Prevalencia de Staphylococcus coagulasa positivo resistentes a meticilina aislados de animales de compañía atendidos en cinco consultorios veterinarios de la provincia de Trujillo, Perú

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO ESCUELA DE POSGRADO. -U. NT. UNIDAD DE POSGRADO EN CIENCIAS BIOLÓGICAS. DO. Prevalencia de Staphylococcus coagulasa positivo resistentes a meticilina. RA. aislados de animales de compañía atendidos en cinco consultorios. PO SG. veterinarios de la provincia de Trujillo, Perú.. TESIS. DE. PARA OBTENER EL GRADO DE:. TE CA. MAESTRA EN CIENCIAS. CON MENCIÓN EN:. BL IO. MICROBIOLOGÍA CLÍNICA. BI. Autor:Br. Castro Haro, Glenda Melissa Asesor:. Dr. Muñoz Ganoza, Eduardo José TRUJILLO – PERÚ 2019 N° de Registro: …………... Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. JURADO DICTAMINADOR. NT. Dr. Heber Max Robles Castillo. DE. PO SG. RA. DO. -U. PRESIDENTE. SECRETARIO. BI. BL IO. TE CA. Ms. Aníbal Quintana Díaz. Dr. Eduardo José Muñoz Ganoza ASESOR. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. NT. A Dios por darme un corazón sensible con las mascotas que son el motivo de mi. -U. perseverancia para el desarrollo de la investigación en mi carrera como médico veterinario.. DO. A mis Padres que me acompañaron en toda esta etapa de mi vida y me dieron el soporte. BI. BL IO. TE CA. DE. PO SG. RA. para seguir adelante.. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTO. Con todo mi corazón a Dios por darme la fortaleza y permitirme avanzar a pesar de las adversidades. Agradecer a mis padres y hermanos por su paciencia y apoyo incondicional. Al Dr. Wilson Castillo Soto, que siempre está dispuesto a apoyar en temas educativos. A la Mg. Roxana Mendoza y al M.v. Christian Campos, por su tiempo y disposición durante la. NT. ejecución de mi tesis. A mi asesor Dr. Eduardo Muñoz Ganoza, por su apoyo y guía en todo. -U. el proceso del estudio. A los médicos veterinarios de Happy dog´s, Start Vet, Mi mascota,. DO. San Francisco y El Porvenir, que me permitieron los aislamientos microbiológicos de sus. RA. pacientes. Al jefe del laboratorio referencial, Percy Asmat que brindo sus instalaciones para. PO SG. continuar con la ejecución de la investigación. A Guillermo Cox y Jorge Del Rosario, por su apoyo en los procedimientos. A mi amigo y colega Roy Macedo Macedo. Gracias a todos. BI. BL IO. TE CA. DE. los que colaboraron y participaron en este proyecto.. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE. JURADO ............................................................................................................................... ii DEDICATORIA ................................................................................................................... iii. NT. AGRADECIMIENTO .......................................................................................................... iv. -U. ÍNDICE .................................................................................................................................. v. DO. RESUMEN ........................................................................................................................... vi. RA. ABSTRACT ........................................................................................................................ vii INTRODUCCIÓN ..................................................................................................... 1. II.. MATERIAL Y MÉTODOS ...................................................................................... 5. III.. RESULTADOS ....................................................................................................... 10. IV.. DISCUSIÓN ............................................................................................................ 16. V.. CONCLUSIONES ................................................................................................... 20. VI.. RECOMENDACIONES ......................................................................................... 21. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS .................................................................... 22. BL IO. TE CA. DE. PO SG. I.. BI. ANEXOS ............................................................................................................................. 28. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN La infección por Staphylococcus coagulasa positivo (SCoP) en el Perú representa el segundo y tercer puesto de los microorganismos más frecuentes. Donde se evidencia la resistencia antimicrobiana de S. aureus a diversos antibióticos, sin embargo, en medicina veterinaria no se conoce la cifra real y la importancia que tiene la transmisión de bacterias multiresistentes desde animales hacia la población humana. En la presente investigación se determinó la. NT. prevalencia y resistencia de SCoP en animales de compañía en el Distrito de Trujillo,. -U. Departamento de La Libertad, Perú, durante el periodo del año 2018. Se recolectaron 294. DO. muestras de animales de compañía (perro, gato y conejo), mediante hisopado oral y nasal,. RA. estos fueron cultivados en agar sangre, agar Bair-Parker y agar manitol salado; las colonias. PO SG. con características del género Staphylococcus se sometieron a tinción gram, prueba de catalasa y coagulasa. Las cepas SCoP fueron conservadas en agar nutritivo, las cuales se reactivaron en agar Brain Heart Infusion (BHI) para la realización de susceptibilidad. DE. antimicrobiana, mediante el método de Kirby-Bauer frente a 10 discos de antibiótico. Todas. TE CA. las cepas SCoP fueron sometidas a PCR para la detección del gen mecA. La prevalencia de SCoP fue de 9.18% (27/294) de origen canina. Se determinó SCoP resistentes a la meticilina. BI. BL IO. en el 22.22% (6/27), donde cepas con presencia del gen mecA fue solo del 7.41% (2/27).. PALABRAS CLAVE: Staphylococcus coagulasa positivo, Animales de compañía, resistente a la meticilina, gen mecA.. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT Coagulase positive Staphylococcus (SCoP) infection in Peru represents the second and third place of the most frequent microorganisms. Where the antimicrobial resistance of S. aureus to various antibiotics is evident, however, in veterinary medicine the real number and importance of the transmission of multiresistant bacteria from animals to the human population is not known. In the present investigation, the prevalence and resistance of SCoP. NT. in pet animals was determined in the District of Trujillo, Department of La Libertad, Peru,. -U. during the period of the year 2018. 294 samples of companion animals (dog, cats and rabbits). DO. are collected, by oral and nasal swabs, these were cultivated in blood agar, Bair-Parker agar. RA. and salted mannitol agar; colonies with characteristics of the genus Staphylococcus were. PO SG. subjected to gram stain, catalase and coagulase test. The SCoP strains were conserved in nutritive agar, which were reactivated in Brain Heart Infusion agar (BHI) for the realization of antimicrobial susceptibility, using the Kirby-Bauer method against 10 antibiotic discs. All. DE. SCoP strains were subjected to PCR for the detection of the mecA gene. The prevalence of. TE CA. SCoP was 9.18% (27/294) of canine origin. Resistant SCoP to methicillin was determined. BL IO. in 22.22% (6/27), where strains with presence of the mecA gene was only 7.41% (2/27).. BI. KEY WORD: Coagulase positive Staphylococcus, Pets, Methicillin resistance, mecA gene.. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. El primer reporte de Staphylococcus data desde 1880, cuando Alexander Ogston reportó sobre el aislamiento de S. aureus desde una infección de herida quirúrgica. A la vez Louis Pasteur produjo abscesos en animales inyectando con pus a partir de una infección por Staphylococcus en humanos. El término Staphylococcus fue acuñada en 1882 por Ogston, y. NT. en 1884 Rosenbach dividió el género en dos especies S. aureus y S. albus (Proctor, 2016).. -U. Esto se mantuvo hasta cuando se diferenció a S. epidermidis como una nueva especie, basada. DO. en la prueba de la coagulasa, lo cual se definiría en el año 1964 por pruebas serológicas. RA. (Cervantes, et al., 2014; Proctor, 2016).. PO SG. En 1975 Kloos y Sheffler crearon un esquema simplificado para la identificación de Staphylococcus que serviría como modelo estándar para los laboratorios de microbiología clínica. En 1999 se adoptó la definición de los estafilococos como cocos gram positivos que. DE. forman racimos y producen catalasa; la especiación se basó en la producción de pigmento,. TE CA. requisitos de crecimiento, actividad fermentativa y oxidativa sobre carbohidratos, susceptibilidad a la novobiocina, actividades enzimáticas como la nitrato reductasa, fosfatasa. BL IO. alcalina, arginina dihidrolasa, ornitina descarboxilasa, ureasa, citocromo oxidasa, coagulasa en plasma de conejo, nucleasa termostable, amidasas, oxidasas, factor de aglutinación y. BI. actividad hemolítica en agar sangre de oveja y bovino (Cervantes, et al., 2014; Proctor, 2016).Las bacterias del género Staphylococcus son microorganismos pertenecientes a la microbiota normal de las mucosas, piel de humanos y animales. Sin embargo, algunas especies son patógenos oportunistas que pueden causar serias enfermedades cutáneas en tejidos o cavidades. La transmisión de estas bacterias puede ser por contacto directo de piel con piel, por aerosoles de estornudos, tos y también a través de la saliva (Anticevic et al., 2010). 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Los estafilococos coagulasa positivos de mayor significancia clínica son: S. hyicus, S. schleiferi, S. aureus y S. pseudintermedius que fue reclasificado debido a ser una especie de difícil diferenciación de S. intermedius y S. delphini, dentro del llamado «grupo S. intermedius» (Sasaki, 2007; Ríos et al., 2015). La revisión de esta clasificación permitió asumir que la mayoría de los estafilococos aislados de caninos e identificados como S. intermedius son S. pseudintermedius el cual es un microorganismo comensal de piel y. NT. mucosas en los caninos, y entre las infecciones más frecuentes se describen las que produce. -U. en piel, oído, vías urinarias y hueso (Vigo, 2015). Los S. aureus se adaptan con facilidad a. DO. las condiciones cambiantes del medio, por lo que puede generar resistencia a los antibióticos. RA. utilizados para el tratamiento de infecciones estafilocócicas, desarrollando múltiples. PO SG. mecanismos de resistencia, junto a este problema posee factores de virulencia que le permiten aumentar su capacidad de producir infecciones graves tanto en pacientes hospitalizados como en la comunidad (Pahissa, 2009; Anticevic et al., 2010). El 17 de. DE. noviembre de 2011, bajo el concepto de “una sola salud”, se declara a la resistencia de. TE CA. bacterias a los antibióticos, junto con la rabia y la influenza de origen animal, como las tres principales amenazas mundiales emergentes (OIE, 2011).. BL IO. Las infecciones por Staphylococcus aureus meticilino resistente (MRSA) ocurre clásicamente en individuos con factores relacionados a los servicios de salud (cirugía previa,. BI. hospitalización, cateterismo endovenoso, usuario de diálisis, etc.), sin embargo desde la década de los 90 se empezaron a describir infecciones por MRSA en grupos de personas sin los factores clásicos, empezándose a reconocer como infecciones de MRSA adquiridos en la comunidad para diferenciarlo de aquellos adquiridos en el hospital (AH) (Coralith, 2011).. Las infecciones causadas por MRSA adquiridos en la comunidad (MRSA-AC) son emergentes en múltiples regiones del mundo incluyendo los países sudamericanos. En el Perú no se han reportado casos de infecciones por MRSA adquiridos en la 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. comunidad (Silva, 2005; Coralith, 2011), sin embargo existe un estudio realizado por el Campo de investigación comercial el cual evidencio que el 62.4% de los limeños poseen un animal de compañía en sus hogares, revelando una preferencia por los caninos presentes en los domicilios con un 80.1%, el gato con un 36.8%, loros con un 4.1% y por último los conejos con 2.8%, quienes podrían forman parte de la transmisión en la comunidad (CFSPH, 2006; CPI, 2016). En un estudio del Hospital Clínico Veterinario. NT. de la Universidad de Chile se obtuvo de un total de 6.316 registros clínicos de pacientes. -U. caninos, entre el período de Junio del 2000 y Julio del 2003, 598 registros (9,48%) donde. DO. las dermatosis bacterianas y micóticas fueron las más frecuentes (28,61% y 26,51%,. RA. respectivamente). Dentro de los diagnósticos específicos, las patologías más frecuentes. PO SG. fueron: dermatofitosis (26,5%), pioderma superficial (23,4%), demodicosis y dermatitis por alergia a la picadura de pulga (ambas con un 10,5%) (Silva, 2005).. DE. Se considera que los profesionales de medicina veterinaria son un grupo con alta incidencia de exposición a animales infectados por Staphylococcus spp., por ello se. TE CA. realizó un estudio a 171 personas del consultorio veterinario junto a sus respectivas mascotas (258 perros y 160 gatos), las 171 muestras de origen humano obtuvieron 6 S.. BL IO. aureus meticilino resistente (MRSA)(3,5%), 9 S. pseudintermedius meticilino resistente. BI. (MRSP)(5,3%) y 4 S. schleiferi meticilino resistente (MRSS)(2,3%) aislados, mientras que 418 muestras de origen animal obtuvieron 8 MRSA(1,9%) 21 MRSP(5%) y 2 aislados MRSS(0,5%). Se aislaron cepas concordantes (genéticamente idénticas por electroforesis en gel de campo pulsado) de humanos y sus respectivas mascotas en cuatro de 171 hogares (2,9%): MRSA de una persona / dos mascotas y MRSP de tres personas / tres mascotas (Morris, 2010).. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Así como se ha observado un aumento de la resistencia a la meticilina en S. aureus aislados de animales de compañía, lo mismo se observó con S.pseudintermedius, ya que se aisló con mayor frecuencia (50%) desde heridas quirúrgicas en perros y gatos (Sasaki, 2007; Sanz, 2009). Se ha demostrado que las personas y los animales de compañía pueden albergar. NT. cepas idénticas de estafilococos resistentes a la meticilina cuando comparten un medio. -U. ambiente (Duquette, 2004; Silva, 2005) y esto puede causar un gran riesgo para la salud pública, al exhibir altos patrones de resistencia y albergar genes codificantes de. RA. DO. resistencia a fármacos tan relevantes como el gen mecA (Galarce et al., 2016).. PO SG. En Perú en medicina humana, el aislamiento de Staphylococcus coagulasa negativo y S. aureus desde pacientes atendidos en los hospitales representan el segundo y tercer puesto de los microorganismos más frecuentes. Donde se evidencia la resistencia. DE. antimicrobiana de S. aureus a diversos antibióticos, siendo la penicilina el de mayor. (INS, 2012).. TE CA. resistencia con un 99%. Por ello el instituto nacional de salud se mantiene en vigilancia. BL IO. En medicina veterinaria, esta situación no es diferente pero tiene la desventaja de no ser vigilada, a pesar de formar parte de un factor importante en la transmisión bacteriana de. BI. procedencia animal hacia la población humana (Galarce et al., 2016). Por ello el presente estudio tuvo interés de investigar la prevalencia de Staphylococcus coagulasa positivo resistente a la meticilina en animales de compañía en el distrito de Trujillo, para evidenciar el riesgo de zoonosis, que crea un serio problema dentro de la salud pública y que requiere vigilancia por parte de las entidades encargadas.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II. MATERIALY MÉTODOS. 2.1. Población y muestra en estudio. Población: Estuvo constituida por todos los animales de compañía atendidos en cinco centros veterinarios privados de la provincia de Trujillo, ubicado en el Departamento de la Libertad, en latitud sur S8°6’57.56” y O79°1’47.93” de longitud oeste con 31. NT. metros sobre el nivel del mar (IIDM, 2002), en el periodo de febrero a diciembre del. -U. 2018.. DO. Tamaño de muestra: Estuvo constituida por 147 animales de compañía procedentes. RA. de cinco centros veterinarios privados de la provincia de Trujillo y que presentaron. febrero a diciembre del 2018.. TE CA. DE. Fórmula:. PO SG. autorización de sus propietarios para la realización del procedimiento en el periodo de. 𝐸2. BL IO. N =. 2 𝑍𝑎/2 xpxq. Dónde:. BI.  𝒁𝒂/𝟐 : 1.96 (Que es un coeficiente en la distribución normal para un nivel de confianza del 95 %)..  p: 22% (Se tomó como referencia el valor de la prevalencia de Staphylococcus coagulasa positivo en felinos de acuerdo a los estudios realizados por Patel y col., 1999).  q:1− p (1−0.22=0.78) E: error de estimación (0.05).. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Luego reemplazando: 𝑛 = (1.96) 2 0.22 (0.78). = 263.58. (0.05)2. 2.1.2. Criterios de selección. NT. Criterios de inclusión: Animales de compañía con autorización de sus dueños.. -. Animales de compañía con y sin enfermedad.. DO. -U. -. Animales de compañía con tratamiento antibiótico de menos de una. PO SG. -. RA. Criterios de exclusión:. semana.. Animales de compañía sin autorización de sus dueños.. 2.1.3. Instrumental. DE. -. TE CA. 2.1.3.1. Material biológico. Las muestras de mucosa oral y narinas de animales de compañía (perro, gato. BL IO. y conejo).. BI. 2.2. Métodos. 2.2.1. Recolección de muestras Las muestras fueron obtenidas desde tres grupos de animales: Felis catus o gatos (n=14), Canis familiaris o caninos (n=125), Oryctolagus cuniculus o conejos (n=8). Los animales de compañía fueron atendidos en las veterinarias: Happy Dog (Distrito de Trujillo), Start Vet (Distrito de Trujillo), San Francisco (Distrito de la Esperanza), El Porvenir (Distrito el Porvenir) y Mi mascota (Distrito de Laredo), durante el año. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2018. Los animales de compañía fueron muestreados en dos zonas corporales: mucosa bucal y narinas (Anexo 1), ya sean enfermos o sanos. Cada zona fue frotada vigorosamente por 10 segundos, con un hisopo estéril y posteriormente depositada en medio de transporte Cary Blair (Biomark) para los análisis microbiológicos. 2.2.2. Siembra y aislamiento de SCoP Todas las cepas fueron analizadas en el Laboratorio de Microbiología de la. NT. Universidad Nacional de Trujillo. A todas las muestras se le realizó tinción gram. -U. para la confirmación de cocos Gram positivos (Anexo 2). Luego fueron sembrados. DO. en placas de Agar sangre (5% de sangre humana), Manitol salado y agar Bair-Parker. RA. (Anexo 3), incubadas por 24 a 48 horas a 37 ºC. Las colonias obtenidas fueron. PO SG. analizadas en su morfología, color, presencia de hemólisis, fermentación del manitol, reducción del telurito a teluro, formación de halos de lipólisis y proteólisis. 2.2.3.. DE. Identificación. TE CA. La presencia de Staphylococcus spp. en las muestras seleccionadas fueron confirmadas mediante la prueba de catalasa, colocándose en un porta objeto una gota. BL IO. de peróxido de hidrógeno al 3% directamente sobre la colonia, evidenciándose una rápida efervescencia que indicó la producción de oxigeno molecular (Koneman,. BI. 2008). Posteriormente fueron cultivadas en agar nutritivo durante 18 a 24 horas para someterse a la prueba de la coagulasa en tubo, donde se colocó 0.5 ml de plasma de conejo (Bactident® Coagulase), disolviéndole suavemente 2 a 3 colonias puras, que fueron mezcladas e incubadas a 37°C por 4 horas (Anexo 4). Finalmente, se almacenó en depósitos de agar nutritivo inclinado (Anexo 5).. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.3. Determinación de los SCoP meticilino resistentes y su susceptibilidad antimicrobiana. Se realizó en el laboratorio referencial de salud pública de La Libertad, mediante el método de difusión en placa de Kirby-Bauer, de acuerdo al Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, 2017); los cultivos conservados en agar nutritivo fueron. NT. reactivados en BHI durante 4 horas a 35 °C para su posterior aislamiento. La. -U. preparación del inóculo que se sembró en agar Mueller Hinton se hizó mediante la turbidez del testigo correspondiente al 0,5 de la escala de Mc Farland, posteriormente. DO. se adicionó discos de antibióticos comerciales de: eritromicina (15 µg), clindamicina. RA. (2 µg), ampicilina (10 µg), amoxicilina/ac. clavulánico (30 µg), oxacilina (1 µg),. PO SG. cefoxitina (30 µg), cefadroxilo (30 µg), doxiciclina (30 µg), vancomicina (30 µg) y enrofloxacina (5 µg). También se utilizó la cepa ATCC 25923 (Anexo 6). Los cuales. DE. fueron incubados a 37°C durante 18 -24 horas. Finalmente se medió los halos de inhibición del antibiograma para ser interpretados mediante los rangos de referencia. TE CA. del CLSI (2017) (Anexo7).. BL IO. 2.2.4. Determinación del gen mecA en SCoP. BI. - Extracción de ADN bacteriano y reacción de polimerasa en cadena (PCR). El proceso de detección del gen mecA en los aislamientos se realizó mediante PCR convencional. La extracción de ADN bacteriano se realizó mediante lisis térmica, en un termociclador Mastercycler (Eppendorf), resuspendiendo una colonia bacteriana en 100 µl de Buffer TE. El tratamiento térmico se realizó a 100°C por 10 minutos. Para la PCR se empleó el kit comercial Master Mix 2X (Promega). Se prepararon reacciones de 25 µl, considerando una concentración de primers de 0.5 µM y 1 µl de. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. muestra.. Los. primers. empleados. AAAATCGATGGTAAAGGTTGGC-3,. fueron y. Forward: Reverse:. 55-. AGTTCTGCAGTACCGGATTTGC-3, los cuales permiten obtener un producto de 533 pb (Galarce et al., 2016). El protocolo de PCR fue 95°C por 3 minutos, seguidos de 30 ciclos de 95°C por 30 segundos, 56°C por 30 segundos y 72°C por 40 segundos, con una amplificación final a 72°C por 10 minutos (Anexo 8). Los productos de PCR. NT. fueron visualizados mediante electroforesis a 90 voltios por 40 minutos en gel de. -U. agarosa 1.5%, empleando 10 µl de sybrsafe DNA gel stain como revelador,. DO. utilizando el marcador de tamaño molecular Hyperladder ™ 250 bp (Bioline) (Anexo. RA. 9).. PO SG. 2.3. Tratamiento estadístico. Se utilizó tablas de resúmenes para hallar el valor de prevalencia de la resistencia de. DE. Staphylococcus coagulasa positivo, las cuales contaron con el apoyo del programa. BI. BL IO. TE CA. SPSS21.0.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III. RESULTADOS En la provincia de Trujillo las cepas de SCoP tuvieron una prevalencia de 9.18% (27/294), a diferencia de las cepas SCoN con 90.81% (267/294), donde se destaca el distrito de Laredo con el mayor número de casos (11) de animales de compañía portadores de SCoP (Tabla 1).. NT. Los animales de compañía con mayor prevalencia de SCoP en la provincia de Trujillo,. -U. periodo 2018 fue la especie canina con la presencia de 27 cepas (10.8%) a diferencia de la especie felina y conejo con 0% (Tabla 2). Así mismo en la Tabla 3 se observó la mayor. DO. presencia de SCoP en la zona anatómica de la boca con una prevalencia de 59.26% y 40.74%. PO SG. RA. en narinas.. Se determinó la susceptibilidad antimicrobiana mediante el método de difusión en placa de Kirby-Bauer de acuerdo al CLSI (2017), donde la prevalencia de SCoP resistente a. DE. la meticilina fue de 23.08%, con un predominio antimicrobiano de AMP-AMC-CEF-DOX-. TE CA. OXA-ERI-CLI-CEFO-VAN (Fig. 1).. Finalmente las cepas SCoP fueron sometidas a PCR para la detección del gen de. BL IO. resistencia a meticilina (mecA). Donde se encontró una prevalencia de 7.41%, en dos. BI. muestras de Canis familiaris (Fig.2).. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 1. Prevalencia de SCoP de animales de compañía en la provincia de Trujillo, periodo 2018.. SCoN. 4. 54. Start Vet (Trujillo). 5. 55. Mi Mascota (Laredo). 11. El Porvenir (El porvenir). 3. RA. 49. 18.52 40.74 11.11. 4. 54. 14.81. 27 (9.18%). 267 (90.81%). 100. PO SG. 55. San Francisco (La Esperanza). BI. BL IO. TE CA. DE. TOTAL. 14.81. DO. Happy Dog (Trujillo). Porcentaje (%). NT. SCoP. -U. Veterinarias por Distritos. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 2. Prevalencia de SCoP de animales de compañía según especie en la provincia de. Enfermos. 250. 148. 102. 28. 18. 16. 10. 10 6. 176. 118. 27. 10.8. 0. 0. 0. 0. 27. 10.8 %. BI. BL IO. TE CA. DE. 294. Porcentaje (%). NT. Sanos. Presencia de SCoP. DO. Canis familiaris (Perro) Felis catus (Gato) Oryctolagus cuniculus (Conejo) TOTAL. Condición. RA. N° muestras aisladas. PO SG. ESPECIE. -U. Trujillo, periodo 2018.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 3. Prevalencia de SCoP según zonas anatómicas en Canis familiaris, periodo 2018.. N° de cepas SCoP. Zonas anatómicas Boca 16. 11. -U. 27. DO. Canis familiaris (Perro). Narinas. NT. ESPECIE. 59.26%. 40.74%. BI. BL IO. TE CA. DE. PO SG. RA. PREVALENCIA. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 74.07%. 29.63% 29.63% 22.22%. 18.52%. 7.41%. 3.70%. AMC. CEF. DOX. OXA. ERI. CLI. CEFO. VAN. RA. AMP. DO. -U. 7.41%. NT. 33.33%. PO SG. Fig. 1. Prevalencia de SCoP resistentes a la meticilina.. Eri: Eritromicina; Cli: Clindamicina; Amp: Ampicilina; Amc: Amoxicilina/ác. Clavulánico;. BI. BL IO. TE CA. DE. Oxa: Oxacilina; Cefo: Cefoxitina; Cef: Cefadroxilo; Dox: Doxiciclina; Van: Vancomicina.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 7.41 %. Ausencia de gen mecA. RA. DO. Presencia de gen mecA. -U. NT. 92.59 %. BI. BL IO. TE CA. DE. PO SG. Fig. 2. Prevalencia del gen mecA en SCoP aislados de animales de compañía.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV. DISCUSIÓN. La prevalencia de SCoP en animales de compañía en la provincia de Trujillo fue de 9.18% (Tabla 1), considerando este valor bajo a comparación de lo obtenido por Galarce et al., 2016 en la universidad de Chile, con una prevalencia de 53.73% de SCoP en gatos dermatológicamente sanos y enfermos; pero es semejante al estudio realizado por Ortega y. NT. Simón, 2010 que obtuvieron una prevalencia de 16% de SCoP aislados desde piel de. -U. animales de compañía (perros y gatos) llegados al hospital Clínico Veterinario de la. DO. Universidad de Zaragosa, España. Estas variaciones pueden deberse principalmente a las. RA. zonas anatómicas muestreadas, ya que los estudios de mayor prevalencia realizados por otros autores, fueron aislados desde piel de animales de compañía a diferencia de este estudio que. PO SG. se aisló solo desde mucosa oral y nasal. Esta inferencia se refuerza con lo descrito por Bannoehr y Guardabassi (2012), quienes refieren que existen otras zonas anatómicas donde. DE. los SCoP habitan como huésped natural (boca 57% (42-74%), perineo-recto 52% (28-72%),. pseudintermedius.).. TE CA. nariz 31%(16-64%) e ingle 23% (16-38%) de caninos con la colonización de Staphylococcus. BL IO. Así mismo esto coincide con el porcentaje de cepas de SCoP encontrados en Canis familiaris en este estudio, con una prevalencia de 10.8% del total de caninos muestreados (27/250),. BI. hallándose en la boca un 59.26% y en narinas 40.74% (Tabla 2 y 3). Sin embargo Giacoboni et al., 2017 reportaron una prevalencia de 34% de SCoP aislados desde piel de caninos. Las zonas anatómicas de mayor prevalencia de SCoP puede deberse a los patrones de comportamiento y aseo de las mascotas, por el cual el estudio se vio limitado debido a la exploración solo de mucosa oral y nasal.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Los SCoP con resistencia a la meticilina en los animales de compañía tienen un impacto importante dentro de la salud pública, debido a la convivencia estrecha que mantienen con el ser humano, ya que típicamente causan infecciones de la piel, neumonía, endocarditis, osteomelitis y por sus toxinas pueden causar gastroenteritis, síndrome de la piel escaldad y síndrome de shock tóxico. Su característica de meticilino resistente les confiere una mayor patogenicidad, duración de la infección, compromiso sistémico y una elevada. NT. morbimortalidad (Moreno et al., 2018). Las infecciones más frecuentes causadas en. -U. mascotas por este microorganismo, son oportunistas y no causan enfermedad, a menos que. DO. haya un desequilibrio en la barrera cutánea por dermatitis, procedimientos médicos,. RA. quirúrgicos o factores ambientales (Anticevic et al, 2010 & Ríos et al, 2015).. PO SG. Los resultados del antibiograma se realizaron en base a los puntos de corte del CLSI, 2017 para la identificación de Staphylococcus resistentes a la meticilina, aislados de animales de. DE. compañía mediante el uso del disco de oxacilina, donde la prevalencia fue de 22.22% (Figura 1). Este resultado difiere de los estudios realizados por Giacoboni et al., 2016 que obtuvieron. TE CA. una prevalencia de 34% de Staphylococcus pseudintermedius resistentes a la meticilina en piodermias caninas y por Galarce et al., 2016 de 11% de SCoP resistentes a la meticilina en. BL IO. gatos. Estos valores pueden ser variables debido a los factores que contribuyen en la. BI. expresión fenotípica y genotípica de resistencia a la meticilina, como la utilización indiscriminada de antibióticos en nuestra localidad, que favorecen la evolución natural de resistencia de los Staphylococcus mediada por enzimas (penicilinas o betalactamasas) y modificación de las proteínas de unión a penicilinas (PBPs); así también a la transmisión horizontal de genes de resistencia intrínseca, codificada por el gen mecA, generando que estas bacterias constituyan un riesgo zoonótico. Algunos autores refieren que el uso del disco de oxacilina es determinante para la detección de resistencia fenotípica a la meticilina en el género Staphylococcus con la predicción de la 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. presencia del gen mecA (Ardanuy et al., 2011; Giacoboni et al., 2016). Por otro lado, en Brazil, Penna et al., 2014 demostraron lo contrario proponiendo un punto de corte de ≤ 30 mm en las pruebas de difusión en disco de cefoxitina (diferente al de humanos ≤ 24 mm), prediciendo la presencia del gen mecA en un 100% en Staphylococcus intermedius de caninos, sin embargo en el presente estudio se hizo uso de ambos discos antibióticos y se obtuvo que el disco de oxacilina fue mejor predictor de Staphylococcus resistentes a la. NT. meticilina con respecto al disco de cefoxitin en caninos, ya que se evidenció la resistencia. -U. fenotípica por lo menos en dos muestra con presencia del gen mecA, lo que no sucedió con. DO. el disco de cefoxitin, así se hubiesen interpretado los resultados con el punto de corte. RA. propuesta por Penna et al., 2014. El gen mecA estuvo presente en dos cepas bacterianas de. PO SG. un mismo animal (108B1 y 108B2), por lo que se puede interpretar que las cepas resistentes a la oxacilina sin presencia del gen mecA (92.59%) se caracterizan por tener una resistencia de bajo nivel o resistencia borderline, ya que se debe a la hiperproducción de betalactamasas. DE. o a la modificación de la proteína de unión a la penicilina denominada PBP2a. No obstan-. TE CA. te las cepas que expresaron resistencia a la oxacilina y presencia del gen mecA (7.41%) se categorizaron como cepas extremadamente heterorresistentes (Figura 2) (Ardanuy, et al.,. BL IO. 2011; Giacoboni, et al., 2016).. Así como coinciden diversas investigaciones en humanos con prevalencias elevadas de. BI. SCoP con resistencia heterogénea. Adamczyk et al., 2005 determinaron que el 100% de las cepas de Staphylococcus aureus presentaron resistencia heterogénea en pacientes internados mediante el método de Kirby Bauer y PCR en los hospitales Boliviano Holandes, Obrero y de Clínicas; por ello se podría deducir que estos genes de resistencia fueron transferidos de forma horizontal desde humanos a animales de compañía por intercambio de plásmidos, y a pesar de su baja prevalencia de SCoP con resistencia heterogénea encontrada en animales de compañía en nuestra localidad, estos cumplen un rol de portadores y diseminadores en la 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. comunidad, pudiendo causar así problemas en la salud pública, aumentando los niveles de. BI. BL IO. TE CA. DE. PO SG. RA. DO. -U. NT. prevalencia en el tiempo.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V.. CONCLUSIONES. - La prevalencia de Staphylococcus coagulasa positivo resistentes a la meticilina en animales de compañía fue de 22.22% en la provincia de Trujillo, 2018. - Todos los Staphylococcus que dieron positivo al test de la coagulasa fueron aislados desde. NT. la especie de Canis familiaris.. DO. familiaris fue de 10.8% en la provincia de Trujillo, 2018.. -U. - La prevalencia de Staphylococcus coagulasa positivo resistentes a la meticilina en Canis. RA. - El disco de oxacilina en animales de compañía fue mejor marcador que el disco de. PO SG. cefoxitin para la identificación de Staphylococcus resistentes a la meticilina. - La prevalencia de Staphylococcus coagulasa positivo resistentes a la meticilina con. BI. BL IO. TE CA. DE. presencia del gen mecA fue de 7.41% en la provincia de Trujillo, 2018.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI. RECOMENDACIONES. - Complementar estudios mediante la secuenciación de los productos amplificados para la determinación de especie de las cepas encontradas con presencia del gen mecA. - Realizar aislamientos en zonas distintas a la mucosa oral y nasal de los animales de. NT. compañía para determinar su prevalencia.. -U. - Realizar estudios complementarios para evaluar la tasa actual de zoonosis que existe en. BI. BL IO. TE CA. DE. PO SG. RA. DO. nuestra localidad.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. Adamczyk, L., Trigoso, C., Vasquez, A., Loretta, D. Homoresistencia. y. Heteroresistencia. (2005). Determinación de la de. Staphylococcus. aureus. metecilinoresistente aislado de muestras de pacientes internados en los Hospitales Boliviano Holandes, Hospital Obrero y Hospital de clínicas. Cuadernos de. Resistencia antimicrobiana de. DO. Anticevic, C., S., Jara O., M., Muñoz A., L. (2010).. -U. NT. Hospital de Clínicas, 25(2):7-11.. RA. Staphylococcus aislados de la piel de gatos. ¿un riesgo para la salud humana?.. PO SG. Avances en Ciencias Veterinarias, 25(1-2). Doi:10.5354/0719-5273.2012.18290.. Ardanuy, C., Cercenado, E., Morosini, M., Torres, C. (2011). Procedimientos en. DE. microbiología clínica. Detección fenotípica de mecanismos de resistencia en. TE CA. grampositivos. [fecha de acceso] 21 diciembre 2018. Disponible en:. BL IO. http://coesant-seimc.org/documents/DeteccionFenotipos_R-CGP.pdf.. Bannoehr, J., Guardabassi, L. (2012). Staphylococcus pseudintermedius in the dog:. BI. taxonomy, diagnostics, ecology, epidemiology and pathogenicity. Vet Dermatol. 23(4):253-66.. Center For Food Security & Public Health (CFSPH). (2006). Staphylococcus aureus resistente a la meticilina. [fecha de acceso] 30 junio 2018. Disponible en: http://www.cfsph.iastate.edu/Factsheets/es/mrsa-es.pdf.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Cervantes, E., García, R., Salazar, P. (2014). Características generales del Staphylococcus aureus. Revista latinoamericana Patología Clínica. 61(1):28-40.. Compañía peruana de estudio de mercado y opinión comercial (CPI). (2016). Resultados de encuesta de presencia de mascotas en el hogar [fecha de acceso] 15 junio 2017. Disponible. en:. http://www.cpi.pe/estudios-y-servicios/opinion-. -U. NT. publica/presencia-de-mascotas-en el hogar.html.. DO. Coralith, A. (2011). Staphylococcus aureus meticilino resistente adquirido en la comunidad.. RA. Acta Medica Peruana, 28(3), 159-162. [Fecha de acceso] 12 diciembre 2017. scielo.php?script=sci_arttext&pid=. S1728-. PO SG. http://www.scielo.org.pe/. 59172011000300007&lng=es&tlng=es.. DE. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). (2017). Performance Standards for. acceso]. TE CA. Antimicrobial Susceptibility Testing. 27th ed. Pennsylvania 19087 USA. [Fecha de 20. diciembre. 2017.. Disponible. en:. BL IO. http://www.facm.ucl.ac.be/intranet/CLSI/CLSI-2017-M100-S27.pdf. BI. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). (2017). Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing. 27th ed. Pennsylvania 19087 USA. [Fecha de acceso]. 20. diciembre. 2017.. Disponible. en:. http://www.facm.ucl.ac.be/intranet/CLSI/CLSI-2017-M100-S27.pdf.. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). (2018). Performance standards for antimicrobial disk and dilution susceptibility tests for bacteria isolated from. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. animals. 4.ed. Wayne, PA. (CLSI document VET08). [Fecha de acceso] 09 Febrero 2018. Disponible en: https://es.scribd.com/document/402966560/CLSIVET08.. Duquette, R. A. & Nuttall, T. J. (2004). Methicillin – resistant Staphylococcus aureus in dogs and cats: an emerging problem?. Journal of Small Animal Practice,. -U. NT. 45(12):591-597. Doi: 10.1111/j.1748-5827.2004.tb00180.x. DO. Galarce N., Muñoz L., Jara M., Lubí P., Sepúlveda A. & Anticevic S. (2016). Detección del. Chilena. Infectología,. 10182016000400005. 33(4):410-418.. Doi:. 10.4067/S0716-. PO SG. Revista. RA. gen mecA en cepas de Staphylococcus coagulasa positiva aisladas desde gatos.. pseudintermedius. resistentes. a. meticilina. y. a. otros. TE CA. Staphylococcus. DE. Giacoboni G., Vinocur F., Fauret N., Grandinetti J., Manzuc P. (2016). Detección de. antimicrobianos de uso habitual en la clínica en piodermias caninas. Revista. BI. BL IO. Analecta Vet, 37(2):19-24.. Gómez L., Atehortua C., Orozco S. (2007). La influencia de las mascotas en la vida humana. Revista Colombiana de ciencias pecuarias, 20:377-386.. Instituto Nacional de Salud (INS). (2012). Informe de la resistencia antimicrobiana en bacterias de origen hospitalario. p. 1-12.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Instituto de Investigación en Desastres y Medio ambiente (IIDM). (2002). Mapa de peligros de la ciudad de Trujillo y zonas aledañas. [fecha de acceso] 15 junio 2018. Disponible. en:. http://bvpad.indeci.gob.pe/doc/estudios_CS/Region_La_. Libertad/trujillo/trujillo_mp.pdf.. Koneman, E. (2008). Koneman.Diagnóstico microbiológico: texto y atlas en color. (6ª ed.). -U. NT. Buenos aires. Argentina: Médica Panamericana. 1696 p.. (2018).. DO. Moreno, M., Castillo, M., Ferrebuz, A., Osorio, W., Torres, M., López, D.. PO SG. humana. Redvet, 19(2):1-24.. RA. Resistencia bacteriana en pequeños animales, potencial riesgo para la salud. Morris, D. O., Boston, R. C., O’Shea, K. & Rankin, S. C. (2010). The prevalence of carriage. DE. of meticillin-resistant staphylococci by veterinary dermatology practice staff and. TE CA. their respective pets. Veterinary dermatology, 21:400-407. Doi:10.1111/j.1365-. BL IO. 3164.2010.00866.x. Oficina Internacional de Epizootias (OIE). (2011). El concepto “una sola salud”: enfoque de. BI. la OIE. Boletin 2013-1, 1-72. [Fecha de acceso] 24 julio 2017. Disponible en:http://www.oie.int/fileadmin/Home/esp/Publications_%26_Documentation/d ocs/pdf/bulletin/Bull_2013-1-ESP.pdf. Ortega, C. & Simón, M. (2010). Staphylococcus aureus resistentes a meticilina (MRSA) y a otros B-lactámicos en animales de compañía (perro y gato); aproximación a la situación actual y al riesgo para la salud pública. Vet. Arg. – 17(269)Pahissa, A.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. (2009). Infecciones producidas por Staphylococcus aureus. (1ª ed.) Barcelona. España: Médica Books. [fecha de acceso] 18 Agosto 2017. Disponible en: v2rZbLAhWBmR4KHbWTA5IQ6wEIGzAA#v=onepage&q=Resistencia%20de l%20Staphylococcus%20aureus&f=false.. -U. South-eastern England. Vet Dermatol 10:257-261.. NT. Patel, A., Lloyd, D., Lamport, A. (1999). Antimicrobial resistance of feline staphylococci in. DO. Penna, B., Rabello, R. & Lilembaum, W. (2014). Comparison of cefoxitin disk diffusion. RA. test and mecA gene PCR results for methicillin resistance detection in. PO SG. Staphylococcus intermedius group isolates from canine origin in Brazil. Revista Brazilian Journal of Microbiology. 45(1): 235-237.. DE. Proctor, R. (2016). Staphylococcus genetics and physiology. History of Staphylococcus. TE CA. aureus. (1ª ed.) Nebraska – Lincoln, UK: Caister Academic Press. 1-22 p.. BL IO. Ríos, A., Baquero, M., Ortiz, G., Ayllón, T., Smit, L., Rodriguez-Dominguez, M., SanchezDíaz, A.. (2015).. Staphylococcus multiresistentes a los antibióticos y su. BI. importancia en medicina veterinaria. Clinica Veterinaria de Pequeños Animales. 35(3):149-161.. Sasaki, T., K. K. (2007). Reclassification of phenotypically identified Staphylococcus. J Clin Microbiol, 45.Sanz L, Junco C. (2009). Infecciones bacterianas de las heridas operatorias-Identification of the etiology of bacterial infections of surgical wounds. Hospitales Veterinarios, 1(1):23-34.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Silva M., V. P. (2005). “Estudio descriptivo, retrospectivo de registros dermatológicos caninos.” [Tesis para optar el título de Médico Veterinario] Universidad de Chile, Facultad de ciencias veterinarias y pecuarias.. Vega H. B., Viviana F. P., Siever M. C., Sonia C. E., & Carlos P. C. (2014). Determinación. NT. de la susceptibilidad antibiótica in vitro de bacterias subgingivales en caninos con. -U. enfermedad periodontal moderada a severa. Revista de Investigaciones. DO. Veterinarias del Perú, 25(1):77-87.. RA. Vigo, G., Giacoboni, I., S.Gagetti, G. Pasteran, F., & C. Corso, A. (2015). Resistencia. PO SG. antimicrobiana y epidemiología molecular de aislamientos de Staphylococcus pseudintermedius de muestras clínicas de caninos. Revista Argentina de. BI. BL IO. TE CA. DE. Mcrobiologia, 27(3):206-223.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXOS. PO SG. RA. DO. -U. NT. Anexo 1. Aislamiento de microorganismos. BI. BL IO. TE CA. DE. Figura 3. Aislamiento de microorganismos desde mucosa oral de Canis familiaris.. Figura 4. Aislamiento de microorganismos desde narinas de Canis familiaris. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TE CA. DE. PO SG. RA. DO. -U. NT. Anexo 2. Presencia de cocos Gram positivos.. BI. BL IO. Figura 5. Frotis de crecimiento bacteriano en forma de cocos (40x). Tinción Gram.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 3. Crecimiento de Staphylococcus en agar sangre y manitol salado.. RA. DO. -U. NT. Manitol salado. Agar Sangre. PO SG. Figura 6. Medio manitol salado- Los Staphylococcus que fermentan el manitol se observan como colonias amarillas, rodeadas del mismo color y los que no fermentan el manitol se. DE. visualizan como colonias rojas, rodeadas del mismo color. Medio Agar sangre- Las colonias. TE CA. alfa hemolisis, dan un color verdoso del medio sólido, las colonias beta hemolisis, lisan los. BI. BL IO. eritrocitos que producen un aclaramiento del medio que rodean las colonias.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TE CA. DE. PO SG. RA. DO. -U. NT. Anexo 4. Prueba de coagulasa en tubo.. Figura 7. Staphylococcus sp. suspendidos en plasma de conejo. La coagulasa de la bacteria. BI. coágulo.. BL IO. se une a un factor sérico y el complejo convierte el fibrinógeno en fibrina, dando lugar a un. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DO. -U. NT. Anexo 5. Conservación de las cepas en agar nutritivo.. BI. BL IO. TE CA. DE. PO SG. RA. Figura 8. Conservación en agar nutritivo de Staphylococcus coagulasa positivo.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DE. PO SG. RA. DO. -U. NT. Anexo 6. Método de Difusión en disco (Kirby-Bauer). BI. BL IO. TE CA. Figura 9. Medición de halos de inhibición de Staphylococcus coagulasa positivo.. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 7. Resultados del antibiograma (mm) Cli. Amp. Amc. Oxa. Cefo. Cef. Dox. Van. Enr. 36(S) 46(S) 28(S) 34(S) 48(S) 40(S) 6(R) 44(S) 46(S) 8(R) 50(S) 7(R) 34(S) 36(S) 34(S) 7(R) 26(S) 28(S) 48(S) 10(R) 36(S) 35(S) 46(S) 48(S) 42(S) 36(S) 18(I) 7(R). 24(S) 42(S) 30(S) 30(S) 42(S) 48(S) 6(R) 40(S) 30(S) 19(I) 42(S) 7(R) 15(I) 24(S) 34(S) 19(I) 30(S) 26(S) 36(S) 25(S) 32(S) 24(S) 40(S) 42(S) 36(S) 34(S) 24(S) 7(R). 26(R) 26(R) 35(S) 20(R) 24(R) 27(R) 17(R) 26(R) 46(S) 20(R) 24(R) 19(R) 48(S) 26(R) 32(S) 20(R) 20(R) 32(S) 26(R) 17(R) 14(R) 21(R) 42(S) 22(R) 9(R) 17(R) 30(S) 7(R). 20(R) 36(S) 40(S) 30(S) 30(S) 24(R) 28(R) 32(S) 56(S) 30(S) 32(S) 14(R) 44(S) 20(R) 40(S) 27(R) 30(S) 38(S) 32(S) 6(R) 19(R) 31(S) 50(S) 30(S) 30(S) 22(R) 36(S) 9(R). 14(R) 28(S) 22(S) 19(S) 28(S) 24(S) 20(S) 14(R) 25(S) 24(S) 24(S) 16(R) 24(S) 14(R) 18(S) 23(S) 15(R) 15(R) 30(S) 20(S) 18(S) 20(S) 24(S) 24(S) 22(S) 23(S) 23(S) 7 (R). 30(S) 42(S) 30(S) 38(S) 46(S) 46(S) 40(S) 42(S) 46(S) 36(S) 46(S) 40(S) 32(S) 30(S) 48(S) 42(S) 23(R) 30(S) 46(S) 28(S) 30(S) 42(S) 44(S) 44(S) 40(S) 28(S) 21(R) 7(R). 32(S) 36(S) 31(S) 38(S) 48(S) 40(S) 18(R) 22(R) 48(S) 32(S) 34(S) 7(R) 34(S) 32(S) 40(S) 10(R) 30(S) 28(R) 36(S) 27(R) 26(R) 31(S) 36(S) 38(S) 9(R) 30(S) 31(S) 7(R). 26(S) 34(S) 22(I) 11(R) 15(R) 34(S) 40(S) 28(S) 13(R) 14(R) 14(R) 25(S) 24(I) 26(S) 30(S) 15(R) 26(S) 26(S) 34(S) 26(S) 24(I) 26(S) 22(I) 20(R) 18(R) 27(S) 22(I) 27(S). 22(S) 25(S) 18(S) 14(R) 24(S) 30(S) 24(S) 24(S) 36(S) 22(S) 25(S) 21(S) 19(S) 22(S) 28(S) 23(S) 23(S) 21(S) 36(S) 21(S) 19(S) 22(S) 24(S) 24(S) 24(S) 20(S) 22(S) 20(S). 36(S) 50(S) 35(S) 38(S) 46(S) 48(S) 22(I) 36(S) 48(S) 20(I) 42(S) 19(I) 38(S) 36(S) 44(S) 20(I) 42(S) 36(S) 44(S) 29(S) 34(S) 35(S) 36(S) 44(S) 36(S) 38(S) 36(S) 24(S). -U. DO. RA. PO SG. DE. TE CA. NT. Eri. BL IO. Código/ Antimicrobia no 28.1 10 67N 46B 7B2 1B 108B1 46B1 52B 11B 46B2 108B2 51N 90B 10N2 11N 27N 94N 17B 41N 77N 17N 10N1 18B 104N 28B 3 C+. BI. Eri: Eritromicina; Cli: Clindamicina; Amp: Ampicilina; Amc: Amoxicilina/ác. Clavulánico; Oxa: Oxacilina; Cefo: Cefoxitina; Cef: Cefadroxilo; Dox: Doxiciclina; Van: Vancomicina; Enr: Enrofloxacino; R: resistente; S: sensible; I: intermedio, de acuerdo a las normas del CLSI, M-100-S27 (CLSI, 2017) y VET08 (CLSI, 2018).. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DE. PO SG. RA. DO. -U. NT. Anexo 8. Termociclador Mastercycler (Eppendorf).. Figura 11. Colocación de tubos con contenido de muestras de ADN, Primers y Master Mix. BI. BL IO. TE CA. en el termociclador para el proceso de PCR.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 41N. 17B. 94N. 90B. -U. TE CA. DE. PO SG. RA. DO. CPM1. NT. 28B. 28.1 CE1. 108B2. 46B CPM2. 10. 67N CE2. 46B1 3. 1B. 11B 77N. 10N1. 7B2 27N. 52B. 51N 11N. 104N. 46B 18B. 17N. C+ 108B1. 10N2. MPM MPM. Anexo 9. Resultados de electroforesis.. BL IO. C+: Control positivo; CPM1: Control de peso molecular; CE1: Control de extracción 1; CE2: Control de extracción 2; CPM1: Control de PCR 1; CPM2: Control de PCR 2: MPM:. BI. Marcador de peso molecular.. Figura 12. Presencia del gen mecA en la muestra 108B1 y 108B2 de Staphylococcus coagulasa positivo, aislado desde mucosa oral.. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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