La conducta de desesperanza se manifiesta en ausencia de evidencias que

Previamente nuestro grupo ha descrito, utilizando el paradigma de desesperanza aprendida, una disminución en las proteínas sinápticas SIN y PSD-95 en el área CA3 del hipocampo 25 días después de la sesión de entrenamiento (Reinés y col., 2008). Teniendo en cuenta que la disminución de SIN se podría correlacionar con una reducción en la densidad sináptica (Eastwood y col., 2001), estos resultados están en línea con la pérdida de sinapsis descripta en este modelo varios días después de la detección de la conducta de desesperanza y que corresponde al día 7 de nuestro protocolo experimental (Hajszan y col., 2009). Los estudios sinápticos realizados en este trabajo de Tesis son anteriores a los antes mencionados y coinciden con el día en el que se observa la adquisición de la conducta de desesperanza. En otras palabras, en este trabajo de Tesis se demuestra fehacientemente que la adquisición de la conducta de desesperanza (día 4 post-entrenamiento) en los animales SD no se acompaña de cambios ultra-estructurales sinápticos de relevancia en el área CA3, como tampoco se acompaña de una alteración en la expresión del marcador sináptico SIN. Basado en el diseño experimental, nuestro trabajo es el primero en proporcionar una fuerte

Discusión

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evidencia acerca de que no se requerirían cambios ultra-estructurales sustanciales en las sinapsis del área CA3 hipocampal para que se desarrolle y evidencie la conducta de desesperanza.

3.2. El remodelado estructural de las sinapsis del CA3 se evidencia más tardíamente en los animales expuestos al paradigma de desesperanza aprendida

El presente trabajo de Tesis demuestra que los cambios ultra-estructurales de las sinapsis del área CA3 se producen en los animales SD con posterioridad a la detección del fallo conductual. Estos resultados están de acuerdo con la reducción del marcador sináptico SIN confirmada a día 25 de nuestro protocolo experimental (21 días después de la primera sesión de prueba) en este trabajo y en un estudio previo (Reinés y col., 2008). Estos hallazgos concuerdan también con las observaciones que demuestran que la reducción de la proliferación celular del hipocampo ocurre varios días después de la primera sesión de prueba (Malberg y Duman, 2003; Ho y Wang., 2010). De esta manera, podría especularse que el remodelado estructural sináptico formaría parte de una respuesta adaptativa del hipocampo o una consecuencia de la reducción de PSA-NCAM (ver más adelante). Sin embargo, no se puede descartar que otros cambios más sutiles generados en el área CA3, ya sean estructurales o a nivel molecular, pudieran contribuir al déficit conductual.

Vale la pena señalar que el perfil pre-sináptico de las sinapsis de la región CA3 de los animales SD a día 25 registran un patrón distintivo caracterizado por un aumento del número de sinapsis con bajo o alto número de vesículas. La forma de las vesículas sinápticas de los animales SD manifiesta una clara desviación de la función de Gauss (Hu y col, 2008), con una tendencia hacia estructuras más grandes, en particular en las sinapsis con un elevado número de vesículas. En varias patologías sinápticas se ha demostrado tanto el polimorfismo como el pleomorfismo de las vesículas sinápticas (Hovorka y col, 1997; Baloyannis y col, 2006), así como también en modelos de patologías neurodegenerativas (Scott y col, 2010). Las alteraciones en la morfología de las vesículas sinápticas se han asociado con cambios cuali o cuantitativos de las proteínas de la vesícula, cambios en el contenido del neurotransmisor, con modificaciones en el mecanismo de formación de vesículas o con anomalías en la endocitosis; todos cambios que pueden comprometer la funcionaliad sináptica (Hu y col, 2008; Qu y col, 2009, Scott y col, 2010). De hecho, los niveles reducidos de SIN en el área CA3 de los animales SD observados a día 25 apoyan fuertemente la posibilidad de que las proteínas de las vesículas pudieran estar alteradas. En conjunto, se

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puede especular que la funcionalidad de las vesículas de las sinapsis de los animales SD (en particular en las sinapsis con un bajo número de vesículas, o con un alto número de vesículas de mayor tamaño) podría estar modificada. Esta especulación concuerda con la disminución en la liberación hipocampal de glutamato estimulada por K+ descripta en los animales SD a día 25 de nuestro protocolo experimental (Ferrero y col, 2005).

Se sabe que una sinapsis se compone de una zona activa en la pre-sinápsis y una DPS en la post-sinapsis, separadas por la brecha sináptica. Un complejo de unión intercelular llamado puncta adherens se encuentra adyacente a estas estructuras (ver Figura 4 de la Introducción)(Sheng y Hoogenraad, 2007; Yamada y Nelson, 2007). Está bien documentado que la forma de la DPS, la longitud de la brecha sináptica y los ángulos sinápticos son características dinámicas de la morfología sináptica (Marrone y col, 2004; Sheng y Hoogenraad, 2007) y, en consecuencia, estos parámetros resultan útiles como marcadores potenciales de remodelado sináptico (Popov y col, 2008). Por lo tanto, los cambios descriptos en estos parámetros en las sinapsis del área CA3 de los animales SD a día 25 son otra evidencia de remodelado sináptico. Curiosamente, en los animales SD, las membranas pre- y post-sinápticas de las sinapsis de la región CA3 se encuentran anormalmente separadas, particularmente en los puntos más distales. Vale la pena mencionar que, el aumento de la distancia medida en los puntos distales de la unión sináptica corresponde al puncta adherens (Shin y col., 2002; Sheng y Hoogenraad, 2007; Yamada y Nelson, 2007), donde se encuentran las moléculas de adhesión celular. En este contexto, las moléculas de adhesión celular resultaron candidatos interesantes para explorar.

3.3 Cambios plásticos a nivel molecular: Las moléculas de adhesión NCAM y PSA-NCAM