Una vez identificados los triatominos (adultos y estadios inmaduros), es nece- sario que dichos ejemplares sean conservados ya que servirán de referencia. Para el montaje de los triatominos se debe seguir los siguientes pasos: 1° Colocar los triatominos vivos en un envase de vidrio de boca ancha con tapa
de rosca hermético (15 cm de alto x 10 cm de ancho), agregar una pequeña porción de algodón embebido con acetato de etilo, el cual permanecerá entre 15 y 30 minutos.
2° Transcurrido el tiempo, retirar el algodón; asimismo, cada ejemplar debe ser colocado en el tablero ajustable para insectos, con la finalidad de exten- der adecuadamente las patas, la probóscide y las antenas; permanecien- do en ella aproximadamente 12 horas.
3° Se debe seleccionar el número apropiado de los alfileres entomológicos (preferentemente para los adultos de los géneros:Triatoma yPanstrongylus )
que pueden ser el número 2 ó 4; mientras que para los del género Rhodnius ,
como para los otros géneros existentes y para los estadios inmaduros (ninfas) serían los números 0, 1 ó 2.
4° El triatomino será colocado sobre un bloque de “tecnopor” pequeño y al
nivel del extremo inferior derecho del pronoto se debe introducir el alfiler seleccionado hasta la tercera parte. Realizado esto, se retira el alfiler del
«tecnopor» y se introduce nuevamente en el centro del bloque de cartulina
de 10 mm x 5 mm, donde deben estar escritos con tinta china el nombre científico de la especie y el sexo; seguidamente se introduce el alfiler en otro bloque de cartulina de 6 mm x 15 mm, donde se escribe el código de registro del ejemplar para el laboratorio o la institución respectiva; y finalmente, introducir a otro bloque de cartulina de 10 mm x 20 mm, donde se consignarán los datos de captura del triatomino. La distancia entre el ejemplar y el primer bloque de cartulina debe ser de aproximadamente 4 mm, y así sucesivamente del primer bloque de cartulina con el segundo y el segundo con el tercero (Fig. 22).
SECCIÓN 7
7.1. ESTUDIO DE INFECCIÓN NATURAL
Para determinar si un triatomino está infectado por trypanosomatideos, se deben seguir los siguientes pasos:
7.1.1. La persona que va a manipular el triatomino debe usar guantes, mascarillas y guardapolvo. La manipulación se tiene que realizar en una cabi- na de flujo laminar y si no se tiene, es necesario adaptar un mechero Bunsen o de alcohol. Además, se debe tener un envase con lejía al 5%.
7.1.2. Separar todos los triatominos muertos encontrados en los vasos colec- tores, después identificar la especie a la que pertenece, dividir por sexo y estadios, y luego continuar con los ejemplares vivos.
7.1.3. Al ejemplar seleccionado se le coge del tórax con una pinza, luego frotar la parte dorsal y ventral del abdomen con un hisopo humedecido en solución salina con antibiótico y colocarlo en posición dorsoventral sobre una lámina portaobjeto limpia, a unos 0,5 cm de la parte final del abdomen, después dejar caer dos gotas de solución salina. Luego, con otra pinza limpia presionar en el octavo y noveno segmento abdominal con la finalidad de que expulse las heces. Con otra pinza limpia, realizando movimientos suaves en un solo sen- tido, homogeneizar las heces expulsadas con la solución salina.
7.1.4. Sobre la muestra se coloca un cubre objeto limpio, para ser observado al microscopio con aumento de 10X, depués se pasa a 40X. La observación debe iniciarse en uno de los extremos de la muestra, luego seguir en una sola dirección ya sea en forma longitudinal u horizontal; una vez llegada a la parte final de la muestra se avanza al campo siguiente y se retrocede, siguiendo de la misma forma hasta observar toda la muestra.
7.1.5. Terminada la observación se retira el cubreobjeto. Si la muestra es positiva se deja secar al medio ambiente, luego es enumerada y rotulada con los datos del triatomino capturado incluyendo la fecha de la observación. 7.1.6. Una vez que la muestra ha secado, es necesario cubrirla con unas gotas de alcohol metílico y secar al medio ambiente. Si la observación se realiza en el campo, es necesario fijar la muestra y luego depositarla en los lamineros. Para posteriormente colorearlas en el puesto o centro de salud más próximo.
7.1.7. Es recomendable que la fijación y la coloración de la muestra se realice en el mismo día. Si no es posible colorearla el mismo día, la lámina será colocada en una caja pequeña de “tecnopor” para ser coloreada al día
siguiente.
7.1.8. La coloración de la muestra se realizará de dos maneras, según el nivel del laboratorio: a) Cubrir toda la muestra con el colorante Giemsa durante 20 minutos; b) La lámina debe ser introducida en un Koplin conteniendo el colo-
rante Giemsa que cubrirá toda la muestra durante 20 minutos.
7.1.9. Transcurrido el tiempo se debe lavar la lámina coloreada, con la finali- dad de eliminar el exceso de colorante. Dejar secar al medio ambiente. 7.1.10. La muestra debe observarse primeramente a 10X, con la finalidad de observar el campo, después a 40X y finalmente a 100X, previamente se debe añadir aceite de inmersión.
7.1.11. Anotar todos los datos en la ficha respectiva adjunta.
7.1.12. Las pinzas y los cubreobjetos utilizados deben ser colocados en el envase que contenga lejía al 5%, en caso contrario pasados por el fuego del mechero.
7.1.13. Todos los triatominos donde se han observado trypanosomatideos deben ser depositados en un envase para posteriormente ser incinerados; mientras que los negativos, si permanecen en buenas condiciones, dejar- los en el insectario para posteriormente ser revisados por segunda vez. Y si continúan siendo negativos, se les da muerte colocando todos los ejem- plares en un envase de vidrio de boca ancha y dejando caer algodón embe- bido con cloroformo.
7.2 EXAMEN DE TRIATOMINOS PARA INVESTIGARTRYPANOSOMA CRUZI O