OBJETIVOS GENERALES:
Identificar la morfología de los diversos parásitos que causan alteraciones intestinales en el organismo.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Reconocer los equipos, materiales, reactivos que se utilizan en el laboratorio de parasitología, y recordar los principios fundamentales de trabajo en el laboratorio.
Describir las características macroscópicas y microscópicas de las muestras de materia fecal utilizadas en el coprológico.
Visualizar e identificas estructuras parasitarias en el microscopio. MARCO TEORICO.
El diagnostico de las enfermedades parasitarias no siempre es posible hacerlo por medio de la clínica y aun cuando este sea posible, siempre es necesario comprobarlo por la demostración del agente etiológico o por la comprobación de las reacciones que puede presentar el organismo parasitado. Así pues los métodos de diagnostico parasicológico en el laboratorio se puede dividir en:
Métodos directos = permiten ver al parasito, o sus estructuras (quiste, huevos, larvas, trofozoito).
Métodos indirectos = se investigan las reacciones citológicas o humorales del organismo parasitado (presencia de anticuerpos, estados alérgicos, etc.) estos métodos tienen un valor diagnostico inferior al de los métodos directos.
Técnicas comunes para detectar parásitos intestinales.
Coprológico.
Coproscópico (sangre oculta-azucares reductores)
Técnicas de concentración
Ziehl neelsen modificado.
Método de Graham.
INTERPRETACION DEL COPROSCOPICO:
Este examen incluye, además de un examen coprológico corriente, las siguientes pruebas: leucocitos, pH y azúcares reductores.
El pH fecal puede ser útil para la determinación etiológica, pH ácidos indican EDA de tipo viral y pH alcalinos indican EDA invasivas.
El pH fecal está alterado en la intolerancia de los azúcares, porque la reducción de los azúcares por las bacterias en el colon produce ácido. Los micelios nos indican EDA producida por hongos (las levaduras no tienen importancia).
Los azucares reductores están representados principalmente por lactosa y glucosa. Se consideran como indicadores de infecciones virales, infecciosas o indeterminadas en los niños.
Interpretación: Reacción intensa cualitativa a la lactosa es compatible con diarrea bacteriana tóxica. A la glucosa, con diarrea viral. La deficiencia de discaridasa manifestada por no desdoblar la lactosa de la leche materna, da intensa reacción positiva a la lactosa. Los leucocitos están presentes en las heces en enfermedades intestinales inflamatorias, esto puede ser el resultado de una EDA bacteriana o parasitaria, es así que entre 10-20 leucocitos (principalmente polimorfonucleares) indican EDA bacterianas invasivas 24.
Preparación del material a observar.
La solución salina se usa para la investigación de todos los parásitos intestinales y de sus formas derivadas (trofozoito-huevos- larvas) y en ella podemos ver sus movimientos, y realizar su respectiva caracterización. Los huevos inmóviles se ven con su morfología específica que ayudan a reconocerlos, los quistes de los protozoarios se verán refringentes, incoloros y muchas veces no es posible determinar a qué especie pertenecen.
Con el lugol, los quistes de protozoarios y los huevos se colorean detallando sus estructuras, los núcleos, flagelos, membrana, etc.
Recolección.
Las muestras fecales deben recogerse durante las deposiciones en un recipiente limpio, seco, de boca ancha y tapa hermética que mantenga la humedad. En el caso del Coproscópico se debe evitar comer carnes rojas, tomates, remolachas debido a que pueden ocasionar interferencias en la lectura de sangre oculta. El uso de laxantes y antibióticos debe suspenderse
porque puede inhibir o bloquear momentáneamente la aparición de los parásitos.
EXAMEN FISICO.
En este examen se describen los siguientes aspectos:
Cantidad
Color
Consistencia
Cantidad = normalmente se excretan aproximadamente 100gr de materia fecal en 1 día. Este varía según el estado del aparato digestivo y la ingestión de alimentos.
Color = debido a la presencia de urobilina, los alimentos, medicamentos y patologías varían. Normalmente van de pardo claro a pardo oscuros, observándose a veces de color amarillo, negro, blanco, verdoso, etc. Se presentan variaciones de color por enfermedades como la hepatitis, TBC, gastritis erosivas.
Consistencia = Normalmente son blandas pero moldeadas, según la consistencia se clasifican en:
Liquidas o acuosas en diarreas
Blandas
Pastosas
Duras o formadas en estreñimiento
Mucoide.
Residuos alimenticios de origen animal.
Fibras musculares = tienen forma rectangular, color amarillo y estrías transversales y longitudinales. Con lugol toman color rojizo.
Grasas = gotas refringentes de diferentes tamaños amarillas o transparentes, con bordes netos de color negro y se tiñen con el lugol de amarillo claro.
Residuos alimenticios de origen vegetal.
Almidón = tienen forma irregular, en solución salina son transparentes y en el lugol se colorean, cuando están no digeridos toman un color violeta o negro y los parcialmente digeridos toman un color morado o rojo.
Células o fibras vegetales = en ocasiones se ven formando un retículo en forma de panal, las fibras, a veces, se presentan como estructuras alargadas de doble pared con un canal central marcado o en forma de espiral.
Pelos vegetales = se parecen a las larvas de algunos parásitos, pero un examen cuidadoso permite diferenciarlos con facilidad por su falta de movilidad: su pared es muy refringente y homogénea y además poseen un conducto central que recorre toda su longitud.
PRODUCTOS DE IRRITACION DE LA MUCOSA INTESTINAL.
Cuando se presentan patologías a nivel intestinal, de cualquier origen, puede observarse microscópicamente diferentes estructuras propias de la mucosa intestinal irritada, que son de gran ayuda para establecer el diagnostico de dichas patologías. Estas pueden ser:
Células epiteliales = indican irritación solo cuando se encuentran muy aumentadas en materia fecal.
Moco = cuando es abundante se aprecia a simple vista, debe confirmarse con otras estructuras como leucocitos, hematíes, etc.
Bacterias = constituyen el 30% del volumen de la materia fecal son de importancia cuando se encuentran aumentadas o disminuidas.
Hematíes = estructuras pequeñas, redondeadas, que solo aparecen en materia fecal cuando la lesión se halla en la parte baja del intestino, ya que se desintegran rápidamente.
Leucocitos = son de mayor tamaño que los eritrocitos, en ocasiones es posible observar su núcleo. Generalmente están asociados con moco y son de ayuda para diferenciar el tipo de diarrea.
Levaduras y micelios = normalmente se observan algunas levaduras en las muestras de materia fecal presentan forma ovalada cuando están aumentadas presentan importancia clínica.
Blastocystis hominis = presenta un corpúsculo interno homogéneo o finalmente granuloso y un citoplasma granular rodeado de una capsula delgada con núcleos alrededor de la periferia.
Protozoos = son organismos unicelulares en forma y tamaño variable, poseen diferentes organelos de locomoción, flagelos, cilios, y pseudópodos. Los protozoos existen en dos formas: la vegetativa o trofozoito que es la forma patógena y la quística o quiste que es la forma infectante. Los quistes son resistentes y sobreviven en el medio a condiciones adversas. Entamoeba histolytica.
Este protozoo presenta 4 estadios: trofozoito, prequiste, metaquiste, quiste, puede causar abscesos hepáticos.
Trofozoito = se observa en materias fecales frescas es la forma móvil de la amiba, tamaño de 20-60 micras. Ectoplasma y endoplasma claramente separados.
Ectoplasma = hialino, transparente, refringente. Endoplasma = granuloso
Pseudópodos = se originan en el ectoplasma, son delgados, digitiformes y rápidos, tienen movimiento unidireccional.
Fagocitan glóbulos rojos.
Quiste = es la forma mas frecuente utilizada para hacer el diagnostico de amibiasis, se observan mejor en lugol.
Forma = redondeada, bien delimitada por la membrana. Tamaño = 10-20 um
Núcleos = de 1-4
Entamoeba coli = mide de 15-50 micras, con pseudópodos gruesos, cortos, y emergen de manera lenta, fagocitan bacterias y otros materiales nunca glóbulos rojos.
Trofozoito = se observa en materia fecales frescas son muy lábiles a los agentes externos, es la única forma móvil de la ameba.
Quiste = es de forma redondeada, de 10-30 micras, de 1-8 núcleos. Endolimax nana.
Los trofozoitos son muy pequeños miden de 6-26 micras, fagocita bacterias y nunca glóbulos rojos, el núcleo no presenta cromatina periférica y el cariosoma es grande irregular y colocado excéntricamente en su interior. Tiene una forma oval y elipsoide presenta de 1-4 núcleos membrana poco aparente y tiene una coloración más pálida que las otras amebas.
Iodamoeba bustchlii.
Presenta dos estadios: trofozoito y quiste presenta una vacuola de glucógeno la cual se tiñe de oscuro y presenta sus contornos bien definidos mide de 10-20 micras.
Giardia lamblia = se asocia a cuadros diarreicos en niños y menos frecuente en adultos, el trofozoito tiene 8 flagelos y una ventosa centras con la que se fija a la mucosa.
Chilomastix mesnili = habitante normal del ciego, en donde los trofozoitos viven a expensas de bacterias entéricas y se multiplica por fisión binaria. MATERIALES
Lugol parasitológico
Solución salina fisiológica
Microscopios Laminas y laminillas Marcador vidrio Cajas de palillos Jabón liquido Gasas PROCEDIMIENTO
Cada estudiante debe realizar el informe completo del examen físico de la muestra suministrada.
Hacer las preparaciones en fresco de la materia fecal.
Observar al microscopio y diferenciar restos de origen animal y vegetal, flora bacteriana, presencia o ausencia de parásitos intestinales.
Consignar en el cuaderno de informes lo visto en la práctica, haciendo gráficos de lo observado.
CONSULTA
1) ¿A que se le llama Periodo de invasión parasitaria?
2) Examen de guayacol en heces explicar metodología e interpretación clínica.
3) Nombre las amebas que pueden producir disentería? 4) Explique cómo se realiza el test de Graham.