LUGAR DONDE SE RALIZO EL TRABAJO: Laboratorio de

MATRICULA: 83245936

LICENCIATURA: -1

TRIMESTRE LECTIVO:

HORAS SEMANA:

TITULO DEL TRABAJO:

N O M B R E DEL

ASESOR:

Biologla Experimental (C.B.S. Iztapalapa).

93 -P

Niveles de prolina, potasio. sacarosa y r a f i n o s n en semillas de aguacate y haba.

Dra. Laura J. P&rez Flores, Profesor Titular “ C ” , Tiempo Completo del Depto. d e Ciencias d e la Salud.

LUGAR DONDE SE

RALIZO E L

TRABAJO: Laboratorio de Fisiologla y Bioqulmica Vegetal ( S 357-B) de la. UAM- 1

FECHA DE INICIO:

FECHA DE TERMINACION:

0 4 de Diciembre d e 1992.

28 de Mayo d e 1993.

CLAVE :

NOKBRE D E L PROYECTO N i v e l e s d e osmorreguladores en

semillas tolerantes e intolerantes a

F I R M A D E L ALUMNO:

UNIVERSIDAD AUTONOMA METROPOLITANA

, Mayo 2 8 d e 1993.

M . e n C. R o s a u r a C r e t h e r Directora d e la División de Ciencias Biol6gicas y

de la S a l u d

P r e s e n t e .

P o r este conducto deseo hacer de su conocimiento que estoy de acuerdo con e i informe final del pr-oyecto d e S e r v i c i o

Social "Niveles d e prolina, potasio, sacarosa y r a f i n o s a , en s e m i l l a s d e aguacate y h a b a " que fue realizado p o r e l

alumno de la licenciatura en Biologia Experimental: Sr. F i - ligonio R o j a s Torres (matrícula 83245936).

E s t e proyecto se desarrolló b a j o m i tutoria e n el L a b o r a t o - rio d e F i s i o l o g í a y Bioquimica Vegetal d e l D e p t o . de Cien-

c i a s d e l a Salud de la UAM-I en el período comprendido entre el 4 de Diciembre de 1992 y el 26 de Mayo de 1993.

S i n mas p o r e l moment(;, aprovecho l a presente para enviarle un cordial saludo.

A t e n t a m e n t e ,

D r a . L a u r a ' J . P C r G z Flores

P r o f e s o r Titular "C" T.C.

D e p t o . Ciencias d e l a S a l u d

1

UNIVERSIDAD AUTONOMA METROPOLITANA

.

.

1

p

;

.&

p'*

I

Mayo 2 0 d e 1393.

M. en C. Ernesto Rodriguez A . Secretario Academico

D.C.B.S.

P r e s e n t e .

Por este conducto deseo hacer de su conocimiento que la

conclusión del proyecto de investigación d e Servicio So-

cial llNiveles d e prolina, potasio, sacarosa y rafinosa en semillas de aguacate y h a b a " sufrió un retraso d e aproxi- madamente un mes, d e b i d o a q u e l o s reactivos utilizados tación y h u b o u n atraso en s u adquisición.

% en l a s determinaciones de sacarosa y rafinosa son de irnpor

-

Sin mas por e l momento, aprovecho l a presente para enviar- le un cordial saludo.

A t e n t a m e n t e ,

Dra. Laura 'J. P e r e z F l o r e s Prof. Titular "C" T. C.

D e p t o . Ciencias de l a Salud

MMR

Mexico, D . F . , O 4 d e diciembre d e 1992

Siol. Marco Aurelio P&rez Hernandez

1

Secretario Academico de la

'

Divisibn de C.B.S.

I

P R E S E N T E I

U . A . M . Iztapalapa

I

I

I

Por medio de la presente, me dirijo a usted para comunicarle que como miembro de la licenciatura e n Biología Experimental, deseo iniciar los tramites necesarios para la realizacibn del

Servicio Social: Niveles de prolina, potasio,sacarosa y rafinosa

e n semillas d e aguacate y haba.

Dicho proyecto se realizara bajo la asesoria de la Dra. Laura

J.

Pbirez Flores, Profesor Titular " B " , Tienpo Completo del Departamento d e Ciencias de la Salud.

I

De ser aprobado este proyecto, las actividades se llevaran a

cabo en el Laboratorio d e Fisiologfa y Bioquímica Vegetal ( S

I

357-B) de la U.A.M. Iztapalapa, durante e 1 periodo comprendido entre el 0 4 de diciembre de 1992 y el 16 de abril de 1 9 9 3 .

ATENTAMENTE :

F I L I G O N I O ROJAS TORRES M a t r f cu 1 a 8 3 2 4 5 9 3 6

Mexico, D . F . O 4 de diciembre d e 1992

Biol. Marco Aurelio P&rez HernAndez Secretario AcadGmico de la

Divisidn de C.E.S.

U.A.M. Iztapalapa P R E S E N T E

Por este conducto me permito hacer de su conocimiento que acepto el compromiso de fungir corno tutora de Servicio Social del

alumno de la licenciatura en Biologla Experimental FILIGONIO R O J A S

TORRES. (matrlcula 83245936 1 .

El

proyecto de investigacibn de Servicio Social e s el

siguiente: Niveles de prolina, potasio,sacarosa y rafinosa

en

semillas de aguacate y haba. De ser aprobado este proyecto sera desarrollado Integramente por el alumno e n el periodo comprendido entre el 04 de diciembre de 1992 y el 16 de abril de 1993 e n el

Laboratorio de Fisiologla y Bioquimica Vegetal ( S 357-B) del Departamento de Ciencias de la Salud.

Asimismo, deseo inforrnarie que he revisado el proyecto

inicial y estoy de acuerdo con su contenido. S i n mAs por el

momento, aprovecho la ocasibn para saludarle.

A T E N T A M E N T E :

Dra. Laura J . P&rez Flores Profesor Titular “ B ”

Tiempo C o m p l e t o

SOLICI TUD DE I NSCRI PC1 ON

NOMBRE Filigonio Rojas Torres TEL 848-45- 16

LICENCIATURA Biología Experimental

MATRICULA 83245936 - CREDITOS 457

NOMBRE DEL PROYECTO:

-

Niveles d e osmorreguladores en semillas tolerantes e intolerantes a la desecacidn

ETAPAS DEL PROYECTO EN QUE DESEA PARTICIPAR Cumplimiento de los

objetivos específicos

_-

1-3

"

NOMBRE DEL ASESOR Dra. Laura _-.- ,':. Perez Flores

__I" -I_ I

LUGAR DONDE SE DESARROLLARA Lab. d e Fisiologla y Bioquimica

Vegetal ( S 357-B) UAM-1 ________"

-

"

FECHA INICIO 04 d e

_-

dic.,1992 FECHA DE TERMINACION 16 de nbri1.1393 VINCULACIQN CON LAS ACTIVIDADES PROPIAS DE SU PERFIL PROFESIONAL

Investigacibn en el Area de la F i s i c l o g l a y Bioquimica Vegetal I

_l_"l__ -_x-,-

___-

CLAVE

TITULO DEL PROYECTO: Niveles de prolina, potasio, sacarosa,

Y rafinosa en semillas de aguacate y haba.

JUSTIFICACION Y N A T U R A L E Z A DEL P R O Y E C T O

Las semillas de plantas superiores se clasifican en ortodoxas

y recalcitrantes en funcibn de su comportamiento durante el

almacenamiento.

Las semillas ortodoxas son faciles de almacenar por largos

periodos en una condici6n seca y de baja temperatura en

recipientes hermeticamente sellados, mientras que por el contrario las semillas recalcitrantes presentan una serie de problemas que las conducen, en la mayorla de los casos a la p&rdida total de viabilidad en corto tiempo cuando se intenta almacenarlas bajo condiciones d e baja humedad y temperatura

.

El estudio de los eventos bioqulmicos y fisioibgicos que

ocurren en semillas ortodoxas y recalcitrantes durante el

almacenamiento y germinacibn as1 como el estudio d e los efectos

que la desecacidn les produce permitirA profundizar en el

conocimiento d e los factores que determinan la tolerancia e iptolerancia a la desecacibn de ambos tipos de semillas

.

La naturaleza d e este proyecto es en principio b2tsica ya que

se pretende aportar mayor informacibn acerca de los efectos

causados por la desecacibn de semillas ortodoxas y recalcitrantes

a s 1 como de los posibles mecanismos que les permitan tolerar la

desecacibn. Se ha propuesto que los mecanismos que operan en las

semillas para tolerar la desecacibn pueden ser similares a los que posen otros tejidos sometidos a deficit hldrico por lo cual se han utilizado las semillas como modelo ( I ) . Los conocimientos obtenidos en la realizacidn de este proyecto pueden tener

posteriormente una naturaleza aplicada, ya que podrlan contribuir a la proposicidn d e condiciones alternativas d e almacenamiento

para las semillas, recalcitrantes.

INTRODUCCION Y ANTECEDENTES

Las semillas de plantas superiores s e han clasificado en dos

tipos: ortodoxas y recalcitrantes, basandose en su comportamiento durante el almacenamiento ( 1 ) .

L a s semillas ortodoxas se caracterizan porque pueden almacenarse por varios afios en condicionas de baja temperatura

1

I

disminucibn significativa e n su viabilidad ( 2 ) . For esta razdn se

d i c e que este tipo de semillas son estructuras de propagacibn tolerantes a la desecacibn ( 3 ) . Dicha tolerancia a la desecacibn se adquiere en los estadios finales de maduraci6n de las semillas, en que estas estructuras van perdiendo agua ae manera gradual hasta llegar a contenidos de humedad e n t r e 5 y 15%. E n estas condiciones se desprenden de la planta madre.

La tolerancia a la desecaci6n que presentan las semillas ortodoxas maduras se conserva durante las primeras etapas de la germinacidn. En esta etapa las. semillas se pueden desecar s i n sufrir daf3os. Posteriormente ocurre una transicibn a una etapa

intolerante a la desecacibn ( 3 ) .

Por otra parte, las semillas recalcitrantes se caracterizan porque se desprenden de la planta madre con un contenido de humedad alto (alrededor del 5096) y su viabilidad disminuye si se

desecan a contenidos de humedad menores a 2 0 % .

En

algunos casos se ha observado que la perdida d e viabilidad esta relacionada con la velocidad d e desecaci6n. Estas caracterlsticas hacen que las

semillas recalcitrantes no se puedan almacenar ( 4 , 5 y 6 ) . Entre

los problemas que se presentan al tratar de almacenar las semillas

recalcitrantes, se pueden mencionar: que no soportan bajas

temperaturas, al parecer debido a que se forman cristales d e hielo que daKan la estructura celular, y que debido al alto contenido de

humedad se incrementa la contaminacibn microbiana especialmente

por hongos ( 7 ) . Otra de las características importantes d e las

semillas recalcitrantes es que mantienen grandes niveles de

sintesis de proteínas y altos niveles de respiracibn durante el periodo de maduraci6n, sin entrar en una etapa de latencia. Lo

anterior hace que a l liberarse de la planta madre estas semillas puedan iniciar el proceso de germinacibn si contienen una cantidad suficiente de agua ( 8 ) . Por último, es importante hacer notar que

existe un continuo entre el caracter recalcitrante y ortodoxo de

las semillas, e s decir que el grado de recalcitrancia de las semi 1 las e s variable.

Al respecto Bonner ( 1990 ) ha propuesto que l a s semillas pueden clasificarse en cuatro grupos de a c u e r d o a G u s.

caracteristicas de almacenamiento:

1 . - Ortodoxas verdaderas, l a s cuales pueden almacenarse p o r l a r g o s periodos de tiempo ( 20 afios o

mas

) a contenidos d e humedad muy b a j o s ( 5 a 10 % ) y a b a j a s temperaturas -5°C a

15°C).

2.- Sub-ortodoxas son semi1 las que pueden almacenarse h a J o

condiciones similares u las anteriores, pero p o r periodos mas cortos de tiempo í 5 aPTos).

3.- Recalcitrantes templadas las cuales no pueden

deshidratarse, pero p u e d e n almacenarse p o r periodos cortos d e

tiempo ( 1 a 2 aRos ) , a temperaturas cercanas al punto d e

congelacion ( - 3 a +3 " C ) .

4:- Recalcitrantes tropicales, las cuales no pueden

deshidratarse y pierden viabilidad rapidamente a temperaturas

Las semillas recalcitrantes son muy importantes ya que constituyen la mayorfa de las especies primarias de la vegetacidn de zonas tropicales y en los últimos aKos se ha observado una rApida reduccibn en la superficie de estos ecosistemas. Esta

destruccibn adquiere gran relevancia en paises que como MBxico

poseen una gran riqueza en diversidad de estas especies ( 9 ) ES necesario implementar medidas que permi tan conservar nuestros recursos bidticos aplicando estrategias de conservaci6n

complementarias, tanto en el medio ambiente natural {Areas

protegidas) como fuera de &l. Entre las medidas de conservaci6n fuera del ambiente natural se tienen el cultivo de tejidos y los

bancos de germoplasma (principalmente de semillas) ( 1 0 ) . S i n

embargo, como ya se mencionb previamente las semillas

recalcitrantes presentan serios problemas en su almacenamiento. Por otra parte, a pesar de la importancia de este tipo de

semillas existen muy pocas investigaciones acerca de su

comportamiento fisiolbgico

y

bioqulmico. En base a lo anterior,i, se hace necesario profundizar en el estudio de este tipo da'.-? semillas para poder proponer en un futuro cercano alternativa

para su almacenamiento y la conservaci6n de su germoplasma.

Las plantas han desarrollado diversos mecanismos par

sobrevivir a la desecacih, entre estas se encuentran las '2

acumulacibn de metabolitos protectores o compatibles en lasi1.22 3

celulas

.

2 9

Entre estos compuestos estan : pro1 i na, a 1 gunosz ! T I ,.I i,

i o n e s , azucares como sacarosa y rafinosa etc.

Se ha propuesto que la acumulacibn de estos compuestosm

2

tambi&n llamados osmorreguladores actúa como un mecanismo de? TJ

ajuste osmbtico que impide la p&rdida de agua del interior de las!? ;,?

c&lula.( 1 1 y 12). ! !?

semillas pueden tolerar la desecacidn por la formaci6n de u n p . -2

estado vitreo. La vitrificacidn 0 s la formacic5n de una soluci&n>, 1;.

líquida con la viscosidad de u n sblido. Se considera que la

vitrificacidn protege a las semillas de la desecacidn y del daf5o por'congelacibn px-oporcionandoles diversas ventajas tales como:

limitar la tendencia a cristalizar de 10s constituyer.)tes

celulares, inmobilizar dichos constituyentes interfiriendo c o n

S U reactividad y limitar la perdida del agua remanente en las

semillas maduras desecadas ( 13 1 .

Diversos autores h a n atribuido un papel relevante e n la formnci6n del estado vitreo de la5 semil las ortodoxas d e s e c a d a s a

la acumulaci6n de osmoreguladores principalmente azúcares ( 1 4 - 1 6 1 .

Sin embargo, no existen estudios acerca de la participacibn

d e 1 0 6 o~moreguladores e n la intolerancia a l a desecacibn d e l a 5

semillas recalcitrantes.

z:

r?

r- ."

i i l

I-:

Existen reportes en semillas ortodoxas que sugieren que estas<.., i 4 , . .,

.

Si los osmorregulares participan en la tolerancia a la

desecacibn de las semillas, se esperaría que sus niveles fueran

mayores en las semillas ortodoxas ( tolerantes a la desecaci6n 1

que en las semillas recalcitrantes ( intolerantes a la

desecaci6n).

OBJETIVO GENERAL

Determinar los niveles de osmorreguladores en semillas

ortodoxas y recalcitrantes para estudiar la participncibn de

dichos compuestos en la tolerancia o intolerancia a la

desecaci6n de estas semillas.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

1 ) Determinar los niveles de prolina en semillas maduras de haba (semilla ortodoxa)

2 ) Determinar los niveles de potasio en semillas maduras de haba (semilla ortodoxa)

3 ) Determinar los niveles de sacarosa en semillas maduras de haba (semi 1 la ortodoxa)

4 ) Determinar los niveles de rafinosa en semillas maduras de haba (semi 1 la ortodoxa)

5 ) Determinar los niveles de prolina en semillas maduras de aguacate (semilla recalcitrante)

6 ) Determinar los niveles de potasio en semillas maduras de aguacate (semilla recalcitrante)

7 ) Determinar l o s niveles de sacarosa en semillas maduras de

aguacate (semilla recalcitrante)

8 ) Determinar l o s niveles de rafinorsn en semillas maduras d e

aguacate (semilla recalcitrante)

.

M A T E R I A L E S Y METODOS

Material Bioldqico, En el presente trabajo se emplbaron semillas de aguacate variedad hass de la zona de Uruapan Michoacan y haba variedad chalquefia de la zona de Chalco estado de M&xico.

Las semillas d e aguacate y haba se disectaron manualmente para separar los embriones de los cotiledones.

Las determinaciones de los niveles d e osmorreguladores se

DETERMINACION DE PROLINA

Bates et al. Plant ans Soil 39:205-207 (1973)

1

FILTRAR (WHATMAN No.2)

1

HACER REACCIONAR EL FILTRADO CON PARTES IGUALES DE NINHIDRINA ACIDA Y ACID0 ACETIC0 GLACIAL EN BAN0 MARIA

POR 1 h

1

EXTRAER EL CROMOFORO CON TOLUENO AGITANDO EN VORTEX POR 20 SEG

1

SEPARAR EL TOLUENO CONTENIDO EN EL CROMOFORO

LEER LA A52ONY PARA CALCULAR LA CONCENTRACION DE PROLINA

DETERMINACION DE POTASIO

SECAR EL TEJIDO EN ESTUFA

A 1 0 0 ° C

DURANTE

48 H

1

PESAR

2 . 5 g DE POLVO

SECO

1

DIGERIR EN CAMPANA

DE ACIDO NITRIC0

Y

LOS VAPORES

F

I

LTRAR EN

DE EXTRACCION CALENTANDO CON

20 M 1

20ML DE

ACIDO PERCLORICO HASTA

QUE

DESPRENDIDOS SE CLARIFIQUEN.

UN EMBUDO DE VIDRIO

POROSO

MEDIR EL VOLUMEN FINAL

1

DETERMINAR LOS NIVELES DE POTASIO

EN UN ESPECTROMETRO PLASMA

4 0

-

DETERMINACION DE SACAROSA

PULVERIZAR EL TEJIDO CON NITROGEN0 LIQUIDO

1

EXTRAER CON AGUA CALIENTE

( 30

m1,90°C

1

AGITANDO DURANTE

5 m i n

CLARIFICAR CON REACTIVOS DE CARREZ

( 2 . 5

m1 DE

SOLUCION

I

DE CARREZ:

3.69/100

m1 DE K4(Fo(CN)61 SEGUIDOS

DE

2 . 5

m1 DE SOLUClON

2

DE 'CARREZ

7.29/100

m1 DE

2 ~ S 0 . r Y

DE 5

m1

DE NaOH 0 . 1 M )

AGITAR

EN

CADA ADICION

Y

DEJAR

REPOSAR

DE 3-5

min

FILTRAR

(

WHATMAN No

4 1 1

AFORAR A

50

m1

LA SACAROSA

SE

DETERMINA USANDO UN

KIT

DE

BOEHRINGER EN

EL QUE SE CUANTIFICA LA GLUCOSA PRODUCIDA ANTES

Y

DESPUES DE LA HIDROLISIS ENZIKATICA DE LA SACAROSA

MEDIANTE LA ACCION DE LA HEXOCINASA

Y

DE LA GLUCOSA-6-

FOSFATO DESHIDROGENASA MIDIENDO EL NADPH FORMADO

A

340 n m

REACCIONES:

D-GL.UCOSA

+

ATP

HIEXOCINASA

GLUCOSA-6P

+

ADP

GLUCOSA-6P

f

NADP

'OLU~OSA-CSP DESHIDROOENAGA

6P-GLUCONRTO

_______3

DETERMINACION DE SACAROSA

2 2 2 5 2 4

Solucihn 1 : Buffer trietanolamina pH= 7.6, NADP', ATP,

Mg S 0 4 .

.

Suspencibn 2: Hexocinasa, glucosa 6-P-deshidrogenasa.

solucibn 3 : Buffer citrato pH= 4.6,/3-fructosidasa

Sacarosa Tabla l. Ajuste del Volumen Total _{3.02 a 1.5 ml.} de

-

Blanco D-Glucosa D-glucosa SAcarosa Sacarosa Muestra Blanco Muestra Solucibn

Solucibn 3 100 pl 100 pl

-

I

_I_

Soluci6n

Muestra

50 pl 50 pl

-

1

Agitar suavemente, e incubar por 15 min. de 20 a 25°C. Solucidn 1

Desionizada 895 pl 845 pl 895 p1 9 4 5 pi

Agua

495 pl

495 pI

495 1.11 495 p1

Agitar suavemente. Dejar reposar 3 mine Leer Aí

I

Suspensibn 2 10 pl 10 p1 10 pl 10 pl

Agitar suavemente. Dejar reposar 15 min. Leer Abs- P.2

Volumen

Total

1 . 5 m1 1 . 5 m1 1 . 5 m1 1 . 5 m 1

hAmuoatra = AZmuoctra

-

A i r n u e n t r a

hAbLanco = A ~ b L a n c o

-

A i bLanco

A A e a c a r o s a = AAmuootra sacarosa - AAbLanco sacarosa

AAgLucoaa = AAmuestra - AAbLanco gluceaa AAsccaroP = AAnacarona

-

AAgLucona

DETERMINACION DE RAFINOSA

PULVERIZAR EL TEJIDO CON NITROGEN0 LIQUIDO

EXTRAER CON AGUA CALIENTE ( 5 0 m l , 60 "C 1 AGITANDO POR 30 MINUTOS. CLARIFICAR CON REACTIVOS DE CARREZ

( 5 m1 DE LA SOLUCION 1 Y 5 m1 DE LA SOLUCION 2

,

SEGUIDOS DE 10 m1 DE NaOH 1 , AGITAR EN

CADA

ADICION

Y ENFRIAR A TEMPERATURA AMBIENTE

FILTRAR ( WHATMAN No 41. 1

AFORAR

A

100 m1

LA RAFINOSA SE DETERMINA USANDO UN KIT DE BOEHRINGER EN

EL

QUE S E CUANTIFICA LA RAFINOSA PRESENTE MEDIANTE LA ACCION DE LA u GALACTOSIDASA Y DE LA GALACTOSA

DESHIDROGENASA MIDIENDO EL NADH FORMADO A 340 n m

REACCIONES:

RAFINOSA

+

Hz0 a-galactonidasa D-GALACTQSA

+

SACAROSA

D-GALACTOSA

+

NAD' ______* GALACTONO -LACTONA

+

NADH

galactosa

DETERMINACION DE RAFINOSA

Solucidn 1 : Buffer citrato pH= 4 . 5 , NAD'.

Suspensidn 2: a-galactosidasa.

Soluci6n 3: Buffer fosfato pH= 8 . 6 .

.

Suspencibn 4: 0-galactosa deshidrogenasa

Raf i n06a Reduccidn d e Volumen Original d e

lTabla 3.40 ml.

a

un volumen d e 1.5 ml.

I

Solucidn

-Muestra

l

Des

=

i on

y

i zada

-

/

44 pl

Muestra Muestra

Rafi nosa

I

D-qalactosa

88 pl 88 pl

22 pl

c_

I

22 pl

Agitar suavemente e incube por l5min. a temp. d e 20 a 25'C

Solucibn 3

Des i on i zada Agua

4 4 1

ul

4 4 1 pl

441 pl

802 pl 882 pl 882 pi

Agite suavemente, deje reposar 2 min. y lea Abs. A i _I

Suspensi6n 4 _{22 pl 2 2 pl 2 2 pi}

A g i t e suavemente, deje reposar por 20 min. y lea A b s . A 2

Volumen Total 1.5 m1

""_

1

A A m u e a t r a = A z m u e o t r a

-

A t m u o o t r c l

CALCULOS DE LOS NIVELES DE SACAROSA Y REFINOSA

Los cAlculos de los niveles de sacarosa y rafinosa se realizaron aplicando la siguiente f6rmula.

c = V PM t

E

*

d

*

v

*

1000

*

AA ( g / l )

Donde :

V = volumen final en la determinacibn ( m 1 1 .

v = volumen de la muestra m1 1 .

PM= peso molecular.

d = paso d e l u z de ¡a celda = 1 cm

t Coeficiente de absorci6n del NADH a 340 n m = 6.3

AA = Diferencia de absorbancia de la muestra

-

Diferencia de 1 m o l cm absorbancia del blanco.

En el caso de la sacarosaf al introducir los valores num6ricos en la fdrmula se obtiene:

g sacarosa

'= 1 * 6 4 1 2

*

AA ( 1 de solucibn de l a muestra 1

Los valores de concentracibn de sacarosa se corrigen

p o r el volumen total d e la muestra y el peso seco de l a muestra expresAndose finalmente como:

u moles sacarosa g peso seco

E n el casos de la rafinosa al introducir los valores nume5ricos en la f6rmula se obtiene

g Raf i n o m

'= 2*7222

*

AA ( 1 de soluci6n de la muestra 1

Los v a l o r e s d e concentracidn d e rafirlosa se corrigen p o r e l v o l u m e n total. d e la muestra y e ¡ peso seco de la muestra expresandose f inaimente como :

y m o l e s d e rafinosa

CALCULOS D E NIVELES

DE

POTASIO

La lectura del espectrofotdmetro de plasma dA los resultados en ppm, es decir m g \ l . Esta lectura se corrige por el volumen total de la muestra para obtener los miligramos de potasio.

Conociendo el peso seco de la muestra analizada se calculan los

miligramos de potasio por gramo de peso seco y este valor se corrige por el peso molecular para obtener micromoles de potasio por gramo de peso, seco.

CALCULOS

DE

NIVELES

DE

PROLINA

La lectura de absorbancia obtenida en el espectrofotc5metro se interpola en una curva patr6n de prolina para obtener micromoles de prolina por mililitro

.

Esta lectura se multiplica por el volumen total de tolueno en que se extrajo el crom6foro

.

Esta lectura se corrige considerando la alfcuota de la

muestra usada en la determinacicbn y el volumen total de la muestra Eara obtener los micromoles de prolina. Esta lectura se corrige considerando el peso seco de muestra analizada para obtener los micromoles de prolina por gramo de peso seco.

ACTIVIDADES

REALIZADAS

Como resultado del trabajo realizado en el present& proyecto se llevaron a cabo las siguientes actividades:

Exposici6n del cartel "Niveles de osmorreguladores en

semillas tolerantes e intolerantes a la desecacibn" I 1 1 Simposium del Depto. de Ciencias de la Salud UAM-I. Octubre 1993.

Presentaci6n de la platica "Niveles da oamorreguladores en semillas d e m a i z y aguacate" Filigonio Rojas Torres noviembre,

1992. Seminarios Biologla Experimental.

RESULTADOS

x

CONCLUSIONES

Los resultados de los niveles de osmorreguladores en las

semillas estudiadas se presentan en las tablas 1-4.

Se puede observar que los niveles de sacarosa son mayores e n

las semillas ortodoxas (haba) con respecto a las semillas recalcitrantes ( aguacate) ( Tabla. 1 ) . Esta diferencia e s de aproximadamente cuatro veces si se comparan los embriones de estas semi 1 las.

Al comparar los niveles de sacarosa en los embriones con

respecto a los tejidos de reserva (cotiledbn), se encontrb que en ambos tipos de semillas estos niveles son superiores en los

embriones aproximadamente de 2.5 a 3 veces ( Tabla 5 ) .

Con respecto-a los niveles de rafinosa se observa que la semilla ortodoxa ( haba ) tiene niveles del mismo orden de magnitud que los observados para sacarosa en estas semillas

(Tablas 1 y 2 ) . S i n embargo, no se logr6 determinar la presencia

d e rafinosa en aguacate ( ni en embribn ni en cotiledbn), a pesar

de incrementar al miximo el volumen de la muestra analizada (Tabla 2 ) .

Los niveles de potasio son menores a los detectados para los

azúcares ( sacarosa y rafinosa 1 ( Tablas 1 2 y 3 1 . S i n embargo, tambikn se observa que los niveles de potasio son aproximadamente dos veces superiores en los embriones de la semilla ortodoxa con respecto a la semilla recalcitrante ( Tabla 3 l .

Por otra parte, tambih se observ6 que al igual que con los

otros osmorreguladores analizados los niveles de potasio son superiores en los embriones con respecto a l o s cotiledones d e las semillas estudiadas excepto para el caso de la rafinosa en

aguacate en el que al no poderse detectar no es posible

determinar esta relaci6n (Tabla 5 ) .

En relaci6n a los niveles de prolina estos son varios 6rdsnes de magnitud superiores en la samilla ortodoxa en ralaci6n a la

recalcitrante (Tabla 4 ) .

Asimismo se encontrt5 cue los niveles d e prolinn son superiores en el embri6n con respecto al cotiledbn para ambos tipos de semillas (aproximadamente dos veces) (Tabla 5 ) .

Analizando en su conjunto los resultados obtenidos se puede observar que los niveles de todos l o s osmorreguladores en la sernilla recalcitrante estudiada (aguacate) son menores que l a r do

la semilla ortodoxa (haba). Estos bajos niveles pudieran explicar ia intolerancia a la desecacibn de estas semillas si S 0

considerara que en estas condiciones es probable que no 6 8 forme

TABLA

1

2 2 2 5 2 4

N I VELES DE SACAROSA ( pmoles/g peso seco 1

.

_{MUESTRA i}

HABA

EMBR

I ON

93

-

56

HABA

COT

I

LEOON

34.99

AGUACATE

EMBR

I

ON

24.36

AGUACATE

COT

I

LEDON

8.78

MUESTRA 2

112.55

TABLA 2

N I V E L E S DE RAFINOSA pmoles/g peso seco 1

.

HABA

EMBR

I

ON

HABA

COT

I

LEDON

AGUACATE

EMBR

I

ON

AGUACATE

COT1 LEDON

MUESTRA 1

37.80

NO DETECTABLE

NO DETECTABLE

45.55

MUESTRA 2

111

.o0

NO DETECTABLE

TABLA

3

.

NIVELES

DE

POTASIO ( pmoles/g p e s o seco 1

MUESTRA 1 MWESTRA 2

HABA

EMBR

I

ON

HABA

COT1

LEDON

AGUACATE

EMBR

I

ON

AGUACATE

COT

I

LEDON

TABLA

4

NXVE,LES DE PROLINA ( pmoles/g peso s 0 c o 1

I

MUESTRA 1

r MUESTRA 2

HABA

EMBR

I

ON

1.82

1.90

HABA

COTI

LEDON

0.91 0.90

AGUACATE

O.

023

EMBR

I

ON

O .

030

AGUACATE

O.

O 4 2

TABLA

5

SACAROSA EMBRION / SACAROSA COTILEDON

MUESTRA 1 MUESTRA 2

HABA

AGUACATE

2.77 2 . 9 6

2.67 2.55

RAFINOSA EMBRION / RAFINOSA COTILEDON

MUESTRA 1 MUESTRA 2

HABA

AGUACATE

2 . 4 4 2 . 4 3

_I_

-

POTASIO EMBRION / POTASIO COTILEDON

I MUESTRA 1 MUESTRA 2

HABA

AGUACATE

1 . 1 1

2.27

PROLINA EMBRION / PROLINA COTILEDON

MUESTRA 1 MUESTRA 2

HABA

AGUACATE

2 . 0 0

l . 82

2 * 1 1

-1

1.80

BIBLIOGRAFIA 1 ) 2) 3 ) 4) 5 )

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2 s

rl? -5

r-o

9

<>

? U n z

E

03%

L-l "J O r

-

-

-

LUGAR DE REALIZACION

El presente proyecto se realizara en el laboratorio d a fisiologia y bioquimica vegetal ( S 357-B ),en el departamento de

ciencias de la salud de la divisibn de CBS de la U.A.M.-I.

DURACION Y ETAPAS

Este proyecto tendra cuatro meses de duracibn ( 04 d e

diciembre d e 1992

-

16 de abril de 1993 1 ; las etapas que comprende seran las requeridas para el cumplimiento de las metas especificas,es decir nueve etapas, entendikndose que algunas de

ellas podran realizarse en forma simultanea.

CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

Etapas meses

( metas a cumplir ) 1 2

1

* * * * *

2 * * * Y *

3

8 9

3 4

* * * * *

* * * * *

* * * r *

* * * * *

* * Y * *

Y * * * *

LICENCIATURA QUE COMPRENDE

Este proyecto comprende a la Licenciatura de Biologla Experimental

NUMERO DE PARTICIPANTES

En este proyecto participara I alumno de la licenciatura:

Filigonio Rojas Torres.

RECURSOS NECESARIOS

-

Material bibliogrAfico.

-

Equipo compartido con otros miembros de departamento de ciencias de la salud as1 como de la Divisidn de C.B.S.:

Potencldtmetro Balanzas

Centrífugas

Espectrofot6metros Ultracongeladores

Espectrhmetro de plasma 40

REACTIVOS:

ASESOR RESPONSABLE

Dra. L a u r a J. PIrez Flores

Profesor Ti tular "B"

,

Tiempo Completo

TIEMPO DE DEDICACION

En los cuatro meses que comprende la realizacibn de este proyecto, se dardn 30 horas a la semana de dedicacidn p o r el participante.

CRITERIOS DE EVALUACION

Iztapalapa, D. F . j u n i o 1 7 de 1 9 9 3

M. en C. ERNESTO RODRIGUEZ

A.

Secretario Acadimico de la División D. C . B. S .

P r e s e n t e

P o r este conducto me permito informar a usted que los informes finales de los siguientes Proyectos de Ser-

vicio Social cumplen satisfactoriamente con los requisitos es

tipuladas en la r e g l a m e n t a c i ó n respectiva vigente.

-

1 . Mejoramiento de medios de? cultivo pera célg las de Sertoli.

$

2. Niveles d e prolina, potasio, sacarosa y f a f i

nosa en semillas d e a g u a c a t e y haba, y

3 . C a r a c t e r i z a c i c j n d e las proteasas de Anopheles

albinanus.

S i n m á s p o r el momento, aprovecho para enviarle un cordial saludo.

A T E N T A M E N T E

"CASA ABIERTA A L TIEHPO"

F.

fi4+$2k kl

M.en C. ENRIQUE MENDIETA MARQUE2

Coordinador de la Lic. e n

UNIVERSIDAD

AUTONOMA

METROPOLITANA

DlVlSiON DE CIENCIAS BIOLOGICAS Y DE LA SALUD

' : '!'. l . : ' ... '.:OL'IAl

A T E N T A M E N T E " C A S A A S I E R T A AL T I E W P G "

NIVELES DE OSMOHEGIJLADORES EN SEhIllLAS TOLERANTES E INTOLERANTES A I A DESECACION.