MATERIAL Y MÉTODOS
1. Material de estudio 1 Muestras vegetales
2.4 Evaluación del efecto de la concentración del aceite esencial de Luma chequen sobre la viabilidad de Escherichia coli, Pseudomonas
2.4.4 Evaluación de la capacidad bactericida y bacteriostática
Se realizó teniendo en cuenta la relación CMB/CMI. De manera que si la relación CMB/CMI ≤ 2, el efecto se consideró como bactericida y si la relación CMB/CMI > 2, el efecto se consideró como bacteriostático (Ingraham et al., 1998).
BIBLIOTECA
DE CIENCIAS
RESULTADOS
Mediante el método de destilación por arrastre de vapor de agua, se obtuvo el aceite esencial de Luma chequen; y mediante cromatografía de gases acoplado a espectrometría de masas (GC-MS) se determinaron sus componentes mayoritarios. (Anexo 22 y 23)
Mediante la prueba de difusión en pocillo, empleada para evaluar la actividad del aceite esencial de L. chequen sobre la viabilidad de ECRC, PARC y SARM, in vitro; se obtuvo que ECRC y SARM mostraron zonas de inhibición con un diámetro de 16,9 mm (Tabla 2; Anexo 24) y 20,4 mm (Tabla 2; Anexo 26); respectivamente. También se reporta que PARC no muestra zona de inhibición alguna (Tabla 2; Anexo 25).
Finalmente, la CMI y la CMB (Tabla 3; Anexos 28 y 29) del aceite esencial
de L. chenquen sobre ECRC fueron de 250 µL/mL y 500 µL/mL respectivamente;
mostrando que el cociente CMB/CMI = 2. Por otro lado, la CMI para SARM fue de 125 µL/mL y su CMB, de 500 µL/mL (Tabla 3; Anexos 32 y 33), siendo el cálculo del cociente entre CMB/CMI = 4.
BIBLIOTECA
DE CIENCIAS
Tabla 2.- Diámetro promedio de las zonas de inhibición del aceite esencial (AE) de
L. chequen sobre ECRC, PARC y SARM.
Bacteria AE de L. chequen Diámetro zona de inhibición (mm)*
ECRC 100% 16,9
PARC 100% 0,0
SARM 100% 20,4
*Ver Anexo 27 para los datos obtenidos en cada repetición.
Tabla 3.- Concentración mínima inhibitoria (CMI), concentración mínima bactericida (CMB) y efecto antibacteriano del aceite esencial de
L. chequen sobre ECRC, PARC y SARM.
Bacteria CMI (µL/mL) CMB (µL/mL) CMB/CMI Efecto antibacteriano ECRC 250 500 2 Bactericida
PARC - - - Sin efecto
antibacteriano
SARM 125 500 4 Bacteriostático
BIBLIOTECA
DE CIENCIAS
DISCUSIÓN
Los ensayos del presente estudio se realizaron empleando el aceite esencial de las hojas de Luma chequen “arrayán”, el cual se obtuvo mediante destilación por arrastre de vapor de agua. A partir de este método, la materia prima únicamente entra en contacto con vapor de agua, sin necesidad de agregar solventes químicos, lo que asegura un aceite esencial de alta calidad y pureza, determinándose así la eficacia del método. Además de ser un método sencillo y de bajo costo que nos permite obtener un aproximado de 6 mL de aceite esencial por cada kg de hojas de
L chequen empleadas. (Carrasco, 2009; Peredo-Luna, Palou-García y López-Malo, G., 2009).
Carhuapoma, et al (2005) y Gonçalves et al. (2006) analizaron los componentes del aceite esencial de L. chequen y encontraron α-pineno (57,3% y 57,1%) y 1,8-cineol o eucaliptol (7,5% y 12,1%), respectivamente como componentes mayoritarios; sustentando el uso popular del aceite como expectorante, antiinflamatorio, conservante, antibiótico y antifúngico. Teniendo como referencia que las características químicas específicas de los aceites esenciales varían en función de la zona de cultivo, condiciones ambientales y/o método de extracción (Sayed, 2017), se encontró que los componentes mayoritarios encontrados en el aceite empleado en el presente estudio fueron: D-limoneno (43,18%) y eucaliptol (14,30%). Datos similares se obtuvieron en la investigación de Ruiz et al. (2015), quienes reportan D-limoneno (49,71%), eucaliptol (13,79%) y α-pineno (7,32%).
BIBLIOTECA
DE CIENCIAS
A pesar que L. chequen es una especie vegetal poco conocida científicamente, ya se han llevado a cabo algunos estudios que demuestran su actividad antimicrobiana sobre ciertas bacterias y hongos. Gonçalves et al. (2006) investigaron el efecto del aceite comercial de L. chequen y de sus compuestos mayoritarios (α-pineno, 1,8-cineol y linalool), sobre tres bacterias Gram positivas, dos Gram negativas, dos levaduras y tres hongos; concluyendo que se puede asociar la presencia de estos compuestos con la actividad antimicrobiana del aceite. Fernández (2019) reporta que concentraciones de 100% y 80% de dicho aceite, son capaces de inhibir el crecimiento de E. coli y S. aureus. En los resultados expuestos en la Tabla 2 del presente informe, se muestra que el aceite esencial de L. chequen
presenta actividad antibacteriana sobre ECRC y SARM, mostrando halos de inhibición de 16,9 mm y 20,4 mm respectivamente. Adicionalmente, en la Tabla 3 se indica que la CMI y CMB encontradas para ECRC fueron de 250 µL/mL y 500 µL/mL, respectivamente; mientras que para SARM, la CMI fue de 125 µL/mL y su CMB de 500 µL/mL.
En la Tabla 3 se muestra la relación encontrada entre la CMB/CMI de las bacterias en estudio, mostrando un efecto bactericida sobre ECRC. No obstante, a pesar de que el halo de inhibición para SARM tuvo mayor diámetro, el cociente entre CMB/CMI, muestra que L. chequen solo tiene efecto bacteriostático sobre SARM.
Chavez et al. (2016) emplearon extracto metanólico de hojas de
Myrcianthes hallii, planta perteneciente a la familia Myrtaceae al igual que L. chequen, sobre cultivos resistentes a antibióticos. Reportando que M. hallii tiene
BIBLIOTECA
DE CIENCIAS
actividad antibacteriana sobre S. aureus resistente a la meticilina, Enterococcus spp resistente a la vancomicina y S. pyogenes. grupo A (resistente a la penicilina) debido a la presencia de los muchos polifenoles con actividad antibacteriana encontrados en el extracto. Así mismo, aunque aún no se han encontrado investigaciones que describan el mecanismo de acción de los terpenos (compuestos mayoritarios presentes en el aceite de L. chequen), se considera que poseen actividad antibacteriana (Gonçalves et al, 2006). Las diferentes actividades antibacterianas mostradas por el aceite esencial de L. chequen, puede explicarse por la variación en la concentración porcentual de sus componentes mayoritarios, el efecto sinérgico de los diferentes componentes en el aceite y/o por la presencia de otros componentes que pueden ser activos incluso en pequeñas cantidades (Chavez et al, 2016).
Chavez et al. (2016); Flores (2014) y Gonçalves et al (2006), coinciden en que el aceite esencial de L. chequen tiene mayor efecto sobre bacterias Gram positivas debido a la composición de su pared celular. Sin embargo, se debe recordar que, al trabajar con bacterias resistentes, es probable que alguno de sus mecanismos de resistencia empleados para contrarrestar los antibióticos, influyan en la escasa o nula actividad del aceite, especialmente en el caso de PARC (Aguayo- Reyes et al, 2018; Moreno, 2013).
Los resultados en la Tabla 3 muestran que el aceite esencial de L. chequen
no presenta actividad sobre la viabilidad de PARC. No obstante, cabe resaltar que, aunque el crecimiento de la bacteria no es afectado, su producción de pigmento sí, tal como se observa en el Anexo 30. PARC presenta una elevada resistencia intrínseca y alta capacidad para adquirir resistencia a diversos antibióticos; esta
BIBLIOTECA
DE CIENCIAS
última característica se encuentra asociada a la formación de biopelícula (Ochoa et al, 2013), la cual es posiblemente responsable de la resistencia de la bacteria ante el aceite esencial de L. chequen.
BIBLIOTECA
DE CIENCIAS
CONCLUSIONES
Se obtuvo el aceite esencial de L. chequen mediante el método de destilación por arrastre de vapor de agua.; determinándose al D-limoneno (43,18%) y al eucaliptol (14,30%) como sus componen mayoritarios, mediante cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (GC-MS).
Se determinó la CMI y la CMB del aceite esencial de L. chequen sobre ECRC y SARM, encontrándose valores de CMI igual a 250 µL/mL y CMB de 500 µL/mL para ECRC y una CMI de 150 µL/mL, con una CMB de 500 µL/mL para SARM.
Se observó que aceite esencial de L. chequen no tiene ninguna actividad sobre la viabilidad de PARC.
Se demostró que el aceite esencial de L. chequen, tiene actividad antibacteriana sobre ECRC y SARM, mostrando un efecto bactericida y bacteriostático, respectivamente.
BIBLIOTECA
DE CIENCIAS
BIOLOGICAS
RECOMENDACIONES
Se sugiere realizar investigaciones en diversos aceites que puedan tener efecto sobre Pseudomonas aeruginosa, especialmente que actúen sobre la formación de su biopelícula. A fin de encontrar un compuesto que pueda combatir cultivos resistentes.