283. RESULTADOS DE 3 AÑOS DE CRIBADO PRENATAL DE CROMOSOMOPATÍAS EN EL HOSPITAL SEVERO OCHOA
A. Anadón Ruiz, C. Córdoba Chicote, I. Sánchez Prieto, A. Andrino García y C. Hernando de Larramendi Martínez
Hospital Severo Ochoa. Madrid. España.
Introducción: En el Hospital Severo Ochoa ofrecemos desde 2006
el cribado de cromosomopatías de primer trimestre (1T) en 2 pasos. Con el objeto de conseguir la máxima sensibilidad bioquímica y ecográfi ca, se mide PAPPA-A y β-HCG libre en la semana 10 (9–11) y la translucencia nucal en la semana 12 (11–13). Desde 2007 ofrece- mos también el cribado de segundo trimestre (2T) para los casos de embarazadas que llegan tarde, determinándose β-HCG libre y α-fetoproteína.
Objetivos: Evaluación de los resultados del programa de cribado
entre 2006–2008: casos cerrados, porcentaje de falsos positivos, grado de cumplimiento y grado de captación.
Material y métodos: Estudio retrospectivo de los cribados reali-
zados entre 2006 y 2008. La determinación de los marcadores bio- químicos se realiza en el analizador INMULITE 2000. La alfa El cálculo del riesgo se realiza mediante el programa informático PRISCA 4.0. Se recogen los datos de edad, semanas de gestación en la fecha de la extracción y en la ecografía, resultados del cribado, riesgos combinados para trisomía 21 y para trisomía 18, desenlace del embarazo y amniocentesis, del programa PRISCA, el sistema informático del Hospital y el del Laboratorio (Omega 3000).
Resultados: Durante el periodo estudiado se han realizado 5.545
cribados. De los cribados realizados, 94 correspondían a embarazos gemelares (1,7%), casos que excluimos del estudio. 137 cribados fueron de 2T (1,7%). El rango de edad de las gestantes es de 15–46 años, media 31,2, mediana 31,6. La edad gestacional media en el momento de extracción de la muestra para bioquímica fue de 9,9 semanas (DE = 1,03), y la mediana 10 semanas. La edad gestacional media en el momento de la ecografía fue de 12,1 semanas (DE =
0,66) y mediana 12 semanas. Hemos cerrado el 89% de los 5.451 cribados de embarazos con feto único ya que el desenlace se pro- dujo en nuestro hospital: hubo 39 IVEs (0,8%), 134 abortos (2,7%) y 4701 partos (96,5%). Con respecto al grado de captación, el 94,9% de los partos habidos en el hospital tenían realizado el cribado pre- natal. Mediante el cribado de 1T hemos detectado 22 cromosomo- patías; entre ellas 12 trisomías 21, 3 trisomías 18 y una trisomía 13. No ha habido verdaderos positivos con el cribado de 2T. La tasa de falsos positivos (FP) durante el periodo estudiado es de 4,6%. En gestantes de 35 años o menos, la tasa de FP es de 2,9%; y en ges- tantes mayores de 35 es del 11,7%. No ha habido falsos negativos.
Conclusiones: El cumplimiento del protocolo de cribado se hace
correctamente, gracias a la colaboración y continua comunicación entre los Servicios de Ginecología y Obstetricia y Análisis Clínicos. Las tasas de FP son similares a las observadas en la bibliografía, por lo que concluimos que el trabajo con nuestras propias medianas poblacionales es adecuado. Conseguimos cerrar 9 de cada 10 criba- dos. La importancia de seguir los casos hasta el desenlace radica en que es una forma de control del programa de cribado y nos propor- ciona seguridad en nuestro modo de llevarlo a cabo.
284. EVALUACIÓN DEL ESTADO NUTRICIONAL DE YODO EN GESTANTES Y SUS RECIÉN NACIDOS EN LA SIERRA DE HUELVA-ANDÉVALO
T. Arrobas Velillaa, M. Castaño Lópezb, C. González Rodríguezd,
A. Barco Sánchezd, C. González Martína, E. Pascual Salvadorc,
J. Limón Padillac, E. Marina Tascónc, M. Perea Brenesc,
M. Sánchez Mateosc, R. Albusac Aguilarc, R. Perea Carrascob
y F. Fabiani Romeroa
aUnidad de Riesgo Vascular; dUnidad de Hipotiroidismo Congénito.
Hospital Universitario Virgen Macarena. Sevilla. España.
bLaboratorio de Análisis Clínicos; cServicio de Ginecología.
Hospital de Río Tinto. Huelva. España.
Objetivos: Evaluar el estado nutricional de yodo en gestantes y
sus recién nacidos en el distrito sanitario sierra de Huelva-Andévalo mediante la determinación del diferentes marcadores bioquími- cos.
Pacientes y métodos: Se han incluido 313 gestantes y sus corres-
pondientes recién nacidos pertenecientes al distrito sanitario selec- cionado. Las gestantes con patología tiroidea previamente diagnos- ticada fueron excluidas para no sesgar el estudio por lo que se incluyeron a todas aquellas gestantes con embarazo normal, con o sin suplementación de yodo durante la gestación y ausencia de pa- tología tiroidea. Una limitación del estudio es que no se reclutaron pacientes controles ya que ponían en peligro la salud de los indivi- duos participantes. Este estudio se ha llevado a cabo conjuntamen- te por la Unidad de Hipotiroidismo Congénito del Departamento de Bioquímica Clínica del Hospital Universitario Virgen Macarena de Sevilla y los Servicios de Ginecología y Análisis Clínicos del Hospital de Río Tinto (Huelva) con una duración de 2 años. Previo consenti- miento informado, se le extrajo a cada gestante un muestra de sangre para la determinación de TSH y T4l por electroquimiolumi- niscencia y una muestra de orina para la determinación de yoduria por HPLC. A los recien nacidos se les determinó la TSH neonatal mediante fl uorimetría a tiempo discriminado en sangre seca en pa- pel. Posteriormente se realizó una base de datos con el programa spss v,13,0 y un estudio estadístico.
Resultados: Los valores de concentración de yoduria no mues-
tran una distribución normal sino que presentan cierta tendencia a valores cercanos a los 150 μg/L. La mediana de las yodurias de las gestantes fue de 137,51 μg/L, por lo que más del 50% de las emba- razadas presentan una ingesta de yodo insufi ciente de acuerdo con las recomendaciones de la Organización Mundial de la Salud. Las medianas de TSH, t4l y TSH neonatal se encuentran dentro de valo- res normales. Se observó la existencia de una correlación negativa
entre valores de TSH neonatal > 5 mUI/L y bajos niveles de yoduria. La prevalencia de recién nacidos con TSH neonatal > 5 mUI/L fue del 19% lo cual se corresponde con una zona de endemia leve de yododefi ciencia, además, el 25% de las gestantes presentaban TSH > 3 mUI/L que excede de los valores normales en embarazadas se- gún las guías clínicas.
Conclusiones: Los marcadores bioquímicos estudiados, yoduria,
TSH materna y TSH neonatal) refl ejan una defi ciencia de yodo en el distrito sanitario sierra de Huelva- Andévalo.
285. DETECCIÓN DE UN CASO DE ACIDURIA GLUTÁRICA TIPO I CON FENOTIPO BIOQUÍMICO DE BAJA EXCRECIÓN Y CLÍNICA NEUROLÓGICA ATÍPICA
I. Baena Ferrerb, C. Fernández Pozuelob, M. Molina Huelvab,
V. Aguadero Acerab, C. Cáceres Marzala y J. Sánchez Alarcónb
aServicio de Pediatría; bServicio de Análisis Clínicos. Hospital
Materno-Infantil de Badajoz. Badajoz. España.
Introducción: La aciduria glutárica tipo I (AGI) es una enferme-
dad autosómica recesiva producida por el défi cit de la enzima glu- taril-CoA deshidrogenasa, la cual está implicada en el metabolismo de los aminoácidos, lisina, hiroxilisina y triptófano. Su alteración conduce a un acúmulo de metabolitos intermedios como los ácidos orgánicos, ácido glutárico (AG) y 3-OH glutárico (3-OH AG), cuyos niveles en orina sirven para realizar el diagnóstico. Existen dos for- mas clínico-analíticas bien diferenciadas. La forma clásica, de ele- vada excreción, se caracteriza clínicamente por macrocefalia, aumento de los espacios subaracnoideos a nivel fronto-temporal por la neuroimagen y por la aparición brusca aguda coincidiendo con procesos interrecurrentes de una encefalopatía metabólica aguda. Es diagnosticada por un aumento de AG y 3-OH AG en orina (AG > 100 mmol/mol creatinina). La forma atípica o de baja excre- ción clínicamente es más heterogénea, no existe macrocefalia y en ella se observan exclusivamente valores de 3-OH AG elevados con valores de AG normales o casi normales. (AG < 100 mmol/mol crea- tinina).
Caso clínico: Niño de dos años de edad que acude a la consulta
de neuropediatría del Hospital Materno-Infantil de Badajoz, con antecedentes de hipotonía en la etapa del lactante. Actualmente presenta una marcha atáxica y un retraso del lenguaje. La neuro- imagen es normal. En el laboratorio de metabolopatías y diagnósti- co de errores congénitos del metabolismo se le realiza la determi- nación de aminoácidos y acilcarnitinas en sangre impregnada en papel mediante espectrometría en tándem masas MS/MS en el equi- po de Perkin Elmer Quattro Micro, Waters. Se detectan unos niveles de acilcarnitina C5DC o glutarilcarnitina de 0,84 μM (valores norma- les en nuestra población < 0,32 μM). Junto con sangre seca en Ex- tremadura se recoge además muestra de orina en papel, dando ésta una concentración de C5DC = 188 μM (0,01–4,12 μM). Estos valores crean la sospecha de una aciduria glutárica que debe ser confi rma- da, por lo que solicita una nueva muestra de orina para la realiza- ción de ácidos orgánicos. Se determinan los niveles de AG y 3-OH AG mediante cromatografía de gases/espectrometría de masas GS/MS. Los resultados son: AG = 11,3 mmol/mol creatinina (2,00–10,00) y 3-OH AG = 51,9 mmol/mol creatinina (2,00–14,00). Estos valores son compatibles con el diagnóstico de aciduria glutárica tipo I, en este caso concreto de fenotipo de baja excreción.
Conclusiones: Futuras determinaciones como el estudio de acti-
vidad enzimática de la glutaril-CoA deshidogenasa en fi broblastos y el estudio molecular del gen GCDH completarán el estudio de este error congénito del metabolismo. Actualmente en proceso. Impor- tancia de la implicación de los laboratorios de metabolopatías do- tados con la tecnología de espectrometría en tándem masas MS/MS para realizar una rápida detección de este tipo enfermedades en donde el diagnóstico precoz y el consejo genético familiar es esen- cial.
286. EVALUACIÓN DE LA VARIABILIDAD ANALÍTICA DE ACILCARNITINAS DICARBOXÍLICAS EN UN LABORATORIO DE SCREENING NEONATAL
P. Belinchón Torresa, I. Baena Ferrerb y J. Sánchez Alarcóna
aHospital Perpetuo Socorro-Materno Infantil. Badajoz. España. bHospital de Mérida. Badajoz. España.
Introducción: La determinación de aminoácidos y acilcarnitinas
es rutinaria en la detección de errores innatos realizándose por espectrometría de masas. Los métodos clásicos exigían derivatiza- ción (butil-ésteres) aunque en la actualidad se preconizan los ensa- yos directos de efi ciencia análoga pero de más sencilla realización. Uno de los puntos de controversia es el ensayo directo de acilcarni- tinas de ácidos dicarboxílicos con valores hasta 5 veces menores que los obtenidos mediante esterifi cación (butil-ésteres). Ello es debido a la baja efi ciencia en su ionización que rinde varios tipos de iones y disminuye hasta 1/3 la cantidad de ión mensurable. El em- pleo de estándar interno resuelve el problema, aunque sigue cues- tionándose la cuantifi cación a valores normales-bajos.
Objetivos: Es objeto de este trabajo comparar la variabilidad
analítica de las acilcarnitinas sencillas (C8) con la de acilcarnitinas dicarboxílicas de parecida concentración (C5DC) en el uso rutinario de screening neonatal sin derivatización y con estándar interno deuterado.
Material y métodos: Espectrómetro de masas de triple cuadru-
polo. Control de concentraciones (μmol/l) C8: 0,74 ± 0,33; C5DC: 0,79 ± 0,36. Las muestras de sangre seca y controles se extraen con mezcla de metanol y estándar interno, analizándose a continuación por MS/MS.
Resultados: Se consideran 80 valores de controles diarios Media
(μmol/l) C8: 0,6; C5DC: 0,9. Desviación estándar C8: 0,14; C5DC: 0,32. Coefi ciente variación C8: 23%; C5DC: 33%.
Conclusiones: La variabilidad analítica para valores normales-
bajos es considerablemente mayor para C5DC que para C8, siendo la diferencia estadísticamente signifi cativa. La utilidad clínica diag- nóstica de C5DC no se ve comprometida porque se valoran elevacio- nes signifi cativas de este parámetro. La monitorización de C5DC puede requerir esterifi cación previa cuando los valores esperados sean normales-bajos. Las conclusiones son extensibles a otras acil- carnitinas dicarboxílicas.
287. RECIÉN NACIDOS VIVOS CON SÍNDROME DE DOWN NO DETECTADO POR CRIBADO PRENATAL
EN EL DEPARTAMENTO DE SALUD 20 DE LA COMUNIDAD VALENCIANA
A. Belmonte Cobos, N. López Riquelme, M. Jiménez Díaz, N. Viciano Morote y M. Fajardo Jiménez
Servicio de Análisis Clínicos. Hospital General Universitario de Elche. Alicante. España.
Introducción: Hasta hace pocos años, el cribado prenatal depen-
día exclusivamente de datos epidemiológicos. En 1987, se asocia la α-FP, βHCG y estriol no conjugado (uE3) junto con la edad materna (screening de 2º trimestre). En 1992, se introdujo la utilización del PAPP-A y la fracción libre de β-HCG (β-HCG libre), translucencia nucal y edad materna, como cribado de síndrome de Down en pri- mer trimestre de la gestación. Desde junio 2006 se implantó el cribado prenatal en el área 20 de la Comunidad Valenciana, siguien- do las recomendaciones de la SEGO. La incidencia global del síndro- me de Down se aproxima a uno de cada 700 nacimientos (15/10.000), pero el riesgo varía con la edad de la madre.
Objetivos: Estimar la prevalencia de síndrome de Down en recién
nacidos vivos en el departamento de salud 20 antes y después de la implantación de cribado prenatal de primer y segundo trimestre. Estudiar pormenorizadamente los casos de falsos negativos del cri- bado prenatal de aneuploidias.
Material y métodos: Se realizaron 7.115 despistajes prenatales
de primer trimestre y 1.377 cribado prenatal de segundo trimestre en 2006, y 2.038, en el periodo de 2007 a 2010 en nuestro labora- torio. El cribado prenatal de primer trimestre se realiza de forma secuencial a todas las embarazadas siguiendo las recomendaciones de la SEGO: la determinación de la β-HCG libre y PAPP-A se realiza en el Immulite 2000 (Siemens) entre la semana 9+0 y 12+6 de ges- tación y la ecografía se concluye entre la semana 10+0 y 13+6 se- mana de gestación. Para el cálculo del riesgo se utiliza el programa estadístico Prisca (Siemens). El cribado prenatal de segundo trimes- tre se realiza determinando a-FP, uE3 y β-HCG entre la semana 14 hasta la 16. En el servicio de Pediatría, se recogieron todos los ca- sos de recién nacidos vivos con síndrome de Down en el periodo estudiado.
Resultados: De 2006 hasta mayo de 2010 se diagnosticó 9 casos
de niños con síndrome de Down nacidos vivos. Sólo 4 gestantes se sometieron al screening prenatal, el resto rechazaron el cribado o fueron embarazos no controlados. Destacamos que en 2007 hubo un caso con cribado de primer trimestre (riesgo combinado < 1:10.000 y riesgo bioquímico 1:5.544; la β-HCG libre 0,56 MoM corregido y PAPP-A 0,62 MoM corregido), y marcadores ecográfi cos negativos. Aunque la extracción se realizó en la semana 11+2, más tarde que la recomendada en nuestro departamento (aproximadamente 9-10 semanas). Respecto al screening de segundo trimestre: sólo 3 ges- tantes se realizaron el test con los siguientes riesgos: 1/3.562, 1/385 y 1/800. La mediana de edad de las gestantes fue 29 años. Ninguna embarazada presentó marcadores ecográfi cos, ni se reali- zaron amniocentesis. En el cribado de primer trimestre, el valor predictivo del resultado negativo es de 99,98%.
Periodo Recién nacidos vivos Prevalencia de Sd.
con Sd. de Down de Down
2006 4 0,13%
2007-2010 5 0,5%
Conclusiones: La implantación del cribado de primer trimestre a
todas las embarazadas desde 2006 ha disminuido de manera consi- derable la incidencia de recién nacidos vivos con síndrome de Down, a pesar de ser ofrecido a toda la población, incluida a las gestantes mayores de 35 años, como exploración previa a la indica- ción de amniocentesis. No creemos necesario un cambio en el pun- to de corte como algunos autores proponen porque aún así el falso positivo no se hubiera detectado. Quizás sería el momento de bus- car nuevos marcadores bioquímicos y/o ecográfi cos que dieran res- puestas a este error.
288. DIAGNÓSTICO DE LA ACIDURIA GLUTÁRICA TIPO I MEDIANTE LA DETERMINACIÓN DEL ÁCIDO
3-HIDROXIGLUTÁRICO EN ORINA POR ESPECTROMETRÍA DE MASAS CON DILUCIÓN ISOTÓPICA
A. Blanco, E. Riudor, A. Arranz, M. Herrero y S. Murillo
Unitat de Metabolopaties. Servei de Bioquímica Clínica. Hospital Universitario Vall d’Hebron. Barcelona. España.
Introducción: La aciduria glutárica tipo I es una enfermedad ge-
nética recesiva con grave clínica neurológica que presenta excre- ción intermitente y muy variable de ácido glutárico y 3-hidroxiglu- tárico (3OHGA). Pequeños aumentos de 3OHGA en orina resultan ser el mejor marcador bioquímico para el diagnóstico. También es útil en el seguimiento de enfermos ya tratados. El método sin dilución isotópica a concentraciones cercanas al límite de normalidad de la población tiene el inconveniente de dar falsos positivos o negati- vos, debido a su gran variabilidad y a su escasa sensibilidad. Por
tanto, se requieren métodos de detección sensibles y reproducibles como la espectrometría de masas con dilución isotópica.
Objetivos: Desarrollo del método de determinación de 3OHGA en
orina por cromatografía de gases acoplada a espectrometría de ma- sas con dilución isotópica y determinación de los valores de refe- rencia.
Material y métodos: El análisis por GC-MS requiere previo trata-
miento de la muestra mediante extracción con acetato de etilo y éter dietílico y derivatización con BSTFA (N, O-(bistrimetilsilil) tri- fl uoroacetamida), utilizando ácido 3-hidroxiglutárico pentadeute- rado (3OHGA-d5) como molécula trazadora para la dilución isotópi- ca. La cuantifi cación de 3OHGA se realizó en modo SIM (Single Ion Monitoring), escogiendo las masas específi cas 259 y 263. Se realiza- ron diversas pruebas con el fi n de analizar el comportamiento de las respuestas en las masas específi cas, en especial en presencia de una concentración añadida de ácido 2-hidroxiglutárico (2OHGA). Este metabolito fi siológico coeluye parcialmente con el 3OHGA y dada su similitud química origina una interferencia espectral. Tam- bién se realizó el estudio de los siguientes parámetros de calidad del método analítico: sensibilidad, límite de detección, linealidad, variabilidad (intra- e interserial), así como la determinación de los intervalos de referencia de la población.
Resultados: La curva fi nal de calibración, lineal hasta una con-
centración de 53,6 μM, presenta un coefi ciente de correlación r2 =
1. El coefi ciente de variación (CV) intraserial es de 3,6% (N = 8), el CV interserial de 10,8% (N = 10) y los intervalos de referencia son: neonatos < 9,2 mmol/mol creatinina (N = 11), resto de población < 4,8 mmol/mol creatinina (N = 10). La contribución del 2OHGA no resulta signifi cativa hasta concentraciones de 400 μM.
Conclusiones: Se ha comprobado con diferentes pruebas que el
3OHGA-d5 se comporta como un buen patrón interno, siendo un factor constante en cuanto a comportamiento de respuestas se re- fi ere a lo largo de la curva de calibración. La determinación de la concentración de 3OHGA en orina con dilución isotópica resulta ser un buen método debido a su buena variabilidad y su alta sensibili- dad analítica, siendo adecuado para detectar pequeños aumentos de 3OHGA, que tienen relevancia diagnóstica.
289. VALORACIÓN DEL SCREENING PRENATAL DEL PRIMER TRIMESTRE EN EL HOSPITAL UNIVERSITARIO PRÍNCIPE DE ASTURIAS
C. Caballero Garcíaa, A. Esteban Susaetaa, B. Gómez Serenoa,
P. Franco Fernándeza, P. Jiménez Hernándezb, C. Coca Martína
e I. Arribas Gómeza
aServicio de Análisis Clínicos; bServicio de Obstetricia. Hospital
Universitario Príncipe de Asturias. Alcalá de Henares. Madrid. España.
Introducción: El screening prenatal para la detección de aneu-
ploidías consiste en la aplicación de un test combinado, en el pri- mer trimestre de la gestación, a partir de datos ecográficos, epidemiológicos y bioquímicos. En esta prueba se combinan los va- lores de beta-HCG libre y PAPP-A, medidos en suero materno entre las semanas 10+3 y 13+6, y los datos ecográfi cos (translucencia nu- cal) procurando la máxima proximidad entre la obtención de am- bos.
Objetivos: Determinar la sensibilidad y especifi cidad del scree-
ning prenatal del primer trimestre, en función de los resultados obtenidos mediante el test combinado, en nuestro hospital.
Pacientes y métodos: Se estudiaron los screening realizados a
9.880 gestantes entre el 24.03.2006 y el 30.10.2009. La determina- ción de los niveles de beta-HCG libre y PAPP-A se realizó mediante inmunoquimioluminescencia en el analizador IMMULITE® 2000; los
datos ecográfi cos y epidemiológicos fueron proporcionados por el Servicio de Obstetricia según el protocolo establecido. El valor del
riesgo estadístico del síndrome de Down (trisomía 21) y el síndrome de Edwards (trisomía 18) se calculó con el programa informático PRISCA®.
Resultados: Los resultados obtenidos muestran que el screening
prenatal del primer trimestre presenta una sensibilidad del 84%