HIDRÓLISIS DE ALMIDON

Fundamento

Algunos microorganismos anaerobios se caracterizan por producir la enzima amilasa que hidroliza almidón. Para saber si el almidón ha sido hidrolizado o no, se utiliza el reactivo iodo/ioduro (lugol) que en presencia de almidón forma un complejo de color oscuro (azul o marrón).

Medio de cultivo

Agar infusión de corazón...40 g Almidón soluble...20 g A.D. ... 1000 ml

Calentar hasta disolver y llevar a autoclave 121°C, 15 min. enfriar a 55°C y volcar en cajas de Petri previamente esterilizadas.

Procedimiento

Sembrar la superficie del medio con el microorganismo en estudio. Incubar en anaerobiosis 48 h a 351 8C.

La hidrólisis de almidón se determina inundando la superficie de la placa con lugol. Interpretación

-POSITIVO: una zona incolora alrededor del desarrollo indica hidrólisis del almidón

-NEGATIVO: una zona oscura a púrpura, indica que no hubo hidrólisis

(+) (-)

Actividades a desarrollar

Los alumnos observarán e interpretarán pruebas bioquímicas para anaerobios obligados que proveerán los docentes.

BIBLIOGRAFÍA

- GUIA PRACTICA PARA EL PROCESAMIENTO DE MUESTRAS CLINICAS, Sadebac, Asoc. Arg. de Microbiología (1995)

- Mac Faddin, J. F. 1980. Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia clínica. Ed. Médica Panamericana.

- Microbelibrary.org. American Society fo r Microbiology. http://lib.jiangnan.edu.cn/ASM/252-Introduce.htm

Guía de Trabajos Prácticos. Microbiología e Inmunología - Parte A

TRABAJO PRÁCTICO N° 6

Tercera parte: MECANISMO DE IDENTIFICACION DE MICROORGANISMOS, EMPLEO DEL MANUAL BERGEY

OBJETIVOS

- Aprender los pasos a seguir para identificar un microrganismo - Adquirir entrenamiento en el manejo del Manual Bergey

INTRODUCCION

Las etapas prácticas a seguir en la identificación de un microorganismo son: 1. Estar seguro que el cultivo está puro

2. Sobre la base del aislamiento establecer si se tiene un organismo quimiolitotrofo, quimioheterotrofo o fotosintético

3. Examinar las células vivas por contraste de fase y células coloreadas al gram con microscopio óptico. Se aplicarán otras coloraciones si éstas son necesarias. Examinar si se observan algunas propiedades morfológicas prominentes tales como formación de esporas, posesión del holdfast, obviamente esto limita los posteriores esfuerzos en la identificación.

4. Observar las apariencias macroscópicas del crecimiento, observando la producción de pigmento y otras características particulares.

5. Realizar pruebas para el requerimiento de oxígeno

6. Realizar pruebas para la desasimilación oxidativa o fermentativa de la glucosa u otros azúcares simples.

7. Completar los tests seleccionados mediante pruebas adicionales que se hacen analizando las características de los grupos de géneros en los cuales se ubió el organismo, basados en las pruebas citadas anteriormente.

Cuando se falla en la identificación de un cultivo se debe probar: 1. Su pureza

2. Que hayan sido realizadas las pruebas adecuadas

3. Que los métodos sean satisfactorios (en varias partes del manual se enfatiza la necesidad de utilizar métodos específicos. Una forma de asegurar esto consiste en incluir un cultivo control conocido en las pruebas.

4. Que hayan sido correctamente utilizadas las distintas reglas y tablas del manual. La causa más frecuente de desaciertos en la identificación de bacterias es la de cometer errores en la forma, reacción de gram y movilidad. En la mayoría de los casos se podría tener pequeñas dificultadoes en la ubicación del germen aislado dentro de un género o en la clasificación en especies o subespecies. Para esto, puede requerir la colaboración de laboratorios especializados de referencia.

Empleo del Manual Bergey de Bacteriologia Sistemática

El Manual Bergey publicado en 1982, corresponde a la 9° edición y consta de 4 subvolúmenes. Estos son:

1) Gram negativos de importancia general, médica o industrial 2) Gram positivos (excluyendo actinomycetes)

3) Archaebacteria, cyanobacteria y el resto de gram negativos 4) Actinomycetes

El principal objetivo del Manual es asistir a la identificación de bacterias e indicar las relaciones que existen entre los distintos grupos. Los métodos de Biología Molecular hacen posible intentar una clasificación de las bacterias basada en sus relaciones mutuas.

Las claves para ingresar correctamente al Manual Bergey son: 1. Tipo de metabolismo

2. Forma y disposición celular 3. Coloración de Gram

Esto conducirá a la acertada elección de 1 de los 4 subvolúmenes. Secciones

El Manual se presenta en varias secciones basadas en unos pocos criterios

determinados. Todos los géneros aceptados han sido ubicados en lo que parece ser la sección más apropiada. Sin embargo, algunos géneros presentan dificultades,

ej.:Gardnerella, Butyrivibrio, etc. Secciones vs. Nombres taxonómicos

Cada sección lleva un nombre vernáculo, pero a veces, también lleva el nombre de un taxón. La Sección 1 (Spirochetes) es el Orden Spirochetales, y la Sección 8 (Cocci Gram-negative anaerobe) es la familia Veillonellaceae.

Algunas secciones contienen más de un Orden (ej. Sección 9) o Familia (ej. Sección 5) y algunas pueden tener únicamente el nivel de género (Sección 7).

El Manual no proporciona una jerarquía de taxas y los nombres vernáculos de las secciones son la base la organización del Manual.

Artículos

Cada artículo que trata de un género bacteriano es presentado siempre en esta secuencia:

a) Nombre del género: el nombre aceptado está en negrilla, seguido de la

autoridad científica que le dio el nombre, el año en que fue descripto por primera vez y la página en la que apareció publicado el taxón.

El superíndice AL indica que el nombre está incluido en la Approved List of Bacterial Names, publicada en enero de 1980.

El superíndice VP indica que el nombre fue válidamente publicado con posterioridad a la fecha en el International Journal of Systematic Bacteriology. b) Nombre del autor (s): la persona o personas que prepararon el artículo para el

Guía de Trabajos Prácticos. Microbiología e Inmunología - Parte A c) Sinónimos: en algunos casos se da una lista de los sinónimos que han sido

dados anteriormente para el mismo género.

d) Etimología del nombre del género: a veces es difícil saber por qué un nombre

particular fue elegido o el objetivo que se buscó. Aquellos autores que proponen nuevos nombres deben necesariamente consultar a autoridades en lengua griega o latina antes de publicar, para asegurarse que sean gramaticalmente correctos y también para asegurarse que el nombre signifique lo que se desea.

En el caso particular del género Escherichia, se presenta en el Manual de la siguiente manera:

Genus II Escherichia Castellani and Chaimers 1919, 942AL