Actividad biocida de las sustancias bioactivas de Azadirachta indica A Juss y Ocimum basilicum L , sobre adultos de Aedes aegypti, Trujillo Perú 2018

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO ESCUELA DE POSGRADO. SG RA. DO. -U NT. UNIDAD DE POSGRADO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. Actividad biocida de las sustancias bioactivas de Azadirachta indica A.. PO. Juss. y Ocimum basilicum L., sobre adultos de Aedes aegypti, Trujillo-. DE. Perú-2018.. TESIS PARA OBTAR EL GRADO ACADEMICO DE:. CA. MAESTRO EN CIENCIAS. IO TE. MENCION EN MICROBIOLOGÍA CLÍNICA. Br. Huaman Medrano, Edwin Abel. ASESOR:. Dr. Vargas Vasquez, Franklin Roger. BI. BL. AUTOR:. TRUJILLO, PERÚ 2019. N° de Registro:. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Dr. José Mostacero León. PO. SG RA. DO. PRESIDENTE. -U NT. MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR. DE. Dr. Carlos Alberto León Torres. BI. BL. IO TE. CA. SECRETARIO. Dr. Franklin Róger Vargas Vásquez ASESOR. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A DIOS Quién supo guiarme por el buen camino, darme. -U NT. fuerzas para seguir adelante y no desmayar en los problemas que se presentaban, enseñándome a encarar las adversidades sin perder nunca la. CA. DE. PO. SG RA. DO. dignidad ni desfallecer en el intento.. BI. BL. IO TE. A MIS PADRES Para mi padre que desde cielo supo brindarme el apoyo espiritual para nunca desfallecer en este largo camino trazado. Para mi madre que siempre confió en mí y me dio el apoyo en los momentos más difíciles de esta etapa. .. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A MI TÍA Para mí tía, que es como mi segunda madre, que siempre confío en mí y me brindo el apoyo sin. DO. -U NT. dudarlo para seguir adelante.. SG RA. A MIS HERMANOS. Para mis hermanos Roció, Julio y Verónica por brindarme ese apoyo fraternal y por estar. IO TE. CA. DE. PO. presentes en los momentos que les requerí.. A MIS SOBRINOS. BL. Para mis sobrinos Pamela, Abel, Mathias, Nicole. BI. y Víctor, por ser el estímulo para continuar avanzando en mi profesión.. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTOS. Mis más sinceros agradecimientos: A mi maestro y asesor Dr. Franklin Roger Vargas Vásquez, por compartir sus conocimientos. investigador y encaminarme en la investigación científica.. -U NT. en el área de la parasitología y enfermedades metaxénicas, contagiarme de su espíritu. DO. Al maestro Dr. Armando Cuéllar Cuéllar, por venir desde La Habana-Cuba, para compartir sus conocimientos en el área de productos naturales y apoyar en la ejecución la presente. SG RA. tesis.. Al Dr. Edmundo Arturo Venegas Casanova, gran maestro, que brindo el apoyo en la. importantes para la ejecución.. PO. recolección de la muestras, obtención de las de extractos y aceites esenciales, pasos muy. DE. A mi amigo Juan Ernesto Valdiviezo Campos, por brindarme el apoyo en toda la ejecución. CA. de la tesis, el trabajo mutuo de las dos tesis, brindo buenos resultados.. IO TE. Al proyecto: “Control de Aedes Aegypti: Sustancias bioactivas de origen natural con potencial actividad biocida en el adulto”, convenio 164-2017-FONDECYT, por financiar la. BI. BL. presente tesis.. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE Pág. Miembros del Jurado Dictaminador ...................................................................................... ii. -U NT. Dedicatoria............................................................................................................................ iii Agradecimiento ..................................................................................................................... v Índice .................................................................................................................................... vi. DO. Resumen .............................................................................................................................. vii. SG RA. Abstract ............................................................................................................................... viii Introducción ............................................................................................................... 1. II.. Material y Métodos .................................................................................................... 9. III.. Resultados................................................................................................................ 23. IV.. Discusión ................................................................................................................. 36. V.. Conclusiones............................................................................................................ 42. VI.. Recomendaciones .................................................................................................... 43. VII.. Referencias Bibliográficas ....................................................................................... 44. IO TE. CA. DE. PO. I.. BI. BL. Anexos ........................................................................................................................... 53. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. Aedes aegypti es un vector de importancia en la salud pública en el Perú, por trasmitir los virus como el dengue, chikungunya y zika. Para el control de este vector se usa insecticidas. -U NT. sintéticos, pero con el paso del tiempo, el vector genero resistencia, por lo cual se está buscando nuevas alternativas de control, como el uso de sustancias bioactivas de plantas medicinales. El presente trabajo evaluó la actividad biocida de las sustancias bioactivas de. DO. Azadirachta indica A. Juss. y Ocimum basilicum L., sobre adultos de Aedes aegypti. Se. SG RA. realizó la recolección, identificación taxonómica, estudio de la calidad de la droga vegetal, obtención de extractos fluidos, obtención de aceites esenciales, Screnning fitoquímico de las especies vegetales Azadirachta indica A. Juss. “neem” y Ocimum basilicum L. “albahaca”. PO. y por último el bioensayo de la actividad biocida frente a adultos de Ae. aegypti procedentes de Rio Seco (Trujillo), Ferreñafe (Chiclayo) y Sullana (Piura). El presente trabajo reporto lo. DE. siguientes resultados: el extracto acuoso (12.32 mg/mL), hidroalcoholico de 70° GL (10.2 mg/mL), hexánico (5.1 mg/mL) del “neem” presentaron efecto sobre a adultos de Ae.. CA. aegypti cepa Rio Seco y Ferreñafe, para la cepa Sullana adicionalmente presento efecto. IO TE. biocida el extracto de acetato de etilo (6.3 mg/mL); el aceite fijo (207 mg/mL) no presento efecto. Para “albahaca”, el extracto acuoso (31.3 mg/mL), hidroalcoholico de 70° GL (21.7. BL. mg/mL), hexánico (32.6 mg/mL), aceite esencial (200 µL/mL) presentaron efecto sobre a. BI. adultos de Ae. aegypti cepa Rio Seco y Ferreñafe, mientras que para la cepa Sullana el extracto hidroalcoholico de 70° GL (21.7 mg/mL), no presento efecto. Algunos extractos fluidos y aceites esenciales presentaron efecto biocida sobre a adultos de Ae. aegypti cepa Rio Seco, Ferreñafe y Sullana. Palabras claves: biocida, bioactivas, neem, albahaca, fitoquímico, Aedes.. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. Aedes aegypti is a vector of importance in public health in Peru, for transmitting viruses such as dengue, chikungunya and zika. Synthetic insecticides are used to control this vector, but. -U NT. over time, the vector generates resistance, which is why new control alternatives are being sought, such as the use of bioactive substances from medicinal plants. The present work evaluated the biocidal activity of the bioactive substances of Azadirachta indica A. Juss.. DO. and Ocimum basilicum L., on adults of Aedes aegypti. Collection, taxonomic identification,. SG RA. study of the quality of the vegetable drug, obtaining fluid extracts, obtaining essential oils, phytochemical Screnning of the plant species Azadirachta indica A. Juss. was carried out. “neem” and Ocimum basilicum L. “basil” and finally the bioassay of the biocidal activity. PO. against adults of Ae. aegypti from Rio Seco (Trujillo), Ferreñafe (Chiclayo) and Sullana (Piura). He present work reported the following results: the aqueous extract (12.32 mg / mL),. DE. hydroalcoholic of 70 ° GL (10.2 mg / mL), hexane (5.1 mg / mL) of the “neem” had effect on adults of Ae. aegypti strain Rio Seco and Ferreñafe, for the Sullana strain additionally the. CA. ethyl acetate extract (6.3 mg / mL); the fixed oil (207 mg / mL) did not show any effect. For. IO TE. “basil”, the aqueous extract (31.3 mg / mL), hydroalcoholic of 70 ° GL (21.7 mg / mL), hexane (32.6 mg / mL), essential oil (200 μL / mL) had an effect on adults of Ae. aegypti. BL. strain Rio Seco and Ferreñafe, while for the Sullana strain the hydroalcoholic extract of 70. BI. ° GL (21.7 mg / mL), did not show any effect. Some fluid extracts and essential oils have a biocidal effect on adults of Ae. aegypti strain Rio Seco, Ferreñafe and Sullana.. Keywords: biocide, bioactive, neem, basil, phytochemical, Aedes.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. En la fauna entomológica del mundo, los mosquitos constituyen uno de los grupos de mayor importancia en salud pública; las enfermedades trasmitidas por mosquitos. -U NT. (vectores) registran altas tasas de morbilidad y mortalidad. Según la OMS, representan 17% del total de las enfermedades infecciosas en el mundo, con 1,000 millones de casos y un millón de defunciones anuales (WHO, 2017). Estas constituyen uno de los principales. DO. problemas de salud, que afectan la mayoría de sectores de la población; entre las cuales se. SG RA. destacan la malaria, el dengue, la fiebre amarilla, la bartonelosis, la leishmaniosis, entre otras (INS, 2005, p. 30).. Los últimos años el continente americano ha sufrido la reemergencia de las. PO. arbovirosis trasmitidas por mosquitos. Culex quinquefasciatus, Aedes albopictus y Aedes. DE. aegypti constituyen dentro de la fauna entomológica de mosquitos, los vectores responsables del mantenimiento y circulación de virus como el dengue, chikungunya, zika y Mayaro. CA. (Leyva et al., 2017, p. 140).. IO TE. El Aedes aegypti es un díptero vector de la fiebre amarilla, dengue, chikunguya y zika; se distribuye principalmente por zonas tropicales (Cabezas et al., 2015, p. 152). En el. BL. Perú se distribuye por la selva, costa y Lima (MINSA, 2016, p. 2).. BI. Se sabe que Ae. aegypti presenta un ciclo acuático que es influenciado por el tipo y. la calidad de los depósitos de agua; en los cuales los huevos eclosionan pasando por estadio larval, luego estadio pupal y finalmente un adulto volador. El vector prefiere reproducir en depósitos de aguas limpias, aunque pueda adaptarse a las nuevas situaciones impuestas por el hombre (Malta, Biral dos Santos, Ricas, Bevilacqual, y Falqueto, 2005, p. 238).. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Las medidas de control vectorial frente a Ae. aegypti, están concebidas como actividades intensivas y de corto plazo con el objetivo de disminuir rápidamente la población de mosquitos adultos, para lo cual se implementa el control larvario en el 100% de las viviendas, seguido inmediatamente del control del vector adulto, de ser necesario se realizará. -U NT. un recojo de residuos sólidos domiciliarios (zonas tropicales) (MINSA, 2015, p. 14). Existen tres métodos para realizar el control químico frente a Ae. aegypti, el primer. DO. método es la aplicación de larvicida o control focal, usado para tratar recipientes de agua potable en el hogar. Otro método es tratamiento perifocal, que utiliza rociadores para el. SG RA. habita de las larvas y destruye no solo larvas sino también adultos mosquitos. Finalmente, la pulverización espacial es generalmente empleada en brotes de emergencia de dengue. PO. (Manjarres y Olivera, 2013, p 69).. En el Perú, se utilizan principalmente plaguicidas piretroides para el control del Ae.. DE. aegypti en estado adulto, y el organofosforado temephos para el control de este vector en su. CA. estado larvario; pero existen otras alternativas según las listas de los plaguicidas que periódicamente evalúa la Organización Mundial de la Salud (OMS), en situaciones en las. IO TE. cuales se reporten resistencia a los piretroides o al temephos (MINSA, 2015, p. 17). En la actualidad en nuestro país se está usando el insecticida organofosforado malathion al 2%. BL. para adultos de Ae. Aegypti y el regulador de crecimiento pyriproxyfen para el estadio larval. BI. (MINSA, 2015, p. 17). Se conoce que el uso intensivo y extensivo de los insecticidas ha creado una presión. de selección que ha favorecido el desarrollo y evolución de la resistencia, esta última es considerada como la habilidad en una especie de insectos para tolerar dosis altas de tóxicos (Mohammad y Garza, 2007, p. 9). Para la Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación (FAO), “la resistencia surge como resultado de la aplicación 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. extensiva de un insecticida.. Por ello, la determinación y vigilancia periódica de la. susceptibilidad a insecticidas debe ser un componente importante en cualquier programa de control químico de vectores” (FAO, 1970, p.32).. -U NT. El Instituto Nacional de Salud (INS) ha encontrado 41 distritos de 14 departamentos del Perú con resistencia a la cipermetrina que era el más utilizado para la fase adulta, el cambio se está dando por el malathion que ha mostrado efectividad en estudios de. DO. susceptibilidad frente a este vector (Guzmán, 2016, p. 137). Otro factor, en la cual debe darse el mayor interés son los resultados de los estudios del INS 2010-2011 sobre la. SG RA. susceptibilidad y resistencia del Ae. aegypti al temephos utilizado para el control de larvas, reporta que en los departamentos de Loreto (Iquitos), Tumbes (El Milagro), Piura (Pachitea). PO. y La Libertad (F. de Mora) existe resistencia moderada. Los estudios de susceptibilidad y resistencia de Ae. aegypti adulto a los insecticidas en el 2007-2011, se determinó resistencia. DE. a los plaguicidas piretroides en los departamentos de Tumbes, San Martín, Ucayali y Madre. CA. de Dios (MINSA, 2013).. Un método alternativo de control lo constituye la utilización de plantas, las cuales. IO TE. representan una fuente promisoria, segura y sostenible ecológicamente para el control vectorial (Leyva et al., 2017, p. 141). Las plantas constituyen un recurso valioso en los. BL. sistemas de salud de los países en desarrollo, la OMS ha estimado que más del 80% de la. BI. población mundial utiliza rutinariamente la medicina tradicional para satisfacer sus necesidades de atención primaria de salud, y que gran parte de los tratamientos implica el uso de extractos de plantas o sus principios activos, los que pueden servir de precursores para la síntesis de nuevos fármacos (Domínguez, 1998). Sobre la década del 40, del siglo pasado se describió aproximadamente 1 200 especies de plantas con valor insecticida. Estudios a principios de los años 90 del siglo pasado 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. resumen alrededor de 344 especies de plantas con actividad específica larvicida en mosquito (Leiva et al., 2017, p. 141). En el año 2005 se amplía esta información incluyendo no solo la actividad larvicida y ovicida de plantas, sino también la actividad reguladora del crecimiento, el efecto de mezclas de aceites, capacidad residual de los mismos y su efecto. -U NT. en organismos que no son objeto de control (Salam, Canyonb, Faried, Wahaba, & Hamid, 2005, p. 1150).. DO. Dentro de los aspectos que hacen valorar lo promisorio de una planta además de su probada actividad insecticida (ser efectiva a bajas dosis), es no tener alto valor económico,. SG RA. poseer un valor adicional como el medicinal y que la utilización de su principio activo no conlleve a la extinción de la especie (Leyva et al., 2017, p. 142). Estos aspectos describen y. PO. concluyen los principios de eco-sostenibilidad; la cual se refiere a la explotación de cualquiera que sea el recurso biológico por debajo de su límite de renovación, sin afectar la. DE. diversidad y productividad del ecosistema adyacente (Leyva et al., 2017, p. 141).. CA. En todos los aspectos referentes a la diversidad biológica, el Perú está entre los 17 países de mayor diversidad de la Tierra, conocidos como "países megadiversos", por su. IO TE. diversidad de ecosistemas, de especies y de recursos. El Perú posee muy alta diversidad ecológica de climas, de pisos ecológicos y zonas de producción, y de ecosistemas. BL. productivos. En lo que respecta a la flora, se calculan unas 25 mil especies (10% del total. BI. mundial) de las cuales un 30% son endémicas, y de las cuales muchas son usadas con efectos benéficos para el ser humano (INEI, 2012, p. 62). Azadirachta indica A. Juss. “Neem” es un árbol originario de la India, reconocido por sus propiedades insecticidas, y adaptado a nuestro país (Gajmer et al., 2002, p. 238). Provoca una variedad de efectos en los insectos, tales como anti alimentaria, retraso del crecimiento,. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. reducción de la fecundidad, trastornos en la muda, defectos morfológicos, neurotóxicos y cambios de comportamiento (Banchio et al., 2003, p. 188; Wandscheer et al., 2004, p. 829). El árbol de “neem”, es una especie de gran importancia y potencialidad del cual se. -U NT. obtienen extractos usados como una fuente natural contra una gran variedad de microorganismos patógenos (acción insecticida y microbicida (Arias et al., 2009, p. 23; Kumar, Jayadevi, Ashoka, y Chandrashekara, 2003, p 1460; López, Angulo, Martínez, Soto,. DO. y Chaidez, 2007, p 118). También se extraen aceites esenciales a partir de hojas, semillas, corteza, etc., y que posee como agente activo el azadiractina, el cual se ha comprobado que. SG RA. funciona como insecticida natural que compite ventajosamente con los insecticidas sintéticos. De esta manera, extractos con alta concentración de azadiractina podrían ser los. PO. precursores de una nueva generación de productos insecticidas, fungicidas, acaricıdas, etc. (Schmutterer, 1995, p. 696; Bandoni, 2000).. DE. Azadirachta indica A. Juss. contiene diversos componentes con actividad insecticida,. CA. de los cuales el más importante es la azadiractina (AZA), un tetranortriterpenoide natural (NIIR Board, 2004, p. 478). Sin embargo, la concentración de los compuestos bioactivos del. IO TE. neem no es alta en las diferentes partes de la planta. La preparación de bioinsecticidas efectivos a base de neem requiere que el proceso de extracción separe e incremente el. BL. contenido de AZA y otros componentes relacionados con la actividad insecticida de los. BI. extractos (NIIR Board, 2004, p. 478). Para la extracción de AZA se han propuesto varios métodos y destacan aquellos que. usan como solvente al etanol, hexano, acetona, acetato de etilo y metanol (Koul y Wahab, 2004, p. 276). También se ha evaluado el uso de isopropanol con evaporación al vacío o gases licuados (Moorty y Kumar, 2004). Adicionalmente, los aceites contenidos en los. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. extractos de neem les confieren propiedades penetrantes y de sinergia con la AZA y otros componentes (Esparza et al., 2010, p. 822). El efecto de la AZA depende de su dosis y de la especie plaga a controlar, ya que puede. -U NT. reducir la alimentación, supervivencia, viabilidad de ninfas, progenie, e incluso puede producir toxicidad aguda (Esparza et al., 2010, p. 822).. Ocimum basilicum L. “Albahaca”, es una planta de la familia Lamiaceae conocida. DO. popularmente como “albahaca”. Su empleo es muy común en la medicina tradicional como. SG RA. hipoglucemiante, antiasmático y antiinflamatorio, repelente de insectos, etc. En estudios de tamizaje fitoquímico se ha identificado la presencia de aminas, flavonoides, leucoantocianinas, esteroles y triterpenos (Laakso, Seppänen, Herrmann, Kühnel, y Knobloch,. PO. 1990). El aceite esencial de “albahaca” ha demostrado tener constituyentes biológicamente activos que actúan como insecticidas, nematicidas, fungistaticos y antimicrobiano (Simon,. DE. Morales, Phippen, Fontes, y Hao, 1999, p 500).. CA. La composición química de los extractos es muy poco estudiado, mientras que el aceite. IO TE. esencial de la “albahaca” ha sido sometida a un número considerable de estudios. Hay una extensa diversidad en los constituyentes de este aceite, sin embargo, para los diferentes quimiotipos de O. basilicum L. se han informado como constituyentes mayoritarios el. BL. estragol, linalol, cinamato de metilo, metil eugenol, eugenol, isoestragol (anetol), mirceno y. BI. geraniol (González, González, González, Rosales,. y Andrade, 2011, p. 19; Romero,. Belisario, y Blasco, 2004, p. 310; Sajjadi, 2006, p. 128; Wesolowska, Grzeszczuk, y Jadczak, 2014, p. 168). Los productos naturales, no pretenden reemplazar completamente a los insecticidas sintéticos, los cuales son de indiscutible necesidad para disminuir las poblaciones de vectores en momentos de brotes epidémicos, pero su estudio, obtención y uso, de los más activos y 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. sostenibles permitirá contar con alternativas seguras y accesibles a todos (Leyva et al., 2017, p. 141). Ndione, Faye, Ndiaye, Dieye, & Afoutou (2007) demostraron que el aceite formulado. evidencio en la parte posterior del intestino del insecto.. -U NT. de neem es toxico para Ae. aegypti, influenciando en el desarrollo de larvas, daño que se. Caser, Carlos, Gasperazzo, Cruz, y Silva (2007) determinaron evidencias. DO. experimentales para la utilización del extracto acuoso de hojas secas del “neem” frente a Ae.. SG RA. aegypti, el extracto acuoso produjo efectos en el estadio larval de este vector. Muñoz, Patiño, Cardenas, Reyes, Martínez, y Stashenko, (2007) determinaron la composición química de extractos obtenidos con solvente de nueve especies de Ocimum. PO. spp. “albahacas”, identificando al eucaliptol, linalol, nerol, geraniol, neral, geranial, estragol,. CA. algunos insectos.. DE. eugenol y transcinamato de metilo, compuestos relacionados con la actividad biocida en. Sanabria, Segovia, González, Alcaraz, y Vera (2009) realizaron bioensayos con. IO TE. extractos acuosos de las especies vegetales chirimoya, palosanto, paraíso, tembetary hú y urukú, frente a larvas de Ae. aegypti, mostrando efectividad el extracto acuoso de chirimoya.. BL. Leyva, Marquettil, Tacoronte, Scull, Tiomno, Mesa, y Montada (2009) evaluaron la. BI. actividad larvicida de los aceites esenciales de Piper auritum, Pimenta racemosa, Chenopodium ambrosioide y Piper aduncum, obteniendo resultados efectivos frente a larvas de Ae. Aegypti. Otiniano y Roldán (2014) determinaron la actividad repelente y el tiempo de protección de las concentraciones de 25, 50, 75 y 100% v/v del aceite del endospermo de Ricinus communis frente a Ae. Aegypti adultos procedentes de La Esperanza (Trujillo), 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. obtuvieron actividad repelente de todas las concentraciones evaluadas y un tiempo de protección de 180 minutos. Pereira et al. (2018) analizaron la composición química de la planta “jaramataia”,. -U NT. mostrando un total de 26 constituyentes y mostro una alta actividad biocida contra larvas de Ae. aegypti, con una CL50 de 28.0 μg/mL.. Aguirre, Duarte, Álvarez, y Jiménez (2018) evaluaron la composición fitoquímica. DO. Jaegeria hirta, Austroeupatorium inulaefolium y Heliopsis oppsitifolia, mostrando la. SG RA. presencia de taninos, quinonas, flavonoides, esteroles, cumarinas y alcaloides; además se evaluó la actividad larvicida de los extractos etanolicos de estas especies frente a Ae. Aegypti, obteniendo resultados efectivos a las 48 horas de exposición.. PO. Luego de los sucesos climatológicos suscitados en la parte norte del país durante el. DE. fenómeno del niño costero del 2017, trajo consigo el aumento de vectores trasmisores de enfermedades, entre los principales tenemos al Ae. aegypti, vector responsable de trasmitir. CA. virus tales como dengue, fiebre chikungunya y zika.. IO TE. En los últimos años, Ae. aegypti ha generado resistencia a algunos productos químicos,. es por eso que debido al incremento de la resistencia a insecticidas sintéticos y la carencia. BL. del estudio de nuevas moléculas con actividad insecticida en el adulto e inhibidora del. BI. desarrollo es necesario ampliar el estudio de las sustancias bioactivas con actividad biocida provenientes de nuestra flora como un método alternativo de control contra el Ae. aegypti, por lo cual el objetivo general del proyecto es: Evaluar la actividad biocida de las sustancias bioactivas de Azadirachta indica A. Juss. y Ocimum basilicum L., sobre adultos de Aedes aegypti.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II.. MATERIAL Y MÉTODOS. 1. Material de estudio 1.1. Material biológico. -U NT.  Adultos de Aedes aegypti procedentes de las localidades de Rio Seco (Trujillo), Ferreñafe (Chiclayo) y Sullana (Piura), proporcionados por el Instituto de Investigación en Microbiología y Parasitología Tropical. DO. (INIMYPAT), de la escuela de Microbiología y Parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo (Anexo 1 y 2).. SG RA.  20 kg de hojas y 2 kg de frutos de árboles de la especie vegetal Azadirachta indica A. Juss. de la localidad de Vitin (Virú) (Anexo 3).. PO.  20 kg de la especie vegetal de Ocimum basilicum L. de los campos de cultivo. DE. en la localidad de Trigopampa (Otuzco) (Anexo 4). 2. Métodos. CA. 2.1. Recolección de la especie vegetal. IO TE. La recolección de la especie vegetal se realizó por el método convencional o clásico de herborización, seleccionando el material de campo y verificando que este en. BL. buenas condiciones (Miranda, y Cuéllar, 2002, p. 4).. BI. Se recolectó 20 kg de hojas y 2 kg de frutos de la especie vegetal Azadirachta indica A. Juss., de la localidad de Vitin, ubicado a coordenadas geográficas con latitud sur 08º25.731´, longitud oeste 078º 44.773´, altitud 57 msnm, distrito de Virú, provincia de Virú, región La Libertad en los meses de Mayo a Junio del 2018 (Anexo 3).. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Se recolectó 20 kg de plantas de la especie vegetal Ocimum basilicum L. de la localidad de Trigopampa, ubicado a coordenadas geográficas con latitud sur 07°53.356´, longitud oeste 078°34.611´, altitud 2607 msnm, distrito de Otuzco, provincia de Otuzco, región La Libertad en los meses de Mayo a Junio del 2018. -U NT. (Anexo 4). 2.2. Identificación y clasificación taxonómica. DO. Se proporcionó ramas (con presencia de hojas, semillas y frutos) de la especie vegetal Azadirachta indica A. Juss. y un ejemplar completo de la especie vegetal. SG RA. recolectada de Ocimum basilicum L. al Herbarium Truxillense de la Universidad Nacional de Trujillo, fue ingresada y depositada en el Herbarium con el código N° 59491 para Azadirachta indica A. Juss. y código N° 59492 para Ocimum basilicum. PO. L., y posteriormente fue identificada (Anexo 5, 6, 7 y 8).. DE. 2.3. Selección de la droga vegetal. De cada especie vegetal se seleccionó la droga vegetal (parte de la planta de la cual. CA. se obtendrán las sustancias bioactivas) con el objetivo de realizar una separación. IO TE. de las partes para evitar la mezcla entre sí, y así también eliminar residuos orgánicos e inorgánicos (Miranda, y Cuéllar, 2002, p. 4) (Anexo 9 y 10).. BL. 2.4. Secado y molienda de la droga vegetal. BI. La droga vegetal seleccionada de Azadirachta indica A. Juss. y Ocimum basilicum L. fueron secados previamente a temperatura ambiente bajo sombra, luego se colocó en bolsas de papel Kraft y llevadas a estufa a 40 °C durante 48 horas. La droga desecada se pulverizó y tamizó (hasta tamaño partícula 2,0 mm) luego se almaceno adecuadamente en frascos ámbar en un lugar sin humedad y sin luz directa (Miranda, y Cuéllar, 2002, p. 5) (Anexo 11 y 12).. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.5. Determinación de los parámetros de calidad de la especie vegetal 2.5.1. Determinación de pérdida de peso en agua En una caja de cartón previamente tarado se pesó 100 g de droga vegetal. -U NT. fresca y se llevó a secar en estufa a 40 °C durante 48 horas hasta obtener peso constante, pasado el tiempo se llevó a enfriar en desecador durante 30 minutos. Se realizó los cálculos por diferencia de pesos. Este procedimiento. DO. se realizó por triplicado (Miranda, y Cuéllar, 2002, p. 10) (Anexo 13).. SG RA. 2.5.2. Determinación de la humedad residual por gravimetría Se pesó 10 g de la droga triturada en una capsula de porcelana previamente tarada, posteriormente se llevó la muestra a estufa a 105°C de temperatura. PO. durante 3 horas, pasado el tiempo la capsula se colocó en el desecador (con silicagel) para dejar enfriar durante 30 minutos. Se realizó los cálculos por. DE. diferencia de pesos. Este procedimiento se realizó por triplicado (Miranda, y. CA. Cuéllar, 2002, p. 10) (Anexo 13).. IO TE. 2.5.3. Determinación de cenizas totales por gravimetría Se pesó 2 g de droga vegetal triturada, en un crisol de porcelana previamente. BI. BL. tarado, se carbonizo en cocina y luego se incineró en horno mufla a 700°C durante 2 horas, pasado el tiempo se colocó en el desecador (con silicagel) para dejar enfriar durante 30 minutos. Se realizó los cálculos por diferencia de pesos. Este procedimiento fue realizado por triplicado (Miranda, y Cuéllar, 2002, p. 7) (Anexo 14).. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.5.4. Determinación de cenizas solubles en agua En el crisol previamente tarado con las cenizas totales obtenidas, se le añadió 10ml de agua. El crisol se tapó y se hirvió suavemente a la llama de una cocina. -U NT. durante 5 min. La solución se filtró través de papel filtro libre de cenizas. El papel filtro con el residuo fue transferido al crisol inicial, se carbonizó en una cocina y luego se incinero en un horno mufla a 700º C durante 2 horas, pasado. DO. el tiempo se colocó en el desecador (con silicagel) para dejar enfriar durante 30 minutos. Se realizó los cálculos por diferencia de pesos. Este. SG RA. procedimiento fue realizado por triplicado (Miranda, y Cuéllar, 2002, p. 9) (Anexo 15).. PO. 2.5.5. Determinación de cenizas insolubles en acido por gravimetría En el crisol previamente tarado con las cenizas totales obtenidas, se le añadió. DE. 10 ml de ácido clorhídrico al 10%. El crisol se tapó y se hirvió suavemente a. CA. la llama de una cocina durante 5 min. La solución se filtró través de papel filtro libre de cenizas, se lavó el residuo con agua destilada caliente hasta. IO TE. eliminar la acidez. El papel filtro con el residuo fue transferido al crisol inicial, se carbonizó en una cocina y luego se incinero en un horno mufla a. BI. BL. 700º C durante 2 horas, pasado el tiempo se colocó en el desecador (silicagel) para dejar enfriar durante 30 minutos. Se realizó los cálculos por diferencia de pesos. Este procedimiento fue realizado por triplicado (Miranda, y Cuéllar, 2002, p. 9) (Anexo 15).. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.6. Obtención de sustancias bioactivas 2.6.1. Obtención de aceites esenciales 2.6.1.1. Determinación de rendimiento (Clevenger). -U NT. En un balón de 1 litro de capacidad se colocó 100 g de hojas y se acondiciono en el equipo Clevenger, procediendo a destilar durante 2 horas. El aceite obtenido se midió en el tubo graduado del equipo. El. DO. rendimiento del aceite esencial se expresó en porcentaje volumen/peso (ml de aceite esencial por 100g de material vegetal) (Oviedo y. SG RA. Orochena, 2011, p. 25) (Anexo 16 y 17).. 2.6.1.2. Obtención de aceites esenciales volátiles (Destilación por arrastre. PO. de vapor de agua). Se utilizó 10 kg de plantas de Ocimum basilicum L. y fue cargada en. DE. la cámara del equipo, de manera que forme un lecho fijo compactado.. CA. El vapor de agua es inyectado mediante un distribuidor interno, la generación del vapor estaba en la base del recipiente. Conforme el. IO TE. vapor entraba en contacto con el lecho, la materia prima se calentaba y empezó a liberar el aceite esencial contenido (evaporándose). Al ser. BI. BL. soluble en el vapor circundante, fue “arrastrado”, corriente arriba. En el refrigerante, la mezcla fue condensada y enfriada. A la salida del refrigerante, se obtuvo una emulsión líquida inestable, la cual fue separada por decantación. El aceite esencial fue purificado con sulfato de sodio anhidro y recepcionado en un frasco de vidrio de color ámbar, sellado para evitar el contacto de la luz y el oxígeno y se almaceno bajo refrigeración a. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 4°C hasta su posterior utilización (Ochoa, Paredes, Bejarano, y Silva, 2012, p. 293) (Anexo 18). 2.6.1.3. Obtención de aceites esenciales fijos (Método de Soxhlet). -U NT. Se pesó 100 g de semillas de Azadirachta indica A. Juss. y fue empacado en un cartucho de gasa, luego se introdujo el cartucho en la cámara extractora del equipo Soxhlet. En el balón del equipo se agregó. DO. 250 mL de solvente (éter de petróleo) y sobre cocina eléctrica se procedió a extraer. El aceite obtenido en el balón, fue purificado con. SG RA. sulfato de sodio anhidro y recepcionado en un frasco de vidrio de color ámbar, sellado para evitar el contacto de la luz y el oxígeno y se almaceno bajo refrigeración a 4°C hasta su posterior utilización (Núñez,. PO. 2008) (Anexo 19).. DE. 2.6.2. Obtención de extractos. 2.6.2.1. Método de reflujo. CA. Se pesó 100 g de droga vegetal y se empacó en bolsa de nylon, luego. IO TE. se introdujo en el balón del equipo y se agregó 250 mL de solvente de polaridad creciente (hexano, acetato de etilo, etanol, agua destilada),. BI. BL. sobre cocina eléctrica se procedió a la extracción. El empacado se secó en estufa y posteriormente se fue extrayendo sucesivamente con cada solvente en el orden descrito. Finalmente cada extracto se filtró a través de una bomba al vacío y se guardó en frasco ámbar hasta su posterior utilización (Proestos, y Komaitis, 2006, p. 569) (Anexo 20 y 21).. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.6.2.2. Determinación de la concentración de los extractos (solidos totales). De cada extracto obtenido se tomó una alícuota de 1 mL y se colocó sobre una capsula previamente tarada, luego se llevó a estufa a 40° C. -U NT. durante 24 horas. Pasado el tiempo se colocó en el desecador (con silicagel) para dejar enfriar durante 30 minutos. Se realizó los cálculos por diferencia de pesos. Este procedimiento se realizó por triplicado. Se. DO. determinó la concentración en mg/mL (Miranda, y Cuéllar, 2002, p. 16). SG RA. (Anexo 22). 2.6.3. Screnning fitoquímico. Se siguió el método descrito por Dra. Miranda & Dr. Cuellar donde cada. PO. muestra fue sometida a la acción extractiva de solventes de polaridad creciente Hexano, Etanol y Agua, modificando el pH del medio con el fin de. DE. obtener los metabolitos secundarios de acuerdo a su solubilidad (Miranda, y Cuéllar, 2002) (Anexo 23 y 24).. CA. 2.6.3.1. Ensayo de Liebermann-Burchard (determinación de triterpenoides. IO TE. y/o esteroides) Se tomó una alícuota del extracto fluido y se colocó en una capsula de. BI. BL. porcelana, luego se llevó a evaporar, el residuo se disolvió en 0.5 ml de cloroformo, más 5 gotas de anhídrido acético, más 5 gotas de ácido acético y por las paredes del tubo se deslizó 2 gotas de ácido sulfúrico concentrado, un ensayo positivo se reconoce por un cambio rápido de coloración. Es positivo cuando el color final es verde oscuro, dependerá la intensidad para calificar (Miranda, y Cuéllar, 2002, p. 20).. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.6.3.2. Ensayo de Bornträger (determinación de quinonas) Se tomó una alícuota del extracto fluido y se colocó en una capsula de porcelana, luego se llevó a evaporar, restituimos redisolviendo con 0.5. -U NT. mL de diclorometano, más la misma cantidad de reactivo de Bornträger que la muestra restituida; se agitó y se dejó reposar. El ensayo se considera positivo cuando la fase acuosa alcalina (superior) se colorea. DO. de rosado o rojo. Coloración rosada (++) y coloración roja (+++). SG RA. (Miranda, y Cuéllar, 2002, p. 19).. 2.6.3.3. Ensayo del cloruro férrico (determinación de compuestos fenólicos y/o taninos). PO. Se tomó una alícuota del extracto fluido y se le añadió 3 gotas de una. DE. solución de cloruro férrico al 5% en solución salina fisiológica. El ensayo se considera positivo de la siguiente forma: coloración rojo-vino. CA. (compuestos fenólicos), coloración verde intensa (taninos del tipo pirocatecólicos), coloración azul (taninos tipo pirogalotánicos). IO TE. (Miranda, y Cuéllar, 2002, p. 21).. BI. BL. 2.6.3.4. Ensayo de Shinoda (determinación de flavonoides) Se diluyó 0.5 mL de extracto fluido con 0.5 mL de ácido clorhídrico concentrado y pedazos de cinta de magnesio metálico, se esperó 5 minutos para que ocurra la reacción. El ensayo se considera positivo cuando se colorea rosado a rojizo (Miranda, y Cuéllar, 2002, p. 21).. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.6.3.5. Ensayo de Dragendorff (determinación de alcaloides) Se tomó una alícuota del extracto fluido y se colocó en una capsula de porcelana, luego se llevó a evaporar, el residuo se redisolvio en un 1. -U NT. mL de ácido clorhídrico al 1 % en agua, si el extracto es acuoso solo se le agrega 1 mL de ácido clorhídrico al 1 %, luego se coloca 3 gotas del reactivo de Dragendorff. El ensayo es positivo cuando precipita en. DO. un color rojo ladrillo refractario o rojo marrón (Miranda, y Cuéllar,. 2.6.3.6.. SG RA. 2002, p. 18).. Ensayo de Nihidrina (determinación de aminoácidos libres o de aminas). PO. Se tomó una alícuota del extracto fluido, se agregó 2 ml de solución. DE. al 2% de nihidrina; la mezcla se calentó de 5 a 10 minutos en baño maría. Este ensayo se positivo cuando se desarrolló un color azul. CA. violáceo (Miranda, y Cuéllar, 2002, p. 21). Ensayo de Fehling (determinación de azucares reductores). IO TE. 2.6.3.7.. En un tubo de ensayo se colocó 5 gotas del reactivo Fehling A. BI. BL. (contiene tartrado de sodio y potasio junto con sulfato cúprico), sobre ella se dejó gotear, gota a gota el reactivo de Fehling B (contiene solución alcalina) hasta aparecer un precipitado, luego se agregó 2 gotas más para que ese precipitado desaparezca dando una coloración azulada. El reactivo de Fehling preparado se mezcla con una alícuota de extracto fluido. El ensayo es positivo si existe la presencia de un precipitado rojo (Miranda, y Cuéllar, 2002, p. 20).. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.6.3.8. Ensayo. de. Baljet. (determinación. de. compuestos. con. agrupamiento lactónicos) En un tubo de ensayo se colocó 5 gotas del reactivo de Baljet A. -U NT. (solución de ácido píprico), luego se añadió 5 gotas del reactivo de Baljet B (solución alcalina), mezclando para formar el picrato de sodio. El reactivo preparado se añadió al extracto fluido. Se consideró. DO. ensayo positivo la aparición del precipitado rojo violáceo o rosado. SG RA. (Miranda, y Cuéllar, 2002, p. 19).. 2.6.3.9. Ensayo de espuma (determinación de saponinas del tipo esteroidal como triterpénica). PO. Si el extracto es etanolico se diluyo con 5 veces su volumen en agua,. DE. para esta prueba se agito el extracto fluido fuertemente durante 10 minutos. El ensayo se consideró positivo si apareció espuma en la. CA. superficie del líquido de más de 2 mm de altura y persiste por más de. IO TE. 2 minutos (Miranda, y Cuéllar, 2002, p. 21).. 2.6.3.10. Ensayo de gelatina (determinación de taninos). BI. BL. Se tomó una alícuota del extracto fluido, y se adiciono 3 gotas de gelatina. El ensayo se consideró positivo si precipita a un color amarillo claro o ligeramente marrón (Miranda, y Cuéllar, 2002, p. 23).. 2.7. Evaluación de la actividad biocida 2.7.1. Estabilización en el insectario de las cepas de Aedes aegypti Luego que el INIMYPAT, proporciono los papeles conteniendo huevos de Ae. aegypti de las cepas Rio Seco (Trujillo), Ferreñafe (Chiclayo), Sullana 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. (Piura), se procedió a pasarlas a fuentes plásticas (48.5cm x 35 cmx 5cm) con agua declorinada y colocarlas en las cajas de crianza de larvas (tecnopor). La alimentación se realizó con comida para peces (triturado finamente hasta polvillo), colocando en el agua declorinada desde la primera presencia de. -U NT. larvas (Quispe, Carbajal, Gozzer, y Moreno, 2015, p 93).. Cuando llegaron al estadio pupal estas fueron transportadas al insectario. DO. donde se colocaron en las jaulas de crianza para adultos, y se esperó hasta que. SG RA. emergiera el adulto (Quispe et al., 2015, p 93).. Una vez que los adultos emergieron, estos fueron alimentados. Los machos y hembras fueron alimentados con solución azucara al 5%, además las hembras. PO. se alimentaron con la ayuda de un cobayo (con sangre para que pueda realizar el proceso de ovoposición), al cobayo fue anestesiado con Ketamyna (0.1 ml). DE. y luego se rasuro la parte posterior para que las hembras puedan picar, una vez que el cobayo ya estaba anestesiado se procedió a colocar en la jaula de. CA. crianza de adultos durante 45 minutos para que las hembras logren. IO TE. alimentarse, pasado el tiempo se retiraba el cobayo y se colocaba en su jaula para ser alimentado (Quispe et al., 2015, p 93).. BI. BL. Luego de la copula entre macho y hembra, pasado tres días la hembra colocaba sus huevos en las tiras de papel craft (ovitrampa) y se esperó cinco días (para que se produzca la embriogénesis) para poder retirar estas tiras y guárdalas en una caja a temperatura ambiente (Quispe et al., 2015, p 93). Se realizó este proceso hasta obtener la F2 para poder realizar los ensayos biodirigidos (Anexo 1 y 2).. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.7.2. Bioensayo en adultos de Aedes aegypti Se utilizó el método del Ensayo Biológico de la Botella de los CDC. Para cada ensayo biológico se utilizaron cuatro botellas de vidrio boca ancha de. -U NT. 250 ml (CORNING) previamente lavadas; tres para las réplicas de pruebas y una para el control positivo (insecticida). Se evaluó los extractos fluidos obtenidos (hexano, acetato de etilo, etanol y acuoso) y aceites esenciales de. DO. Azadirachta indica A. Juss. y Ocimum basilicum L. (Brogdon, y Chan,. SG RA. 1998).. 2.7.2.1. Limpieza y secado de botellas antes del recubrimiento Las botellas usadas para la experimentación fueron lavadas con agua. PO. jabonosa caliente, y enjuagadas a fondo por lo menos tres veces.. DE. Para secar las botellas se colocaron en una estufa a 50°C por 15-20 minutos hasta que sequen completamente (Brogdon, y Chan, 1998, p.. CA. 10).. IO TE. 2.7.2.2. Preparación de control positivo (malathion al 2%) A partir del insecticida madre Starkil 60 EC (malathion al 60%),. BI. BL. proporcionado por el puesto de salud del distrito de Huanchaco, se diluyo con acetona hasta obtener una concentración del 2% (Flores, 2014, p. 27) (Anexo 25).. 2.7.2.3. Impregnación de botellas Cada botella fue impregnada colocando 1 ml de la solución en estudio de cada planta a evaluar, exponiendo la totalidad de la superficie interna de la botella a la solución, incluyendo el fondo de la botella y el interior de la tapa, esto se realizó en una campana extractora para ayudar en la 20. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. evaporación del solvente y por seguridad al momento de trabajar con solvente orgánicos (Brogdon, y Chan, 1998, p. 11). Las botellas se dejaron secar antes de iniciar las pruebas, teniendo la. -U NT. precaución de cubrirlas con papel o papel de aluminio para proteger la solución formulada, de la degradación por efecto de la luz (Anexo 26, 27 y 28).. DO. La botella control positivo fue impregnada con malathion al 2%,. 2.7.2.4. Experimentación. SG RA. realizando los pasos anteriores (Anexo 25).. Usando un aspirador, se introdujo 15 mosquitos hembras en cada. PO. botella. Se activó el cronómetro y se examinó las botellas en el Tiempo. DE. 0, se contó el número de mosquitos muertos y/o vivos. Se registraron cuántos mosquitos están vivos y cuántos han muerto, cada 15 minutos. CA. hasta que la totalidad de mosquitos hayan muerto o hasta que se. IO TE. cumplan 2 horas desde el inicio (Brogdon, y Chan, 1998, p. 11) (Anexo 29 y 30).. BI. BL. Notas sobre criterio de mortalidad: Mosquitos “muertos” son los que no se pudieron mantenerse de pie. Se roto suavemente la botella para facilitar el conteo. Mosquitos inmovilizados que se deslizaron por la curvatura de la botella al rotarla fueron clasificados como muertos (Brogdon, y Chan, 1998, p. 14).. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.7.2.5. Interpretación de resultados en relación con estrategias de control El criterio propuesto por la Organización Mundial para la Salud (OMS) para evaluar el significado de los valores de resistencia detectados es:. -U NT.  98%–100% mortalidad en el tiempo de diagnóstico recomendado, indicara susceptibilidad en la población..  80%–97% mortalidad en el tiempo de diagnóstico recomendado. DO. sugerirá la posibilidad de resistencia y debe ser confirmada.. SG RA.  <80% mortalidad en el tiempo de diagnóstico recomendado sugiere resistencia (Brogdon, y Chan, 1998, p. 17). 2.8. Tratamiento estadístico. PO. Los datos fueron sometidos al análisis de varianza (ANAVA), y con la prueba de comparación múltiple de Tukey, a fin de determinar las diferencias significativas. DE. entre los grupos experimentales y control con un grado de significancia de 0.05. Se. BI. BL. IO TE. CA. utilizó el programa InfoStat versión 2018 (Anexos 61, 62, 63, 64, 65 y 66).. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. RESULTADOS. Se determinó el rendimiento de aceites esencial volátiles, para Azadirachta indica A. Juss. se obtuvo 0.0 % RAE (v/w), luego de obtener este valor se extrajo aceite fijo a partir. -U NT. de frutos de Azadirachta indica A. Juss. obteniendo un valor de 2.0 % RAE (v/w). En el caso de Ocimum basilicum L. el rendimiento de aceites esencial volátil fue de 0.1 % RAE (v/w), como se observa en la tabla 1.. DO. Luego de evaluar los parámetros de calidad de las especies en estudio, se obtuvo los. SG RA. siguientes resultados para Azadirachta indica A. Juss., pérdida en peso de agua de 61,34 %, humedad residual de 6,74 % y cenizas totales de 7,34 %; las sustancias extraídas para la muestra vegetal fue de 12,32mg/ml (extracto acuoso), 20,42 mg/ mL (extracto. PO. hidroalcoholico al 50° GL), 20.12 mg/mL extracto hidroalcoholico al 70° GL) y 19,34 mg/ml (extracto etanolico al 96° GL). Para Ocimum basilicum L., posee una pérdida en peso de. DE. agua de 88,89 %, humedad residual de 8,42 %, cenizas totales de 11.86%, cenizas solubles en agua de 8.14% y cenizas insolubles en ácido de 1.61%; las sustancias extraídas para la. CA. muestra vegetal fue de 26,5mg/ml (extracto acuoso), 26 mg/ ml (extracto hidroalcoholico al. IO TE. 50° GL), 21.7% (extracto hidroalcoholico al 70° GL), y 8,4 mg/ml (extracto etanolico al 96° GL) (tabla 2).. BL. Además se realizó el tamizaje fitoquímico para la especie vegetal de Azadirachta. BI. indica A. Juss. se determinó la presencia de metabolitos secundarios en extractos fluidos, donde se puede observar que el mejor extracción de metabolitos secundarios se obtuvo en el extracto hidoalcoholico al 70%, mientras que para la muestra vegetal de Ocimum basilicum L., también se obtuvo el mismo resultado (tabla 3). Se determinó la concentración de cada extracto fluido (solidos totales) y aceite esencial, para Azadirachta indica A. Juss., se determinó 12.32 mg/mL para el extracto 23. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. acuoso, 10.2 mg/mL para el extracto etanolico 70° GL, 6.3 mg/mL para el extracto de acetato de etilo, 5.1 mg/mL para el extracto hexánico y 207 mg/mL para el aceite fijo; mientras que para la especie vegetal Ocimum basilicum L. se determinó 31,3 mg/mL para el extracto acuoso, 21,7 mg/mL para el extracto etanolico 70° GL, 14.8 mg/mL para el extracto de. -U NT. acetato de etilo, 32,60 mg/mL para el extracto hexánico y 200 µL/mL para el aceite (tabla 4).. DO. En los bioensayos realizados se determinó los porcentajes de mortalidad de adultos de Ae. aegypti de las cepas de Rio Seco (Trujillo), Ferreñafe (Chiclayo) y Sullana (Piura), frente. SG RA. a las concentraciones de extractos de polaridad creciente y aceite fijo de Azadirachta indica A. Juss.; concentraciones de extractos de polaridad creciente y aceite esencial de Ocimum. PO. basilicum L., como control positivo se usó malathion al 2% (Figura 1, 2, 3, 4, 5 y 6). Además se determinó que extractos y aceites esenciales tuvieron actividad biocida. DE. frente a adultos de Ae. aegypti de las cepas de Rio Seco (Trujillo), Ferreñafe (Chiclayo) y. CA. Sullana (Piura) (tabla 5).. Luego de realizar el análisis de la varianza de todos los resultados obtenidos de las especies. IO TE. vegetales frente a las tres cepas de Ae. aegypti, se obtuvo un P-valor de <0.0001 para todos los bioensayos, por lo cual se realizó la prueba de Tukey, determinando la igualdad. BL. estadísticamente significativa entre los grupos evaluados, como se puede mostrar en las. BI. tablas 6 y 7.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 01: Rendimiento del aceite esencial de las especies vegetales Azadirachta indica A. Juss. y Ocimum basilicum L.. 0.0. Ocimum basilicum L.. 0.1. 2.0. --------. DO. Azadirachta indica A. Juss.. % RAE (v/w) Aceite Esencial Fijo. -U NT. % RAE (v/w) Aceite Esencial Volátil. Especie vegetal. Tabla 02: Parámetros de calidad de las especies vegetales Azadirachta indica A. Juss. y. SG RA. Ocimum basilicum L.. Ocimum basilicum L.. 61,34 %. 88,89 %. 6,74 %. 8,42 %. 7,34 %. 11,86 %. --------. 8,14 %. --------. 1,61 %. H2 O. 12,32 mg/ mL. 26.5 mg/mL. Etanol 50° GL.. 20,42 mg/ mL. 26.0 mg/mL. Etanol 70° GL.. 20,12 mg/ mL. 21,7mg/mL. Etanol 96° GL.. 19,34 mg/ mL. 8,4 mg/mL. Humedad residual Cenizas totales. Azadirachta indica A. Juss.. DE. Perdida en peso de agua. Especie vegetal. PO. PARÁMETROS DE CALIDAD. CA. Cenizas solubles en agua. IO TE. Cenizas insolubles en ácido. BI. BL. SUSTANCIAS EXTRAÍDAS. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 03: Screnning fitoquímico de las especies vegetales Azadirachta indica A. Juss. y Ocimum basilicum L. Especie vegetal. Azadirachta indica A. Juss.. Metabolitos. Agua. Hexano. Etanol. Agua. N.R.. +++. ++. N.R.. -. -. +. +. -. Polifenoles. N.R.. +++. +. Gelatina. Taninos. N.R.. -. -. Shinoda. Flavonoides. N.R.. ++. N.R.. +. +. -. +. +. -. N.R.. -. +/-. N.R.. -. +/-. N.R.. N.R.. N.R.. N.R.. N.R.. N.R.. N.R.. -. -. N.R.. -. -. N.R.. -. -. N.R.. -. -. N.R.. -. -. N.R.. -. -. Triterpenos Liebermann/esteroides burchard. SG RA. Cloruro férrico. DO. Hexano Etanol. Ocimum basilicum L.. -U NT. Ensayos. Quinonas. Rosenheim. LeucoAntocianidinas. Dragendorff. Alcaloides. Mayer. Alcaloides. Sudam. Grasas. Baljet. Lactonas. N.R.. ++. -. N.R.. -. -. Kedde. Lactonas. N.R.. N.R.. N.R.. N.R.. N.R.. N.R.. Catequinas. N.R.. N.R.. N.R.. N.R.. N.R.. N.R.. DE. CA. IO TE. Carbonato de sodio. PO. Borntrager. Resinas. N.R.. N.R.. N.R.. N.R.. N.R.. N.R.. Mucilagos. Mucilagos. N.R.. N.R.. N.R.. N.R.. N.R.. N.R.. Ninhidrina. Aminas libres. N.R.. +++. +++. N.R.. +. ++. Felhing. Azucares reductores. N.R.. +++. +++. N.R.. ++. +++. Cumarinas. N.R.. N.R.. N.R.. N.R.. N.R.. N.R.. BI. BL. Resinas. UV. Leyenda:  Identificación: Presencia (+), Ausencia (-)  Intensidad: Baja (+), Moderada (++), Alta (+++)  No se realizó: (N.R.). 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 04: Determinación de las concentraciones de los extractos fluidos (solidos totales) y de los aceites esenciales de las especies vegetales Azadirachta indica A. Juss. y Ocimum basilicum L.. Aceite esencial. Extracto Hexánico. Extracto acetato de etilo. Extracto etanolico 70° GL. Extracto acuoso. Azadirachta indica A. Juss. 207 mg/mL. 5.1 mg/mL. 6.3 mg/mL. 10.2 mg/mL. 12.32 mg/mL. Ocimum basilicum L. 200 µL/mL. 32,60 mg/mL. 14.8 mg/mL. 21,7 mg/mL. 31,3 mg/mL. 100.00. 100.00. 100.00. 95.56 80.00 MORTALIDAD (%). 80.00. DO. 100.00. 100.00. EXTRACTO DE ACETATO DE ETILO ( 6,3 mg/mL) EXTRACTO HEXANICO ( 5,1 mg/mL). DE. 66.67. 60.00. CA. 53.33. 40.00. 33.33. IO TE. ACEITE FIJO (207 mg/mL). 20.00. 0.00. 0.000. 4.44. 0.00. BL. 0.00. 15. 30. 45. 60. 75. 90. 105. CONTROL POSITIVO (malathion al 2%). 120. TIEMPO (MINUTOS). BI. 0. EXTRACTO ACUOSO (12,32 mg/ mL) EXTRACTO ETANOLICO (10,2 mg/mL). PO. 100.00. SG RA. 120.00. -U NT. Especie vegetal. Grafica 1: Porcentaje de mortalidad de adultos de Aedes aegypti cepa Rio Seco (Trujillo) expuesta a una concentración de 12,32 mg/mL de extracto acuoso, 10,2 mg/mL de extracto hidroalcoholico (70° GL), 6,3 mg/mL de extracto de acetato de etilo, 5,1 mg/mL de extracto hexánico, 207 mg/mL de aceite fijo de Azadirachta indica A. Juss. y malathion al 2% (control positivo). 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 120.00. 100.00. 100.00. 99.26 83.70. 82.96. 100.00. EXTRACTO ETANOLICO (21,7mg/mL). DO. EXTRACTO DE ACETATO DE ETILO (14.8 mg/mL) EXTRACTO HEXANICO (32,60 mg/mL). 60.00. SG RA. MORTALIDAD (%). 80.00. 100.00. -U NT. 100.00 100.00. 100.00. 40.74. 40.00. 33.33. 20.74. PO. 20.00. 0.00. 0.74. 0.00 15. 30. 45. DE. 0. 60. ACEITE ESENCIAL (200 µL/mL). 0.00. 1.48 75. 90. EXTRACTO ACUOSO (31,3 mg/mL). 105. CONTROL POSITIVO (malathion al 2%). 120. CA. TIEMPO (MINUTOS). Grafica 2: Porcentaje de mortalidad de adultos de Aedes aegypti cepa Rio Seco (Trujillo). IO TE. expuesta a una concentración de 31,3 mg/mL de extracto acuoso, 21,7mg/mL de extracto hidroalcoholico (70° GL), 14.8 mg/mL de extracto de acetato de etilo,. BL. 32,60 mg/mL de extracto hexánico, 200 µL/mL de aceite esencial de Ocimum. BI. basilicum L. y malathion al 2% (control positivo).. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 120.00. 100.00. 100.00 100.00. -U NT. 100.00 100.00. 100.00. EXTRACTO ACUOSO (12,32 mg/mL). 88.15. 88.15 73.33. DO. 68.15 60.00. 60.74. EXTRACTO DE ACETATO DE ETILO (6,3 mg/mL) EXTRACTO HEXANICO (5,1 mg/mL). 54.81. SG RA. MORTALIDAD (%). 80.00. 60.00. EXTRACTO ETANOLICO (10,2 mg/mL). 94.81. 91.85. 40.00. 8.15 0.00. 0.00 0. 15. 30. PO. 20.00. 45. 60. ACEITE FIJO (207 mg/mL). 0.00 0.00 75. 90. 105. CONTROL POSITIVO (malathion al 2%). 120. DE. TIEMPO (MINUTOS). CA. Grafica 3: Porcentaje de mortalidad de adultos de Aedes aegypti cepa Ferreñafe (Chiclayo). IO TE. expuesta a una concentración de 12,32 mg/mL de extracto acuoso, 10,2 mg/mL de extracto hidroalcoholico (70° GL), 6,3 mg/mL de extracto de acetato de etilo,. BL. 5,1 mg/mL de extracto hexánico, 207 mg/mL de aceite fijo de Azadirachta indica. BI. A. Juss. y malathion al 2% (control positivo).. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) 120.00. 100.00. 100.00. 100.00. 100.00. 100.00. 62.96. 66.67. 68.15. 71.85. 60.00. EXTRACTO DE ACETATO DE ETILO (14.8 mg/mL) EXTRACTO HEXANICO (32,60 mg/mL). 54.07. 42.96. ACEITE ESENCIAL (200 µL/mL). PO. 40.00. 0.00. 0.00. 0. 15. 6.67. 0.00 30. CA. 0.00. DE. 20.00. 45. 0.00 60. 75. 90. EXTRACTO ACUOSO (31,3 mg/mL) EXTRACTO ETANOLICO (21,7mg/mL). SG RA. MORTALIDAD (%). 80.00. 100.00. DO. 86.67 80.00. -U NT. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 105. CONTROL POSITIVO (malathion al 2%). 120. TIEMPO (MINUTOS). IO TE. Grafica 4: Porcentaje de mortalidad de adultos de Aedes aegypti cepa Ferreñafe (Chiclayo) expuesta a una concentración de 31,3 mg/mL de extracto acuoso, 21,7mg/mL de. BL. extracto hidroalcoholico (70° GL), 14.8 mg/mL de extracto de acetato de etilo,. BI. 32,60 mg/mL de extracto hexánico, 200 µL/mL de aceite esencial de Ocimum basilicum L. y malathion al 2% (control positivo).. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 120.00. 100.00. 100.00. 100.00. -U NT. 100.00 100.00. 80.00. EXTRACTO DE ACETATO DE ETILO (6,3 mg/mL) EXTRACTO HEXANICO (5,1 mg/mL). DO. 62.22. 60.00. 43.70. SG RA. MORTALIDAD (%). EXTRACTO ACUOSO (12,32 mg/mL) EXTRACTO ETANOLICO (10,2 mg/mL). 35.56. 40.00. 20.00 14.81. 17.04. 0.00. 2.22. 0.00. 0. 15. 30. 45. DE. 0.00. 21.48. PO. 20.00. ACEITE FIJO (207 mg/mL). 60. 0.00 75. 90. 105. CONTROL POSITIVO (malathion al 2%). 120. CA. TIEMPO (MINUTOS). Grafica 5: Porcentaje de mortalidad de adultos de Aedes aegypti cepa Sullana (Piura). IO TE. expuesta a una concentración de 12,32 mg/mL de extracto acuoso, 10,2 mg/mL de extracto hidroalcoholico (70° GL), 6,3 mg/mL de extracto de acetato de etilo,. BL. 5,1 mg/mL de extracto hexánico, 207 mg/mL de aceite fijo de Azadirachta indica. BI. A. Juss. y malathion al 2% (control positivo).. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 120.00. 100.00. 100.00. -U NT. 100.00 100.00. EXTRACTO ETANOLICO (21,7mg/mL) EXTRACTO DE ACETATO DE ETILO (14.8 mg/mL) EXTRACTO HEXANICO (32,60 mg/mL). DO. 80.00. 60.00. SG RA. MORTALIDAD (%). EXTRACTO ACUOSO (31,3 mg/mL). 40.00. 44.44. ACEITE ESENCIAL (200 µL/mL). 24.44. 0.00. 1.48. 0.00 15. 30. 11.11. 0.00. 45. DE. 0. PO. 20.00. 60. 0.00 75. 90. 105. CONTROL POSITIVO (malathion al 2%). 120. CA. TIEMPO (MINUTOS). Grafica 6: Porcentaje de mortalidad de adultos de Aedes aegypti cepa Sullana (Piura). IO TE. expuesta a una concentración de 31,3 mg/mL de extracto acuoso, 21,7mg/mL de extracto hidroalcoholico (70° GL), 14.8 mg/mL de extracto de acetato de etilo,. BL. 32,60 mg/mL de extracto hexánico, 200 µL/mL de aceite esencial de Ocimum. BI. basilicum L. y malathion al 2% (control positivo).. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 05. Resumen de resultados obtenidos en los bioensayos de los extractos y aceites esenciales de las especies vegetales Azadirachta indica A. Juss. y Ocimum basilicum L., frente a adultos de Aedes aegypti cepa Rio Seco (Trujillo), cepa. Cepa Rio Seco (Trujillo). Cepa Ferreñafe (Chiclayo). Cepa Sullana (Piura). Aceite Fijo. (-). (-). (-). Extracto Hexánico. (+). (+). (+). Extracto acetato de etilo. (-). (-). (+). Extracto etanolico 70° GL. (+). (+). (+). Extracto acuoso. (+). (+). (+). (+). (+). (+). (+). (+). (+). Extracto acetato de etilo. (-). (-). (-). Extracto etanolico 70° GL. (+). (+). (-). Extracto acuoso. (+). (+). (+). Aceite esencial. DE. PO. Extracto Hexánico. Ocimum basilicum L. DO. Azadirachta indica A. Juss.. Sustancia evaluada. SG RA. Especie vegetal. -U NT. Ferreñafe (Chiclayo) y cepa Sullana (Piura).. BI. BL. IO TE. CA. Leyenda: Con efecto biocida (+) Sin efecto biocida (-). 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 06. Comparación estadística de medias (test de Tukey) entre resultados obtenidos en los bioensayos de los extracto fluido y aceites fijo. de la especie vegetal. Azadirachta indica A. Juss. frente a adultos de Aedes aegypti cepa Rio Seco. B. A. A. A. B. A. Extracto etanolico 70° GL. A. B. A. B. Extracto acuoso. A. B. A. B. CA. DE. Extracto acetato de etilo. Malathion al 2%. A. B. Cepa Sullana (Piura). B A. B. B A. B B. IO TE. Control Positivo. A. PO. Extracto Hexánico. A. Cepa Ferreñafe (Chiclayo). DO. Aceite Fijo. Azadirachta indica A. Juss.. Cepa Rio Seco (Trujillo). Sustancia evaluada. SG RA. Especie vegetal. -U NT. (Trujillo), cepa Ferreñafe (Chiclayo) y cepa Sullana (Piura).. BI. BL. Medias con una letra común no son significativamente diferentes (p > 0.05).. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 07. Comparación estadística de medias (test de Tukey) entre resultados obtenidos en los bioensayos de los extracto fluido y aceites esencial de la especie vegetal Ocimum basilicum L. frente a adultos de Aedes aegypti cepa Rio Seco (Trujillo),. Cepa Sullana (Piura). A. C. A. B. A. A. A. Extracto etanolico 70° GL. A. A. A. Extracto acuoso. A. A. A. A. A. CA. DE. Extracto acetato de etilo. Malathion al 2%. C. B C. IO TE. Control Positivo. A. PO. Extracto Hexánico. A. Cepa Ferreñafe (Chiclayo). DO. Aceite Esencial. Azadirachta indica A. Juss.. Cepa Rio Seco (Trujillo). Sustancia evaluada. SG RA. Especie vegetal. -U NT. cepa Ferreñafe (Chiclayo) y cepa Sullana (Piura).. BI. BL. Medias con una letra común no son significativamente diferentes (p > 0.05).. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.