Determinación de Proteína Cruda Responsable de la Práctica:
3.2 Proteína cruda ( AOAC, 968.06) método Dumas de combustión interna con el equipo Leco FP 528 Usando el manual de procedimientos FP-528 Protein / Nitrogen Determinator
Principio: el nitrógeno es liberado por pirolisis y subsiguiente combustión y acarreada por
CO2 al nitro metro. El CO2 es absorbido en KOH y el nitrógeno es medido y convertido a equivalente de proteína por un factor numérico de conversión.
4.- Propósito especifico de la practica.
El profesional en formación a través del conocimiento adquirido en la teoría del curso, sea capaz de realizar las técnicas para determinar nitrógeno y calcular la proteína bruta o cruda en los alimentos, comparar los resultados y la eficiencia del equipo Leco FP 528.
Criterios de desempeño:
• El profesional en formación será competente cuando sepa realizar e interpretar los resultados de los análisis.
Resultados esperados:
♦ Los profesionales en formación serán capaces de realizar la técnica e interpretar los resultados obtenidos.
♦ Identificara la limitante del análisis y su importancia para la evaluación de los ingredientes.
♦ Evaluación de los datos obtenidos comparados contra los de tablas y literatura
5).- Normas de seguridad especificas para la practica. a) cuadro de detección de riesgos.
Tipo de peligro Como evitarlo Como proceder en caso de un accidente.
Por el método kheldahl es más peligroso en virtud de que se realizan digestiones, destilaciones y titulación y se usan reactivos concentrados, y el grupo es numeroso pro lo que se requiere seguir los reglamentos de seguridad vigentes.
El profesor será el encargado de realizar en forma demostrativa una determinación.
Notificar en caso de cualquier incidente al profesor.
6. -Desarrollo de la práctica
la técnica de macrokhendal Procedimientos:
a) Pesar de 0.5 a 1 g de muestra, sobre un papel libre de nitrógeno de preferencia blanco, y colocarlo todo junto en el matraz Kjeldahl y en otro matráz colocar un papel sin muestra. Éste será nuestro blanco.
b) Agregar 25 mL de ácido sulfúrico concentrado.
c) Agregar el catalizador una pequeña cucharadita, junto con 5 piedras de ebullición. d) Colocar el matraz con su contenido en la parrilla del digestor, encender el extractor y
la parrilla.
e) Cuando la solución adquiera la coloración transparente, suspender el calentamiento y dejar enfriar por un período aproximado de 30 minutos. Manteniendo el extractor encendido para eliminar los gases.
f) Adicionar lentamente y por las paredes del matraz 250 mL de agua destilada antes de que el residuo digerido se solidifique y después déjelo enfriar a una temperatura inferior a 25 oC.
g) Por otro lado agregar 50 ml de H2SO4 de normalidad conocida a un matraz en el que recibiremos el destilado + 4 gotas de indicador de nitrógeno.
h) Al matráz “K” que está en condiciones del punto numero f, inclinarlo y adicionar lentamente por las paredes 100 mL de hidróxido de sodio al 45 % de tal manera que se formen 2 capas.
i) Conectar el matráz “K” al refrigerante del destilador, iniciar el calentamiento.
j) Destilar aproximadamente unas dos terceras partes del contenido del matráz kheldahl o hasta que se hayan recolectado 250 mL en el matraz Erlenmeyer.
k) Retirar el matraz Erlenmeyer antes de apagar la parrilla para evitar sifoneo, enjuagar con una piseta el extremo del tubo colector recibiendo el agua de lavado en el matráz Erlenmeyer.
l) Titular el destilado con hidróxido de sodio a normalidad conocida. Se anota el volumen gastado de hidróxido de sodio normalidad conocida.
Fórmulas
% N2 = (mL gastados en la titulación- mL gastados en el problema) * (N) * (Meq. N2)*(100) gr. de muestra=
% PC= % N2 x 6.25 Meq. N2= .014007
6.25= Factor de nitrógeno convencional para convertir el nitrógeno a proteínas de cualquier material excepto para: trigo y subproductos que su factor es 5.7. Para la leche y sus subproductos es 6.38
Método Dumas de combustión interna con el equipo Leco FP 528. Usando el manual de procedimientos FP-528 Protein / Nitrogen Determinator
Procedimiento.
1.- se verifica las condiciones de los gases, temperaturas en el ambiente de monitor.
2.-Se corrieron 6 blancos. Usando el menú análisis en el inciso insertar blancos, con el fin de eliminar ruido por el nitrógeno ambiental.
2.- se calibro con 5 estándares de EDTA marca LECO.
3.- se pesaron por triplicado 0.16 gr. de muestra en un papel de estaño, con la cual se hicieron paquetes tipo kiss, en el menú principal análisis con la tecla selec se introduce el peso de muestra, y factor de conversión, identificación de la muestra, y se introduce la muestra envuelta en estaño a loading heat se presiona la tecla next y star 2 veces. El tiempo de análisis es en promedio 2 minutos.
4.- para las repeticiones se siguen los pasos a partir del punto 3 por ultimo en el menú resultados se selecciona la opción estadística obtenemos el promedio y la desviación.
Programa de actividades.
♦ todos y cada uno deben tomar sus propias notas.
Dinámica utilizadas.
♦ En el laboratorio bajo la asesoría del profesor, realizara la determinación de nitrógeno (proteína cruda) cruda usando el equipo de combustión interna Dumas.
♦ El alumno portara el manual de practicas al momento de la practica, mismo que habrá leído previamente, el cual será firmada por el profesor como medida de que ya leyó y entendió la practica y verificativo de asistencia.
♦ Los resultados y notas de la práctica serán revisados en la siguiente sesión y se les estampará la firma del profesor y fecha, mismos que se anexarán al reporte de la práctica, en caso de no incluirlos la práctica no será válida.
Materiales y equipos utilizados. MacroKjeldahl.
Material:
Aparato de digestión y destilación MacroKjeldahl. 2 matraces Kjeldahl de 800 ml
2 Matraces Erlenmeyer de 500 mL. 2 Buretas de 50 mL.
Reactivos:
- Solución indicadora de nitrógeno.
- Solución valorada de ácido sulfúrico (0.1 N)
- Solución valorada de hidróxido de sodio a una normalidad conocida - Ácido sulfúrico concentrado grado reactivo
- Catalizador (selenio)
- Granalla de zinc o piedras de ebullición
- Muestra a analizar, la cual tendremos parcialmente seca y el resultado será reportado en BMS (base materia seca)
Método de combustión interna Dumas.
Helio cromatografico, bióxido de carbono, oxigeno. Estándar de calibración marca LECO.
7.-Sistema de evaluación
Los conocimientos y habilidades serán evaluados a través del reporte de práctica como se indicará, además se le cuestionará sobre los contenidos de su reporte. La practica se revisa y en 24 horas pasara por su practica y acatara las observaciones para mejorar la calidad de la misma. Las actitudes se evaluarán a través de la responsabilidad del alumno ante su práctica y su entorno. (anexo 1 y 2)
Método de asignación de calificaciones.
Asistir a laboratorio y cumplir con las actividades es obligatorio
para tener calificación en cada practica. 5 %
Lista de cotejo (Anexo 1) 5%
Entrega y calidad del reporte (Anexo 2) 5%
Presentación de un seminario 5%
Nota: la calificación y su ponderación serán de acuerdo a lo estipulado en el plan de estudios.
8.- Bibliografía recomendada
La bibliografía citada en su programa de estudios de la materia de bromatología. 9.- para saber más.
En que se basa el método de digestibilidad de las proteínas y en que caso se recomienda.
Que es el nitrógeno verdadero. Que es el nitrógeno no proteico.
10 - Glosario de términos.