Para analizar la activación del mastocito se realizó la tinción de azul de toluidina, pues este colorante tiñe especificamente los gránulos de los mastocitos en un color púrpura. La tinción se realizó en cultivos de la línea celular MC/9 (Figura 40) y en MCs de cultivo primario (Figura 41). En las tinciones realizadas se pudo corroborar la presencia de los mastocitos al virar del azul del colorante al violeta rosáceo (púrpura) confirmando que entre los principales componentes del tejido que presentan metacromasia se encuentran la mucina, el cartílago y los gránulos de los mastocitos (Culling y Allison,1985) todos los estímulos mostraron la presencia de los mastocitos con gran presencia de gránulos,
. .
68 8. CONCLUSIONES
➢ Se logró expresar la proteína recombinante GST-NS3DEN de los cuatro serotipos en un vector procarionte.
➢ Se realizó la caracterización de los mastocitos de la línea celular MC/9 y los mastocitos del cultivo primario mediante la identificación de los marcadores CD117 y CD45 por citometría de flujo.
➢ Tanto los mastocitos de la línea celular MC/9 como los mastocitos del cultivo primario expresaron IFN-γ y TNF-α, citocinas características de la activación de esta célula y que podrían estar interviniendo en el establecimiento de las formas graves de la infección por el virus dengue.
➢ Se logró observar la producción de interleucinas pro inflamatorias IL-1β, IL-6, y TNF-α y de las quimiocinas CCL3, CCL4, CCL5 e IL-8 tanto en línea celular como en cultivo primario, cuya presencia apoya la teoría que los mastocitos tienen un papel importante en las complicaciones del dengue provocando la extravasación severa de plasma y el choque por dengue.
➢ Se logró observar la activación de los mastocitos de cultivo primario y de la línea MC/9 por medio de la tinción con azul de toluidina.
69
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