Efecto insecticida de diferentes concentraciones del extracto alcohólico de ocimum basilicum (lamiaceae) en aedes aegypti bajo condiciones de laboratorio

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. EM. AS. DE. IN FO. EFECTO INSECTICIDA DE DIFERENTES CONCENTRACIONES DEL EXTRACTO ALCOHÓLICO DE Ocimum basilicum (Lamiaceae) EN Aedes aegypti BAJO CONDICIONES DE LABORATORIO. CC. IO. N. DE. SI ST. TESIS PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO MICROBIÓLOGO BIÓLOGO. DI. RE. Autora: Br. . ANA MARÍA TORRES CORDERO. Asesora: Dra. JUDITH ENIT ROLDÁN RODRÍGUEZ TRUJILLO – PERU 2014. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC. AC IÓ. N. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. CO. M. Dr. Orlando Velásquez Benites. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. RECTOR. DE. Dra. Vilma Julia Méndez Gil. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. VICE – RECTORA ACADÉMICA. Dr. Santiago Uceda Duclos PROFESOR – SECRETARIO GENERAL. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC. AC IÓ. N. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. CO. M. Dr. José Mostacero León. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. DECANO. AS. DE. Dr. Willian Zelada Estraver. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. SECRETARIO. Dr. Bertha Soriano Bernilla. DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC. AC IÓ. N. MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR. CO. M. Dr. César Jara Campos. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. PRESIDENTE. AS. DE. Dra. Judith Enit Roldán Rodríguez. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. SECRETARIA. Ms.C. Jaime Agreda Gaitán VOCAL. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. La que suscribe, asesora de la tesis de “Efecto insecticida de diferentes. N. concentraciones del extracto alcohólico de Ocimum basilicum (Lamiaceae) en Aedes. CO. M. UN IC. AC IÓ. aegypti bajo condiciones de laboratorio”. A. Y. CERTIFICA:. IC. Que la presente investigación ha sido desarrollada de conformidad con su. RM. ÁT. correspondiente proyecto y teniendo en cuenta las orientaciones pertinentes al tesista.. IN FO. En cuanto al informe, éste ha sido redactando bajo mi asesoramiento de acuerdo al formato establecido en la Facultad de Ciencias Biológicas y ha acogido las. DE. observaciones y sugerencias alcanzadas.. AS. Por ello, autorizo a la bachiller Ana María Torres Cordero, continuar con. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. los trámites correspondientes según sus fines.. Dra.Judith Enit Roldán Rodríguez ASESORA. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran que la presente tesis ha cumplido con los requisitos formales y fundamentos teóricos, siendo. ÁT. IC. Dr. César Jara Campos. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. aprobada por. EM. AS. DE. IN FO. RM. PRESIDENTE. SECRETARIA. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. Dra. Judith Enit Roldán Rodríguez. Ms.C. Jaime Agreda Gaitán VOCAL vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. UN IC. AC IÓ. N. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. En cumplimiento con las disposiciones vigentes establecidas en el. M. Reglamento de Grados y Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, someto a. CO. vuestra consideración y elevado criterio la presente tesis titulada: Efecto insecticida de diferentes concentraciones del extracto alcohólico de Ocimum basilicum (Lamiaceae) en. A. Y. Aedes aegypti bajo condiciones de laboratorio”, con el propósito de obtener el Título. RM. ÁT. IC. Profesional de Biólogo-Microbiólogo.. IN FO. Esperando que el jurado se sirva a calificar este trabajo según su criterio. EM. AS. DE. establecido, y a que el presente sea merecedor de vuestra aprobación.. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. Trujillo, 24 de Julio del 2014. DI. Br. Ana María Torres Cordero. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. A mis padres por brindarme siempre su apoyo incondicional, gracias por su cariño, mi formación, mi educación, por ayudarme, por escucharme cuando los necesito, gracias.. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. A mi tía que es como mi segunda madre por también brindarme siempre su apoyo y confianza siempre. DI. RE. CC. IO. N. DE. Por ultimo gracias a ti Bobby porque fuiste mi mejor amigo y siempre estuviste a mi lado desde que fui una niña aunque este año tuviste que partir y fue muy dolorosa tu pérdida te agradezco porque estuviste siempre a mi lado siendo leal y fiel.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS. A la Dra. Judith Enit Roldán Rodríguez por brindarme su apoyo, dedicación,. Al Ms.C. Mayar Ganoza Yupanqui, profesor. AC IÓ. N. guía y orientación durante la ejecución y redacción del presente informe.. de la escuela de Farmacia y. UN IC. Bioquímica por su apoyo brindado en la realización de la preparación de los. CO. M. extractos alcohólicos de Ocimum basilicum.. A la facultad de Química de la Universidad Nacional de Trujillo, por permitirme. Y. trabajar en sus instalaciones para la realización de la preparación de los. ÁT. IC. A. extractos.. RM. Al departamento técnico de Microbiología y Parasitología por proporcionar la. IN FO. esterilización en los materiales de vidrio utilizados en el proyecto.. DE. Al Blgo- Mblgo. Richard Joel Morales Rodríguez por su asesoramiento en la ejecución del método CDC para determinar el efecto insecticida en adultos de. EM. AS. Aedes aegypti.. SI ST. A mis amigos Arturo Rodríguez, Christian Sipirán y Gisela Otiniano por el. DI. RE. CC. IO. N. DE. apoyo brindado durante la ejecución de este trabajo.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN Se evaluó el efecto insecticida de diferentes concentraciones del extracto alcohólico de Ocimum basilicum en Aedes aegypti, para ello se utilizaron dos poblaciones de zancudos una natural de Sullana y una cepa de referencia. AC IÓ. N. (Rockefeller). Para la determinación de actividad larvicida se utilizaron tres concentraciones de 1.5, 2.0 y 4.5% del extracto alcohólico de O. basilicum y un. UN IC. control de etanol al 1%; colocándose estas concentraciones en recipientes de 500mL luego se colocó las larvas III y IV de Ae. aegypti en los mismos. M. recipientes realizando cinco repeticiones: dos para los provenientes de Sullana y. CO. tres repeticiones para la cepa Rockefeller; la actividad adulticida fue. Y. determinada mediante el método de la botella propuesto por el CDC, para ello se. A. estableció un grupo control (etanol absoluto) y tres grupos experimentales de. ÁT. IC. 1ml de las concentraciones de 15%, 20% y 30% del extracto alcohólico de O.. RM. basilicum con 5 repeticiones: dos para los provenientes de Sullana y tres repeticiones para la cepa Rockefeller. Se observó una elevada mortalidad de las. IN FO. larvas de Ae. aegypti de Sullana y en las cepa Rockefeller encontrándose diferencia significativa para todas las concentraciones respecto al control y sin. DE. diferencia significativa entre las poblaciones, produciendo la concentración de. AS. 4.5% un 100% de mortalidad para ambas cepas en 60 minutos, con un CL50 de. EM. 2.9% para Sullana y CL50 de 3.158% para Rockefeller. Asimismo se observó. SI ST. una elevada mortalidad de los adultos encontrándose diferencia significativa para todas las concentraciones respecto al control y sin diferencia significativa un 100% de. DE. entre poblaciones, produciendo la concentración de 30%. mortalidad para ambas cepas en 40 minutos, observándose un CL50 de 24.260%. IO. N. para la cepa Sullana y un CL50 de 24.468% para la cepa Rockefeller. Por lo tanto. CC. se concluye que existe un efecto insecticida del extracto alcohólico de O.. DI. RE. basilicum en Ae. aegypti para larvas con una CL50 de 2.9% para la cepa Sullana y 3.158% para la cepa Rockefeller, y para adultos con un CL50 de 24.260% para la cepa Sullana y un CL50 de 24.468% para la cepa Rockefeller, no encontrándose diferencia significativa en mortalidades entre las poblaciones.. Palabras Claves: Aedes aegypti, insecticida, larvicida, adulticida, extracto alcohólico, Ocimum basilicum. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT The insecticidal effect of different Ocimum basilicum alcoholic extract concentrations was evaluated in Aedes aegypti, for this, two populations of mosquitoes from Sullana and Rockefeller strain was used. To determine de. AC IÓ. N. larvicidal effect three O. basilicum alcoholic extract concentrations of 1.5%, 2.0% and 4.5% and one ethanol 1% control was used. The concentrations and. UN IC. control placed in 500mL containers, then the III and IV instar Ae. aegypti larvae was put in the containers, performing five repetitions: two for Sullana and three. M. for Rockefeller strain; the adulticidal effect was determined through the CDC. CO. bottle method, for this, one control group (ethanol absolute) and three. Y. experimental groups of 15%, 20% and 30% O. basilicum alcoholic extract. A. concentrations was established with five repetitions: two for Sullana and three. ÁT. IC. for Rockefeller strain. A high mortality in Ae. aegypti from Sullana and. RM. Rockefeller strain larvae was observed, finding a significant difference for all concentrations in relation to control and without significant difference between. IN FO. poblations, producing the 4.5% concentration 100% mortality in 60 minutes for both strains, with a LC50 of 2.9% for Sullana and LC50 of 3.158% for. DE. Rockefeller. A high mortality in adults also was observed, finding a significant. AS. difference for all concentrations in relation to control and without significant. EM. difference between poblations, producing the 30% concentration 100% mortality. SI ST. in 40 minutes finding the LC50 of 24.260% for Sullana and LC50 of 24.468% for Rockefeller. Therefore there is an insecticidal effect of O. basilicum alcoholic. DE. extract in Ae. Aegypti with a LC50 of 2.9% for Sullana and LC50 of 3.158% for Rockefeller larvae and LC50 of 24.260% for Sullana and LC50 of 24.468% for. IO. N. Rockefeller adults not finding a significant difference between poblations was. DI. RE. CC. concluded.. Keywords: Aedes aegypti, insecticidal, larvicidal, adulticidal, alcoholic extract, Ocimum basilicum.. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INDICE Autoridades de la Universidad Nacional de Trujillo……………………...……..ii Autoridades de la Facultad de Ciencias Biológicas…………………………….iii. N. Miembros del Jurado Dictaminador……………………………………….……iv. AC IÓ. Del asesor………………………………………………………………….……v. UN IC. Aprobación……………………………………………………………………..vi Presentación……………………………………………………………...…….vii. CO. M. Dedicatoria…………………………………………………………………….viii. Y. Agradecimientos…………………………………………..……………...……..ix. IC. A. Resumen…………………………………………………..….………………….x. ÁT. Abstract…………………………………………………...……..………………xi. RM. Introducción…………………………………………………………………..….1. IN FO. Materiales y Métodos……………………………….……………..…….………5. DE. 1. Material………………………………………….………..……….……….…….5. Procedimiento………………………………………………..…...……….……..5. EM. 2.. AS. 1.1. Material biológico…………………………….……..………………..….….5. Recolección e identificación de las hojas de O.basilicum……….5. DE. 2.1.1.. SI ST. 2.1. Obtención del extracto alcohólico de Ocimum basilicum………..……..…..5. Extracción del extracto etanólico de O. basilicum……………….6. N. 2.1.2.. DI. RE. CC. IO. 2.2. Determinación del efecto larvicida………………………………………….6 2.2.1.. Preparación de las concentraciones…………………………….….6. 2.2.2.. Bioensayo……………………………………………………...…..6. 2.2.3.. Determinación de la mortalidad…………………………...………7. 2.3. Determinación del efecto insecticida………………………………………..7 2.3.1.. Preparación de las concentraciones………………………….…….7. 2.3.2. Bioensayo…………………………………………………………...7 xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.3.3.. Determinación de la mortalidad………………………………..….8. 2.4. Análisis de datos y análisis de los CL50 y CL90…………………………….8 Resultados……………………………………………..………………………..9. AC IÓ. N. Discusión…………………………………………………………………..…..20 Conclusiones…………………………………………………………….…….25. UN IC. Referencias bibliográficas…………………………………………...………..26. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. Anexos…………………………………………………………………..…..…36. xiii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) es importante en la salud pública por ser el vector de los agentes etiológicos de arbovirosis como dengue y la fiebre amarilla urbana. El dengue es una enfermedad distribuida en 100 países endémicos y es estimado que. AC IÓ. N. alrededor de 2.5 billones de personas se encuentran en riesgo de infección1.. Ae. aegypti fue introducido en América por medio del transporte de especímenes:. UN IC. adultos, huevos, larvas o pupas en barcos, aviones y transportes terrestres. Sus hábitos son antropofílicos y domésticos, con ubicación de sus criaderos en la vivienda o sus. M. alrededores2. En Perú, fue detectado desde el año 1852 y en el 2012, la Dirección. CO. General de Epidemiologia del Perú informó que se encuentra distribuído en 17 de los. A. Y. 24 departamentos del Perú3.. IC. La hembra de Ae. Aegypti puede poner entre 300 y 450 huevos en su vida,. ÁT. aproximadamente 25-100 en cada ovipostura4, los huevos son puestos individualmente. RM. en recipientes artificiales y naturales que contienen agua5, los huevos presentan una. IN FO. forma ovoide y tienen la superficie de aspecto reticulada, miden menos de un milímetro, son de color blanco al ser depositados y a las dos horas oscurecen eclosionando a las. DE. 12-14 horas aproximadamente bajo condiciones favorables de humedad y temperatura; pueden resistir a la sequía y sobrevivir varios meses hasta más de un año5 se conservan. AS. viables fuera del agua y son resistentes a la desecación por varios meses6. Las larvas. EM. pasan por cuatro estados larvales y crecen de 1 a 6 mm. Su desarrollo se completa en. SI ST. condiciones favorables de nutrición y temperatura óptima entre 25 a 29ºC, en cinco a siete días, siendo incapaces de resistir temperaturas inferiores a 10ºC y superiores a. DE. 42ºC7.Las pupas no se alimentan y completan su desarrollo entre uno a tres días a una. N. temperatura entre 30°C. El ciclo completo es de huevo a adulto, se completa en óptimas. CC. IO. condiciones de temperatura y alimentación, en 10 días aproximadamente8.. RE. Las hembras hematófagas de Ae. aegypti poseen hábitos de alimentación diurnos, con. DI. gran afinidad a la alimentación sobre el hombre, no se aleja mucho de sus criaderos9,. algunas observaciones aseguran que pueden alejarse unos 200 o 300 metros y algunos creen que hasta un kilómetro o más,10 la actividad del mosquito adulto está limitada por debajo de los 14 °C y la ovoposición se verá afectada por debajo de los 17°C11.. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El control de vectores sigue siendo la principal prevención y control de dengue debido a que no existe vacuna estos casos1, de acuerdo con la OMS la única vía para prevenir la transmisión del dengue es combatiendo la transmisión del agente etiológico12.. El. enfoque para combatir la enfermedad se basa principalmente en la interrupción del ciclo. N. de transmisión mediante la reducción del vector por medio de la matanza de larvas del. AC IÓ. agente etiológico o de los adultos por medio de insecticidas13 el cual es dependiente. frecuentemente de insecticidas sintéticos14 que están siendo revisados debido al. UN IC. incremento de resistencia a éstos y por sus efectos secundarios al medio ambiente15 serios riesgos para los organismos de la clase Mammalia16, estos. implicando. M. insecticidas están frecuentemente asociados con residuos que son peligrosos para el. CO. consumidor17 produciendo alteraciones en el embarazo18 provocando alteraciones del. Y. desarrollo perceptivo y aprendizaje en niños19, efectos carcinogénicos provocando. IC. A. linfomas20 así como envenenamientos21 y provocando la contaminación en alimentos. ÁT. causando una sobredosis en éstos22y la alta relación costo beneficio de los insecticidas. RM. sintéticos impulsa la búsqueda de investigar insecticidas alternativos17como el control. IN FO. biológico.. El control biológico, el cual se define como la reducción de densidades de plantas o. DE. animales que causan daño al hombre mediante sus enemigos naturales; es decir la. AS. acción de predadores, parásitos y patógenos23. Bacteria como Bacillus thuringiensis ha. EM. sido usada como larvicida de mosquitos en diversos países24 hongos como Metarhizium25 y Beauveria26 con propiedades adulticida25 larvicida y ovicidas6 en. DE. SI ST. Anopheles27,28y Ae. Aegypti disminuyendo también la fecundación en hembras.29. Las plantas están siendo utilizadas en el control de mosquitos, éstas son fuentes de. N. compuestos bioactivos30 que lo producen como mecanismo de defensa contra ataques de. CC. IO. insectos, estos compuestos pueden actuar como insecticidas30, detención de la alimentación, inhibiendo hormonas de muda, deteniendo la oviposición, repelentes,. RE. inhibiendo el crecimiento así como atrayentes31. Los principios activos en el vegetal se. DI. agrupan en función al “precursor” a través del cual se biosintetizan: Derivados de los acetatos y sikimatos se encuentran los flavonoides y compuestos relacionados, taninos, quinonas, lignanos y cumarinas, fenoles simples y ácidos fenólicos y lípidos; derivados del ácido mevalónico se encuentran los monoterpenos y sesquiterpenos, lactonas, iridoides y secoiridoides, diterpenos, saponósidos , heterósidos y cannabionoides, 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. derivados de los aminoácidos como heterósidos. sulfoácidos. se. los alcaloides; derivados de polisacáridos y. encuentran. polisacáridos,. enzimas,. heterósidos. cianogenéticos y sulfocianogenéticos32. Por estas razones los insecticidas de plantas están ganando más popularidad en este contexto, particularmente por su viabilidad en el. AC IÓ. N. medio ambiente15. Las plantas han sido evaluadas como fuentes naturales de insecticidas contra larvas Ae.. UN IC. aegypti, ensayos biolarvicidas se llevaron a cabo usando las larvas III y larvas IV, así como el extracto acuoso de hojas de Indigofera suffruticosa mostró actividad. M. embriotóxica y un retardo general del crecimiento33 Se estudiaron una diversidad de. CO. plantas de las familias Laminaceae que poseen acción insecticida como Origanum. Y. onites L. Satureja thymbra L. Myrtus communis sobre adultos de Ephestia kuehniella. A. Zeller (Lepidoptera: Pyralidae)Plodia interpunctella Huber (Lepidoptera: Pyralidae) y. ÁT. IC. Acanthoscelides obtectus Say (Coleoptera: Bruchidae)34 y Mentha rotundifolia L.,. RM. Origanum vulgare L. spp. Vulgare, Rosmarinus oficinales L Thymus vulgaris L y Ocimum basilicum L. se reportaron como larvicidas de Tribolium castaneum. IN FO. (Coleoptera: Tenebrionidae) 35. Ocimum basilicum “albahaca” es una planta perteneciente a la familia Laminaceae,. DE. contiene componentes activos de como eugenol, metileugenol, citral y metil clavicol36.. AS. y es usado como antiespasmódicos, antiséptico, analgésico37 y para tratar diferentes. EM. enfermedades como desórdenes cardiovasculares36 estimulante digestivo y dolor de. SI ST. cabeza, tos, diarrea, insomnio, constipación, verrugas, heridas y malfuncionamiento de los riñones37. DE. El aceite esencial de O. basilicum predomina el linalol pudiendo coexistir con eugenol,. IO. N. safrol, 1,8 cineol y otros monoterpenos38 los componentes químicos pueden variar. CC. según los quimiotipos dados por la diferencia geográfica: el quimiotipo Europeo,. RE. presentando el linalol y estragol como componentes principales; el quimiotipo Reunión, se caracteriza por tener altas concentraciones de estragol; el quimiotipo tropical por ser. DI. rico en cinamato de metilo; y un quimiotipo de África del norte y de la antigua Unión Soviética es rico en eugenol39 , entre otros. Sus compuestos han sido reportados con efectos antivirales40 antibacterianos41., antifúngicos42,43 antiparasitarios44 e insecticidas.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Diversas especies de Ocimum se han reportado que presentan propiedades insecticidas y larvicidas, extractos de O. canum y O sanctum han sido evaluados sus propiedades larvicidas. contra. Anopheles. subpictus45;. así. como,. en. adultos. de. Culex,. quinquefasciatus y Ae. Aegypti46 ; Ocimum. gratissimum contra Anopheles gambiae y. AC IÓ. N. Anopheles funestus causando rápido efecto knockdown47. La actividad insecticida de O. basilicum ha sido reportada por diversos investigadores,. asimismo el efecto del. linalool y estragol, componentes de O. basilicum en , también se ha reportado el efecto larvicida del extracto. M. Rhyzopertha dominica. 49. como Callosobruchus maculatus (Fabricius)48,. UN IC. principalmente contra coleópteros. CO. alcohólicos contra lepidópteros como Lymantria dispar L.50 así como como insecticida. Y. y larvicida en culícidos, Prejwltta51 demostró que el extracto de éter de petróleo es. A. eficaz contra las larvas de Anopheles stephensi y Culex quinquefasciatus. El extracto de. ÁT. IC. etil acetato contra An. stephensi tuvo una DL50 de 93.02 µg/ml52 así como el aceite esencial como larvicida de L2 L3 y L4 de An. stephensi incrementando la mortalidad del. RM. mosquito conforme incrementaba la concentración del aceite esencial53. Además de ser. IN FO. un potente ovicida contra An. stephensi en condiciones de elevada humedad54.. DE. La toxicidad y potencial repelente de O. basilicum Linn. en diferentes concentraciones (2 , 4 , 6 , 8 y 10 % ) contra diferentes estadios ( I, II , III y IV) también se evaluaron en. AS. larvas y pupas de Aedes aegypti. Los valores de LC50 de O. basilicum para la larva de I. EM. estadío fue 3.734 , II estadío: 4.154 , III estadío 4.664 , IV estadío de 5.12455. SI ST. Teniendo en cuenta el efecto insecticidas de O. basilicum en culícidos y al no existir publicaciones del extracto etanólico sobre Ae. Aeygpti de esta región así como la. DE. variación de la composición química de los quimiotipos y que el uso de insecticidas. IO. N. químicos conducen a promover la resistencia, contaminación del medio ambiente y. CC. daños en la salud del hombre; el presente trabajo que tuvo como finalidad determinar el. RE. efecto insecticida en larvas y adultos de concentraciones de 1.5%, 2.0% , 4.5% y 15%, 20%,. 30%. respectivamente. del. extracto. alcohólico. de. Ocimum. basilicum. DI. (Lamiaceae)contra Aedes aegypti bajo condiciones de laboratorio.. Teniendo en cuenta los antecedentes se puede afirmar que a medida que se incrementa las concentraciones del extracto alcohólico. de. Ocimum basilicum (Lamiaceae),. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. disminuye la viabilidad de larvas IV tempranas y adultos de Aedes aegypti bajo condiciones de laboratorio.. MATERIALES Y MÉTODOS. AC IÓ. N. 1. Material biológico. Los adultos de Aedes aegypti fueron obtenidos a partir de huevos colectados del. UN IC. distrito de Sullana y se utilizó una cepa susceptible (Cepa Rockefeller) el cual se transportaron al insectario de Artropodología Parasitaria. Las larvas fueron. M. depositadas en recipientes de plástico de 30x35 cm y 5 cm de alto conteniendo. CO. 1500 mL de agua, y se mantuvieron con alimento balanceado estéril “purina”. Y. hasta el estadio de larva IV56. Posteriormente las pupas fueron transferidas a 57,58. Los adultos fueron. A. jaulas de crianza con medidas de 30x30x30 cm.33,. ÁT. IC. alimentados con una dieta a base de una solución de sacarosa al 10% y las hembras además con sangre de Mus musculus, se mantuvieron a una temperatura. RM. de 25 ± 2°C,59 y a una humedad de 70-75 %. 60,61. . Para la ovoposición se. IN FO. acondicionaron recipientes de plástico de 10x10x5 cm. con agua libre de cloro62 y alrededor del recipiente papel filtro 63,64. Los adultos de Ae. aegypti emergidos. AS. respectivos bioensayos.. DE. de estos huevos eclosionados, fueron utilizados para la realización de los. EM. La planta de Ocimum basilicum fue colectada del distrito de Simbal, provincia. SI ST. de Trujillo, Departamento de La Libertad. E identificada en el. Herbarium. N. DE. Truxillense de la Universidad Nacional de Trujillo (anexo 01). CC. IO. 2. Procedimiento. DI. RE. 2.1. Obtención del extracto alcohólico de O. basilicum 2.1.1. Recolección e identificación de las hojas de O. basilicum. Se recolectaron las hojas de Ocimum basilicum del distrito de Simbal, provincia de Trujillo, Departamento de La Libertad. Se seleccionó manualmente, eligiéndose hojas frescas, ausentes de manchas y fueron trasladadas al Laboratorio de Artropodología Parasitaria para la extracción del extracto.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.1.2. Extracción del extracto etanólico de O. basilicum El extracto fue preparado siguiendo el protocolo de Renisheya et al65 as hojas frescas (gramos) fueron secadas y pulverizadas utilizando un moledor, el material pulverizado fue remojado en etanol por 48 horas en. AC IÓ. N. una temperatura ambiente. Después del remojo, el extracto fue filtrado. usando papel filtro Whatman N° 41. El filtrado fue colectado y guardado. 2.2. Determinación del efecto larvicida. CO. 2.2.1. Preparación de las concentraciones usadas. M. UN IC. a 4° C66. Las concentraciones de 1.5% 2.0% y 4.5% fueron preparadas según. A. Y. Basheer67 siendo obtenidas a partir de la solución de 30% de extracto. IC. alcohólico y se añadió agua destilada hasta completar unos 250 ml, luego. ÁT. fueron transferidos al recipiente de experimentación, el control fue con. RM. etanol al 1%.. IN FO. Se colocaron 25 larvas de estado IV temprano de Ae. aegypti en un recipiente de plástico de 500mL, en cuatro recipientes en total,. DE. colocándose unos 250 mL de agua destilada en cada recipiente para. AS. someterla a condiciones de estrés; los recipientes fueron cubiertos con un. EM. pedazo de malla sujetados firmemente con una liga, por 24 horas antes del experimento.. SI ST. 2.2.2. Bioensayo. Se colocaron los 250 mL preparados de cada concentración en los. DE. recipientes de 500mL incluyendo el control, después se colocaron 20. pincel. Se realizó cinco repeticiones: Dos para la población Sullana y tres para la cepa Rockefeller siendo todos mantenidos a la misma temperatura de 27 ± 2°C 6y a una humedad de 70-75 % 60. DI. RE. CC. IO. N. larvas de cara recipiente que fue sometido a estrés con ayuda de un. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.3. Cálculo del porcentaje de mortalidad Después de 3, 6, 9, 12 y 24 horas desde el inicio de la colocación de las larvas el número de muertos y vivos fue contado y se realizó la curva de muerte. El tiempo de muerte de las larvas fue contado cada 5 minutos. N. hasta los 360 minutos, para determinar el porcentaje de mortalidad se. CO. M. UN IC. AC IÓ. aplicó la siguiente fórmula:. A. Preparación de las concentraciones usadas:. IC. 2.3.1.. Y. 2.3. Determinación del efecto insecticida. ÁT. Se preparó las concentraciones a partir de la solución madre, siendo. RM. diluidas en alcohol para cada prueba, se siguió el protocolo del ensayo. IN FO. biológico de a botella del Centro Para el Control y Prevención de Enfermedades (CDC)68,. colocando 1mL en tres botellas de cada. DE. concentración, posteriormente se recubrió toda la botella agitándola y rodándola suavemente como indica el protocolo, la botella control se. AS. recubrió con 1mL de agua destilada y etanol absoluto respectivamente.. EM. Las botellas fueron secadas a las 24 horas. antes de colocarlas en. SI ST. posición vertical.. Se colocaron 25 adultos al azar de Ae. aegypti con la ayuda de un tubo. DE. colector, en un recipiente de plástico de 500mL en cuatro recipientes en. DI. RE. CC. IO. N. total para someterla a condiciones de estrés; los recipientes fueron cubiertos con un pedazo de malla sujetados firmemente con una liga, por 24 horas antes del experimento y alimentados a través de un algodón remojado con 10% de dilución de azúcar.. 2.3.2. Bioensayo Se colocaron 20 adultos de Ae aegypti de los sometidos a estrés y con la ayuda de un tubo colector, en la botella seca y cubiertos con un pedazo de malla sujetados firmemente con una liga para prevenir el escape; lo mismo se realizó para las demás botellas. Los mosquitos fueron provistos 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. de 10% de dilución de azúcar estéril en un algodón remojado y fue colocado encima de las botellas. Se realizó cinco repeticiones: Dos para la población Sullana y tres para la cepa Rockefeller.. AC IÓ. N. 2.3.3. Cálculo del porcentaje de mortalidad Después de los 300 minutos desde el inicio de la exposición los. UN IC. mosquitos fueron considerados muertos si ellos se encontraban tumbados sobre sus espaldas o de lado en la parte inferior de la botella y si no. M. podían volar después de unos suaves golpecitos en la botella. El número. CO. de muertos y vivos será contado y se realizará la curva de muerte,. Y. determinándose el porcentaje de mortalidad mediante la siguiente. IN FO. RM. ÁT. IC. A. fórmula:. 2.4. Análisis de datos y análisis de los CL50 y CL90. DE. Los datos fueron sometidos al análisis de varianza (ANOVA) y una prueba de comparación de medias T-student, a fin de determinar las diferencias entre los grupos experimentales y control con un grado de. AS. significativas. EM. significancia de 0.0537 Los valores de CL50 (concentración letal que mató al 50%. SI ST. de la población) y CL90 (concentración letal que mató al 90% de la población), la actividad larvicida y adultica fueron calculados mediante el programa de análisis. DI. RE. CC. IO. N. DE. de la agencia de protección ambiental (EPA Analysis Program) versión 1.569. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS En el estudio realizado se indican los porcentajes de mortalidad de larvas de Ae aegypti cepa Sullana y cepa Rockefeller con las concentraciones utilizadas de 1.5%, 2.0%. y 4.5% (Figuras 1, 2 y 3) del extracto alcohólico de O. basilicum. AC IÓ. N. encontrándose diferencias significativas entre los grupos experimentales y controles. (etanol al 1%) la concentración de 4.5% causó la mortalidad del 100% de la. UN IC. población en tan solo 60 minutos, para cepa Rockefeller y cepa Sullana. A pesar que la concentración de 1.5 y 2.0% no tiene diferencia significativa entre éstos, la. M. concentración de 4.5% obtuvo una diferencia significativa para ambas cepas de Ae.. Y. CO. aegypti. (p≤0.05) (Figura 4). A. Los resultados del Programa de análisis de la agencia de protección ambiental (EPA. ÁT. IC. Analysis Program) verión 1.5 de los bioensayos para determinar la actividad. RM. insecticida en larvas del extracto escencial de O. basilicum, permitieron establecer las concentraciones letales, la concentración letal media (CL50) y la concentración. IN FO. letal 90 (CL90) encontradas en el trabajo fue CL50 de 2.900% y CL90 de 4.783% para la cepa Sullana (Tabla 1) y un CL50 de 3.158% y CL90 de 5.924% para la cepa. AS. DE. Rockefeller (Tabla 2),. EM. En las Figuras 4, 5, y 6 indican los resultados obtenidos al colocar el extracto de O.. SI ST. basilicum en la botella donde se encontraban los adultos de Ae aegypti. (método CDC) Se observa variación en la mortalidad en las concentraciones utilizadas de. DE. 15%, 20% y 30% de extracto alcohólico de O. basilicum mostrando efectos estadísticamente significativos en comparación con los controles (etanol al 100%). IO. N. (p≤0.05) (Figura 8) que mostraron una escasa mortalidad. La concentración de 30%. CC. afectó drásticamente causando la mortalidad del 100% de la población, que murieron todos a los 45 minutos de la exposición , siendo altamente significativo. DI. RE. (p≤0.05).. Los resultados del Programa de análisis de la agencia de protección ambiental (EPA Analysis Program) versión 1.5 de los bioensayos para determinar la actividad insecticida en adultos del extracto esencial de O. basilicum, permitieron establecer las concentraciones letales CL 50= 24.260% y CL 90= 29.390% para la cepa Sullana 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. (Tabla 3) y un CL50 de 24.468 y CL90 de 30.295 para la cepa Rockefeller (Tabla 4) , encontrándose que no existe diferencia significativa entre cepas, pero si existe diferencia significativa entre las concentraciones (Figura 8). AC IÓ. N. 100. UN IC. 90 80. M CO Y. 60. A. 50. ÁT. IC. Población Sullana. 40. RM. Mortalidad (%). 70. IN FO. 30. DE. 20. Control población Sullana Control Cepa Rockefeller. AS. 10. Cepa Rockefeller. EM. 0. 100. DE. SI ST. 0. 300. 400. Tiempo (min). Porcentaje de mortalidad de larvas IV tempranas de Aedes aegypti cepa Sullana y cepa Rockefeller expuestas al extracto etanólico de Ocimum basilicum al 1.5%. DI. RE. CC. IO. N. Figura 1:. 200. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 100 90. N. 80. AC IÓ UN IC. 60. Población Sullana 50. CO. M. Cepa Rockefeller. 40. Y. Mortalidad (%). 70. IC. A. 30. Control Cepa Rockefeller. RM. ÁT. 20. Control población Sullana. IN FO. 10 0 100. 200. 300. 400. DE. 0. Porcentaje de mortalidad de larvas IV temprana de Aedes aegypti. SI ST. Figura 2:. EM. AS. Tiempo (min). Ocimum basilicum al 2.0%. DI. RE. CC. IO. N. DE. cepa Sullana y cepa Rockefeller expuestas al extracto etanólico de. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. N. 100. UN IC. Población Sullana 60. CO. M. Cepa Rockefeller. Y. Mortalidad (%). 80. Control Cepa Rockefeller. RM. ÁT. IC. A. 40. Control población Sullana. 0 100. 200. 300. 400. Tiempo (min). Porcentaje de mortalidad de larvas IV tempranas de Aedes aegypti. SI ST. Figura 3:. EM. AS. 0. DE. IN FO. 20. Ocimum basilicum al 4.5%. DI. RE. CC. IO. N. DE. cepa Sullana y cepa Rockefeller expuestas al extracto etanólico de. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 1: Determinación de la concentración letal media (CL50) y concentración letal 90 (CL90) del extracto alcohólico de Ocimum basilicum contra larvas IV tempranas de Aedes aegypti cepa Sullana. Extracto alcohólico. Concentración. %Mortalidad. CL50. CL90. 13%. 4.5. 88%. Control (agua. 0%. UN IC. 2.0. 2.900 %. A. IC. 0%. 0.524. Y. destilada) Control (etanol. 4.783 %. M. 7%. CO. 1.5. Ocimum basilicum. AC IÓ. N. % (v/v). RM. ÁT. 1%). Tabla 2: Determinación de la concentración letal media (CL50) y concentración letal. IN FO. 90 (CL90) del extracto alcohólico de Ocimum basilicum contra larvas IV tempranas de Aedes aegypti cepa Rockefeller.. Concentración. %Mortalidad. DE. Extracto alcohólico. CL50. CL90. 1.5. 10%. 2.0. 12%. 4.5. 78%. Control (agua. 0%. 3.158 %. 0.872 5.924 %. destilada) Control (etanol. 0%. 1%). DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. Ocimum basilicum. EM. AS. % (v/v). 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 100 b. 90. b. AC IÓ. N. 80. UN IC M. 60. CO. 50. Cepa Sullana. Y. 40. IC. A. Mortalidad (%). 70. a. 10. a. DE. a. IN FO. 20 a. AS. 0. 0. 2. 4.5. 0. Control. Concentraciones (% v/v). SI ST. EM. 1.5. Cepa Rockefeller. RM. ÁT. 30. Figura N° 4: Porcentajes de mortalidad de larvas IV tempranas de Aedes aegypti. DE. cepas Sullana y Rockefeller tratadas a diferentes concentraciones (1.5%,. 1%) Letras diferentes presentan diferencia significativa entre grupos. DI. RE. CC. IO. N. 2.0% y 4.5%) del extracto alcohólico de O. basilicum y control (etanol. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 80. N. 70. UN IC. AC IÓ. 60. CO. M. Población Sullana. 40. A. Y. Cepa Rockefeller. IC. Mortalidad (%). 50. RM. ÁT. 30. Control Cepa Rockefeller. IN FO. 20. Control población Sullana. 0 50. 100. 150. 200. 250. 300. Tiempo (min). DE. SI ST. 0. EM. AS. DE. 10. Porcentaje de mortalidad de adultos de Aedes aegypti cepa Sullana y cepa. Rockefeller expuestas al extracto etanólico de Ocimum basilicum al 15%. DI. RE. CC. IO. N. Figura 5:. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 90. AC IÓ. N. 80. UN IC. 70. CO. M. Población Sullana. 50. A. Y. Cepa Rockefeller. IC. Mortalidad (%). 60. ÁT. 40. RM. Control Cepa Rockefeller. IN FO. 30. Control población Sullana. AS. DE. 20. EM. 10. 50. 100. 150. 200. 250. 300. Tiempo (min). DE. SI ST. 0. Figura 6:. Porcentaje de mortalidad de adultos de Aedes aegypti cepa Sullana y cepa. DI. RE. CC. IO. N. Rockefeller expuestas al extracto etanólico de Ocimum basilicum al 20%. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 100 90. AC IÓ. N. 80. UN IC. 60. M. Población Sullana. 50. Y. CO. Cepa Rockefeller. 40. IC. A. Mortalidad (%). 70. Control Cepa Rockefeller. RM. ÁT. 30. Control población Sullana. IN FO. 20. 0 50. 100. 150. 200. 250. 300. Tiempo (min). SI ST. EM. 0. AS. DE. 10. Figura 7:. Porcentaje de mortalidad de adultos de Aedes aegypti cepa Sullana y cepa. DI. RE. CC. IO. N. DE. Rockefeller expuestas al extracto etanólico de Ocimum basilicum al 30%. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 3: Determinación de la concentración letal media (CL50) y concentración letal 90 (CL90) del extracto alcohólico de Ocimum basilicum contra adultos de Aedes aegypti cepa Sullana.. Ocimum. 15%. 17%. basilicum. 20%. 18%. 30%. 93%. Control (agua. 3%. 24.260 % 29.390 %. AC IÓ. % (v/v). CL90. 1.342. M. alcohólico. CL50. N. Concentración %Mortalidad. UN IC. Extracto. Control (Etanol. CO. destilada) 2%. IC. A. Y. 100% ). ÁT. Tabla 4: Determinación de la concentración letal media (CL50) y concentración letal. RM. 90 (CL90) del extracto alcohólico de Ocimum basilicum contra adultos de Aedes aegypti. Concentración %Mortalidad. alcohólico. % (v/v). Ocimum. 15%. basilicum. 20%. CL90. EM. AS. 15%. SI ST. 30%. CL50. DE. Extracto. IN FO. cepa Rockefeller. Control (agua. 24.468 %. 18%. 30.295 %. 90%. 1.145. 3%. DE. destilada). 3%. 100% ). DI. RE. CC. IO. N. Control (Etanol. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 100 b b. 90. AC IÓ. N. 80. UN IC CO. M. 60. Cepa Sullana. Y. 50. A. 40. Cepa Rockefeller. ÁT. IC. Mortalidad (%). 70. a. a a. DE. 10. a. IN FO. 20. RM. 30. 20% 30% Concentraciones (% v/v). a. Control. SI ST. EM. 15%. AS. 0. a. DE. Figura N° 8: Porcentajes de mortalidad de adultos de Aedes aegypti cepas Sullana y Rockefeller tratadas a diferentes concentraciones (15%, 20% y 45%) del. Letras diferentes presentan diferencia significativa entre grupos. DI. RE. CC. IO. N. extracto alcohólico de Ocimum. basilicum y control (etanol 100%). 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN El efecto larvicida que posee O. basilicum (Figuras 1, 2, 3) se encontró que. la. concentración de 4.5% causó la mortalidad del 100% de Ae. aegypti para cepa Rockefeller y cepa Sullana, expuestos a 60 minutos en relación a las otras. (Figura 4), el efecto larvicida se debería a que. AC IÓ. N. concentraciones, mostrando que no existe diferencia significativas entre estas cepas. esta planta presenta alcaloides,. UN IC. glicósidos, flavonoides, fenoles, saponinos, triterpenoides ,proteínas , resuinas, esteroides y taninos en el extracto alcohólico70 las cuales son conocidos por tener. M. propiedades larvicidas, ninfocidas y adulticidas en insectos71 algunos compuestos. CO. fenólicos como linalool y eugenol identificados en esta especie, se demostró su eficacia. Y. en hongos como Alternaria alternata y Colleotrichum capsicii72; el linalool , se. A. encuentra en mayor cantidad en esta planta73 cual se reveló que el linalool y estragol. ÁT. IC. producen toxicidad contra Rhyzopertha dominica38 Asimismo concuerda con López. RM. Belchi74 que encontró que el linalool tuvo actividad insecticida con un CL50 de 4.89. IN FO. mg/L en Sitophilus oryzae.. Dentro de los compuestos fenólicos que posee O. basilicum se encuentran. DE. monoterpenos como el metileugenol, que se ha demostrado que tiene propiedades insecticidas , siendo éste más tóxico que los terpenos cineol, limoneno, pcymeno y α-. AS. pineno para Periplaneta americana, además de ser más efectivo en actividad. EM. knockdown, así como repelente y en mortalidad75. También es tóxico para larvas de. SI ST. Spodoptera litura76. El metileugenol, otro de sus compuestos, es encontrado en hojas de Magnolia salicifolia (Magnoliaceae), induciendo el 100% de mortalidad en larvas IV. DE. de Ae. aegypti77.. IO. N. Otro componente presente en O. basilicum es el metilclavicol, o también conocido. CC. como estragol, Nour et al78 determinaron que el metilclavicol y el geranial - geraniol. RE. extraído del aceite esencial en dosis de 500µg/ml causó el 100% de mortalidad en larvas. DI. III de Aedes aegypti después de tres y seis horas respectivamente siendo el LC50 y LC90 de 160 µg/ml y 262 µg/ml para el metilclavicol y 174 µg/ml y 356 µg/ml para el geranial- geraniol.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Los resultados obtenidos en el trabajo concuerdan con Aidaross79 et al que demostraron que la más alta concentración de 10 000 ppm del extracto acuoso de O. basilicum causó el 20%, 30%, 50% y 60% de mortalidad exponiendo a 1, 2, 3, 4 y 24 horas en larvas III de Cx. quinquefasciatus respectivamente siendo la concentración de 1000 ppm la más Así como con Aarthi y Murugan53 que estudiaron que la mortalidad. AC IÓ. exposición.. N. eficaz produciendo una mortalidad de 10%, 10% y 26% a las 3, 4 y 24 horas de. incrementa con el aumento de la concentración , encontrando así 78% , 81% y 84% de. UN IC. mortalidad para larva IV, III y II de An. stephensi respectivamente, producido por el. M. tratamiento del extracto metanólico al 2%. CO. En el presente trabajo la concentración letal media (CL50) y la concentración letal 90. Y. (CL90) encontradas fue un CL50 de 2.900% y CL90 de 4.783% para la cepa Sullana. A. (Tabla 1) y un CL50 de 3.158% y CL90 de 5.924% para la cepa Rockefeller (Tabla 2),. ÁT. IC. estos resultados difieren de Maurya et al54 que comprobaron el efecto lavicida del. RM. extracto de éter petróleo de O. basilicum teniendo valores de LC50 de 8.29±1.92 ppm y 4.57±1.24 ppm para las 24 y 48 horas respectivamente y un LC90 de 87.69±34.35 ppm. IN FO. para las 24 horas y un LC90 de 47.25±16.01 ppm para las 48 horas, todos para An. stephensi. Anteriormente evaluaron el extracto de éter petróleo de éter petróleo. DE. obteniendo un CL50 de 4.57 ppm y 6.06 ppm a las 24 y 48 horas para Cx.. EM. larvas de An. stephensi55.. AS. quiquefasciatus y una CL50 8.29 ppm a las y 10.06 ppm a las 24 y 48 horas contra. SI ST. Otros reportes que demuestran la actividad larvicida encontrada es el de Manzoor et al69 que estudiaron la eficacia de aceite esencial de O. basilicum contra Ae. aegypti y Cx.. DE. quinquefasciatus (Say) con un LC50 de 75.35 ppm y 92.30 ppm respectivamente y. N. Chavan y Nikam80 mostraron el efecto larvicida que indució el 100% de mortalidad en. IO. Cx, quienquefasciatus a la concentración de 0.12%. y Govindarajan81 et al que. CC. encontraron que el aceite esencial posee propiedades larvicidas con un LC50 de 9.75,. RE. LC90 18.56 ppm para An. subpictus,un LC50 de 14.01, LC90 23.44 ppm para Culex. DI. tritaeniorhynchus y un LC50 de 11.97 , LC90 23.44 ppm para Aedes albopictus Basheer67 encontró un LC 50 de 705, 532, 455 ppm a las 24, 48 y 72 horas en larvas III de An arabiensis producido por el extracto etanólico de hojas de O. basilicum, sin embargo se encontró un menor LC50 por el extracto etanólico de las semillas con una LC50 de 657, 556, 442 ppm a las 24,48 y 72 horas, a pesar de estos resultados se extrajo 21. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. el extracto alcohólico de las hojas en el trabajo ya que estudios como el de Inbaneson et al44 demostraron que las hojas de O. basilicum tienen más baja CL50 que las semillas, raíces y flores para Plasmodium falciparun con un CL50 de 43.81 mientras el resto de 63.67 78.69 y 76.75 µg/ml de extracto alcohólico, mostrando que el extracto de hojas es. N. más eficaz que el extracto de semillas pudiéndose deber a la alta concentración de. AC IÓ. aceites esenciales en la hoja que son conocidos por ser tóxicos debido a que posee. UN IC. alcaloides, taninos, proteínas que no se encuentran en las semillas ni en los tallos82.. A pesar que Murugan et al55 encontraron valores de LC50 y LC90 para el extracto. M. metanólico de hojas de O. basilicum en larvas de I, II, III , IV y pupa de Ae. aegypti de. CO. 3.734% y 7.528% para larva I, 4.154 y 8292 para larva II, 4.664% y 8.746% para larva. Y. III, 5.124 y 9.767% para larva IV y 5.449 y 15.474% para pupas; estos resultados son. A. diferentes a los encontrados en el presente trabajo lo cual se debería a la composición. ÁT. IC. química de la planta que difiere en variedades encontrándose diferentes variedades de la. RM. planta como O. basilicum L. var minima Benth, contenia geraniol (45%) y eugenol (25%) como los mayores componentes, O. basilicum L. var glabratum Benth.,. IN FO. quimiotipo N° 1 contenía metilclavicol (38%) y linalool (35%). O. basilicum var glabratum Benth.,quimiotipo N° 2 contiene linalool (47%) y eugenol (20%) como los. DE. mayores componentes; O. basilicum L. var. glabratum Benth., quimiotipo N° 3 contiene. AS. linalool (40%) eugenol (20%) y camphor (20%) O. basilicum L. var purpurascence. EM. Benth. contiene methilcinnamato (20 %) y linalool (60 %); O. basilicum L. var. SI ST. tryrsiflora Benth. contiene metilcinamato (35 %) y linalool (60 %); O. basilicum L. var crispum Benth. contiene metilclavicol (50 %) y linalool (28 %); y O. basilicum L. var. IO. N. DE. darkapal contiene geraniol (35 %), linalool (35 %) y eugenol (25 %)83.. CC. Además de los anteriores quimiotipos prsesentados, existen otras clasificaciones de. RE. acuerdo al de origen geográficos como el quimiotipo Europeo, presentando el linalol y estragol como componentes principales; el quimiotipo Reunión, se caracteriza por altas. DI. concentraciones de estragol; el quimiotipo tropical, es rico en cinamato de metilo; y un quimiotipo de África del norte y de la antigua Unión Soviética es rico en eugenol84 y los descritos por Koba85 que son quimiotipos provenientes de Togo, siendo del tipo estragol, el tipo linalool/estragol, el tipo metileugenol, tipo metileugenol T- anetol y el tipo anetol Nour et al86 demostraron el efecto insecticida varía con la variabilidad 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. encontrándose que a 500 μL/L el aceite esencial de O. basilicum como planta ornamental proveniente de Sudán produjo una mortalidad del 60% de larvas del III estado de Anopheles sp. mientras el aceite esencial de como planta silvestre proveniente de Sudán obtuvo un 90% a las 3 horas y el aceite esencial de proveniente de Emiratos. N. Árabes Unidos y el de Alemania obtuvieron ambos un 100% de mortalidad a las 3. AC IÓ. horas, encontrándose un LC50 de 300 μL/L para el proveniente de Sudán utilizado como planta ornamental, 280 μL/L para el proveniente de Sudán como planta silvestre, 190. el proveniente de Emiratos Árabes Unidos y 16.200 μL/L para el proveniente. UN IC. μL/Lpara. de Alemania, el cual indicaría que la efectividad del efecto larvicida está en relación con. CO. M. su variedad; y con Umesh et al87 que encontró un LC50 de 10 µg/ml para el aceite. A. Y. esencial de O. basilicum var. purpurascens para Ae. albopictus.. ÁT. IC. La actividad insecticida del extracto alcohólico de O. basilicum en adultos de Ae.. RM. aegypti mostró que la concentración letal incrementa con la concentración y el tiempo de exposición (Figura 5, 6, 7 ). Las concentraciones más bajas de extracto alcohólico. IN FO. utilizadas (1.5%, 2% y 4.5%) afectan en el aumento de la mortalidad de las larvas pero son menos eficaces en la mortalidad de los adultos, por esta razón se utilizaron. DE. concentraciones más elevadas. Se observó que los zancudos muertos tuvieron cierta. AS. atracción hacia el extracto alcohólico y quedaron paralizados hasta tener el knockdown,. EM. estas propiedades como atrayente concuerdan con la presencia de fenoles el cual los. SI ST. polifenoles actúan como atrayente para insectos y microbios41,88 el 99% mortalidad se encontró a los 40 minutos (Figura 7) indicando que el extracto tiene propiedades. DE. insecticidas lo cual se debería a que esta planta presenta alcaloides, glicósidos, flavonoides, fenoles, saponinos, triterpenoides ,proteínas , resuinas, esteroides y taninos. IO. N. en el extracto alcohólico44. Ya que como se había explicado antes, contienen. CC. monoterpenos como el metileugenol, eugenol y linalool que se han demostrado que. RE. tienen efectos insecticidas.. DI. Uno de los monoterpenos como el metileugenol también se utilizó como fumigante siendo muy tóxico para Ceratitis capitata y Bactrocera cucurbitae comparado con el aceite esencial de O. basillicum, linalool, estragol y e-anetol que no mostraron efecto knockdown a la concentración de 0.75%. Después de dos horas de exposición al metil eugenol a concetraciones de 0.5 y 0.75% la mortalidad /knockdown fue de 96 y 100% contra C. capitata y 98 y 08% contra Ba. cucurbitae59. 23. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El mecanismo de acción que posee los monoterpenos como el metileugenol se debería a que son inhibidores de la acetilcolina esterasa un enzima responsable de la hidrólisis del neurotransmisor acetilcolina89, como los insecticidas sintéticos quedando la enzima. AC IÓ. N. bloqueada e inactiva, de esta manera las concentraciones sinápticas de acetilcolina. aumentan y ocurre una hiperexcitación del sistema nervioso central paralizando la. UN IC. transmisión nerviosa reportándose hiperactividad, convulsiones, temblores, seguido por parálisis “knockdown” una pérdida de la locomoción74 e incluso la muerte90. Otro de los. M. monoterpetos con esta propiedad es el linalool, que se ha encontrado en trabajos como. CO. el de López Belchi74 que es un inhibidor de la acetilcolinesterasa; por lo tanto también. Y. tiene un modo de acción como el metileugenol, como lo indica Pravena y Sanjayan91. A. siendo el linalool un inhibidor de la de acetilcolinesterasa de Ae. aegypti con mayor. IC. actividad.actuando en el sistema nervioso afectando el transporte de iones e inhibiendo. IN FO. RM. ÁT. la acetilcolinaesterasa92, 93.. Los resultados encontrados concuerdan con Zahir et al52. que observaron un 100% de. DE. mortalidad a las 24 horas en adultos de An. stephensi, causada por el extracto de etil. AS. acetato de O. basilicum , con una CL50 de 93.02 µg/ml y una IE90 de adultos es 705.09. EM. µg/ml del extracto de cloroformo. Akono et al94 estudiaron que tuvo una mortalidad de 100% a la concentración de 250 ppm para Anopheles funestus ss y Belong et al95 con. SI ST. una LC50 de 84 ppm para el mismo mosquito. También concuerda con Bhatnagar96 et al que reportó que el aceite esencial y su mayor constituyente: metil clavicol en dosis de. DE. 0.003 ml/43.0 cm2 y 0.001 ml/ 43.0 cm2 indució el 100% de mortalidad en An.. IO. N. stephensi, Ae. aegypti y Cx. quinquefasciatus.. CC. El presente trabajo indicaría que el extracto alcohólico alcohólico de O. basilicum posee. RE. propiedades larvicidas y adulticidas para Ae. aegypti siendo debido a la presencia de. DI. alcaloides, glicósidos, flavonoides, fenoles, saponinos, triterpenos, proteínas, resinas, esteroides, taninos y monoterpenoides como el linalool y metileugenol que actúan inhibiendo la acetilcolinesterasa , de esta manera alteran el sistema nervioso y contribuyen a su muerte.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES Las concentraciones de 1.5, 2.0 y 4.5% del extracto alcohólico de O. basilicum así como las de 15, 20 y 30% tienen efecto larvicida y adulticida respectivamente con un CL50 de 2.9% para las larvas de la población Sullana y. AC IÓ. N. de 3.158% para la de la cepa Rockefeller asimismo un CL50 de 24.26% para los. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. adultos de la población Sullana y 24.468% para los de la cepa Rockefeller.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Manda H, Arce LM, Foggie T, Shah P, Grieco JP, Achee NL. Effects of irritant. N. chemicals on Aedes aegypti resting behavior: is there a simple shift to untreated. AC IÓ. "safe sites" PLoS Negl Trop Dis. 2011; 5(7):e1243.. 2. Forattini OP. Principais mosquitos de importância sanitária no Brasil. Cad.. UN IC. Saúde Pública [online]. 1995; 11(1) 157.. 3. Arrasco J. Situación del dengue en el Perú. Bol Epidemiol. (Lima). 2012; 21. CO. M. (03): 35 - 36.. 4. Hernández CF, García JD. Aedes, Dengue y la posibilidad de un enfoque. Y. diferente de lucha. Rev Costarric. Salud Pub. 2000; 9(16): 7-17. IC. A. 5. Salas MA. Ciclo gonotrópico, tasa de supervivencia, estructura d edades de. ÁT. Aedes aegypti L. en la zona metropolitana de Monterrey, Nuevo León, México.. RM. [Tesis de maestría]. Nuevo León. Universidad Autónoma de Nuevo León, 1993.. IN FO. 6. Luz C, Tai MH, Santos AH, Silva HH. Impact of moisture on survival of Aedes aegypti eggs and ovicidal activity of Metarhizium anisopliae under laboratory. DE. conditions. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2008; 103(2):214-5. 7. Marquetti Fernandez MC. Aspectos bioecológicos de importancia para el control. AS. de Aedes aegypti y otros culícidos en el ecosistema urbano.[Tesis doctoral]. La. EM. Habana. Instituto de Medicina Tropical “Pedro Kouri”. Departamento de control. SI ST. de vectores, 2008.. 8. Salvatella Agrelo R. Aedes aegypti, Aedes albopictus (Diptera: Culicidade) y su. DE. papel como vectores en las Américas. La situación de Uruguay.Rev Med. N. Uruguay. 1996; 12(1): 28 – 36.. IO. 9. Gubler DJ. Dengue and Dengue Hemorrhagic Fever. Clin. Microbiol. Rev.. CC. 1998; 11(3) : 480 – 496. International, New York, 1997. DI. RE. 10. Gubler DJ, Kuno GK. Dengue and Dengue Hemorrhagic fever. CA. 11. López Velez R, Molina Moren R. Cambio climático en España y riesgo de enfermedades infecciosas y parasitarias transmitidas por artrópodos y roedores. Rev Esp Salud Publica. 2005; 79(2): 177 – 190.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..