DESCRIPCIÓN DE LA MUESTRA

Se establecieron 3 líneas de estudio:

- Estudio 1: realizado en 2005, sobre 20 pacientes VIH positivos, se

realizó el estudio anatomopatológico, para ver la presencia del virus en mucosa bucal sana, y serológico (ver linfocitos en sangre periférica); la toma de las muestras se realizó el mismo día. De estos

20 pacientes sobre los que se tomaron las muestras de mucosa bucal para el análisis anatomopatológico y extracciones de sangre para el estudio serológico, hubo 3 en los que la biopsia de mucosa bucal no pudo considerarse para su posterior estudio por no conseguir una buena preparación de las mismas que permitiera su análisis anatomopatológico, pudiendo haberse contaminado. Por tanto, el estudio anatomopatológico y serológico finalmente se realizó sobre 17 pacientes.

- Estudio 2: Se realizó el test de saliva Oraquick Advanced de Orasure;

el cual está compuesto por:

o grupo A, formado por 312 pacientes VIH positivos a los que se les realizó una historia clínica y la exploración odontológica (ver anexo ficha clínica); o grupo B, control, compuesto por 70 pacientes sanos,

no VIH positivos, a los que también se les realizó la historia clínica.

A ambos grupos, A y B, se les realizó el test rápido de saliva Oraquick Advanced de Orasure.

- Estudio 3: de la muestra total, compuesta por 312 pacientes VIH

positivos, se escogieron aquellos pacientes VIH positivos, homosexuales y varones, con lo cual la muestra resultante fue de 265 pacientes, a los que se les realizó la historia clínica y dental descrita anteriormente. En este grupo se realizó un frotis faríngeo para estudiar la existencia de una infección gonocócica subclínica.

El rango de edad de los pacientes estudiados es de 20-70 años. La edad media de los pacientes es de 43 años, un 93% eran hombres y un 7% mujeres.

2. MÉTODOS

Para dichos estudios se ha realizado la toma de datos a partir de la historia clínica y dental del paciente; como información adicional de esta patología se contrastaban los datos obtenidos con unas tablas que relacionan la presencia de determinadas enfermedades con la incidencia de sida (anexos: tablas 4 y 5).

- Estudio 1: Sobre los 20 pacientes se realizó además de la

historia clínica y dental (anexos: tabla 2), una biopsia de mucosa bucal de la zona alveolar, la cual una vez obtenida se incluía una parte en formol, otra en parafina y en el mismo momento se le extraían 20cc de sangre al paciente, de los cuales 10cc se heparinizaban y 10cc no se heparinizaban. La mucosa bucal de la muestra no presentaba alteraciones clínicas aparentes.

Se anotaba el estadío clínico según la clasificación del CDC de Atlanta. El estado inmunológico del paciente, era valorado de acuerdo al estudio de poblaciones linfocitarias CD4 y CD8 por citometría de flujo en un citómetro FACS-Calibur (Beckton-Dikison) utilizando anticuerpos monoclonales directamente marcados (Tritest DB). La determinación de la carga viral plasmática RNA-VIH1 se realizó con Roche Amplicor Ultrasensible (sensibilidad del método 20 copias/ml).

- Estudio 2: Se estudió la sensibilidad del test Oraquick

Advanced de Orasure sobre el total de la muestra, 312 pacientes, así como la especificidad del test sobre el grupo control, 70 pacientes.

El test Oraquick Advanced es un inmunoensayo cualitativo de flujo lateral, de un solo uso, para detectar anticuerpos contra el virus de la inmunodeficiencia humana VIH-1 y VIH-2 en muestras de fluido oral. El test contiene péptidos sintéticos que representan la región del sobre del VIH y un control de procedimiento de IgG antihumano de cabra.

En aquellos pacientes en los que el test de saliva Oraquick Advanced fue positivo, se estudiaron distintas variables como: historial médico previo, presencia de enfermedades de transmisión sexual (ETS) como herpes simple, gonorrea, sífilis, condilomas, proctitis, etc…, presencia de hábitos tóxicos como el consumo de tabaco, alcohol ó drogas, estar en tratamiento antirretroviral (Tto ARV) y presencia de lesiones en mucosa bucal.

Se compararon los resultados de la analítica de estos pacientes con la positividad del test, se compararon con la carga viral, el cociente CD4/CD8, el valor de los CD4, el valor de los CD8, el valor de plaquetas y la hemoglobina.

- Estudio 3: Sobre el grupo de pacientes VIH+, homosexuales,

varones, se estudió la existencia de una infección gonocócica subclínica. Estos pacientes debían estar asintomáticos y no haber padecido enfermedades de transmisión sexual (ETS) en los seis meses previos a la realización del estudio, con lo cual la muestra inicial se redujo de 312 pacientes a 265 pacientes.

Se estudiaron las siguientes variables: presencia del virus de la hepatitis C (VHC), presencia del virus de la hepatitis B (VHB), mantoux positivo, presencia de alguna enfermedad de transmisión sexual (ETS): herpes simple, sífilis, proctitis, gonorrea, condilomas, etc… aunque nunca en los seis meses anteriores a la realización del estudio; presencia de hábitos tóxicos: tabaco, alcohol, drogas (cocaína, heroína), estar en tratamiento antirretroviral (Tto ARV), existencia de alguna patología bucal asociada.

Para valorar la presencia de la infección gonocócica subclínica, se realizaron frotis faríngeos en los pacientes siempre que no estuvieran en tratamiento con algún antimicrobiano en el momento del estudio.

Se valoraron las especies de neisseria gonorrhoeae aisladas y se estudiaron las distintas sensibilidades a los distintos antimicrobianos: penicilina, tetraciclinas, ciprofloxacino y ceftriaxona. En aquellos pacientes en los que el resultado del frotis fue positivo y volvieron a consulta dentro de los quince días posteriores al resultado, se les instauró tratamiento antimicrobiano con una dosis de ceftriaxona 250mg vía intramuscular. En la repetición del frotis faríngeo el resultado en todos los pacientes fue negativo.

2.1 TOMA DE LAS MUESTRAS

Estudio 1:

• Biopsia de mucosa bucal: se realizaba con hoja de bisturí del nº15, de encía queratinizada de la zona alveolar posterior, el tamaño mínimo era de 0.5x0.5 cms y la mucosa no presentaba alteraciones clínicas aparentes. La sutura de la zona de extracción se realizó con seda

trenzada 2-0. La muestra obtenida se metía en parafina para su posterior preparación y fijación.

• Extracción de sangre: se tomaban 20cc con una aguja tipo mariposa, y se depositaban 10cc de sangre en un tubo estéril y otros 10cc en otro tubo estéril con heparina para evitar la coagulación y así poder analizar en laboratorio la presencia del VIH-1.

Estudio 2:

 Test de saliva: se obtiene una muestra de fluido oral utilizando la paleta del dispositivo de prueba, con la que se impregna la saliva en la zona de mucosa yugal derecha e izquierda de los pacientes y la zona de fondo de vestíbulo superior e inferior a continuación se inserta el dispositivo de prueba en el frasco de solución reveladora. Se tomaba la muestra de una zona que no presentara lesiones en la mucosa (figura 1). Esta prueba se debe llevar a cabo en temperaturas dentro del margen de 15ºC-37ºC.

Figura 1:Toma de muestra de saliva con el test Oraquick Advanced.

 Frotis faríngeo: con un hisopo estéril se realiza un escobillado y se impregna de saliva la zona posterior de la faringe, a nivel de las amígdalas, siempre que el paciente no hubiera utilizado colutorios 30 minutos antes de la prueba, no presentara alteraciones en la mucosa a ese nivel ni estuviera en tratamiento con antimicrobianos (figura 2).

Figura 2:Frotis faríngeo.

2.2 ANÁLISIS DE LAS MUESTRAS

Estudio1: