MATERIALES Y MÉTODOS
3.5.2.2 Niveles de lluvia artificial
Tratamientos
Los 8 grupos se mantuvieron a diferentes asignaciones de forraje durante el período previo a la encarnerada, en interacción con distintos niveles de lluvia artificial durante el período de encarnerada y primer tercio de gestación.
3.5.2.1 Asignación de forraje previo a la encarnerada
El período de sobrealimentación previo a la encarnerada fue de 24 días y se extendió desde el 4/4/05 hasta el 30/4/05, separando los grupos en dos niveles de oferta de forraje, 2 y 4 kg MS/100 kg peso vivo por animal por día (2 y 4%). Para ello los animales rotaron en un total de 14 subdivisiones de 0,27 has cada una.
A los animales se les suministró agua de bebida mediante bebederos ubicados en cada parcela.
3.5.2.2 Niveles de lluvia artificial
Se diferenciaron 4 tratamientos según nivel de lluvia artificial, con dos grupos de asignación de forraje cada uno. Estos se efectuaron desde el 4/5 al 28/7, siendo los niveles de lluvia artificial de 200, 100, 50 y 0 mm.
La lluvia artificial se realizó mediante dos aspersores, colocados dentro de un brete a una altura de 2 metros, de forma tal de hacer un mojado homogéneo de toda el área. Se utilizó una bomba eléctrica de 0.25 hp. Para registrar el nivel de precipitaciones se utilizó un pluviómetro colocado en el centro del brete.
Grupo Asign. (%PV) 04-May 25-May 29-Jun 28-Jul Acumulado 1 2 50 50 2 2 50 50 50 50 200 3 2 50 50 100 4 2 0 5 4 50 50 50 50 200 6 4 50 50 100 7 4 0 8 4 50 50 Lluvia artificial (mm)
Figura 2. Lluvia artificial
Sincronización e Inseminación
La mitad de las ovejas de cada grupo, tomadas al azar, fueron sincronizadas mediante la colocación de esponjas intravaginales de progestágenos (acetato de Medroxiprogesterona) el 14/4/05. Las mismas fueron retiradas el 29/4/05 (15 días luego de ser colocadas), realizándose la inseminación artificial 50 horas después.
La inseminación se realizó mediante el método cervical, utilizándose semen fresco, a razón de entre 50 y 60 millones de espermatozoides por oveja. Las ovejas inseminadas se repasaron con carneros al 3%.
Los animales no inseminados artificialmente se encarneraron a la salida del flushing utilizando carneros de la misma raza al 3 %, durante 40 días (desde el 30/4/05 al 10/6/05).
Las ovejas permanecieron sobre campo natural desde el inicio de la encarnerada hasta el fin del experimento a una dotación de 4 ovejas/há.
Medición de la tasa ovulatoria
Al inicio de encarnerada se estimó la tasa ovulatoria mediante observación de los ovarios, utilizando laparoscopía, a 57 ovejas (correspondiendo 26 y 31 al grupo de 2 y 4 % de asignación respectivamente).
Medición de la tasa de fertilización
La tasa de fertilización se estimó mediante flushing o lavado de ovocitos desde el cuerno uterino al oviducto, utilizando laparotomía. Este tratamiento se realizó en los últimos días de la encarnerada (1/6/05), a un total de 11 ovejas tomadas al azar, de ambos grupos de asignación de forraje.
Medición de las pérdidas embrionarias y fetales
A partir de los 20 días de finalizada la encarnerada se realizó mensualmente seguimiento de preñez mediante ecografía de tipo B o ecotomografía, trans-rectal (sonda de 7,5 Mhz) y transcutánea (sonda de 5,0 Mhz) (figura 3). Se registró presencia, número y tamaño de embriones o fetos, así como presencia de vestigios de abortos y embriones o fetos muertos y/o momificados. La segunda y tercer ecografía se realizó a los 50 y 100 días post encarnerada respectivamente (27/7/05 y 1/9/05).
Figura 3. Realización de ecografías
Días antes del flushing, a cada animal se le extrajo sangre por punción de vena yugular (5 a 8 ml). Esta operación se repitió al finalizar la encarnerada, con aquellas ovejas que no presentaban infección de toxoplasmosis, reiterándose el mismo procedimiento a los 45 días.
La sangre fue centrifugada durante 20 a 25 minutos a 2000 rpm. Luego, se extrajo de cada muestra con micro pipeta 1 ml de suero, el cual fue mantenido a -20º C hasta el momento de los análisis correspondientes.
Se realizó análisis para detección de anticuerpos específicos anti-T.gondii utilizando un kit comercial de aglutinación de partículas de látex (Barbieri et al., 1993).
Registro de peso y condición corporal
Se registró peso y condición corporal mensualmente a todos los animales.
Manejo sanitario
Se realizó un seguimiento del estado sanitario de la majada mediante análisis coprológicos cada 30 días para detectar el nivel de parásitos internos. Mediante la aplicación de las drogas correspondientes se mantuvieron los niveles por debajo de los críticos, con el fin de evitar toda interacción del factor sanitario sobre el resultado del experimento.
Para una mejor comprensión del conjunto de actividades que se realizaron en el presente experimento, se presenta en la figura 4, un resumen de las mismas ordenadas cronológicamente.
Figura 4. Principales actividades realizadas
3.6 ANÁLISIS ESTADÍSTICO
Variación de condición corporal y peso vivo
El efecto de la asignación y los tratamientos de lluvia sobre la variación de peso y condición se analizó ajustando un modelo lineal de la forma:
Yijk= µ + Ai + Lj + (A * L)ij + εijk Donde :
Yijk es la variación de peso o la variación de condición Ai = efecto de la asignación de forraje
Lj = efecto de la lluvia artificial
(A * L)ij = efecto de la interacción entre la asignación y el nivel de lluvia artificial εijk es el error experimental (variabilidad entre animales)
LLUVIA ARTIFICIAL LLUVIA ARTIFICIAL LLUVIA ARTIFICIAL LLUVIA ARTIFICIAL DIAGNÓSTICO DE PREÑEZ DIAGNÓSTICO DE PREÑEZ DIAGNÓSTICO DE PREÑEZ 17/3 4/4 30/4 10/6 29/6 27/7 1/9 4/5 25/5 29/6 28/7 LAPAROSCOPÍA (Medición de Tasa Ovulatoria) LAPAROTOMÍA (Lavado de ovocitos) Flushing Encarnerada Extracción de sangre Inseminación artificial REFERENCIAS: LLUVIA ARTIFICIAL LLUVIA ARTIFICIAL LLUVIA ARTIFICIAL LLUVIA ARTIFICIAL DIAGNÓSTICO DE PREÑEZ DIAGNÓSTICO DE PREÑEZ DIAGNÓSTICO DE PREÑEZ 17/3 4/4 30/4 10/6 29/6 27/7 1/9 4/5 25/5 29/6 28/7 LAPAROSCOPÍA (Medición de Tasa Ovulatoria) LAPAROTOMÍA (Lavado de ovocitos) Flushing Encarnerada Extracción de sangre Inseminación artificial REFERENCIAS: Flushing Encarnerada Extracción de sangre Inseminación artificial REFERENCIAS:
Las medias de los efectos significativos se compararon usando la prueba de Tukey.
Tasa mellicera, pérdidas tempranas, pérdidas fetales, infección toxoplasmática, fertilidad
El efecto de los niveles de lluvia artificial y asignación al flushing sobre las pérdidas tempranas, pérdidas fetales, fertilidad, infección toxoplasmática y tasa mellicera, se analizó ajustando un modelo lineal generalizado con la siguiente forma:
Ln ( Pij* / 1 – Pij ) = µ + Ai + Lj + (A * L)ij Donde :
Pij = probabilidad de que una oveja experimente pérdida temprana = media general de los tratamientos
Ai = efecto de la asignación de forraje Lj = efecto de la lluvia artificial
(A * L)ij = efecto de la interacción entre la asignación y el nivel de lluvia artificial
Se asume que el número ovejas con determinada característica (ovejas preñadas, ovejas con toxoplasmosis, ovejas con pérdidas, ovejas con mellizos) en relación al número total de ovejas en cada grupo, tiene distribución binomial.
Las probabilidades de los efectos significativos se compararon usando contrastes simples.
Tasa ovulatoria y prolificidad
Ln (µij) = µ + Ai + Lj + (A*L)ij
Se asume que el número de óvulos o el número de corderos tiene distribución de Poisson.
Las medias de los efectos significativos se compararon usando contrastes simples. Para todos los análisis estadísticos se usó el software estadístico SAS versión 9.1 (SAS Institute, 2005).