Las diferencias en la fijación, el procesamiento y la inclusión de tejidos en el laboratorio del usuario pueden generar una variabilidad significativa de los resultados, lo que requeriría un rendimiento regular de los controles internos además de los portaobjetos de control suministrados por Dako. En EE.UU., consulte las indicaciones de control de calidad del Programa de certificación de inmunocitoquímica del Colegio de patólogos americanos (CAP, por sus siglas en inglés), así como la Quality Assurance for Immunocytochemestry, Approved Guideline del CLSI (anteriormente NCCLS) (24) y la referencia 25 para obtener información adicional.
Tabla 8. Finalidad del control de calidad diario.
Tejido: muestra equivalente a paciente fijada y procesada
Anticuerpo específico y anticuerpo secundario
Anticuerpo no específico* o tampón más el mismo anticuerpo secundario al utilizado con el anticuerpo específico
Control positivo:
El tejido o las células que contengan el antígeno objetivo que deba detectarse (puede estar situado en el tejido del paciente). El control ideal es un tejido con una tinción ligeramente positiva, ya que de este modo es más sensible a la degradación del anticuerpo o el antígeno.
Controla todos los pasos del análisis. Valida el reactivo y los procedimientos utilizados para la tinción de la proteína HER2.
Detección de tinción de fondo no específica.
Control negativo:
Tejidos o células que se prevén negativos (pueden estar situados en el tejido del paciente o el tejido de control positivo)
Detección de reactividad cruzada no buscada del anticuerpo con las células o componentes celulares.
Detección de tinción de fondo no específica.
Tejido de paciente Detección de tinción específica Detección de tinción de fondo no específica.
Portaobjeto de control suministrado por Dako
Controla solamente el procedimiento de tinción
* El suero es de la misma especie que el anticuerpo específico, pero no va dirigido al mismo antígeno objetivo. Para detectar un ligamiento de anticuerpo no específico, por ejemplo, ligamiento de la porción Fc del anticuerpo al tejido.
Portaobjeto de control (suministrado): cada uno de los portaobjetos de control contiene tres
líneas celulares con cáncer de mama humano en pellet, incluidas en parafina y fijadas en formol con unas puntuaciones de intensidad de tinción de 0, 1+ y 3+. En cada secuencia de tinción debe teñirse sólo un portaobjeto. La evaluación de las líneas celulares del portaobjeto de control suministrado por Dako indica la validez de la secuencia de tinción.
Tejido de control positivo: los controles deben ser especímenes procedentes de autopsia,
biopsia o quirúrgicos fijados, procesados e incluidos tan rápido como sea posible de la misma forma que las muestras de pacientes. Los controles de tejido positivos indican si los tejidos se han preparado correctamente y si se han utilizado las técnicas de tinción oportunas. Debe incluirse un tejido de control positivo para cada conjunto de condiciones de prueba en cada secuencia de tinción.
Los tejidos de control positivo deben mostrar una tinción positiva débil para que puedan detectar cambios leves en la sensibilidad del anticuerpo primario. Los portaobjetos de control
suministrados con este kit o los especímenes procesados de forma diferente de la(s) muestra(s) del paciente validan sólo el rendimiento del reactivo y no verifican la preparación del tejido. Utilice la proteína HER2 2+ determinada con anterioridad que sobreexprese tejido de adenocarcinoma de estómago, incluida la unión gastroesofágica, para un control de tejido positivo óptimo.
NOTA: el tejido de control positivo conocido sólo debe utilizarse para realizar el seguimiento
del rendimiento correcto de los tejidos procesados y los reactivos de la prueba y NO como una ayuda para formular un diagnóstico específico de las muestras de paciente. Si el tejido de control positivo no consigue demostrar una tinción positiva apropiada, los resultados de los especímenes de paciente deberán considerarse inválidos.
Tejido de control negativo: utilice un tejido de control negativo (que se haya demostrado
negativo para la proteína HER2) fijado, procesado e incluido de idéntica forma a la muestra o las muestras de paciente de cada secuencia de tinción para verificar la especificidad del anticuerpo primario y ofrecer una indicación de una tinción de fondo específica. El colon, el hígado o el tiroides son apropiados como tejido de control negativo. La variedad de tipos celulares diferentes presentes en la mayoría de cortes de tejido ofrece puntos de control negativo internos (debe verificarlo el usuario).
Si se produce tinción específica en el tejido de control negativo, los resultados de la muestra del paciente deben considerarse no válidos y debe repetirse la prueba.
Reactivo de control negativo no específico: utilice el reactivo de control negativo
suministrado en lugar del anticuerpo primario con un corte de cada espécimen de paciente para evaluar la tinción no específica y permitir una mejor interpretación de la tinción específica en la zona del antígeno. El periodo de incubación para el reactivo de control negativo debe corresponderse con el del anticuerpo primario.
Verificación del ensayo: antes del uso inicial de un anticuerpo o un sistema de tinción en un
procedimiento de diagnóstico, el usuario debe verificar la especificidad del anticuerpo sometiéndolo a una prueba en un conjunto de tejidos internos con unas características de rendimiento inmunocitoquímico demostradas que representen tejidos positivos y negativos conocidos. Consulte los procedimientos de control de calidad descritos anteriormente en esta sección del prospecto y los requisitos de control de calidad del Programa de certificación del CAP respecto a la inmunocitoquímica y/o la Quality Assurance for Immunocytochemestry, Approved Guideline (24) del CLSI (anteriormente NCCLS). Estos procedimientos de control de calidad deben repetirse para cada nuevo lote de anticuerpos o siempre que se produzca un cambio en los parámetros de ensayo. Los adenocarcinomas de estómago, incluida la unión gastroesofágica, con intensidades demostradas de tinción de la proteína HER2 de entre 0 y 3+ y los tejidos negativos, como el colon, el hígado o la tiroides, son válidos para la verificación del ensayo.