000 10 Fuente: USP 29, 2006.

2.4. ESPECTROFOTOMETRÍA

Se denomina espectrofotometría a la medición de la cantidad de energía radiante que absorbe un sistema en función de la longitud de onda de la radiación, y a las mediciones a una determinada longitud de onda.

La teoría ondulatoria de la luz propone la idea de que un haz de luz es un flujo de cuantos de energía llamados fotones; la luz de una cierta longitud de onda está asociada con los fotones, cada uno de los cuales posee una cantidad definida de energía. (FISHER, 1970)

Se puede realizar lecturas espectrofotométricas de diversas sustancias para determinar parámetros como la absorbancia o la tramitancia, lo mismo que puede hacerse con una emulsión de microorganismos para determinar así su concentración.

Un cultivo bacteriano actúa como una suspensión coloidal, porque absorbe o transmite la luz que pasa a través de él. Dentro de ciertos límites, la luz que pasa por una suspensión bacteriana es directamente proporcional a la concentración de células que hay en el cultivo. Por lo tanto al aplicar la medida de la transmisión de los rayos de luz, o la medida del porcentaje de absorción de luz a una suspensión bacteriana, se puede calcular el número de células presentes. (ESCOBAR, 2002) Para estas determinaciones se utiliza el espectrofotómetro, instrumento que posee una fuente de luz monocromática. Esta luz pasa a través de un cultivo bacteriano y la cantidad de luz reflejada o transmitida es medida.

2.4.1. Aspectos Cuantitativos de las Mediciones de Absorción: Ley de Beer-