ya que es un poderoso antígeno, que cuando se realiza una transfusión sanguínea incompatible, ocasionará grandes problemas post- transfusionales; así también en incompatibilidad de sangre Rh (-) de la madre y el feto Rh (+), proceso conocido como eritroblastosis feta
III. DETERMINACIÓN DEL GRUPO SANGUÍNEO ABO Y FACTOR RHESUS GRUPO SANGUÍNEO ABO
Materiales
Suero Anti –A monoclonal o policlonal.
Suero anti - B monoclonal o policlonal.
Suero anti AB monoclonal o policlonal.
Lectin
Centrifuga
Gradilla de tubos
Reactivos de eritrocitos A1. By O en suspensión al 5% en Sol Salina
Fisiológica Tubos de 10 x 15 mm. Pipetas Pasteur Lámparas Lente de magnificación Procedimiento Fase celular
Colocar una gota de anti –A en un tubo de ensayo, rotulado y limpio. Colocar una gota de anti –B en un tubo de ensayo, rotulado y limpio. Colocar una gota de anti –AB en un tubo de ensayo, rotulado y limpio
Agregar a cada tubo un agota de suspensión al 5% (en solución salina) de los Eritrocitos o hematíes en evaluar.
Mezclar el contenido de los tubos y centrifugue por 15 segundos a 3400rpm. ó 1000 rpm por 1 minuto.
Re suspenda nuevamente los botones celulares y examinar si existe aglutinación, inclinar el tubo hasta la posición horizontal y leerlo contra un fondo bien iluminado.
Leer, interpretar y registrar los resultados según patrón. Tubo en mano. Patrón de lectura:
Una cruz: aglutinación homogénea.
Dos Cruces: grumos irregulares, sobrenadante transparente.
Nota: si es grupo A usar lecitina A1. Seguir el mismo procedimiento anterior. Interpretación
o Si hay aglutinación indica presencia del antígeno correspondiente al suero
utilizado
o Si no hay aglutinación indica la ausencia del antígeno correspondiente al suero
utilizado. Fase Sérica
En tres tubos rotulados como A, B y O agregar dos gotas de suero a cada tubo. Agregar una gota de hematíes conocidos de A al tubo marcado A.
Agregar una gota de hematíes conocidos de B al tubo marcado B. Agregar una gota de hematíes conocidos de O al tubo marcado O.
Mezclar suavemente el contenido de los tubos y centrifugar durante 15 s egundos a 3400 rpm. ó 1000 rpm por 1 minuto.
Resuspender suavemente los botones celulares y detectar la existencia de aglutinación, inclinándolo hasta la posición horizontal y leerlo contra un fondo bien il uminado.
Leer, interpretar e informar tubo en mano, según patrón. Interpretación
o Si hay aglutinación indica presencia del anticuerpo correspondiente a la
suspensión de hematíes utilizado.
o Si no hay aglutinación indica la ausencia del anticuerpo correspondiente a la
suspensión de hematíes utilizado. FACTOR RH
Materiales y equipos:
Suero anti –D.
Albumina (control Rh)
Tubos 10 x 75 mm.
Hematíes lavados al 5% en solución salina fisiológica.
Pipetas Pasteur. Procedimiento:
Colocar una gota de suero anti –D en un tubo de ensayo, limpio y rotulado. Colocar una gota de albumina (control Rh) en otro tubo de ensayo, limpio y rotulado.
Agregar a cada tubo una gota de la suspensión al 5% (en solución salina fisiológica) de los En trocitos a examinar.
Mezclar suavemente y certificar por 15 segundos 3400 rpm.
Desprender el botón de células del fondo del tubo agentándolo suavemente, inclinarlo hacia a posición horizontal y leerlo contra un fondo bien iluminado para apreciar la aglutinación.
Anotar inmediatamente, tubo en mano, los resultados de la aglutinación según patrón.
Informar en cruces de 0 a 4. Interpretación:
Si hay aglutinación indica presencia del antígeno D correspondiente a un RH positivo.
Si hay aglutinación indica ausencia del antígeno D correspondiente a un RH negativo, debe ser confirmado por el test del variante Du.
Nota: El control RH en todos los casos no debe aglutinar por ser un control serológico negativo.
DIAGNÓSTICO DE EMBARAZO
Las pruebas de embarazo detectan la presencia en orina de hormona de Gonadotrofina Corionica humana (GCH)producida por el tejido trofoblástico placentario durante la gestación o por tumores de origen trofoblástico en hombres y mujeres.
En la práctica diaria las pruebas que se utilizan mayormente se basan en la inhibición de la hemaglutinación o del látex. Comercialmente existen conjuntos de reactivos (Sed) del diversas marcas para realizar en tubos o en láminas, como la Gravindex. Pergnosticon. Planotest. Gamma. Fundamento. Se necesitan glóbulos rojos partículas de látex cubiertas con GCH (servirán de antígeno y un suero anti GCH) (Anticuerpos contra GCH).
Cuando la orina no contiene GCH al mezclarse con el suero GCH no sucede nada, pero al añadir los glóbulos rojos o las partículas de látex cubiertos con GCH sucede una reacción antígeno anticuerpo visualizándose una aglutinación
(Prueba negativa).
La orina contiene GCH al reaccionar con el suero anti GCH lo neutraliza. Pero no se visualiza y finalmente al agregar los glóbulos rojos o las partículas de látex no sucede ninguna reacción (prueba positiva).
Procedimiento en placa: Prueba de Latex
Seguir las indicaciones de cada fabricante para la obtención de buenos resultados. El procedimiento usual en lámina es como sigue:
1. La muestra de orina debe ser tomada como para examen de orina completa y de preferencias procesar antes de las 12 horas, en caso contrario refrigerarse hasta por 24 horas. 2. Con un dispensador descartable colocar una gota de orina en una lámina de fondo oscuro. 3. Añadir una gota de suero anti GCH, mezclar y luego oscilar la lámina circularmente por 30
segundos.
4. Añadir una gota de partículas de látex cubiertas con GCH, mezclar luego oscilar la lámina por 2 minutos y observar la presencia de aglutinación.
Resultados: Aglutinación: Negativo (no existe gestación) No Aglutinación: Positivo (gestación)
Test rápido de ELISA en Micropaca: Beta-Gonadotropina coriónica humana (Test Cualitativo). Antes de proceder con el análisis atemperar los reactivos, controles y muestras a 20- 27ºC.
1. Rotule la microplaca para cada suero de referencia, controles y muestras de cada pa ciente. Se recomienda utilizar tips nuevos para cada muestra, los cuales vienen dentro de la bolsa de alumnio almacenados a una temperatura de 2 a 8 ºC
2. Poner una gota con la micropipeta de 0.025 mL (25µL) del frasco de suero de referencia, control y de la muestra en la microplaca.
3. Luego añada dos gotas de la solución HCG-enzima a todos los ensayos
4. Gire con movimientos de rotación la microplaca por el espacio de 5 a 10 segundos y mezcle, e incube a temperatura de 20 a 27 ºC por 10 minutos.
5. Deseche el contenido de la microplaca por decantación o aspiración. Si utiliza la decantación deseche el residuo de la microplaca con papel absorbente.
6. Finalmente a los tips utilizados en los ensayos, lave de dos a tres ceces con agua fría.
7. Luego añada 2 gotas de la solución sustrato a todas las muestras. No mueva la placa despues de la adición del sustrato.
8. Incube a una temperatura de 20 –27 ºC por 5 minutos Interpretación
Si el color se evidencia de menos intensidad que el del calibrador B se considera negativo (< 25mIU/mL.)
Si el color se evidencia de mas intensidad que el del calibrador B s e consdera positivo
(≥25mIU/mL.)
CUESTIONARIO
¿Porque es importante el estudio de los grupos sanguineos ABO? Explique Refiérase sobre los efectos adversos de la transfusión sanguínea.
PRÁCTICA N° 12
I. OBJETIVOS
Conocer el fundamento, conceptos generales y manejo de las diferentes técnicas de análisis de muestras de orina que se manejan en el examen completo de orina..
Interpretar los resultados obtenidos de las muestras analizadas. III. INTRODUCCIÓN
Es un conjunto de exámenes realizados en una muestra de orina que nos permita obtener una información cualitativa, cuantitativa o semicuantitativa de los componentes de la orina.
OBTENCION DE MUESTRAS
Para las pruebas cualitativas ordinarias se puede emplear en muestra tomada en cualquier. El momento en que se obtiene una muestra de orina deben ser el adecuado al tipo de examen que se va realizar.
En lo posible se debe tener en cuenta ciertas recomendaciones para la obtención de la muestra de orina que va permitir obtener datos más precisos. La técnica recomendada para este tipo de
análisis es la llamada “chorro intermedio” que consiste en desechar el chorro inicial a fin de
eliminar la flora microbiana residente en la uretra y tomar el chorro intermedio en un frasco de vidrio de boca ancha, limpio, seco y estéril. La calidad del análisis depende en las condiciones que se toma, se almacena y se procesa la muestra, razón por la cual se debe tener en cuenta los siguientes aspectos:
a).- Hora de recolección. De preferencia la primera orina de la mañana, debido a que los diferentes elementos, que se encuentran en la orina estarán más concentrados.
b).- Evitar la contaminación. Indicando al paciente el lavado externo de los genitales con agua y jabón común, no es aconsejable el uso de antisépticos. El paciente de origen rural, y personas
que carecen de hábitos de higiene la contaminación externa de la orina es muy frecuente, lo que ocasiona cambios en cuanto al aspecto físico de la orina.
c).- Inicio del examen. La descomposición de la orina es especialmente rápida en ambientes cálidos. Es preferible el examen inmediato.
d).- Toma de datos del paciente. Datos que permitan identificar la muestra, además de otros que puedan ayudar a determinar la patología.
Los conservadores, en general son poco satisfactorios. Se emplean lo siguiente: Toluol.- 2 mL de toluol por 100 mL. de orina
Timol.- un pequeño fragmento flotante conserva la orina por varios días.
Formalina.- se emplea una gota por cada 30 ml. de orina. La formalina en concentraciones demasiadas altas precipita las proteínas. Es un agente fuerte y puede reducir el cobre o bismuto en las pruebas para glucosa.